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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE QUERTARO CAMPUS AMEALCO

MATERIA: BIOINGENIERA

TRABAJO: BIOREACTOR

MAESTRA: KARLA ZAVALA GUTIRREZ

INTEGRANTES: CSAR RAMREZ PREZ HERMINIO MIRANDA RODRGUEZ MARIANA HERNNDEZ MALDONADO

Introduccin El biorreactor, es sin duda, uno de los equipos fundamentales de la microbiologa industrial. Es el recipiente donde se realiza el cultivo, y su diseo debe ser tal que asegure un ambiente uniforme y adecuado para los microorganismos. Un biorreactor es un recipiente o sistema que mantiene un ambiente biolgicamente activo. En algunos casos, un biorreactor es un recipiente en el que se lleva a cabo un proceso qumico que involucra organismos o sustancias bioqumicamente activas derivadas de dichos organismos. Este proceso puede ser aerbico o anaerbico. Estos biorreactores son comnmente cilndricos, variando en tamao desde algunos mililitros hasta metros cbicos y son usualmente fabricados en acero inoxidable. Un biorreactor puede ser tambin un dispositivo o sistema empleado para hacer crecer clulas o tejidos en operaciones de cultivo celular. Estos dispositivos se encuentran en desarrollo para su uso en ingeniera de tejidos. En trminos generales, un biorreactor busca mantener ciertas condiciones ambientales propicias (pH, temperatura, concentracin de oxgeno, etctera) al organismo o sustancia qumica que se cultiva. En funcin de los flujos de entrada y salida, la operacin de un biorreactor puede ser de tres modos distintos: El fermentador (o biorreactor) tiene dos objetivos primordiales: a) proporcionar oxgeno a las clulas que se estn cultivando en suspensin y b) mantener las condiciones ambientales bsicas (como temperatura, oxgeno disuelto y pH) en los niveles que sean ptimos para la produccin del metabolito de inters. El equipo donde se realiza el proceso se denomina biorreactor o fermentador. El mismo provee todos los servicios que son necesarios para el cultivo, tales como mezclado, termostatizacin, suministro de oxgeno, entradas para adicin de nutrientes, control del pH, etc. Por otra parte, cuando se habla de sistemas de cultivo o, tambin, mtodos de cultivo, se hace referencia al modo de operar el biorreactor, esto es en forma continua o discontinua. Clasificacin de los Biorreactores Clasificacin Operativa Tanto biorreactores como fermentadores se clasifican primeramente de acuerdo al modo de operacin: discontinuo, semicontnuo, continuo. Esta es una clasificacin operativa y se aplica a cualquier reactor, sea qumico o biolgico (biorreactor). En los reactores biolgicos el modo de operacin define el sistema de cultivo que es el mismo y delimita la clasificacin procesalproductiva del bioproceso (cultivo). Al operar un biorreactor en una determinada

categora (discontnuo, semicontnuo, contnuo), automticamente queda determinado el modo de cultivo del sistema y se definen los parmetros y las caractersticas operativas y de diseo que intervienen en el proceso productivo del sistema. Clasificacin Biolgica Los sistemas biolgicos deben interaccionar con el ambiente externo para poder crecer y desarrollarse; es por eso que los biorreactores se clasifican biolgicamente de acuerdo al metabolismo procesal del sistema de cultivo: anaerbico, facultativo, aerbico. Los bioprocesos de cultivo y las fermentaciones estn basados en el metabolismo celular del cultivo. El metabolismo define los parmetros y caractersticas operativas-biolgicas de diseo y de operacin del biorreactor. Estas caractersticas son las que intervienen en la parte biolgica del sistema y tienen que ver con el crecimiento, productividad y rendimiento del cultivo; por lo que, definen la clasificacin biolgica-procesal del sistema de cultivo. Clasificacin Biolgica-Operativa Ambas clasificaciones; la biolgica y la operativa, son procesalmente interdependientes y en su conjunto afectan el diseo final del biorreactor. Al conjuntarse ambas clasificaciones, se conjuntan tambin la funcin operativa y la biolgica para establecer entre ambas un propsito de utilizacin, el modo de cultivo y el bioproceso. Siendo el propsito de utilizacin, el destino de cultivo del biorreactor; para qu tipo de cultivo va a ser utilizado el biorreactor; el modo de cultivo es sinnimo de sistema de cultivo y el bioproceso es en s, todo el proceso. En trminos generales, un biorreactor busca mantener ciertas condiciones ambientales propicias (pH, temperatura, concentracin de oxgeno, etctera) al elemento que se cultiva. En funcin de los flujos de entrada y salida, la operacin de un biorreactor puede ser de tres modos distintos: 1. Lote (Batch) 2. Lote alimentado (Fed-Batch) 3. Continuo o quimiostato Diseo de un biorreactor discontinuo Un sistema de cultivo discontinuo no posee alimentacin (F1) o lavado (F2); se carga el contenido del biorreactor (tanda o lote) con el medio de cultivo y luego se inocula con el cultivo (clulas o microorganismos) y se deja crecer hasta obtener el producto (biomasa o metabolito). Balances y ecuaciones El primer balance que debe realizarse en cualquier sistema es el Balance General o Global; en l se toma en consideracin nicamente el sistema como una caja negra el ambiente externo y los flujos que entran (F1) y

salen (F2) e interaccionan con el ambiente externo. De esta forma el primer balance es: Balance general biomasa Velocidad de Acumulacin = Velocidad de Entrada Velocidad de Salida + Velocidad de Formacin Velocidad de Consumo Balance General por componente Una vez dado el balance general de biomasa, debe tomarse en cuenta que, en un sistema de cultivo, existen muchos componentes: sustratos, productos, compuestos metablicos que conforman el caldo de cultivo (medio interno); incluso la biomasa, se considera un componente en s misma. A partir del balance general, debe establecerse un balance general para cada componente del cultivo o la biomasa. De acuerdo al enunciado del balance general: la velocidad de acumulacin del componente componente es el flujo de entrada por la concentracin inicial del por la [velocidad de entrada] menos el flujo de salida

concentracin del componente i [velocidad de salida]; ms la velocidad de formacin del componente [formacin] menos la velocidad de consumo del componente [consumo]: Ec.1 Respecto a las velocidades de formacin y consumo: Si se trata de un componente metablico, responden a la acumulacin (formacin) del componente dentro de la clula y al consumo del metabolito por parte de la clula (consumo). Si se trata de biomasa, formacin corresponde a la generacin de biomasa y el consumo al consumo de biomasa durante el bioproceso; esto es, a la produccin metablica en el primer caso y a la produccin o productividad en el segundo. Nomenclatura

