ENZIMAS

A converso da sacarose em CO2 e H2O na presena de O2 um processo altamente exergnico que libera energia livre e, apesar desse processo qumico ser termodinamicamente favorvel, muito lento. => sem catalise reaes no ocorrem em tempo til para sustentar a vida. Enzimas: - Agindo em sequncias organizadas catalisam centenas de reaes sucessivas pelas quais as molculas nutrientes so degradadas, a energia qumica conservada e transformada e as macromolculas biolgicas so sintetizadas a partir de molculas precursoras simples. - Enzimas especializadas => aumenta o grau de especificidade por seus substratos - Aceleram reaes qumicas - Funcionam em solues aquosas sob condies suaves de TC e pH - As estruturas proteicas primarias, secundrias, tercirias e quaternrias das enzimas so essenciais para a sua atividade cataltica. Se essas estruturas se perdem, ou seja, a enzima destruida ou desnaturada a atividade cataltica se perde. CO-FATOR: componente qumico adicional de 1 ou mais ons orgnicos (Fe2+, Mg2+, Mn2+ e Zn2+) COENZIMA: molcula orgnica complexa ou metalorgnica que funcionam como transportadoras transitrias de grupos funcionais especficos. Geralmente so derivadas de vitaminas. GRUPO PROSTTICO: coenzima ou on metlico que est COVALENTEMENTE ligada parte proteica da enzima HOLOENZIMA: a enzima completa e cataliticamente ativa juntamente com sua coenzima e/ou ons metlicos. A parte proteica dessa enzima chamada de APOENZIMA/APOPROTENA. Como as enzimas funcionam A caracterstica que distingue uma reao catalisada enzimaticamente a de ela ocorrer no interior dos limites de uma cavidade na enzima chamada de STIO ATIVO. A superfcie do centro ativo contornada com resduos de aminocidos cujos grupos subtituintes se ligam ao substrato e catalizam sua transformao.

E+S

ES

EP

E+P

- ESTADO FUNDAMENTAL: ponto de partida tanto para reao de ida como de volta. Obs: As setas bidirecionais indicam que qualquer enzima que catalisa S->P catalisa P>S. - variao de energia livre padro bioqumica: G , padro em pH=7,0 - A energia livre do estado fundamental de P menor que a de S => G < 0 para reao no sentido S -> P e o equilbrio favorece a formao de P. - ESTADO DE TRANSIO: momento molecular efmero no qual eventos como quebra e/ou formao de ligaes e desenvolvimento de cargas ocorrem em um ponto preciso no qual a decomposio para formar o substrato ou o produto igualmente provvel. - Existe uma barreira energtica entre S e P que representa a energia necessria para o alinhamento dos grupos qumicos reagentes, formao de cargas de transientes instveis, rearranjos de ligaes e outras transformaes necessrias para que a reao ocorra em uma das direes => para sofrerem reao as molculas precisam ser excitadas at um nvel de energia maior. Obs: Uma energia de ativao alta corresponde a uma reao lenta. As velocidades das reaes podem ser aumentadas pela elevao da temperatura, que aumenta o nmero de molculas com energia suficiente para superar essa barreira energtica. Os catalisadores aumentam a velocidade das reaes diminuindo sua energia de ativao - A estabilidade de uma molcula aumenta com o aumento da altura de sua barreira de ativao. Sem tais barreiras energticas, as macromolculas complexas poderiam reverter espontaneamente para as formas moleculares mais simples e as estruturas complexas e altamente ordenadas, bem como os processos metablicos das clulas poderiam no existir.

O equilbrio de um reao est intrinsicamente ligado ao G enquanto a velo cidade da reao ao G

V Obs 1: Grande valor negativo de G reflete equilbrio desfavorvel. E K reflete a probabilidade de a reao ocorrer em um dado conjunto de condies (pH, TC, etc).

Obs 2: R a constante dos gases 8,315 KJ/mol e T a temperatura absoluta 298K ou 25C. Alm disso k a constante de Boltzmann e h a constante de Planck - Reaes qumicas dos mais variados tipos ocorrem entre o substrato e os grupos funcionais da enzima (cadeias laterais de aminocidos especficos, ons metlicos e coenzimas). Os grupos funcionais catalticos das enzimas podem formar uma LIGAO COVALENTE TRANSITRIA com um substrato e ativ-lo para a reao ou, ento algum grupo pode ser transferido transientemente do substrato para um grupo da enzima. Elas diminuem a energia de ativao (e, portanto, aceleram a reao), propiciando um caminho reacional alternativo de energia mais baixa. A maior parte da energia necessria para diminuir a energia de ativao derivado de interaes fracas, no-covalentes, entre o substrato e a enzima. - A formao de cada interao fraca no complexo ES acompanhada por uma pequena liberao de energia livre que garante o grau de estabilidade para a interao. A energia derivada da interao enzima substrato chamada de energia de ligao GB.

