Captulo

BASES DA GENTICA

Gentica um termo de origem Latina genesis que significa nascimento. a Cincia que estuda a herana das caractersticas dos seres vivos. Isso corresponde ao estudo de todos os processos de transmisso do material gentico de gerao a gerao em qualquer organismo. A primeira ramificao abrange a Mendeliana que estuda a variabilidade Gentica Clssica ou gentica discreta ou

descontnua (por exemplo, a cor dos olhos) e a Gentica Quantitativa que estuda a variabilidade gentica contnua (por exemplo, a altura de indivduos). A Gentica atualmente sofre ainda diversas ramificaes de acordo com o organismo estudado ou o nvel de organizao em que esse estudo realizado. Assim temos as divises de Gentica Humana, Gentica Animal, Gentica Vegetal e Gentica de

Microrganismos. Essa ltima corresponde ao estudo da gentica de fungos, de bactrias, de protozorios e de vrus.

Ao nvel de organizao, a Citogentica

estuda o padro

cromossmico nas populaes e sua implicao evolutiva, a Gentica Molecular estuda as caractersticas e propriedades do material gentico (DNA ou cido Desoxiribonucleico e RNA ou cido Ribonucleico) e de molculas semantoforticas (que trazem de maneira indireta a informao da composio gentica de um organismo) como as protenas no catalticas (insulina, etc.) e catalticas ou enzimas (proteases, amilases, etc.). Ao nvel

populacional, a Gentica de Populaes estuda a dinmica dos genes nas populaes, a quantificao dos efeitos causadores de mudana nas frequncias dos genes e o modo que a estrutura de uma populao afeta sua composio gentica . O trabalho de Gregor Mendel (1866), a base da gentica clssica e a anlise dos seus dados sobre o padro de segregao de diferentes aspectos de sete caracteres qualitativos de ervilha (Vicia faba) analisados individualmente a partir de linhagens puras para cada caracter, permitiu elucidar o mecanismo da herana dessas

caractersticas qualitativas. Trouxe novos conceitos com os termos: unidade de transmisso dos caracteres, o gene; as combinaes de genes para uma ou mais caractersticas ou gentipo; o padro que

um indivduo apresenta em relao a uma caracterstica estudada (textura de semente: lisa ou rugosa), resultante da interao do gentipo - ambiente ou fentipo; genes iguais ou diferentes denominados de alelos; que hoje sabemos so pertencentes a um mesmo lugar ou locus no cromossomo; alelo dominante o que determina o padro fenotpico quando em presena de outro alelo igual (A) ou em presena de um alelo que no se manifesta (a). Alelo (a) encoberto na manifestao do fentipo, tambm denominado por Mendel de recessivo; o indivduo que apresenta dois alelos iguais (AA, aa) ou homozigoto; e aquele que apresenta dois alelos diferentes (Aa) ou heterozigoto. Mendel ainda introduziu o conceito de diplide para os indivduos que portam dois genes para um mesmo carcter, mais tarde evidenciado como os indivduos que tem dois cromossomos de cada tipo (2n cromossomos) e haplide para os gametas que possuem um gene para cada caracterstica, explicado pela sua origem atravs da diviso redutora ou meiose que a partir de clulas me, reduz o nmero de cromossomos das clulas originadas para n, que diferenciadas formam os gametas, o conceito de haploidia foi mais tarde aplicado a indivduos de populaes com reproduo assexuada onde cada organismo possui em suas clulas um nico

conjunto de cromossomos. Mendel estabeleceu as duas Leis da herana: 1a Lei - Princpio da Segregao. Um hbrido Amarelo (Aa), indivduo resultante de um dos cruzamentos usados por Mendel de duas variedades distintas para colorao da semente de ervilha Sementes Amarelas (AA) e Sementes verdes (aa), possui os dois fatores parentais que se separam e segregam nos gametas (A e a) em um cruzamento monohbrido (Aa x Aa) da F1 entre si de sementes amarelas, produzindo uma F2 de descendentes na

proporo genotpica de 1/4 de ervilhas com sementes amarelas (AA), 2/4 de ervilhas com sementes amarelas (Aa) e 1/4 de ervilhas de sementes verdes (aa) e com uma proporo fenotpica portanto de 3/4 de ervilhas com sementes amarelas e 1/4 d ervilhas com

sementes verdes.
Gerao Parental (P) Amarela Verde AA x aa

Gerao Filial 1 (F1) 100% Amarela Aa Gametas (50%)A, (50%)a Cruzamento Monohbrido da F1 Gerao Filal 2 (F2) Aa x Aa