= volumen del cultivo (m) = caudal de alimentacin (m/s) = caudal de salida (m/s) = concentracin del componente en la alimentacin (kg/m) = concentracin del componente en el lavado (kg/m) = velocidad de formacin del componente (kg/ms) = velocidad de consumo del componente (kg/ms).

Balance General por componente para cada modo de operacin La ecuacin de balance general por componente Ec. 1, por ser general, se define para una operacin continua. La condicin fundamental de toda operacin continua es: En una operacin continua el flujo de entrada (F1) debe ser igual al flujo de salida (F2): F1 = F2 Esta condicin se conoce como flujo en estado estacionario (FEE). Para modelar el comportamiento de la biomasa del cultivo en el estado estacionario (EE) adems de la condicin de flujo (FEE) debe haber equilibrio en la densidad o concentracin de sta. Esto se conoce como quimioestsis o equilibrio quimioesttico y es por eso que a los sistemas de cultivo continuo se les llama quimioestatos. Est condicin est dada por la ecuacin: dV/dt = F1 F2 Ec. 2. Bajo la condicin de FEE y suponiendo que la densidad del cultivo y de la alimentacin son iguales (Ec.2, quimioestsis) la Ec.1 se reduce a: dCi/dt = F (Ci1 Ci) + V (rfi rci) Ec. 3. La ec.3 que se conoce como ecuacin de balance para una operacin contina en estado estacionario. De no existir el estado estacionario (EE) se produciran dentro del biorreactor dos condiciones de flujo indeseables: Si F1 > F2 se produce el rebalse o desborde del biorreactor, condicin que se da cuando el flujo de entrada sobrepasa la capacidad del reactor. Si F2 > F1 se produce el lavado o drenado de producto o biomasa, condicin que se da cuando el flujo de salida sobrepasa la capacidad del reactor. Cuando el modo de operacin es semicontinuo (fed-batch) el caudal de salida F2 es nulo (F2 = 0) por lo que, el volumen V aumentar con el tiempo en funcin del caudal de entrada: dV/dt = F Ec.4. Y en el balance de materia se anula el trmino F2Ci resultando: d(VCi/dt) = FCio + V (rfi - rci) Ec.5. Observe que el volumen que permanece dentro del operador diferencial es porque vara con el tiempo (Ec.4), en tanto que el otro no lo hace (Ec.3). Esa es la razn por la que una operacin semicontinua tiene duracin limitada en el tiempo (el volumen no puede incrementarse ms all del volumen de trabajo o volumen til del biorreactor). El tiempo que dura una operacin semicontinua se conoce como tiempo de residencia (tr) y es el tiempo que dura el cultivo o bioproceso en un sistema semicontinuo. Cuando el modo de operacin es discontinuo (batch) ambos caudales son nulos (F1 = F2 = 0) por lo que, el volumen es constante y se anulan los trminos F1 Cio, F2 Ci en la Ec.1.Eso da como resultado: dCi/dt = rfi rci Ec.6. La duracin de un cultivo discontinuo (batch) es tambin, limitada en el tiempo, pero se diferencia de la del cultivo semicontinuo (fed-batch) en que depende nicamente de las condiciones iniciales del cultivo; esto por cuanto, no existe

alimentacin (F1). Una vez cargado el biorreactor e inoculado el medio de cultivo, la concentracin de la biomasa aumenta gracias a los nutrientes, pero una vez que el sustrato que limita el crecimiento se haya agotado, el crecimiento ya no es posible y finaliza el cultivo. Por este motivo, el tiempo que dura el cultivo dentro de un biorreactor con un modo de operacin discontinuo se llama tiempo de cultivo (tc). Balances individuales Los principales balances por componente en su forma individual son:

Balance de Biomasa: d (VX) / dt = FiXi + VrgX FoXo VrcX rgX = X (velocidad de crecimiento celular) rcX = kdX (velocidad de muerte celular) Balance de Sustrato: d (VS) / dt = FiSi FoSo VrcS

Balance de Sustrato: d (VS) / dt = Fi(40) Fo(20) (2)(.5)(.02)

rcS = qSX / YX/S = X / YG + m X + qPX / YP Balance de producto: d (VP) / dt = FiPi FoPo VrgP rgP = qP X Balance de Oxgeno: d (VCL) / dt = FiCLi FoCLo VrcO2 + VNiO2 Balance de Anhdrido Carbnico: d(VCCO2) / dt = FiCCO2i FoCCO2o + VrgCO2 VNoCO2

