PRODUCCIN Y SEPARACIN DE CIDO LCTICO POR FERMENTACIN EXTRACTIVA MODELAMIENTO Y SIMULACIN

Valentina Hernndez, Javier A. Dvila, Carlos A. Cardona

Departamento de Ingeniera Qumica, Universidad Nacional de Colombia Sede Manizales, Manizales Colombia. Tel: 8866766. Fax: 8863220. Email: ccardona@nevado.manizales.edu.co

Resumen. En el presente artculo se estudia la produccin y separacin de cido lctico, a partir de lactosa como sustrato, proveniente de suero de leche, por medio de un proceso no convencional (Fermentacin extractiva). Se evalan diferentes solventes as como el efecto de la relacin solvente/Alimento y tiempo de operacin sobre la cantidad de cido lctico extrado al final de la operacin. Tambin se comparan los resultados obtenidos con lo reportado en la literatura sobre fermentaciones sin solvente para ver las ventajas de este proceso sobre los convencionales. Palabras clave. Fermentacin extractiva, cido lctico, Procesos reaccin separacin no convencionales.

1. INTRODUCCIN Desde hace tiempo los estudios se dirigen a la obtencin de cido lctico a partir de materias residuales y su posterior transformacin en compuestos qumicos intermedios, disolventes, plastificantes y resinas (Huang et al., 2005). Como en la mayora de fermentaciones de cidos orgnicos, la inhibicin por producto final es un gran obstculo en la fermentacin de cido lctico (Wang y Lin, 2003). Por esto, la produccin por fermentacin ocurre lentamente, produce soluciones relativamente diluidas y el producto se obtiene como una mezcla con carbohidratos residuales, protenas, aminocidos, sales y otros constituyentes del medio. La falta de mtodos eficientes y econmicos para la recuperacin del cido lctico es el mayor obstculo para una comercializacin ms extensa de su produccin biolgica (Cardona y Rivera, 2005). Este producto tiene aplicaciones en las industrias alimentaria, mdica, farmacutica, cosmtica, qumica y de polmeros (Huang et al., 2005; Shi et al., 2005; Tanaka et al., 2005; Oh et al., 2005). La fermentacin extractiva es un proceso que se utiliza para reducir el efecto de un producto inhibitorio del crecimiento celular, por medio del uso de un solvente inmiscible en el caldo de fermentacin, que remueva selectivamente el producto de la fermentacin in situ permitiendo fermentar soluciones ms concentradas de sustrato, reduciendo los costos de recuperacin del producto y disminuyendo los volmenes de desechos (Cardona y Rivera, 2005). sta es una tcnica viable, a futuro, para muchos procesos que a nivel industrial presentan dificultades en la produccin o separacin, en ella se combina la fermentacin con la extraccin liquido liquido o extraccin con solventes no miscibles con el medio de fermentacin (Kahya et al., 2001) Este proceso ha encontrado aplicacin en sistemas donde el crecimiento microbiano (y, por ende, la generacin de producto) se ve inhibido por la concentracin del producto en el
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fermentador, fenmeno conocido como inhibicin por producto final, o por algn otro metabolito indeseable (Cardona et al., 2004). La recuperacin del producto por extraccin es de particular inters para tales sistemas, ya que permite la remocin in situ del agente inhibidor. La extraccin se consigue generando una segunda fase con el uso del contacto continuo de un solvente orgnico inmiscible en el caldo de fermentacin que, por lo general, es de naturaleza acuosa (Samant y Ng, 1998). Esto provoca una menor concentracin inhibidora del producto en el caldo, aumentando la velocidad de reaccin. 2. PRODUCCIN DE CIDO LCTICO POR FERMENTACIN EXTRACTIVA La produccin y separacin de cido lctico ha sido objeto de estudio, por muchos autores (Ratchford et al., 1951; Juang y Huang, 1997; Kyuchoukov et al., 2001); entre ellos Yankov et al. (2004) estudiaron la extraccin de cido lctico de soluciones acuosas con trioctilamina disuelta en decanol y dodecano, encontrando que la eficiencia de la recuperacin dependa del pH de la solucin y la concentracin inicial de cido lctico y determinaron la fuerte influencia de los diluyentes en los valores del numero de molculas extractantes en el complejo acido amina. Por otro lado, Wasewar et al. (2002) estudiaron la extraccin reactiva de cido lctico usando alamina 336 en metil isobutil cetona, donde se calcula el cociente de cargamento (Grado en el que la fase orgnica, amina + MIBK, se puede cargar con cido lctico), los clculos se basan en la estequiometria de la extraccin. El estudio del proceso se llev a cabo con base en el estudio realizado por Burgos et al. (2000), en el cual se evala la conversin de varios sustratos (Lactosa, glucosa y galactosa) a cido lctico usando Lactobacillus bulgaricus como biocatalizador, puesto que ste trabajo se centra en la separacin de cido lctico proveniente del caldo de fermentacin utilizando suero de leche, los datos extrados de este articulo pertenecen a los ensayos realizados utilizando lactosa como sustrato. Aqu se considera la existencia inhibicin por producto, debido a que una concentracin muy alta de cido lctico cambia considerablemente el pH del caldo. 3. MATERIALES Y MTODOS Para el modelamiento del proceso de fermentacin extractiva batch se considera que, inicialmente, se carga el sustrato (Suero de leche) con el solvente, de sta manera, en tiempo cero, se tienen dos fases en el fermentador, a medida que transcurre el tiempo los microorganismos producen cido lctico, dividindose ste en dos fases en equilibrio, quedando una fase acuosa que contiene los microorganismos y el sustrato diluido en agua; y una fase orgnica compuesta por el solvente y el cido lctico que se separa de la fase acuosa despus de ser producido por los microorganismos. En ste estudio se considera que solo el producto se divide en las dos fases en equilibrio, debido a que el sustrato en la fase orgnica se encuentra en muy pequeas cantidades. El proceso se lleva a cabo de acuerdo con el diagrama de flujo de la Fig. 1: Al fermentador se cargan, inicialmente, el sustrato, la biomasa y el solvente, la corriente 1 contiene sustrato, biomasa, solvente y producto que se enva a un equipo de filtracin donde se separa la biomasa y se recircula al fermentador por la corriente 2. La corriente 3, que contiene sustrato, solvente y producto, se enva a un decantador para separar las dos fases lquidas. La fase acuosa (Corriente 5) se recircula al fermentador, mientras que la fase orgnica (Corriente 4)
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pasa a un flash lquido vapor para separar el producto (Corriente 7) y recircular el solvente (Corriente 6) al proceso. Por ltimo la corriente 8 suministra solvente puro al proceso. Partiendo de este esquema, se procede a modelar el proceso de fermentacin extractiva para conocer el comportamiento de la biomasa, el sustrato y el producto en las dos fases con respecto al tiempo a partir de balances de materia en el fermentador.