1/4 AA, 2/4 Aa, 1/4 aa 3/4 Amarela 1/4 verde Gametas Femininos Gametas masculinos A a A a AA Aa Aa Aa

2a Lei - Princpio da Transmisso Independente, Mendel, agora considerou o produto de indivduos que diferiam entre si, em dois pares de genes, em cruzamentos dihbridos (AaBb x AaBb). Para isso utilizou em um dos cruzamentos, duas linhagens puras de ervilha, sementes amarelas e lisas (AABB) com sementes verdes e rugosas (aabb). Da F1 cruzada entre si, de sementes amarelas e lisas (AaBb), obteve as propores de 9/16 amarelas e lisas; 3/16 amarelas e rugosas; 3/16 verdes e lisas e 1/16 verdes e rugosas, provando que dois pares de genes tem transmisso independente.
Gerao Parental (P) Amarela Lisa AABB x Verde Rugosa aabb

Gerao Filial 1 (F1)

Gerao Filial 2 (F2)

100% Amarela Lisa AaBb Cruzamento Dihbrido: AaBb x AaBb 9/16 A_B_, 3/16 A_bb, 3/16 aaB_, 1/16 aabb Amartela Lisa Amarela Rugosa Verde Lisa Verde Rugosa

Para obteno dos gentipos segregantes da F2 basta utilizar o Quadro de Punnet: GAMETAS 1/4 AB 1/4 AB M A C H O S 1/4 Ab 1/4 aB 1/4 ab 1/16 AABB 1/16 AABb 1/16 AaBB 1/16 AaBb 1/4 Ab 1/16 AABb 1/16 AAbb 1/16 AaBb 1/16 Aabb FMEAS 1/4 aB 1/16 AaBB 1/16 AaBb 1/16 aaBB 1/16 aa Bb 1/4 ab 1/16 AaBb 1/16 Aabb 1/16 aaBb 1/16 aabb

A noo que os cromossomos carregam os genes, como percebe-se, s foi aceita mais tarde e constituiu-se na Teoria Cromossmica da Herana. Thomas Hunt Morgan em 1910, trouxe a primeira evidncia para essa teoria. Foi obtida a partir de estudos em uma mosca da fruta, a Drosophila melanogaster.

D. melanogaster

cor de olho selvagem (vermelho) e do mutante white (branco)

Esse organismo que mostrou-se como um dos mais adequados organismos para estudos genticos, pelo seu pequeno tamanho e baixo nmero de cromossomos, fcil criao em pequenos espaos de laboratrio, cultura de manuteno econmica, grande nmero de descendentes por gerao, grande nmero de geraes em pouco espao de tempo e a possibilidade de se obter fmeas virgens logo aps a ecloso para efetuar cruzamentos precisos. Morgan cruzou moscas de linhagens puras com olhos vermelhos (gene dominante) e de olhos brancos. Entretanto nem toda a prognie era de olho vermelho. Quando cruzava machos de olho vermelho da gerao F1 com suas irms fmeas de olho vermelho produzia somente de

machos de olho branco mas nenhuma fmea de olho branco. Para uma explicao desse resultado a cor de olho nessa mosca deveria ser ligada ao sexo. Ento existiriam cromossomos sexuais que carregariam genes como os da colorao de olhos. Observando essa e outras caractersticas com o mesmo padro de segregao em Drosophila: asas pequenas (Miniature), cor de corpo amarela (Yelow), Morgan trouxe, portanto, como evidncia da Teoria Cromossmica da Herana, os padres de segregao dos genes ligados aos cromossomos sexuais em Drosophila. Embora W. Waldeyer (1888) tenha sido quem usou o termo cromossomo pela primeira vez, foi W. C. Von Nageli (1842) quem primeiro os observou, mas foi W. Fleming (1879-1875) que utilizando novas tcnicas de colorao os descreveu, denominando essa substncia existente no ncleo de cromatina. Foi O. Hertwig(1875) quem primeiro referiu a fuso do esperma com o ovo para formar o zigoto. A identificao dos cromossomos como carregadores dos genes foi rapidamente demonstrada em trabalhos de 1880 de T. Boveri, K. Rabi e E. Van Breden, e mais tarde evidenciadas em publicaes de

