Atividades de apoio em Biologia Celular e Molecular Aluno: ____________________________________________________ n ______

Atividade prtica
Quem o pai? Quem o criminoso? OBJETIVOS Compreender a importncia prtica da Engenharia Gentica na identificao das pessoas. Conhecer os princpios bsicos da manipulao gentica e algumas de suas principais aplicaes, como identificao de pessoas atravs do DNA.

PR-REQUISITOS necessrio que o aluno tenha noes de gentica (DNA, gene, cromossomos homlogos) e de algumas tcnicas de engenharia gentica (enzimas de restrio, gel de eletroforese).

INTRODUO O primeiro caso de identificao criminal atravs de exames de DNA ocorreu em 1985, na Inglaterra. Num pequeno condado, rodeado de montanhas e com uma nica estrada de acesso, uma mulher foi estuprada e assassinada. "L havia um geneticista, Alec Jeffreys, que colheu o esperma encontrado na vtima e fez o exame de DNA. Mais tarde houve outro crime similar. Novamente Jeffreys analisou o smen encontrado na vtima. Era do mesmo homem que cometera o primeiro crime", conta Jos Maria Marlet, professor de medicina legal da USP. As autoridades locais forjaram uma campanha de doao de sangue cuja finalidade era identificar o agressor. Todos os habitantes foram doar sangue, mas nenhum deles possua DNA igual ao do estuprador. "A polcia prosseguiu com as investigaes e descobriu que havia um viajante no condado. Quando o sujeito voltou, foi convidado a doar sangue. Feito o teste de DNA no sangue colhido, Jeffreys concluiu que o cdigo gentico do viajante era o mesmo do estuprador", conta Marlet.
Fonte: Folha de S. Paulo, 28/05/95

As tcnicas da Engenharia Gentica permitem identificar pessoas pela anlise de suas molculas de DNA (cido desoxirribonuclico), a substncia que constitui os genes. Com exceo dos gmeos univitelinos, cada pessoa possui um conjunto de genes e, portanto, de molculas de DNA, nico e particular. O processo mais simples para caracterizar o DNA consiste em cortar as molculas dessa substncia com o auxlio de "tesouras moleculares", as chamadas enzimas de restrio, analisando em seguida o tamanho dos fragmentos que se formaram. Uma enzima de restrio corta a molcula de DNA em pontos especficos, somente onde ocorre determinada seqncia de bases nitrogenadas. Como cada pessoa tem seqncias tpicas de bases nitrogenadas, o nmero e o tamanho dos fragmentos obtidos pelo corte enzimtico acabam por caracterizar seu DNA. O tamanho dos "fragmentos de restrio", como so chamados os fragmentos obtidos aps o corte enzimtico, determinado atravs da tcnica de eletroforese. A mistura de fragmentos de DNA aplicada em uma camada de gelatina (gel) e submetida a um campo eltrico. Nessas
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Atividades de apoio em Biologia Celular e Molecular condies, os fragmentos se movem em velocidades proporcionais ao seu tamanho, os menores mais rapidamente que os maiores. Quando o campo eltrico desligado, fragmentos de mesmo tamanho estacionam juntos em determinada posio do gel, formando uma faixa. O padro de faixas que surge caracterstico para cada pessoa, e corresponde sua "impresso digital" gentica.

Foto de um gel de eletroforese iluminado com luz ultravioleta. Sob essa luz, o DNA previamente tratado fluoresce, revelando um padro de faixas tpico de DNA analisado.

ATIVIDADE: SIMULANDO A IDENTIFICAO DE PESSOAS ATRAVS DO DNA Nesta atividade voc aplicar os princpios da identificao de pessoas pelo DNA na soluo de duas questes judiciais. Em uma delas identificar um criminoso entre trs suspeitos, e em outra descobrir quem o pai de uma criana. Na figura 1 esto representados segmentos de DNA de cinco pessoas (P-1 a P-5). Cada uma tem dois segmentos, correspondentes a um par de cromossomos homlogos (Ca e Cb). As seqncias de bases dos homlogos podem ser ligeiramente desiguais em funo da diferena entre os genes alelos. O primeiro passo para a anlise do DNA cort-lo com uma enzima de restrio hipottica que, neste exemplo, reconhece a seqncia de dois pares de bases C-G adjacentes (dois C em uma cadeia e dois G na outra). Para facilitar, essas "seqncias de corte" esto destacadas no DNA. Localize, nos dois segmentos de DNA de cada pessoa, todas as seqncias de corte. Marque-as a lpis com um trao horizontal, de modo a separar um par C-G do par C-G adjacente. O passo seguinte organizar os fragmentos obtidos por ordem de tamanho. Para isso, conte o nmero de pares de bases de cada fragmento e complete o preenchimento do grfico da figura 2. Cada coluna do grfico simula o padro eletrofortico de uma pessoa, onde os fragmentos de DNA se distribuem em faixas por ordem de tamanho. A ttulo de exemplo, a coluna correspondente ao padro da pessoa P-5 j est preenchida.