Figura 1. Representacin esquemtica del proceso de fermentacin extractiva semi batch. 3.1 Balance de biomasa La expresin ms comnmente utilizada es la ecuacin de Monod (Fogler, 2001). Burgos et al. (2000) proponen 9 modelos para expresar la velocidad de crecimiento especfico () para el caso de conversin de lactosa a cido lctico, de los cuales el que mejor se ajusta a los resultados reportados en el mismo trabajo est dado por la Ec. (1).

= max

S K PI K S + S P + K PI

(1)

Entonces, el balance de biomasa est dado por:

rg =

dX S K PI = max dt K S + S P + K PI

(2)

3.2 Balance de sustrato La velocidad de consumo de sustrato ( rs) se relaciona con la velocidad de crecimiento celular por medio del coeficiente de rendimiento YXS, de la forma:

rS =

dS 1 1 dX 1 S K PI rg = max = = dt YXS Y XS dt YXS K S + S P + K PI

(3)

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3.3 Balance de producto En los resultados obtenidos por Burgos et al. (2000), la produccin de cido lctico esta directamente asociada al crecimiento exponencial de biomasa de la forma:

rP =

dP S K PI = YPX rg = YPX max dt K S + S P + K PI

(4)

De esta manera el sistema de ecuaciones diferenciales est dado por las Ec. (2), (3) y (4). Los parmetros necesarios fueron encontrados por Burgos et al. (2000).

mx = 1.14 h -1 , K S = 3.36
YPX = 9

g de clulas g de producto g , Y XS = 0.1 , YPS = 0.9 , L g de sustrato g de sustrato

gr producto g g g g , K PI = 8.31 , S 0 = 26 , X 0 = 0.5 , P0 = 0 gr celula L L L L

3.4 Solventes seleccionados Los solventes analizados son sistemas de inmiscibilidad tipo I y II (Cardona y Rivera, 2005), cuyos equilibrios lquido lquido con el sistema agua cido lctico se presentan a continuacin.

