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Olga Nunes
Crescimento Populacional
Aumento do nmero de clulas da populao ao longo do tempo;
Clulas
Biomassa
Protenas
Olga Nunes
Desvantagens:
No distingue clulas mortas de clulas vivas; Clulas pequenas so pouco visveis Baixa preciso;
Olga Nunes
Corantes de DNA: SYTO 9 - verde - entra livremente nas clulas Iodeto de propdio - vermelho - s penetra nas clulas com membrana danificada
Crescimento Populacional
Assim, podemos observar vista desarmada a colnia originada pela clula vivel, designada por unidade formadora de colnia (U.F.C.)
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10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
U.F.C.
Crescimento Populacional
2.1 Espalhamento em placa
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
171
16
1 ml
U.F.C.
Incubao
Olga Nunes
Crescimento Populacional
2.2 Incorporao em agar
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
171
16
Desvantagens: No mtodo de incorporao em agar: organismos aerbios podem ter diculdade em se desenvolver; o choque trmico provocado pela adio de meio de cultura pode inibir os microrganismos;
Olga Nunes
1 Pesa-se uma membrana filtrante; 2 Filtra-se um volume conhecido de suspenso celular; 3 Lavam-se as clulas; 4 Pesa-se a membrana filtrante com a biomassa; 5 Calcula-se o peso da biomassa por litro de cultura;
Sistema de vcuo Membrana filtrante Suporte Vedante
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Peso seco de uma clula procariota: 10-15 a 10-11 g. Peso seco de uma clula eucariota: 10-11 a 10-7 g. Peso seco : ~ 20 a 30% do peso hmido.
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(l0)
(l)
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A relao absorvncia / densidade celular aproximadamente linear (numa certa gama de concentraes celulares)
um mtodo muito utilizado pois RPIDO e NO DESTRI a amostra. Biomassa Pode construir-se uma curva que relacione a absorvncia com: N de clulas Protena
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Crescimento em descontnuo
3 - 10%
COLNIA
Olga Nunes
Escala semi-logartmica
Biomassa (g/l)
Biomassa (g/l)
1.5
0.1
0.5
0.01
MORTE 7 8
Olga Nunes
Tempo (horas)
Tempo (horas)
ESTACIONRIA
Crescimento em descontnuo
1. Fase de adaptao
Perodo de tempo necessrio para as clulas sintetizarem todos os componentes necessrios para crescerem naquelas condies.
Depende: Fase crescimento do inculo; Composio do meio de cultura; Condies de incubao; Estado das clulas;
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Crescimento em descontnuo
2. Fase exponencial
consequncia do facto de cada clula originar duas clulas filhas.
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Crescimento em descontnuo
3. Fase estacionria
Num sistema fechado, o crescimento no pode continuar indefinidamente devido: falta de um nutriente essencial; acumulao de produtos txicos; Normalmente a fisiologia das clulas diferente, pois tm que se adaptar a condies adversas.
4. Fase morte
As clulas da populao morrem porque as suas reservas energticas se esgotaram;
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(1)
dN/dt = N
(2) ln N = ln N0 + (t-t0)
ou
(3) = (ln N - ln N0) / (t-t0)
= taxa especca de
crescimento instantneo (t-1)
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Durante fase de adaptao Durante fase exponencial Durante fase estacionria Durante fase de morte
~0 = max. ~0 <0
Mantm-se invarivel ao longo do tempo
Olga Nunes
ln N = ln N0 + (t-t0) ou
y = a + mx
N = N0 e(t-t0)
y = a emx
Olga Nunes
Regresso linear
y = -5,0136 + 1,3948x R= 0,99931
1 0.5
ln Biomassa (g/l)
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Biomassa (g/l)
1.5
0.5
-3
Tempo (horas)
Tempo (horas)
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N /N0 = 2
N = 2 N0
ln 2 = .tgerao
tgerao = 0,693 /
Olga Nunes
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= max. S / (ks + S) max. = taxa crescimento com saturao de nutrientes. S = concentrao do substrato limitante (normalmente a Fonte de Energia) Ks = constante de Monod (concentrao do substrato limitante para = 1/2 max.) Taxa de diluio: D = taxa de diluio do quimiostato (tempo-1) D = Q / V = 1/
Q = caudal do meio de cultura (volume/tempo) V = volume do reactor (volume) = tempo de passagem no reactor
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>D
dN/dt > 0
Olga Nunes
[S]
funo directa de S
1.
momentneo
2. momentneo
Falta nutrientes
Olga Nunes
dN/dt = 0
Nclulas que permanecem - Nclulas que saem do vaso = 0
N - DN = 0
Em estado estacionrio:
=D
8 6 4 2 0
4 3 2 1 0 0,0 0,5
Taxa de diluio (h-1)
8
Tempo de gerao (h)
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6 4
0 1,0
washout
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Afectam produtividade
Olga Nunes