Nomenclatura

V: Volumen del lquido en el biorreactor, L t: Tiempo, h y: Concentracin del componente y en el lquido dentro del biorreactor, g/L X: Concentracin de biomasa en el lquido dentro del biorreactor, g/L S: Concentracin de sustrato en el lquido dentro del biorreactor, g/L P: Concentracin de producto en el lquido dentro del biorreactor, g/L CL: Concentracin de oxgeno en el lquido dentro del biorreactor, g/L C*: Concentracin de oxgeno en el lquido en equilibrio con el gas, g/L CCO2: Concentracin de CO2 en el lquido dentro del biorreactor, g/L F: Velocidad de flujo de lquido, L/h Ni: Velocidad de transferencia de un componente del gas al lquido, g/Lh No: Velocidad de transferencia de un componente del lquido al gas, g/Lh rg: Velocidad de generacin, formacin o produccin, g/Lh rc: Velocidad de consumo o utilizacin, g/Lh : Velocidad especfica de crecimiento celular, h-1 qS: Velocidad especfica de consumo de sustrato, g/gh qP: Velocidad especfica de formacin de producto, g/gh m: Velocidad especfica de consumo de sustrato para mantenimiento celular, g/gh

Kd: Velocidad especfica de muerte o declinacin celular, h-1 YP: Coeficiente (estequiomtrico) de rendimiento de producto basado en el consumo de sustrato consumido para formacin de producto, g/g YP/S: Coeficiente de rendimiento de producto basado en el consumo total de sustrato, g/g YG: Coeficiente de rendimiento de biomasa basado en el consumo de sustrato para crecimiento, g/g YX/S: Coeficiente de rendimiento de biomasa basado en el consumo total de sustrato, g/g kLa: Coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno, h-1

Subndices

i = Ingreso o = Salida S = Sustrato P = Producto O2 = Oxgeno CO2 = Anhdrido carbnico

Casos Generacin de Biomasa: cuando la operacin discontinua tiene como objetivo la generacin de biomasa (clulas o microorganismos); se parte del supuesto de que no se forma producto y que la relacin -S puede ser representada por la ecuacin de Monod, con lo que las ecuaciones de balance de biomasa y balance de sustrato limitante de la velocidad quedan: Balance de biomasa: d (X)/dt = m (XS / Ks + S) Balance de sustrato: d (S)/dt = -m / Yx/s (XS / Ks + S) El sistema de ecuaciones posee solucin analtica, pero en sta, no aparece X en forma explcita, por lo que, resulta de poca utilidad. Afortunadamente, es posible analizar casos particulares, haciendo algunas suposiciones. En el caso de tomar en cuenta nicamente la fase exponencial del crecimiento, cumple que: S Ks y las ecuaciones se reducen a las originales, salvo que es substituida por m: Balance de biomasa: d (X)/dt = mX Balance de sustrato: d (S)/dt = mX / Yx/s Dado que bajo tales condiciones el crecimiento ocurre al mximo valor de posible, integrando la ecuacin de balance de biomasa con las condiciones: t = 0, X = Xo se obtiene una expresin para la concentracin de biomasa en funcin del tiempo: X = Xo emt o bien: lnX = lnXo + mt

La ecuacin establece que para S Ks, el crecimiento es exponencial y permite calcular el valor de m graficando el valor del logaritmo de X (ln X) en funcin del tiempo (t). En forma similar, la concentracin de sustrato limitante de la velocidad en funcin del tiempo es: S = So [(Xo / Yx/s) (emt - 1)] Conforme el sustrato se agota, S disminuye y la condicin de S se hace comparable a Ks con lo que dX/dt comienza a disminuir (fase de desaceleracin), hasta hacerse finalmente nula (S = 0); en este punto, se alcanza la mxima concentracin de biomasa y finaliza el cultivo, pues se ha alcanzado la fase estacionaria. La concentracin final de biomasa (Xf) se puede calcular si se conoce Yx/s: Yx/s = - (Xf Xo) / (Sf So) Dado que Sf = 0, Xf = Xo + Yx/sSo Lo usual es utilizar estas ecuaciones para calcular Yx/s. Note que antes de la fase exponencial existe una fase de retardo durante la cual, la concentracin de biomasa no se modifica substancialmente pero, ocurren cambios en la composicin macromolecular y en el "estado fisiolgico" de las clulas del cultivo. Si por algn motivo debe tomarse en cuenta esta fase, se debe aplicar una correccin a la ecuacin la concentracin de biomasa en funcin del tiempo: lnX = lnXo + m (t tr) donde tr es el tiempo de retardo; es decir, la modificacin consiste en restarle al tiempo real, el tiempo transcurrido hasta que comienza el crecimiento exponencial. Normalmente, la fase de retardo no es deseable, tanto por la prdida econmica como por el tiempo desperdiciado; para minimizarla se hace crecer el inculo aparte, en un medio de cultivo igual al que se va a emplear en el bioproceso (cultivo o fermentacin) y luego se procede a transferirlo cuando las clulas ya se encuentran en la fase exponencial. La ltima fase es la decaimiento o muerte y consiste en la disminucin de la concentracin celular de la biomasa por lisis o muerte celular. Ecuacin de Diseo de un Biorreactor Discontinuo Ideal Un sistema de cultivo discontinuo es un sistema discreto en cuanto al movimiento de biomasa, ya que no hay flujos. Como condiciones de idealizacin en un biorreactor discontinuo ideal se supone que el cultivo y su medio estn perfectamente agitados y que los parmetros de velocidad (r) son constantes en todo el volumen del sistema (volumen de control); es decir, que la mezcla es perfecta. La otra consideracin es que se trabaja con velocidades y componentes individuales (i), por lo que se utiliza la definicin de conversin del componente i (Xi), en vez de biomasa; es decir, se trabaja el componente metablico, no la clula. La ecuacin de balance del componente i es: d (Xi)/dt = rxi = Xi