Figura 3. 1 Octanol

Figura 4. 2 Octanol

Figura 5. Metil isobutil cetona

Figura 6. 1 Hexanal

Figura 7. N Dodedanol

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4. RESULTADOS Y DISCUSIN 4.1 Evaluacin de la biocompatibilidad Se determina la hidrofobia de los solventes como un parmetro para estimar la biocompatibilidad de los mismos, el parmetro logp se define como el logaritmo decimal del coeficiente de distribucin de un solvente en el sistema n octanol agua (Honda et al., 1995; Vandak et al., 1997) y es inversamente proporcional a la solubilidad del solvente en agua. Como criterio se tiene que un valor de logp mayor a 1.5 indica que el solvente es solo escasamente soluble en agua. Una correlacin para estimar el valor de ste parmetro es:
log p = 4.5 0.75 * log s

(5)

El logp, para los solventes evaluados se presenta en la Tabla 1. Tabla 1. Resultados de la biocompatibilidad de los solventes. Solvente Solubilidad en agua (mg/L) 1 Octanol 0.3 2 Octanol 787 Metil isobutil cetona 0.02 1 Hexanal 6000 n Dodecanol 1.9 Logp 4.8922 2.3280 5.7742 1.6664 4.2909

Estos valores son superiores al reportado de 1.5, indicando que los solventes son muy poco solubles en agua, es decir, son aptos para utilizarlos en la fermentacin extractiva de cido lctico. 4.2 Calculo de las curvas cinticas del proceso de fermentacin extractiva Para graficar el comportamiento de las concentraciones de biomasa, sustrato y producto en el fermentador y la masa de cido lctico en ambas fases con el transcurso del tiempo, se resolvieron las ecuaciones diferenciales resultantes del balance de masa en el fermentador, Ec. (2), (3) y (4). Los perfiles de concentracin de biomasa, sustrato y producto en la fase acuosa y orgnica en g/L, para los dos solventes que arrojaron los mejores resultados se presentan a continuacin, adems se presenta el comportamiento de cido lctico en ambas fases con respecto al tiempo y las Fig. 10 y 13 presentan la influencia de la relacin solvente/alimento y el tiempo de operacin sobre la cantidad de cido extrada para cada solvente. Los resultados presentados a continuacin fueron obtenidos con el programa Reactiva1. La Tabla 2 muestra las condiciones del proceso de fermentacin extractiva y los resultados obtenidos para los 5 solventes evaluados.

Desarrollado por el grupo de investigacin en Procesos Qumicos, Catalticos y Biotecnolgicos de la Universidad Nacional de Colombia, Sede Manizales.
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Tabla 2. Resultados del proceso de fermentacin extractiva Solvente Tiempo de operacin (h) Relacin VO/VA Producto extrado (g) Densidad del solvente (g/L) Masa remanente en la Fase acuosa (g) Masa remanente en la Fase orgnica (g) Tiempo en el cual se Termina el sustrato (h)
Concentracin en la fase acuosa (g/l)

N Dodecanol 5 1.2 22.37 800 1.1373 0.1238 3.6

1 Octanol 4 1.4 23.03 824 0.4615 0.1087 3.1

2 Octanol 4.5 1.3 23.25 820 0.1834 0.04 3.2

Hexanal

Metil isobutil cetona 6 1.4 22.76 800 0.6970 0.0656 3.8

12 1.33 22.17 830 1.2694 0.0376 4.5

30 20 10 0 0 1 2 Tiempo (h) 3 4

0,8 0,6 0,4 0,2 0

Concentracin en la fase orgnica (g/l)

Sustrato (g/l) Producto fase acuosa (g/l) Biomasa (g/l) Producto fase orgnica (g/l)

Figura 8. Perfiles de concentracin usando 1 Octanol

4,5 4 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 0 0,5 1 1,5 2 Tiempo (h) Fase acuosa (g) Fase orgnica (g) 2,5 3 3,5 4

Figura 9. Distribucin de la masa de cido lctico usando 1 Octanol

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Masa (g)

Figura 10. Influencia de la relacin Solvente/Alimento y el tiempo de operacin en la cantidad de cido lctico extraido usando 1 Octanol.

