BIOTECNOLOGA E INGENERA GENTICA

Sigrid Mennickent1, Mario Suwalsky2

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Departamento de Farmacia, Facultad de Farmacia, Casilla 237, Universidad de Concepcin. FAX: 56-412207086, e-mail: smennick@udec.cl 2 Departamento de Polmeros, Facultad de Ciencias Qumicas, Universidad de Concepcin.

Muchas civilizaciones del pasado descubrieron que el azcar y las materias primas azucaradas podan sufrir transformaciones espontneas que generaban alcohol. El proceso fue controlado gradualmente, hasta que en el siglo XIX el qumico francs Louis Pasteur demostr que la fermentacin era producida por microbios; demostr tambin que otros microorganismos, diferentes en apariencia, eran responsables de otros procesos, como la produccin de vinagre. El trabajo de Pasteur no slo revolucion la tecnologa de la elaboracin de la cerveza y el vino, excluyendo microorganismos que pudieran contaminar el proceso de fermentacin y causar grandes prdidas, sino que demostr tambin que haba otros productos que podan ser obtenidos en la industria gracias a la intervencin de microorganismos. Uno de estos productos fue la acetona, un disolvente utilizado para la produccin de plvora. Durante la Primera Guerra Mundial, el qumico Chaim Weizmann verific que la acetona era producida por la bacteria Clostridium acetobutylicum. No siempre es fcil encontrar el organismo o clula adecuados para producir un determinado producto. Para ello se crean mediante la herramienta con ms proyeccin de la biotecnologa, que es la ingeniera gentica. Existen numerosos productos biotecnolgicos de uso diario. En el mbito de la salud se pueden citar la insulina ADN recombinante o insulina humana, linfocinas, interfern, hormona del crecimiento, eritropoyetina, factores de coagulacin sangunea, vacuna contra la hepatitis B, vacuna contra la malaria (esta ltima en fase de ensayo clnico), antibiticos, vitaminas, etc. En otras reas se encuentran insecticidas, combustibles renovables, cultivos mejorados en su produccin, colorantes, alimentos para ganado, etc. La biotecnologa no est exenta de interrogantes y debates morales debido a sus posibles usos indebidos. La mayor oposicin la han tenido los proyectos de clulas madre y el del genoma humano, los que en manos inescrupulosas podran tener graves consecuencias, como por ejemplo la clasificacin de la especia humana por sexo, defectos genticos o po enfermedades de transmisin gentica, posibles catstrofes ecolgicas por la liberacin incontrolada de algunos microorganismos, efectos secundarios de productos alimenticios y farmacolgicos, armas biolgicas usadas por grupos terroristas, etc. Biotecnologa: Existen numerosas definiciones de biotecnologa. Una de ellas dice que es la utilizacin de organismos vivos, o de compuestos obtenidos de organismos vivos, para obtener productos de valor para el hombre. Como tal, la biotecnologa ha sido utilizada desde los comienzos de la historia en la produccin del pan, cerveza, vino, queso, yogurt, etc., la que implica el uso de bacterias o levaduras con el fin de convertir un producto natural como leche o jugo de uvas, en un producto de fermentacin ms apetecibles como el yogurt o el vino. La biotecnologa moderna se basa en la utilizacin de las tcnicas del