Teniendo en cuenta la definicin de conversin y diferenciando Ni respecto al tiempo: dNi/dt = -NiodXi/dt Sustituyendo en la ecuacin de balance: -NiodXi/dt = rxiV Separando en variables e integrando: (Nio/-rxiV) dXi = dt donde los lmites de integracin son: Xio (conversin de entrada) y Xf (conversin final) para la conversin y to = 0 (tiempo inicial) y tf (tiempo total de reaccin) para el tiempo de reaccin. Integrando obtenemos: t = Nio dXi/-rxiV la ecuacin general de diseo para un biorreactor discontinuo ideal. Anlisis de Fenmenos de Transporte Sistemas de Intercambio Trmico La transferencia de calor es un proceso el que se intercambia energa en forma de calor entre distintos cuerpos o entre diferentes partes de un mismo cuerpo que estn a distinta temperatura. El calor se transfiere por una combinacin de dos o ms de estos tres procesos: conveccin, conduccin o radiacin. Uno de los mecanismos trmicos (proceso) suele predominar sobre los otros dos, tambin es posible que los tres procesos se den simultneamente. La conduccin es el proceso dominante en los intercambiadores de calor de casco y tubos y en el tubo serpentn. Aunque el mecanismo exacto de la conduccin no se comprende, se sabe que se debe al movimiento (energa cintica) de los electrones libres que se mueven por la red cristalina del slido y transportan energa cuando existe una diferencia (gradiente) de temperatura. Ley de Fourier: J = KT/x Donde J = densidad de corriente de energa (J/ms); K = conductividad trmica (constante caracterstica del material). La velocidad de conduccin de calor (J) a travs de un cuerpo slido (medida por unidad de seccin transversal) es proporcional directamente al negativo del gradiente de temperatura que existe en dicho cuerpo. Tabla de Conductividades Trmicas y Propiedades de Metales

Las unidades de las magnitudes estn expresadas en el Sistema Internacional de Unidades de Medida. Clculo de Resistencias Trmicas Para calcular la resistencia trmica es necesario transformar las ecuaciones que modelan los distintos mecanismos de transferencia de calor para que presenten la siguiente forma: (Ta - Tb) / Q-punto = expresin matemtica = Rth La expresin de la resistencia trmica Rth es diferente en cada sistema y depende del mecanismo de transferencia. Resistencia trmica en la conduccin En estos casos se debe distinguir entre las diferentes geometras que se presentan en cada elemento resistivo; las configuraciones geomtricas ms usuales: pared plana, pared cilndrica y pared esfrica. Cilindro; Circuito elctrico anlogo para cilindro; Paredes conectadas en serie; Circuito elctrico anlogo para paredes compuestas conectadas en serie; Paredes compuestas conectadas en paralelo; Circuito elctrico anlogo para una pared compuesta conectada en paralelo. Intercambiadores de Calor Un intercambiador de calor es un dispositivo diseado para transferir calor por un mecanismo mixto de conveccin entre la pelcula de un lquido procesado (medio cultivo) y la pared de un slido metlico, seguido de la conduccin del calor transferido al rea transversal del slido metlico (tubo o placa) y nuevamente la transmisin de calor por conveccin desde la pared del slido metlico a otro fluido procesado (agua). Existen diversas formas de disear un intercambiador de calor. Arriba: un serpentn es un tubo metlico que se encarga del intercambio trmico; el lquido refrigerante recoge (absorbe) o transmite el calor. Abajo: una camisa o chaqueta es un dispositivo cerrado de intercambio trmico; en tanto que, un regenerador de calor es un dispositivo abierto. En todos los casos el mecanismo mixto de intercambio trmico es la conveccin que conduce el calor entre slidos metlicos estticos y superficies fluidas mviles.

Intercambiadores de Tubos: Doble Tubo: es el tipo ms sencillo de intercambiador de calor; est formado por dos tubos metlicos concntricos (paralelos) de dimetros diferentes; el fluido que se debe calentar o enfriar entra y fluye por el tubo de menor dimetro; el fluido trmico que ejecuta la accin, fluye por el espacio anular entre los dos tubos; ste espacio es el rea de transferencia de calor. Existen dos configuraciones para la direccin del flujo fluido:

a) Flujo paralelo: los dos fluidos entran por el mismo extremo y fluyen en el mismo sentido. b) Contraflujo: los fluidos entran por los extremos opuestos y tambin fluyen en sentidos opuestos. En un intercambiador de calor en flujo paralelo la temperatura de salida del fluido fro nunca puede ser superior a la temperatura de salida del fluido caliente. En un intercambiador de calor en contraflujo la temperatura de salida del fluido fro puede ser superior a la temperatura de salida del fluido caliente. El caso lmite ocurre cuando la temperatura de salida del fluido fro es igual a la temperatura de entrada del fluido caliente. La temperatura de salida del fluido fro nunca puede ser superior a la temperatura de entrada del fluido caliente. Compactos: son intercambiadores de calor multitubulares y estn diseados para alcanzar una gran rea superficial de transferencia de calor por unidad de volumen. La razn entre el rea superficial de transferencia de calor y su volumen se denomina densidad de rea (b). Un intercambiador con b > 700 m2/m3 se clasifica como compacto. En los intercambiadores de calor compactos los dos fluidos fluyen en direcciones ortogonales entre s (90) esta configuracin de flujo recibe el nombre de flujo cruzado y se clasifica en funcin del mezclado: a) Flujo cruzado mezclado: uno de los fluidos fluye libremente en direccin ortogonal al otro sin restricciones; b) Flujo cruzado no mezclado: se disponen las placas para guiar el flujo de uno de los fluidos en direccin ortogonal al otro sin que se mezclen. Casco y Tubos: es el tipo ms comn de intercambiador para aplicaciones industriales; estn formados por gran cantidad de tubos metlicos contenidos dentro en un casco o carcasa metlica. Los tubos se disponen con sus ejes paralelos al eje del casco; la transferencia de calor tiene lugar, a medida que el

fluido que se desea calentar o enfriar, se mueve (fluye) por el interior de los tubos metlicos; mientras que, el fluido trmico se fluye por fuera de stos, dentro del rea de transferencia encerrada por el casco. Los intercambiadores de casco y tubos se clasifican segn: a) Nmero de pasos por el casco; b) Nmero de pasos por los tubos.