Mc.Clung (1902), W.S.Sutton (1903), T.Boveri (1904), E.B.Wilson (1905). Em 1885, A. Weissmann j afirmava que a herana era baseada exclusivamente no ncleo e em 1887 predizia a ocorrncia e uma diviso redutora que denominou de meiose. Em 1890, O. Hertwig e T. Boveri descreviam o processo de meiose em detalhe. Em 1913, A. Sturtevant criava o primeiro mapa gentico usando as caractersticas de Drosophila melanogaster. Demonstrava que os genes existiam em ordem linear nos cromossomos. Em 1927, L. Stadler e H. J. Muller demonstravam que os genes podiam ser originados artificialmente ou induzidos por mutaes usando radiaes ionizantes como o Raio-X. Os cromossomos de eucariotes so formados por

nucleoproteinas, as histonas e no histonas associadas a DNA. Possuem em sua estutura dois braos separados por uma constrio primrio ou centrmero, e ainda constrices secundrias que separam eventuamente o brao cromossmico de uma pequena regio chamada de satlite. No M.E., um cromossomo na fase descondensada e com atividade de sntese de RNA, pode ser

observado com um estrutura de contas em colar (os nucleossomos) constitudos de DNA enrolado (core DNA) em uma bola de 4 pares de histonas,H2A,H2B,H3 e H4, (core Histona) que juntos constituem cada nucelossomo. Observe o esquema na figura a seguir.
DNA histona H1

nucelossomo

conjunto de 8 molculas de histonas visualizao esquemtica de um nucleossomo

Dentro da regio do centrmero existem regies onde no processo de diviso celular os fusos acromticos se ligam. O lugar onde ocorre essa ligao o Kinetocoro, regio constituda de DNA e proteina, a sequncia de DNA dessa regio chamada de CEN DNA, que possui comprimento de 120 pares de base e est constitudo de vrias sub-regies, CDE-I, CDE-II e CDE-III. Quando ocorrer uma

mutao pontual na regio III, isso elimina a possibilidade do centrmero funcionar na segregao do cromossomo durante a

diviso celular. Atualmente foram evidenciados 3 tipos de proteinas

que pertencem a essa regio. esse complexo de proteinas denominado Cbf-III. Esse complexo se liga a regio III normal mas no tem capacidade de se ligar a essa regio III mutada. Outra estrutura tpica do cromossomo do eucarote a regio terminal do cromossomo chamada de telmero. Telomeros so as regies de DNA terminal do cromosssomo, usualmente heterocromticas e constitudas de

sequncias repetidas tandemicamente (com as mesmas sequncias de bases).

Algumas sequncias repetidas de Telomeros

Espcie Sequncia Homem TTAGGG Tripanosoma TAGGG Leveduras (TG)1-3 TG2-3 Uma tcnica utilizada para estudo da complexidade dos cromossomos de diferentes espcies consiste em desnaturar o seu DNA e aps renaturar o mesmo. A taxa de renaturao ou reanelamento do DNA uma funo da espcie da qual ele foi isolado. No grfico abaixo, podemos observar essa propriedade, onde no eixo Y temos a percentagem de DNA de filamento simples (C) em relao a concentrao total de DNA iniciador (Co). No eixo X temos em escala logaritimica o resultado do produto da concentrao inicial de DNA (mmoles/l) pelo tempo da reao (Seg.), desinado como valor

Cot. A curva obtida chamada por conseguinte curva Cot. Um valor til o valor Cot 1/2, o valor Cot onde o DNA teve 50% de renaturao.
VIRUS % C D N A E. COLI LEVEDURA

Na fase larval de insetos ainda podemos encontrar um tipo especial de cromossomos. So cromossomos gigantes resultantes da grande duplicao de DNA, chamados de cromossomos politnicos. A D. melanogaster tem sido estudada quanto a atividade do padro de puffs de RNA ( anis de Balbiani), nos diversos estgios larvais para cada um dos 2 braos de cada um dos 4 pares de cromossomos, permitindo com isso estabelecer relaes taxonomicas entre as diversas populaes estudadas. Entre os principais citogeneticistas nessa rea pode ser citado M. Ashburner.

cromossomos politnicos de Drosophila

Em ocitos de anfbio ainda tem sido descrito um outro tipo de cromossomo em eucariote, so os cromossomos plumosos que embora no ativos em transcrio de RNA, durante os ltimos

estgios da prfase I meitica, esses ocitos depositam grande quantidade de gema e crescem muito, nesse perodo, os

cromossomos crescem muito em comprimento at 100 vezes mais longo que um cromossomo mittico, possuindo inmeras alas laterais como pode ser visualizada na foto abaixo.

cromossomos pumosos de Triturus sp.