ADN recombinante o de ingeniera gentica, los anticuerpos monoclonales y los nuevos mtodos de cultivo de clulas y tejidos. As, se puede decir que la biotecnologa es un conjunto de innovaciones tecnolgicas basadas en la utilizacin de microorganismos para la obtencin de bienes y servicios y para el desarrollo de actividades cientficas de investigacin. Se pueden establecer varias pocas o perodos en el desarrollo de la biotecnologa: La primera corresponde al perodo anterior a Pasteur. En esa poca, la biotecnologa se refiere a las prcticas empricas de seleccin de animales, plantas y sus cruzas, y a la fermentacin como un proceso para preservar y enriquecer el contenido proteico de los alimentos. Este perodo se extiende hasta la segunda mitad del siglo XIX. El segundo perodo comienza con los trabajos de Pasteur citados anteriormente. La tercera poca en la historia de la biotecnologa se caracteriza por desarrollos en cierto sentido opuestos, ya que por un lado la expansin vertiginosa de la industria petroqumica tiende a desplazar los procesos biotecnolgicos de la fermentacin, y por otro lado el descubrimiento de la penicilina por Fleming el ao 1928 sentara las bases para la produccin en gran escala de antibiticos a partir de la dcada de los aos cuarenta. El cuarto perodo destaca el descubrimiento de la estructura helicoidal del ADN por Crick y Watson en 1953, seguido por los procesos que permiten la inmovilizacin de las enzimas, los primeros experimentos de ingeniera gentica realizados por Cohen y Boyer en 1973 y la aplicacin en 1975 de la tcnica del hibridoma para la produccin de anticuerpos monoclonales, gracias a los trabajos de Milstein y Kohler. Existen varias tcnicas biotecnolgicas: ingeniera gentica, fusin de materiales celulares, fermentacin, e ingeniera enzimtica. Ingeniera gentica: Es la ms conocida de las tcnicas biotecnolgicas. Persigue la modificacin del patrimonio hereditario de un organismo introduciendo o seleccionando en su haber gnico uno o varios genes pertenecientes a un organismo de una especie distinta para dotarlo de capacidades que antes no tena, con el fin de que al reproducirse produzca sustratos modificados tiles para un determinado uso o funcin. El proceso puede emplearse en bacterias o en clulas eucariotas vegetales o animales. La ingeniera gentica puede definirse como la manipulacin deliberada de la informacin gentica, con miras al anlisis gentico o al mejoramiento de la especie. Existen varias tcnicas para la ingeniera gentica, como la electroforesis en gel, sondas, amplificacin del gen, vectores, y, la ms conocida de ellas, la tcnica ADN recombinante. Fusin de materiales celulares: consiste en extraer plsmidos (inclusin intracelular que se considera tiene una funcin gentica, especialmente una molcula de ADN procedente del cromosoma bacteriano que determina rasgos no fundamentales para la viabilidad del organismo, aunque de algn modo cambia la capacidad del organismo para adaptarse) con caractersticas interesantes de diferentes clulas e incorporarlos, sin modificacin, en un microorganismo que rene, entonces, las caractersticas de los organismos originales.

Fermentacin: aqu los microorganismos naturales o alterados genticamente se cultivan en cubas de fermentacin. Gracias a los productos fermentados, la biotecnologa proporciona una alimentacin ms rica en vitaminas, fcil de digerir y sabrosa. Ingeniera enzimtica: investiga y desarrolla mejores condiciones para incrementar el rendimiento de la fermentacin. ADN recombinante: Una molcula de ADN contiene miles de genes. No existe tcnica alguna que permita distinguir entre uno y otro; por lo tanto, el aislar el gen debe partir de su producto. El ms inmediato es el cido ribonucleico mensajero (ARNm). Con este fin se seleccionan aquellas clulas en que el gen se exprese en mayor cantidad y de ellas se asla el correspondiente ARNm. Existen diferentes mtodos que permiten efectuar esto. Se convierte la informacin almacenada en el ARNm en un segmento de ADN, utilizando las trancriptasas inversas de los virus. Una vez conseguido esto, se emplean las enzimas ADN polimerasas para convertir el filamento simple de ADN en un segmento de doble hlice. A este se le denomina ADN copia o complementario (ADNc) y es el objetivo final de la primera etapa. Una vez conseguido el ADNc correspondiente, se introduce en un plsmido o plasmidio. En esta etapa se utilizan enzimas de restriccin, cada una con capacidad para reconocer una secuencia especfica de bases en el ADN. Estas enzimas cortan el ADN en diversos fragmentos y pueden dejar extremos colgantes (de cadena simple) que tienden a asociarse nuevamente con nucletidos complementarios, por lo que se les llama extremos pegajosos. La accin posterior de una ernzima llamada ligasa hace posible la unin del ADNc con el plsmido y logra que la molcula recombinante sea estable. El plsmido recombinante se introduce en un hospedador. El ms usado es la bacteria escherichia coli, aunque tambin se pueden emplear levaduras. Una vez en el interior del hospedador, el plsmido se reproduce, y con l el ADNc. Cuando la bacteria se divide, lega copias a las dos bacterias hijas, aunque tambin es posible que slo una se quede con todas las copias. De entre todas las bacterias, se identifica cules portan plsmido recombinante, mediante un marcador.