Materiales y Mtodos

2 botes de plstico de 2L

Un motor de ventilador Una resistencia para calentar agua Un atomizador

Un contenedor de agua de 3 litros forma de tazn**

Desarmador de cruz y plano

Un eje de metal con aspas***

Tornillos

3 tapas de diferentes tamaos

Plastiloca*** Cables

Cinta de aislar negra***

Termmetro

Diseo Experimental Lactobacilos INTRODUCCIN: La flora cido lctica ha sido tema de muchos estudios por analista de la leche a nivel mundial. El cido lctico de fermentacin se ha convertido en un importante producto qumico en estado puro o en forma de sales recibe diversas aplicaciones;

industria alimenticia, farmacutica, industria textil, industria de materias plsticas etc. Cuando decimos flora cido - lctica, nos referimos a la gran diversidad de microorganismos presentes en la lactosa, que son capaces de producir cidos, ya sean perjudiciales para el producto o beneficioso para el mismo. El cido lctico existe como indicios en la leche fresca, con un porcentaje medio de 30 mg/lts. Es ante todo, el resultado de la fermentacin lctica, y segn estudiaremos ms adelante, dentro de la industria lctea pude presentar un carcter beneficioso o perjudicial. El gnero a estudiar va a ser la flora cido lctica de los lactobacilos, este gnero estn menos abundante en la leche cruda, pero si juega un papel importante en la preparacin de diversas leches fermentadas, como ejemplos nombramos, los yogurt, leche acidfila. Tambin este gnero est presente en la saliva de los seres humanos, en las caries dentarias y en el intestino del hombre y animales. Los lactobacilos los estudiamos como termfilos, que se desarrollan de manera normal a temperatura de 45 C y los mesfilos que son menos resistentes a las temperaturas, su desarrollo ideal se da a 30 C, a una temperatura > 40 C, no se desarrollan. El trmino Lactobacillus es la unin de un prefijo y una raz: lacto que significa leche y bacillus que quiere decir en forma de barra o vara. Por otro lado, acidophilus quiere decir con afinidad por los cidos. Esta bacteria crece, fcilmente, en medios mucho ms cidos que los ideales para otros microorganismos (pH 4-5 o menores) y crece en condiciones ptimas a unos 45 C. El L. acidophilus crece de manera natural en una gran variedad de alimentos, incluidos la leche, la carne, el pescado y los cereales. No solo est presente en los intestinos de los animales y en el del propio ser humano, sino tambin en la boca y la vagina. El L. acidophilus absorbe la lactosa y la metaboliza formando cido lctico. Ciertas variedades genticamente similares (conocidas como heterofermentivas) tambin producen etanol, dixido de carbono y cido actico como subproductos (hay que resear que el L. acidophilus produce exclusivamente cido lctico). Como cualquier bacteria puede ser eliminada por un exceso de calor, humedad, o la luz solar directa.

Lactobacilos: Son bacilo microaerfilos, gram positivos y catalasa negativos, estos organismos forman cido lctico como producto principal de la fermentacin de los azcares. Los Lactobacilos homofermentativos dan lugar a cido lctico como producto principal de fermentacin. Este grupo est integrado por Lactobacillus caucasicus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus lactis, Lactobacillus acidophilus y Lactobacillus delbrueck. Los Lactobacilos heterofermentativos producen adems de cido lctico, dixido de carbono, etanol y otro productos voltiles; Lactobacillus fermenti es heterofermentativo y es capaz adems, de dar buen crecimiento a temperaturas elevadas (45 C, 113 F).

Lactobacillus; Caracterstica del Microorganismo: Morfolgicamente, algunos bacilos son bastones delgados y largos; otros son algo parecido al colibacilo, pero, al contrario de este, todos son grampositivos. Casi todos son inmviles, pero se han sealado excepciones. Muchos cultivos muestran una forma diplobacilar caracterstica, a menudo reniforme. Frecuentemente los cultivos viejos muestran considerable pleomorfismo. Los Lactobacilos, son microaerfilos o anaerobios, pero despus de cultivos continuos, algunas cepas pueden desarrollarse en presencia de aire. Sus necesidades nutritivas son complejas, y la mayor parte de las cepas no puede cultivarse en los medios nutritivos ordinarios, q menos que se enriquezcan con glucosa y suero. Las necesidades individuales de aminocidos varan de dos a 15; en general , se requiere piridoxina, tiamina, riboflavina, biotina, cido flico y cido nicotnico, variando las necesidades en cada caso. Estos requerimientos nutritivos variados tienen aplicacin prctica en tcnicas de dosificacin microbiolgica de vitaminas y de algunos aminocidos, para los cuales son mas sensibles que los mtodos qumicos disponibles. En concentracin adecuada, hay cierta relacin definida, incluso lineal, entre la concentracin de vitamina en un medio de cultivo adecuado, pero exento de vitamina, y el desarrollo o la cantidad de cido producidos. Algunos bacilos forman parte de la flora intestinal normal y pueden predominar en lactantes e individuos con ingestin elevadas de azcares, especialmente lactosa. Se supuso que la flora intestinal de lactobacilo era preferible a una flora proteoltica de coliformes, ya que tenda a inhibir los trastornos degenerativo aumentando la vitalidad en personas de edad avanzada, y que esa flora poda establecerse consumiendo leches fermentadas o leches blgaras y acidfilos. De esta manera puede alterarse la composicin de la flora intestinal, y tambin mediante el consumo de cantidades equivalentes de leche azucarada, pero el cambio es pasajero, y no est demostrado que esa flora intestinal por s misma favorezca la salud. Aunque se han encontrado raros casos de relacin de Lactobacilos con procesos patolgicos como endocarditis y enfermedad febril, estas bacterias esencialmente no son patgenas, excepto las raras veces que pueden relacionarse con caries dentales. Son fundamentalmente interesante en la industria de derivados lcteos y de fermentacin, donde tienen importancia considerable. La clasificacin de los Lactobacilos se ha basado en la fuente de donde se aislaron. Los Lactobacilos, segn los productos de fermentacin de azcar, se dividen en dos grupos. El grupo homofermentativo es el mayor y convierte casi completamente el azcar fermentada en cido lctico; el grupo heterofermentativo est constituidos por formas que producen cantidades importantes de otros productos de fermentacin, incluyendo bixido de carbono, etanol y cido actico. En tanto el estudio de aglutingenos es complicado, por la neta tendencia de lactobacilo a la aglutinacin espontnea en solucin salina, entre los Lactobacilos heterofermentativos son demostrable diez diferentes