Concentracin en la fase acuosa (g/l)

30 25 20 15 10 5 0 0 1 2 3 Tiempo (h) 4 5 6

0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

Concentracin en la fase orgnica (g/l)

Sustrato (g/l) Producto fase acuosa (g/l) Biomasa (g/l) Producto fase orgnica (g/l)

Figura 11. Perfiles de concentracin usando Metil - Isobutil - Cetona

Concentracin en fase acuosa (g/l) 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 1 2 3 Tiempo (h) Fase acuosa (g) Fase orgnica (g) 4 5 6

Figura 12. Distribucin de la masa de cido lctico usando Metil Isobutil Cetona
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Figura 13. Influencia de la relacin Solvente/Alimento y el tiempo de operacin en la cantidad de cido lctico extraido usando Metil Isobutil Cetona. Burgos et al. (2000) reportan un tiempo de operacin de 7 horas, para una fermentacin sin uso de solvente, en las Fig. 8 y 11 se muestran los perfiles de concentracin de biomasa, sustrato, producto en la fase acuosa y producto en la fase orgnica con un tiempo de operacin de 4 y 6 h, reduciendo el tiempo de fermentacin en 3 y 1 h, respectivamente. Las Fig. 9 y 12 muestran la variacin de la masa en g de cido lctico extrada con respecto al tiempo. En las Fig. 10 y 13 se presentan las variaciones de la masa de cido lctico extrada con respecto a la relacin Solvente/Alimento y al tiempo de operacin para el 1 Octanol y el MIK, respectivamente. 5. CONCLUSIONES El tiempo para la fermentacin sin solvente se ve reducido considerablemente al utilizar sta tcnica, pues el sustrato se consume (Dependiendo del solvente utilizado) alrededor de 3 5 horas comparado con las 7 horas alcanzadas, bajo las mismas condiciones, en una fermentacin normal. El nmero de unidades empleadas para la produccin y separacin por fermentacin extractiva es mucho menor que para el proceso de produccin de cido lctico convencional, puesto que para ste ltimo es necesario obtener primero lactatos y despus stos son transformados en cido lctico. Con el uso de sta tcnica se reduce considerablemente la inhibicin por producto, hecho que se confirma con la disminucin del tiempo de fermentacin.

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La tcnica de fermentacin extractiva es un proceso, a priori, econmicamente viable hecho por el cual vale la pena su escalado a nivel industrial para mejorar tanto la calidad del producto como los costos de capital y produccin. AGRADECIMIENTOS Al grupo de investigacin de Procesos Qumicos, Catalticos y Biotecnolgicos de la Universidad Nacional sede Manizales y a COLCIENCIAS por su apoyo econmico. NOMENCLATURA KPI KS P P0 rg rP rS S S0 t VA VO X X0 YPS YPX YXS mx Constante de inhibicin por producto (g/L). Constante de Monod (g/L). Concentracin de producto (g/L). Concentracin inicial de producto (g/L). Velocidad de crecimiento celular (g*L/h). Velocidad de aparicin de producto (g*L/h). Velocidad de consumo de sustrato (g*L/h). Concentracin de sustrato (g/L). Concentracin inicial de sustrato (g/L). Tiempo de operacin (h). Volumen de la fase acuosa (m3). Volumen de la fase orgnica (m3). Concentracin de biomasa (g/L). Concentracin inicial de biomasa (g/L). Coeficiente de rendimiento (g producto/g sustrato) Coeficiente de rendimiento (g producto/g biomasa). Coeficiente de rendimiento (g biomasa/g sustrato). Velocidad de crecimiento especfica (h-1). Velocidad de reaccin de crecimiento especfica mxima (h-1).

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