Usos de la biotecnologa
Tcnicas de identificacin forense. Consiste en someter el ADN de una clula a la accin de enzimas de restriccin, obtenindose una coleccin de fragmentos de diferentes tamaos. Una sonda (secuencia de ADN marcada radiactivamente) especfica se unir a determinados fragmentos en determinadas posiciones. Si el procedimiento se lleva a cabo en zonas del ADN que sean polimrficas, esto constituye una especie de huella de identificacin que es distinta a la de otro individuo, pues otro ADN, sometido a la accin del mismo conjunto de enzimas de restriccin, rendir una serie de fragmentos diferente del anterior, unindose la sonda entonces a otros, en diferentes posiciones. Esta huella gentica es de amplio uso en criminologa y pruebas de paternidad siendo su fiabilidad altsima. Se denomina anlisis del polimorfismo de los fragmentos de restriccin o PLFR. Tcnicas de diagnstico/ Proyecto Genoma Humano (PGH). El genoma es el contenido del material gentico de un organismo biolgico en un juego completo de cromosomas. La perspectiva del PGH en medicina se basa en el postulado de que todas las enfermedades,

excepto el trauma, tienen un componente gentico. Las tcnicas de diagnstico consisten en detectar anomalas genticas, incluso antes de que se manifieste el fenotipo de la enfermedad, tambin mediante el empleo del PLFR. Es importante tener en cuenta, eso s, que mediante esta tcnica se ha avanzado en el diagnstico y pronstico de determinadas enfermedades genticas, pero que esto no va necesariamente de la mano del desarrollo de terapias eficaces para solucionar el problema por lo que el conocimiento del riesgo de manifestar una determinada enfermedad gentica puede ser una carga innecesaria para el paciente. Terapias gnicas. Es la administracin de material gentico en un paciente con la intencin de corregir un defecto gentico especfico. Se puede utilizar para curar enfermedades hereditarias y adquiridas y se puede llevar a cabo en clulas somticas o en clulas de la lnea germinal (espermatozoides, vulos). En USA las enfermedades hereditarias para las cuales se encuentra aprobado el uso de la terapia gnica son enfisema pulmonar, fibrosis qustica, hipercolesterolemia familiar e inmunodeficiencia combinada severa (nios burbuja). Entre las enfermedades adquiridas, son factibles de tratar en dicho pas mediante terapia gnica SIDA, restenosis y algunos tipos de cncer. Clonacin y transferencia nuclear. El clon es la copia fiel del original. Este procedimiento lleva a cabo la particin de un embrin, o separacin de blastmeros totipotentes (clulas totipotenciales son aquellas capaz de dar origen a un individuo completo) en embriones preimplantatorios (de 2-32 clulas). Esta tcnica conlleva muchas controversias y dudas de ndole valrica. Clulas madre embrionarias y de adultos. En los momentos posteriores a la fecundacin, el embrin unicelular tiene la capacidad de empezar a desarrollar un individuo humano completo; sin embargo, durante las sucesivas divisiones celulares el ADN va sufriendo una serie de plegamientos que hacen ilegible la informacin de numerosos genes. Estas clulas con plegamientos de su ADN no dan lugar a un embrin completo sino a estirpes celulares diferenciadas. Estas clulas se denominan pluripotenciales. Cuando estas clulas pluripotenciales son capaces de multiplicarse y proporcionar as clulas con el fin de reparar y renovar los tejidos donde pertenecen, se denominan clulas multipotenciales. Estas clulas estn presentes en la mayora de los rganos de los seres humanos adultos y su funcin es, por ejemplo, renovar las poblaciones de clulas que van envejeciendo. Las clulas pluripotenciales y las multipotenciales se consideran clulas madre o stem cells. La utilizacin teraputica de clulas madre intenta reparar tejidos daados utilizando mecanismos similares a los que de forma natural usa el organismo para este fin. El debate tico es si utilizar clulas madre embrionarias o clulas madre de un individuo adulto. Hoy en da existen estudios prometedores en relacin a la utilizacin de clulas de mdula sea para la recuperacin del sistema inmunolgico y hematopoytico en pacientes tratados con quimioterapia como en pacientes con neoplasias hematolgicas. Tcnicas reproductivas. Se han utilizado en algunos animales con el fin de mejorar las especies. Sometido tambin a cuestionamientos ticos. Proyecto Proteoma Humano. Consiste en analizar, desde todo punto de vista, las protenas que conforman el cuerpo del ser humano. Se encuentra an en etapa de proyecto.

Por qu esta magnfica tecnologa cientfica que ahorra trabajo y nos hace la vida ms fcil, nos aporta tan poca felicidad?. La respuesta es esta simplemente: porque an no hemos aprendido a usarla con tino. (Albert Einstein).

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