Depois da redescoberta dos experimentos de Mendel, dois dos primerios geneticistas, Bateson e De Vries (Mendelianos) propuseram que caracteres contnuos como altura, no eram herdveis e que somente as grandes variaes descontnuas eram causadas por genes. Galton, primo de Drawin, na segunda metade do Sculo XIX, fundava um grupo que procuraria explicar a origem das diferenas fsicas e mentais no homem. Algumas dessas caractersticas eram mtricas, como de indivduos mais baixos produzindo descendentes mais baixos que a mdia da populao, mostravam uma condio de herana. Tcnicas biomtricas foram ento desenvolvidas, tais como como correlao e padro das regresso. Os biomtricos, observando que o

caractersticas quantitativas eram uma mescla das

caractersticas da gerao anterior, se opunham a idia de unidades de herana segregando em separado. Johansen, em uma anlise detalhada do tamanho e peso de sementes de cultivares de Phaseolus vulgaris (feijo), separou pelo peso diferentes tipos de linhagens desde as mais leves (15cm) at as mais pesadas (90cm). A autopolinizao permitiu uma fcil obteno de linhagens altamente consanguneas e homozigotas e com grande uniformidade. Em 1906 Yule, a partir dos experimentos de Johansen, sugeriu que a variao

quantitativa podia ser determinada um nmero grande de loci de genes, cada um deles com um efeito individual pequeno. Mais tarde Nilson-Ehle demonstraram uma segregao e transmisso real de genes com efeitos quantitativos. Eles mostraram que havia 3 pares de genes na determinao da cor gro do trigo, sendo os genes A,B e C para a cor roxa dominantes sobre os genes a,b e c para cor branca. Consideraram trs hipteses, na proporo esperada de

descendentes entre heterozigotos (1 par de genes, com 3 roxos :1 branco; dois pares, com 15 roxos : 1 branco e 3 pares de genes com 63 roxos para 1 branco, o que verdadeiramente ocorria). Em 1930 e 1932, R. A. Fisher, S. Wright e J.B.S. Haldane desenvolveram os fundamentos algbricos para a compreenso do processo evolutivo e de caracteres quantitativos. Fisher foi mais alm, desenvolvendo os fundamentos da anlise de varincia em efeitos sobre

delineamentos experimentais com a avaliao dos variveis respostas em experimentos agronmicos.

Em 1912, Feulgen introduz a tcnica de colorao do DNA cromossmico com especificidade tcnica denominada reao de

Feulgen que permitiu a realizao de inmeros estudos de quantificao de DNA.

A importncia biolgica do DNA e RNA como material gentico comeou a ser demonstrada a partir dos trabalhos de Griffith(1928) com bactrias no patognicas transformadas em patognicas quando misturadas com patognicas mortas pelo calor. Em 1944, D.T Avery, C.M. Mac Leod e M. Mac Carty demonstraram que esse princpio transformante era o DNA. Em 1953, J. Watson e F. Crick demonstraram a estrutura de dupla hlice do DNA. A partir da dcada de 1960, entre 1968 e 1973 W. Arber, H. Smith, D. Nathans e outros descobriram endonucleases de restrio, enzimas que permitiam o corte de pedaos de DNA e sua manipulao possibilidade iniciando-se de a era da Engenharia atravs de Gentica. tcnicas A de

manipular

genes

recombinao de DNA permitiu que P. Berg em 1972 criasse a primeira molcula de DNA recombinante. Em Eucariotes ou organismos que possuem ncleo definido e cujo material gentico o DNA, foram descobertas sequncias

espaadoras ou introns, essas sequncias so genes que so transcritos em RNA mas nunca so transladados do ncleo para o citoplasma. So removidas do RNA antes de seu transporte para o

citoplasma.

Os

introns

foram

descobertos

por

P.

