LOS ESTRS NITROSATIVO Y OXIDATIVO CONTRIBUYEN A LESIN HEPTICA POST-ISQUMICA TRAS CHOQUE HEMORRGICO SEVERO: EL ROL DE LA REANIMACIN HIPOXMICA.

RESUMEN: - Propsito: Shock hemorrgico y reanimacin es frecuentemente asociado con la lesin heptica por isquemia-reperfusin. El objetivo del estudio fue investigar si la reanimacin hipoxmica atena la lesin heptica. - Mtodos: Anestesiados, conejos blancos de Nueva Zelanda con ventilacin mecnica se desangraron a una presin arterial media de 30 mmHg. por 60 minutos. Reanimacin bajo normoxemia (nivel normal de oxgeno) (Normox-Res group, n = 16, PaO2 = 95105 mmHg) o hipoxemia (Hypox-Res group, n = 15, PaO2 = 3540 mmHg), seguido de la modificacin de FiO2. Los animales no sometidos a shock constituyeron al grupo de simulacin (n = 11, PaO2 = 95105 mmHg). Los ndices de respuesta inflamatoria, nitrosativa y oxidativa, fueron medidos y los estudios histopatolgicos e inmunohistoqumicos en el hgado se realizaron. - Resultados: El grupo de animales Normo- Res mostraron un incremento de suero alanina aminotransferasa, factor tumoral de necrosis alfa, interleuquinas 1b y 6 en comparacin con los grupos Hipox-Res y de simulacin. Generacin de especies reactivas de oxgeno, formacin de malondialdehido y actividad de mieloperoxidasa fueron elevadas en todos los conejos Normox-Res en comparacin con los grupos Hipox- Res y de simulacin. Del mismo modo, NO sintetasa endotelial y la expresin de mRNA de la NO sintetasa inducible fue sobre regulada y la inmunotincin nitrotirosina aument en los animales reanimados normoxemicamente, indicando un estrs nitrosativo ms intenso. Los animales Hipox-Res demostraron una lesin histopatolgica menos prominente, la cual era similar a los animales de simulacin. - Conclusiones: La reanimacin hipoxmica previene lesiones hepticas de reperfusin mediante la atenuacin de la respuesta inflamatoria y el estrs oxidativo y nitrosativo. INTRODUCCIN: El shock hemorrgico y la reanimacin inician una respuesta inflamatoria caracterizada por la sobre regulacin de la expresin de citoquinas y la acumulacin de neutrfilos en una variedad de tejidos [1,2]. El hgado con su crucial participacin en el metabolismo y la homeostasis frecuentemente es uno de los rganos ms afectados [3]. Estos procesos son activados cuando el hgado es privado transitoriamente de oxgeno y es reoxigenado. Esto ocurre en una serie de situaciones clnicas asociadas a con estados de bajo flujo que provocan una perfusin insuficiente, como los shocks hemorrgicos y otros tipos de shock, diversos procedimientos quirrgicos o durante la obtencin de rganos para transplantar [4,5]. Aunque la isquemia causa dao significativo a los tejidos y clulas, la lesin durante la reperfusin es ms grave [5]. Los estudios en animales han demostrado que al comienzo del perodo de reperfusin, el dao tisular parece estar asociado con una disminucin de la cantidad de xido ntrico sintetasa endotelial (e-NOS) derivando NO de la baja regulacin de la e-NOS. A diferencia de la NO sintetasa inducible (i-NOS) que el NO derivado se produce en cantidades excesivas relacionadas con la sobre regulacin de la i-NOS luego de la hemorragia.