aglutingenos, junto con algunos antgenos menores compartidos junto con la especie Leuconostoc. De las especies Lactobacilos diferenciables por reacciones fisiolgicas, solo tres mencionamos. Lactobacillus acidophilus. Este organismo, cultivado por primera vez por Moro en 1900, a partir de heces de lactante, ha sido aislado del intestino de casi todos los mamferos, muchos otros vertebrados y algunos invertebrados. Su cantidad aumenta en el intestino cuando aumenta el contenido de carbohidratos en la dieta; pueden ser predominantes cuando se ingiere una dieta lctea. Estos bacilos, bastante gruesos y de longitud variable, se disponen aislados, a pares frecuentemente algo flexionados en la unin, y en empalizadas. Las cadenas largas, las formas filamentosas y las formas en maza no son raras. Los cultivos jvenes se tien uniformemente grampositivos; los cultivos viejos, a menudo muestran coloracin listada o bipolar y pueden decolorarse fcilmente. Las colonias, generalmente pequeas, pueden variar en su forma: de la opaca, redonda y lisa a la aplanada, translcida e irregular, frecuentemente con aspecto de cristal. Las reacciones de fermentacin son variables, pero la mayor parte de cepas producen cido pero no gas, a partir de glucosa, lactosa, maltosa y sacarosa y coagulan la leche en 48 horas. El bacilo de Dderlein (1892), miembro comn de la flora vaginal, que se cree ayuda a las defensas naturales contra la infeccin por contribuir a la acidez de las secreciones vaginales, parece ser idntico a L. Acidophilus. Lactobacillus acidophilus: Est ampliamente diseminado y se halla en la leche productos lcteos y como comensal de tracto digestivo de los mamferos. Se emplea para fabricar "leche cida" y se supone se haya relacionado con la caries dental del hombre, en la que puede describirse como L. Odontolyticus. Los lactobacilo son importantes para la industria lctea y alimenticia y son comensales del hombre y de los animales. Bacilos Acidolcticos ("Lactobacilos"), Determinacin a Nivel de Laboratorio: Para su enriquecimiento, puede utilizarse uno de los medios selectivos, segn se pretenda descubrir todos o slo aquellos que crecen a temperaturas medias. En el primer caso se utiliza el agar - acetato talio Sharpe, besado en el medio mejorado de Briggs para los bacilos acidolcticos. Composicin del agar acetato talio Jugo de tomate ---------------------------------- 100 c.c. (Neo-) peptona ---------------------------------- 20 gr Glucosa ---------------------------------- 20 gr Sal comn ----------------------------------------- 5 gr

Almidn sol ----------------------------------------- 0,5 gr Yeastrel (prep.. levadura) -------------------------- 3 gr Twen 80 (monooleato de polioxietilensorbit) 1 gr Thioglicolato ------------------------------------------ 10 gr Acetato de talio ------------------------------------ 1 gr. Agar 150 gr, todo disuelto en 1.000 c.c. de agua; el pH final debe ser de 6.6 Preparacin de jugo de tomate segn Briggs: Se ponen 54 kg de tomates en 1 litro de agua destilada, se trocean los tomates en pequeos pedazos y el total se pasa por una prensa metlica. El jugo obtenido se filtra, se grada su pH en 70 y se somete durante 15 minutos a la accin del autoclave a 120 C; 100 c.c. de este producto corresponden en concentracin a los 100 c.c. que se agregaban antes (Briggs) En lugar de la Neo peptona (Difco) podra emplearse tambin con los fines mencionados la casena o peptona de carnes obtenidas mediante digestin trpsica; en vez de Yeastrel, puede utilizarse doble cantidad de extracto de levadura (Difco). Se distribuye en tubitos de ensayo a razn de 10 c.c. en cada uno y se esteriliza. Tras la siembra se incuban las placas 2 das a 37 C. Los bacilos acidolcticos del subgnero Thermobacterium se desarrollan muy bien, pero por desgracia los estreptococos acidolcticos no son inhibido por el acetato - de talio, por lo cual, cuando los bacilos no pueden reconocerse por las "speras" colonias (filamentosas) de las colonias lisas de los estreptococos, entonces debe recurrirse a su diferenciacin por medios microscpicos. El medio acetato de Rogosa descrito ms abajo en la modificacin de Mabbitt y Zielinska es, como tambin ratifica Sharpe, especial para aquellos bacilos acidolcticos que crecen mejor a la temperatura de 30 C que a 37 C o ms; se trata de las estreptobacterias homo fermentativas y betabacterias heterofermentativas. Agar Compuesto por agarosa, agaropectina, galactosa, acido uronico Levadura Existe la evidencia de que el pan era conocido alrededor del ao 2600 a.C. en Babilonia, y ya en el siglo 12 a.C. era producido normalmente con una tecnologa establecida. Lgicamente esto implica que el hombre dominaba ya el uso de a levadura para levar la masa preparada con harina y producir as el pan. En las primeras pocas se utilizaba la levadura obtenida de la fabricacin de cerveza primero y de las destileras despus, hasta que finalmente se establecieron las plantas de produccin de levadura durante el siglo 19.