- Algumas interaes fracas so formadas no complexo ES, mas a totalidade das interaes fracas que se estabelecem entre o substrato e a enzima estabelecida apenas quando o substrato atinge o estado de transio. A energia livre (de ligao)

liberada pela formao dessas interaes supre parcialmente a energia requerida para se atingir o topo da colina de energia. O somatrio da energia de ligao , desfavorvel (+)G e favorvel (-)GB, resulta em uma energia de ativao lquida menor. E+ S E+P A segunda reao mais lenta, ela limita a velocidade da reao enzimticas => essa velocidade deve ser proporcioanl concentrao da substncia que reage no segundo passo, isto ES. - A velocidade Vmx ser atingida quando praticamente todas as molculas da enzima estiverem na forma do complexo ES e a concentrao de E livre for significativamente pequena => enzima saturada e a valocidade da reao no aumenta com o aumento da [S]. ES ES

Eq. de Michaelis-Menten , Km = cte. Quando: portanto, Km = [S] - Km a constante de MichaelisMenten e corresponde a [S] necessria para haver catalise efetiva. Alm disso, indica a AFINIDADE da ENZIMA pelo S quando K2 determinante.

Quanto MENOR Km => MAIOR a afinidade com o substrato Eq. de Lineweaver-Burk

Quando Quando portanto:

temos que: temos que: =

- Kcat: uma constante de velocidade de primeira ordem cuja unidade o recproco do tempo. Corresponde ao nmero de molculas S convertidas em P por uma NICA MOLCULA E. Para reaes que ocorrem em duas etapas: Vmx Obs: Duas enzimas que catalizam reaes diferentes podem ter a mesma Kcat (nmero de renovao), embora as velocidades das reaes no-catalisadas possam ser diferentes. Inibio enzimtica - Os inibidores das enzimas so agentes moleculares que interferem com a catlise, diminuindo ou interrompendo as reaes enzimticas. Por agirem dessa forma, tem grande importncia nos agente farmacuticos. Por exemplo, a aspirina (acetilsalicilato) inibe a enzima que catalisa o primeiro passo na sntese das prostaglandinas, compostos envolvidos em muitos processos, incluindo alguns que produzem a sensao de dor. Inibio reversvel: a) Inibio competitiva: compete com o substrato pelo stio ativo da enzima. Enquanto I ocupar o centro ativo da enzima ele impedir a ligao do substrato.

b) Inibio incompetitiva: se liga em um stio diferente do stio ativo do substrato, porm, diferentemente do inibidor competitivo, liga-se apenas ao complexo ES.

c) c) Inibio mista: tambm se liga a um stio ativo diferente do stio ativo do substrato, mas ele pode se ligar tanto a E como a ES.

Altera a relao Vmx e Km/Vmx

Obs: O caso clssico em que =, raramente encontrado na prtica, definido classicamente como inibio no-competitiva e um caso particular da inibio mista.Nesse caso: Vmx alterado mas Km no.

Inibio irreversvel: So aqueles que se combinam com um grupo funcional na molcula da enzima ou o destroem ou ainda formam uma associao covalente bastante estvel.

Um caso especfico desse tipo de inibidor so os inibidores suicidas, que so compostos relativamente pouco reativos at se ligarem ao stio ativo de uma enzima especfica. Assim, em vez de ser transformado no produto normal, o inibidor convertido em um composto muito reativo que se combina irreversivelmente com a enzima, inativando-a. Atividade enzimtica afetada pelo pH As enzimas tem um pH timo (ou um intervalo de pH) no qual a sua atividade mxima. Em um pH maior ou menos, a atividade diminui. Logo, o intervalo de pH no qual a enzima sofre mudanas na atividade pode fornecer uma pista sobre qual aminocido est envolvido.

Enzimas reguladoras ou alostricas Em cada via metablica existe pelo menos uma enzima que determina a velocidade de toda a sequncia, porque ela catalisa a reao mais lenta ou a reao limitante da velocidade. Alm disso, essas enzimas reguladoras tm sua atividade cataltica aumentada ou diminuda em resposta a determinados sinais. Enzimas alostricas so as enzimas que alm de stio ativo, possuem um ou mais stios reguladores ou alostricos para a ligao do modulador. Formam ligao nocovalente de compostos reversveis. Mundaas conformacionais induzidas por um ou mais moduladores interconvertem formas mais ou menos ativas da enzima. Os moduladores das enzimas reguladoras podem ser tanto inibidores como estimuladores e podem ser metablits ou cofatores, posivitos ou negativos. Esses determinam a velocidade das reaes, uma vez que atividade cataltica pode ser aumentada ou diminuida pelos sinais qumicos ou moduladores. Obs: Em muitas vias metablicas a 1 enzima da sequncia regulada - Heterotrpica: quando o modulador uma molcula diferente do substrato

- Homotrpicas: quando o modulador e o substrato so idnticos

Inibio por feedback ou retroalimentao:

Curva sigmoidal de uma enzima homotrpica em que o substrato tambm atua como um modulador positivo (estimulador) ou ativador.

Efeitos de um modulador positivo Tipo menos comum de modulao e um modulador negativo sobre em que Vmx alterada e K0,5 uma enzinam alostrica em que permanece constante. K0,5 alterado sem mundaas em Vmx.

Enzimas reguladoras: modificaes covalentes reversveis Agentes modificadores: ligados e removidos por outras enzimas

Modificao covalente da enzima: ativao inativao da fosforilase do glicognio