UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO Facultad de Estudios Superiores Zaragoza Qumica Farmacutico Biolgica

Microbiologa General II

PRACTICA NO. 10 FISIOLOGA DE LEVADURAS

Grupo: 1752 Equipo: 8 Integrantes: - Acosta Basilio Jos Arturo - Aguilar Lpez Aristteles - De la Cruz Jimnez Pedro Manuel - Urbina Soto Jonathan

RESULTADOS

Prueba
Zimograma

Cepa Lactosa Manosa Trehalosa Maltosa Sacarosa Glucosa Galactosa

1 2 1 2

AG AG -

AG -

AG -

Auxonograma

Observacin microscpica
Clamidiosporas 1 2 Tanto la cepa 1 como la 2, crecieron de forma difusa sobre la lnea de siembra. El crecimiento que presentaron ambas fue de consistencia cremosa y color blanquecino; al observar al microscopio, no se encontr produccin de clamidiosporas, solo se observ la presencia de levaduras en la cepa 1 y 2. Aqu se muestra una imagen microscpica de Clamidiosporas, las cuales eran las que se esperaba observar en el medio de cultivo harina de maz aunque no hubo xito.

Tubo germinativo Se logr observar la formacin de un tubo germinativo al cabo de 2: 30 horas de incubacin. Tubo germinal de Candida spp. Obtenido de suero humano, que est indicado con la flecha negra en la imagen de lado derecho. Esto es lo que se esperaba observar en la prueba.

Auxonograma Cepa 1

Zimograma Cepa 1

Cepa 2

Cepa 2

ANLISIS DE RESULTADOS
La identificacin de la especie de toda levadura aislada en sangre o en cualquier otro lquido corporal estril est plenamente justificada. Sin embargo, debido a que los organismos levaduriformes forman parte de la flora normal de piel y mucosas, el aislamiento de levaduras a partir de hisopos nasofarngeos, esputo, lavados bronquiales, orina, raspados de uas, muestras vaginales o heces puede cuestionar su significado clnico. No obstante, el aislamiento reiterado de levaduras en diferentes muestras clnicas del mismo paciente es sugestivo de infeccin por el microorganismo aislado y requiere la identificacin de la especie causal. La identificacin de las levaduras se puede llevar a cabo atendiendo a cuatro criterios diferentes: morfolgicos, bioqumicos, inmunolgicos o genticos. En esta prctica, solo se analizaron las caractersticas morfolgicas y bioqumicas de dos diferentes cepas de levadura desconocidas. En cuanto a la morfologa, macroscpicamente se observaron colonias blancas y cremosas para ambas cepas con forma elevada, las cules son caractersticas del gnero Candida sp. ; para los criterios microscpicos, se llev a cabo la prueba del tubo germinal en suero de humano, en donde se logr observar dicha extensin filamentosa de la levadura. Otra caracterstica morfolgica de gran importancia para la identificacin de algunas especies de levaduras, es la observacin de la formacin de hifas, blastoconidias, clamidosporas o artrosporas, para esta prueba, se sembraron las cepas a identificar en agar harina de maz, luego de incubacin correspondiente se observ la levadura al microscopio, pero no se logr observar ningn tipo de hifa, slo se observaron levaduras circulares.

Por otra parte, algunos equipos sembraron en BD Chromagar Candida, medio que permite determinar actividades enzimticas por parte de las levaduras mediante la hidrlisis especfica de un sustrato cromognico en presencia de un indicador de la enzima, y lo que se observ de crecimiento, fueron unas colonias cremosas, lisas color verde esmeralda, caractersticas de Candida albicans. Se llevaron a cabo dos mtodos basados en la asimilacin de nutrientes: En el zimograma, criterio anaerobio, para la cepa 1 se observ fermentacin en 2 de los 7 carbohidratos utilizados: maltosa y glucosa, la cepa 2 present fermentacin para maltosa y sacarosa, con produccin de gas en los cuatro tubos respectivos. En base a estos resultados no se puede precisar el gnero de las levaduras que se trabajaron aunque Candida albicans es capaz de fermentar los 3 carbohidratos antes mencionados al igual que Trichosporum cutaneum. Para la prueba del auxonograma, criterio aerobio, donde se valora la capacidad de las levaduras para metabolizar en condiciones aerobias, azcares, alcoholes y cidos orgnicos, no se presento ningn halo de fermentacin para ninguna de las dos cepas de trabajo, algunas razones por las que tal vez no se obtuvieron los resultados esperados fue la cantidad de inoculo sembrado en los medios de cultivo PBS, la temperatura de incubacin no fue constante y en menor probabilidad por el tiempo de incubacin (3 das), ya que a la mayora de los equipos les sucedi los mismo con esta prueba.

CONCLUSIONES
Las pruebas realizadas en esta prctica: auxonograma y zimograma, son de utilidad para poder visualizar la fermentacin de los carbohidratos por parte de la levadura (zimograma) y el auxonograma (condiciones aerobias) presenta la reaccin de oxidacin de los carbohidratos. Estas pruebas se fundamentan en la asimilacin de los nutrientes por parte de las levaduras. La morfologa es muy importante ya que con esta se puede comenzar a deducir que genero y especie de la levadura en esta ocasin segn la literatura solo llegamos a deducir que posiblemente se trataba de Candida sp. . Se aprendi que esta prueba es simplemente presuntiva las pruebas bioqumicas son las pruebas confirmatorias es necesario dar el tiempo necesario y la temperatura optima para poder apreciar el tubo germinativo si no existe un buen desarrollo no existe la formacin de este. El Chromagar Candida es de gran utilidad y sobre todo es una prueba que auxilia a la identificacin

de la especie de Candida sp . El conocer los requerimientos fisiolgicos y nutricionales de las levaduras hacen posible que se puedan realizar determinaciones clnicas para identificar o descartar a agentes etiolgicos en pacientes sintomticos de presencia por alguna levadura patgena.

BIBLIOGRAFA
1. Odds, F.C., and R. Bernaerts. 1994. CHROMagar Candida Medium, a new differential isolation medium for presumptive identification of clinically important Candida species. J. Clin. Microbiol. 32: 1923-1929 2. Prats, Guillem. Microbiologa clnica. Editorial Mdica Panamericana. Espaa, 2006. 3. Koneman. Diagnostico Microbiolgico, texto y atlas a color. 5 ed. Editorial panamericana. Mxico, 2003