Es posible que la primera planta de produccin comenz a operar en Holanda en 1780 con el llamado proceso Dutch que era anaerobio y que tena slo rendimiento del 4 al 6% con respecto a la materia prima usada. Posteriormente se mejor el rendimiento, que pas a ser del 12-22% con el proceso Vienna, tambin conducido sin aire, en 1846. Con la introduccin de la aireacin en el proceso de produccin, que tiene lugar en 1879, se aumentan considerablemente los rendimientos, que pasan a ser del 50 al 60% del terico. La ltima etapa importante de modificacin de la tecnologa tiene lugar con la alimentacin controlada de azcar a los mostos en fermentacin, cambio introducido por un cientfico dans, Sak, y un alemn, Hayduck, en 1919. Este proceso conocido como "Zulaufverfahren" es la base de todas las tecnologas posteriores que se basan en los principios de los procesos "batch" alimentado ya considerados. Los procesos de produccin utilizaban granos como materia prima, hasta que el elevado costo de stos produjo el reemplazo por las melazas de remolacha o de caa con las cuales pueden alcanzarse rendimientos cercanos al 100% del terico. Actualmente se est tratando de encontrar otras fuentes de materias primas alternativas a las melazas, como el suero de leche hidrolizado. La produccin mundial de levadura prensada (27-30% de materia seca) es considerable ya que en 1983 estaba en el orden de 1,763,000 toneladas, con un valor de 473,000, 363,000 y 83,000 toneladas correspondiente a Europa occidental, Norte y Centro Amrica, y Sud Amrica respectivamente. Con respecto al consumo anual per capita de levadura prensada (27-30% de materia seca) est en el rango de 1.5 a 2.1 Kg para los paises europeos, mientras que en paises de Sud Amrica como Chile es de 1 Kg y en Argentina 0.6 Kg. Inicialmente fue la levadura de cerveza, el Saccharomyces uvarum, syn S. carlsbergensis, el empleado con fines de panificacin. Posteriormente se la reemplaz por la levadura de las destileras, y por la llamada levadura de panificacin, que es el Saccharomyces cerevisiae. Se han ensayado tambin muchas otras cepas, no slo del mismo gnero sino tambin las pertenecientes a distintas especies de Candida, Hansenula y Zygosaccharomyces, aunque ninguna de ellas demostr poseer ventajas sobre el Saccharomyces cerevisiae. El mejoramiento gentico de cepas de S. cerevisiae de inters industrial para la produccin de levadura prensada es dificultoso, porque no existe un conocimiento detallado de los genes comprendidos en las propiedades o caractersticas deseadas de dichas cepas. Las propiedades fundamentales son

aquellas relacionadas con la produccin, que resultan en un crecimiento rpido y altos rendimientos a partir de las melazas con el mantenimiento de las propiedades de panificacin exigidas, que son el poder fermentativo y la estabilidad del producto. Estas propiedades dependen de muchos genes que intervienen en los ciclos de la glicolisis y de los cidos tricarboxilicos, como as tambin en el metabolismo del nitrgeno y en la sntesis de hidratos de carbono de reserva. Algunas cepas de inters industrial se han obtenido utilizando tcnicas de hibridacin que incluyen la fusin de protoplastos, ya explicada en el captulo 3. La obtencin de hbridos para mejorar una cepa no es siempre exitosa, ya que los productos de fusin (hbridos) tienen que cumplir con todas las caractersticas exigidas por las levaduras comerciales, ya comentadas. Es conveniente mencionar finalmente que el advenimiento de las tcnicas de ingeniera gentica ha abierto una nueva rea de inters industrial en el campo de las levaduras. Sin embargo, hasta el presente esas tcnicas no han sido de utilidad en la industria de la levadura de panificacin, porque los logros alcanzados incluyen solamente propiedades bioqumicas relacionadas con pocos genes. Las cepas de levadura que han sido desarrolladas en los ltimos aos, permiten la produccin de productos de inters farmacolgico como la insulina, hormona de crecimiento bovina, interfern, vacuna contra la hepatitis B, se han originado en cepas de laboratorio definidas genticamente y no en cepas de levaduras industriales. 1. Mantenimiento en medios de cultivo slidos y repiques peridicos (cada 3 a 6 meses) en medio fresco, 2. bajo aceite mineral, 3. congeladas a -20 C y despus a -55 C en medios que contienen leche o glicerol, 4. liofilizacin, y 5. mantenimiento a muy baja temperatura, en nitrgeno lquido (-196 C). Tal vez el mtodo ms satisfactorio sea el de la liofilizacin, aunque pueden emplearse con xito cualquier otro mtodo que asegure la estabilidad, o sea que no se produzcan cambios en las propiedades bioqumicas de microorganismo. Los requerimientos nutricionales de los macroelementos ms significativos pueden deducirse del conocimiento de la composicin centesimal de las clulas. En el captulo mencionado se estableci tambin la ecuacin de formacin de 100 g de levadura seca a partir de 200 g de sacarosa. De las fuentes de carbono y energa que pueden emplear el Saccharomyces cerevisiae figuran en primer lugar la glucosa y la sacarosa, aunque tambin pueden emplearse fructuosa, galactosa, maltosa y suero hidrolizado, ya que la