Del mismo modo, las especies reactivas de oxgeno han mostrado ejercer un papel central en la contribucin a la lesin tisular luego de la reperfusin del hgado isqumico. La rpida interaccin de las ROS, en particular del superxido, con los NO derivados de las iNOS produce peroxinitrito radical que parece desnaturalizar el ADN, inhibir la fosforilacin y causar la peroxidacin de lpidos. Peroxinitrito entre otros (mieloperoxidasa), pueden nitrar (?) protenas dando como resultado nitrotirosina, la deteccin del mismo representa un marcador fiable de dao tisular. Este conocimiento se ve respaldado por el efecto beneficioso que ejerce cualquiera de los eliminadores de radicales (N-acetilcistena, la superxido dismutasa o catalasa), o por los inhibidores selectivos de iNOS [N6-(iminoetil)-L-lisina o N3(aminometil )benzylacetamidine] que ofrecen un grado variable de proteccin ante el compromiso de dao heptico por reperfusin. Si bien, la hipoxia lleva a una acumulacin de equivalentes reducidos, ya no puede ser oxidado debido por la mitocondria debido al oxgeno limitado, el aumento repentino de oxgeno al inicio de la reperfusin se considera que conduce al estrs oxidativo. La posterior agresin oxidativa puede conducir al dao del hepatocito contribuyendo al desarrollo de la hepatitis hipxica. Hemos demostrado el efecto beneficioso de la reintroduccin gradual de O2 a los tejidos isqumicos durante la reanimacin de shock hemorrgico por medio de la reanimacin hipoxmica. Estos efectos han sido observados en conjunto, el tejido del rgano y las interacciones sistmicas. El objetivo del presente estudio por lo tanto, fue investigar el efecto de la reanimacin hipoxmica de shock hemorrgico en la prevencin del tipo de lesin heptica isquemia-reperfusin. Este efecto fue evaluado por el grado de respuestas oxidativas, nitrosativas e inflamatorias, dadas por los hgados de los animales sometidos a shock hemorrgico y reanimacin. Resultados Suero de la actividad de la alanina aminotransferasa Como se muestra en la Figura 1, suero, alanina aminotransferasa (ALT) actividades aument significativamente a los 60 minutos de la reperfusin y despus, en comparacin con el tratamiento simulado Normox-Res grupo. por Por el contrario, la actividad de ALT no mostraron diferencia en todos los puntos de reperfusin entre los grupos sham y hipox-res. El estrs oxidativo heptico Lesin por reperfusin en Normox Res. animales tratados llev a El aumento de tejido heptico malondialdehdo (MDA), con indicacin de los niveles de peroxidacin lipdica, en comparacin con tanto simulacro y hipox Resgrupos (p = 0,05, Figura 2A). Por el contrario, los niveles de MDA hipox Res. grupo fueron similares con el tratamiento simulado (p = NS). As, la isquemia / reperfusin (I / R) dao causado el agotamiento significativo de la defensa heptica antioxidante en Normox-Res. grupo como se observa por La reduccin significativa en el glutatin reducido (GSH) de En comparacin con el tejido heptico tanto hipox-res y los grupos falsos (P, 0,05, Figura 2B), # en la que se mantuvo. Tejido heptico

GSH-a-total de GSH (GSH 2 oxidado, GSSG) relacin (Figura 2C) fue significativamente menor en el grupo-Res Normox En comparacin con los dos Hypox-res y los grupos ficticios (p 0,05). La generacin de ROS se mejor en Normox Res-tratado En comparacin con los animales tanto hypox y la falsa-Res. Como se muestra en Figura 2D mediana de la media geomtrica de la intensidad de fluorescencia (GMFI), que representa la formacin de ROS en el grupo de Normox-Res fue significativamente mayor que hipox-res y los grupos falsos (P, 0,05). En contraste, no se observaron diferencias significativas entre los grupos sham y hipox-res. Heptica actividad de la mieloperoxidasa Como se muestra en la Tabla 1, I / R dao causado un aumento significativo en la infiltracin de neutrfilos heptica en el grupo de Normox-Res, evalu por la mieloperoxidasa heptica elevada (MPO) de la actividad, en comparacin con hipox resolucin y los grupos ficticios (p = 0,05). La actividad de MPO fue Por lo tanto significativamente elevada entre los grupos sham y hipox resolucin (P = 0,05). RT-PCR para la e-NOS e I-NOS expresin del ARNm La expresin de ARNm de los e-NOS en el tejido heptico de la NormoxRes animales del grupo se increment significativamente en comparacin con el Hypox-res y los grupos ficticios (Tabla 1, p, 0,05). Un lmite de la asociacin de e-NOS mRNA mostr que entre hipox-Res y falsos grupos (p = 0,056). La expresin de ARNm i-NOS Se detect en el tejido del hgado, de 12 de los 16 animales del Normox-Res grupo contra de 3 de los 15 animales en el hipox-Res (p 0,05). Por el contrario, iNOS expresin del ARNm no fue detectado en el tejido del hgado del grupo de simulacin que no muestra diferencia a hipox resolucin de grupo. Figura 1 Los niveles sricos de alanina aminotransferasa (ALT), que denotan el grado de lesin hepatocelular. Los diagramas de caja muestra la mediana (Lneas), rangos intercuartil (cajas) y percentiles 5 y 95 (bigotes) de los tres grupos durante el experimento. + P, 0,05 frente al Sham. Normox-Res; * P, 0,05 frente a la Resolucin Normox. Hypox resolucin.

conclusion:El presente estudio fue comprobar el efecto protector de reperfusin hipoxemia sobre la lesin heptica post-isqumica en un modelo experimental de choque hemorrgico severo y reanimacin. En ausencia de cualquier terapia antioxidante protectora, los resultados de este estudio mostraron que la reintroduccin progresiva de oxgeno durante el perodo de reperfusin inicial atena post-isqumica hgado lesiones por limitar las tensiones tanto oxidativos y nitrosativo, as como la respuesta inflamatoria