Sharp

colaboradores (1977). Os segmentos do gene entre introns so transcritos e transladados para o citoplasma e denominados exons. O resultado da remoo de um intron pode ser visto quando o RNA mensageiro ou m-RNA hibridizado ao DNA de onde o intron foi removido. O DNA forma estruturas de dupla cadeia para o exon no RNA. Como o intron no tem nada a parear, ele forma estruturas de cadeias simples. Para um intron ser removido ele deve ser cortado ou sofrer o processo de splicing. Esse processo pode ser atravs do auto - splicing descoberto por T. Cech (1982), que demonstrou que o RNA pode ter propriedades catalticas. O intron nesse caso age com propriedades catalticas e o RNA com atividade enzimtica pode ser chamado de ribozima. Os introns com auto-splicing so chamados de introns do

grupo I. Os introns do grupo II, do RNA nuclear de eucariotes, so removidos com a ajuda de proteinas atravs de partculas de

RNA-proteina chamadas de spliceossomas. Esse tipo de intron foi descoberto por J. Abelson e E. Brody.

Os componentes do mecanismo de splicing so

pequenas

ribonucleoproteinas nucleares ou snRNPs (small nuclear ribonucleo proteins) e pronunciadas snurps assim denominadas por J. Steitz e colaboradores. Cerca de 5 dessas partculas tomam parte no mecanismo de splicing, cada uma delas composta de uma ou mais proteinas e uma pequena molcula de RNA, sendo designadas por U1,U2,U4,U5 e U6. As molculas de RNA variam de tamanho (de 100 a 215 bases). Existem ainda introns do grupo II, mitoncondriais. Finalmente existe ainda exemplos de sequncias de DNA que no predizem a sequncia de proteina mesmo aps a remoo de introns. Isso ocorre pela insero ou deleo no RNA mensageiro de nucleotdeos antes que ele seja transladado. Essa insero ou deleo quase que exclusiva de uridinas(Us). O processo chamado de edio de RNA. Esse processo foi particularmente evidenciado para sntese de proteinas mitocondriais de um grupo de parasitas, os Trypanosomos. Em um caso, mais que 50% dos nucleotdeos do m-RNA foram por adio de uridinas. As uridinas estavam tambm deletadas quando comparadas ao gene original. Esses parasitos tem outra caracterstica, possuem mini - crculos e maxi - crculos de DNA nas mitocndrias especializadas, chamadas

cinetoplastos ou kinetoplastlos. Em mdia os kinetoplastos contm 50 maxi - crculos e 5000 mini - crculos concatenados como ligaes em cadeia. Esses achados foram evidenciados por L. Simpson e

colaboradores (1990). Ambos os maxi - crculos e mini - crculos so frmas para um RNA guia (gRNA), um s-RNA que guia o processo de edio do RNA mensageiro. O dogma central original da informao gentica previa o fluxo de informao do DNA-RNA-Proteina. Pensava-se que esse esquema, da informao sair do DNA para editar sequncias de proteinas, fosse inviolvel. O sentido inverso da informao RNA-DNA entretanto foi evidenciado em vrus causadores de tumores como o linfosarcoma de Rous, tanto como o vrus da AIDS que fazem uma polimerase de DNA dependente de RNA conhecida como transcriptase reversa, capaz de sintetizar DNA a partir de moldes de RNA viral descobertos por H. Temin e D. Baltimore. Uma segunda modificao do dogma central original foi dada pela possibilidade do RNA agir como molde para sua prpria replicao, um processo observado em uma pequena classe de bacterifagos como o R17,f2,MS2 e o Q. Esses fagos de RNA so os mais simples fagos conhecidos.

captulo 1 Exerccios e Problemas 1. Observe o esquema anterior e procure em bibliografia uma hiptese plausvel para explicar a origem das clulas procariotes e eucariotes. 2. Monte um esquema com sequncia de nucleotdeos caractersticas do DNA, RNA e uma sequncia de aminoacidos que seriam formados correspondentes a sequncia proposta com base nos conecimentos do cdigo gentico. 3. Diferencie um cromossomo de procariote de um cromossomo de eucariote. 4. Faa um esquema do processo de diviso mittica. 5. Faa um esquema do processo de diviso meitica. 6. Para o caritipo humano caracterize um homem normal uma mulher normal um homem com sndrome de Klinefelter. uma mulher com sndrome de Down. 7. Mostre para Drosophila melanogaster o numero cromossmico de uma fmea com 3X, e uma XO. 8. Caracterize um Intron. Exemplifique. 9. Quando voce supeita a ocorrncia de um intron? 10. Explique o mecanismo gentico de certas clulas cancergenas.