levadura de cerveza no puede asimilar lactosa. Tambin puede utilizarse etanol como fuente de carbono. El nitrgeno asimilable debe administrarse en forma de amonaco, urea o sales de amonio, aunque tambin se pueden emplear mezclas de aminocidos. Ni el nitrato ni el nitrito pueden ser asimilados. Aparte de carbono y el nitrgeno los macroelementos indispensables son el fsforo que se emplea comunmente en forma de cido fosfrico y el Mg como sulfato de magnesio, que tambin provee S. Finalmente son tambin necesarios el Ca, Fe, Cu y Zn como elementos menores. Por ejemplo, se ha establecido que S. cerevisiae requiere 200 mg de Zn, 75 mg de Fe y 12-15 mg de Cu por litro de medio para crecimiento ptimo. Un requerimiento esencial est constituido por las vitaminas del grupo B como biotina, cido pantotnico, inositol, tiamina, pyridoxina y niacina. Existen sin embargo algunas diferencias entre las distintas cepas. Entre las vitaminas mencionadas la biotina es requerida por la casi totalidad de las mismas. Los requerimientos cambian segn las condiciones de cultivo, ya que el aumento de la aerobiosis disminuye los requerimientos de esa vitamina y el uso de urea como fuente de nitrgeno los aumenta por la necesidad de biosntesis de 3 sistemas enzimticos que contienen biotina. Se ha estimado que los requerimientos de la biotina son de 100 mg de biotina por 100 g de azcar suministrados para el crecimiento de la levadura. El cido pantotnico, que es un componente de la coenzima A, es tambin requerido por muchas especies, mientras pocas especies requieren inositol. Con respecto a la tiamina se ha demostrado que aumenta la actividad fermentativa de la levadura. Finalmente debe mencionarse al 02 como otro requerimiento nutricional para la produccin de levadura. Como se estableci anteriormente se necesita 1 g de 02 para la produccin de 1g de levadura seca en el caso de crecimiento en condiciones ptimas. El 02 se suministra con el aire que se inyecta en los medios durante la fermentacin. Si existe limitacin de 02 no se puede alcanzar los rendimientos ptimos que como vimos deben estar cercanos al 100% del terico.La velocidad de transferencia de 02 requerida depende del proceso empleado. Si la mxima velocidad de alimentacin es de 10 g de azcar l -1 h-1 se puede lograr una productividad de 5 g l -1 h-1 de materia seca, y para la cual se requiere una velocidad de transferencia de 5 g de 02 1-1 h-1 que debe ser suministrada por el equipo. Tal como se mencion en el captulo 7 se debe asegurar por lo tanto un valor de coeficiente KLa que asegure esa valor de transferencia de oxgeno para que no exista limitacin por el oxgeno. En el ejemplo citado el valor de KLa necesario es de 685 h -1. Los valores normales de la velocidad especfica de crecimiento para levaduras estn en el orden de 0,45 a 0,6 h -1 como mximo.

Como en realidad se utilizan para la produccin de procesos tipo batch alimentado la cintica del proceso, ya considerada, predice un aumento de XV igual a

En la prctica comercial de la produccin de levadura, la alimentacin no es constante sino que se realiza segn programas propios de cada industria. La aplicacin de la ecuacin logartmica para calcular p debe hacerse con precaucin, ya que m no es constante sino que va disminuyendo en funcin del tiempo, salvo en casos de alimentacin programada para mantenerla constante durante intervalos cortos con una finalidad especfica de calidad. La relacin entre la velocidad especfica de crecimiento y la concentracin de sustrato puede ser representada por la ecuacin de Monod. Para S. cerevisiae se ha establecido un valor de Ks igual a 25 mg glucosa l-1 , siendo m dependiente de la concentracin de sustrato por debajo de S = 10 Ks, o sea 250 mg l-1 . La eficiencia de un proceso industrial de produccin de biomasa como es el caso de la levadura se mide fundamentalmente en base al valor Y x/s, ya discutido con anterioridad en esta monografa. Los valores ptimos a partir de azcares estn alrededor de 0.5 g de biomasa seca por g de azcar asimilada. En el caso de emplearse etanol, Yx/s puede alcanzar valores de 0.78 a 0.80. Con el aumento de la concentracin del sustrato puede aumentarse m pero disminuye Yx/s porque se favorece la fermentacin alcohlica, an en exceso de 02 segn el fenmeno Crabtree ya mencionado anteriormente. Debido al mismo rendimiento celular es funcin de m , y cuando esta es superior a 0.2 el rendimiento celular baja. Es por ello que ese valor es raramente excedido en la prctica industrial. La temperatura ptima del proceso se ha establecido en 28.5 C; a mayores temperaturas disminuye el rendimiento, probablemente debido al aumento de energa de mantenimiento. El rendimiento celular puede tambin afectarse por la presencia de inhibidores como S02, cido acontico y metales pesados o restos de herbicidas o bactericidas que pueden estar presentes en las melazas. CONCLUSIONES Con este trabajo se concluyo la primera etapa para el diseo de un bioreactor casero para ser terminado con materias subsecuentes tales como electrnica, programacin, entre otras.

Siempre con la finalidad de usar recursos reutilizables y de bajo costo tratando de igualar la tecnologa en el mercado y as obtener nuestra propia tecnologa para ser utilizada en las instalaciones dentro del campus. Bibliografa Comprehensive Biotechnology. The practice of Biotechnology: Current Commodity Products. Volume 3. Ed. Harvey W. Blanch, Stephen Drew and Daniel Wang. Pergamon Press (1985) Progress in Industrial Microbiology. Vol 23. Ed. M.R.Adams. Elsevier (1986) Microbial Technology. Vol. I, 2da. Ed. H.J.Pepple r y D. Perlman. Academic Press (1979).

Ciencia de la Leche; Principios de Tcnicas Lecheras. 1 edicin en espaol de la 2 edicin francesa, junio 1970. Editorial: Continental S.A.Impreso en Espaa Microbiologa de la Fermentacin. Industrial Galindo Enrique; Pea Carlos; Serrano-Carren Leobardo. 2007. DOMESTICAR MICROORGANISMOS EN UN BIORREACTOR: LOS RETOS DEL BIOINGENIERO. UNAM http://www.biologia.edu.ar http://bioreactores.wordpress.com http://es.wikipedia.org