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P1 Ca C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C C-G C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T G-C T-A A-T A-T G-C C-G C-G T-A A-T T-A G-C G-C A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T C-G C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T C-G T-A A-T C-G A-T T-A G-C G-C Cb C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C C-G C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T A-T T-A A-T A-T G-C T-A C-G T-A A-T T-A G-C G-C A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T T-A C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T C-G T-A G-C C-G A-T T-A G-C G-C Ca C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C C-G C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T A-T T-A A-T A-T G-C T-A C-G C-G A-T T-A G-C G-C A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T T-A C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T C-G T-A G-C C-G A-T T-A G-C G-C P2 Cb C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C T-A C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T G-C T-A A-T A-T G-C T-A C-G C-G A-T T-A G-C A-T A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T C-G C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G T-A T-A A-T C-G T-A A-T C-G A-T T-A G-C G-C Ca C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C T-A C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T A-T T-A A-T G-C G-C T-A C-G T-A A-T T-A G-C G-C A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T T-A C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T C-G T-A G-C C-G A-T T-A G-C G-C P3 Cb C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C T-A C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T G-C T-A A-T A-T G-C T-A C-G C-G A-T T-A G-C G-C A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T C-G C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G T-A T-A A-T C-G T-A G-C C-G A-T T-A G-C G-C Ca C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C C-G C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T A-T T-A A-T A-T G-C C-G C-G T-A A-T T-A G-C G-C A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T C-G C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T C-G T-A A-T C-G A-T T-A G-C G-C P4 Cb C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C T-A C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T A-T T-A A-T A-T G-C T-A C-G C-G A-T T-A G-C G-C A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T C-G C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G T-A T-A A-T C-G T-A G-C C-G A-T T-A G-C G-C Ca C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C T-A C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T A-T T-A A-T A-T G-C T-A C-G C-G A-T T-A G-C A-T A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T C-G C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G T-A T-A A-T C-G T-A G-C C-G A-T T-A G-C G-C P5 Cb C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C C-G C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T A-T T-A A-T A-T G-C T-A C-G C-G A-T T-A G-C G-C A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T T-A C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T C-G T-A G-C C-G A-T T-A G-C G-C

Figura 1: Segmentos de DNA de 5 pessoas (P-1 a P-5). Ca e Cb correspondem a um par de cromossomos homlogos. Programa de pesquisas aplicadas sobre a melhoria do ensino pblico no Estado de So Paulo - FAPESP Parceria USP-So Carlos e EESOR 3/5

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Os nmeros ao lado (1 a 22) indicam os nmeros de pares de bases por fragmento

Figura 2: Grfico que simula o padro eletrofortico de uma pessoa. Os fragmentos de DNA se distribuem em faixas por ordem de tamanho. QUESTES: Quem o criminoso? Restos de pele encontrados sob as unhas de uma pessoa assassinada foram submetidos ao teste de DNA, revelando o padro eletrofortico P-5. Trs pessoas, P-1, P-2 e P-3, suspeitas do crime, tambm foram submetidas ao teste de DNA. Qual delas a provvel culpada? ________________________________________________________________________________

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Quem o pai da criana? Dois homens, P- 1 e P-2, disputam a paternidade de uma criana,P-4, filha da mulher P-3. Com base no teste de DNA dos quatro implicados, quem o provvel pai da criana? ________________________________________________________________________________

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BIBLIOGRAFIA: Esta atividade foi retirada de AMABIS, J.M.; MARTHO, G.R. Guia de apoio didtico para os trs volumes da obra Conceitos de Biologia: objetivos de ensino, mapeamento de conceitos, sugestes de atividades. So Paulo: Editora Moderna, 2001. 256p.

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Atividades de apoio em Biologia Celular e Molecular ANEXO (PARA O PROFESSOR) Resposta dos testes

Quem o criminoso? P-2. O padro eletrofortico do DNA deste suspeito idntico ao da amostra de pele encontrada sob as unhas da Vtima (P-5).

Quem o pai da criana? P-1. A criana P-4, pode ter recebido da me (P-3) DNA relativo as faixas de nmeros 1,4,10,12,13,18 e 19. As faixas 5,8,11 e 15 de P-4 provm necessariamente do pai. P-2 o outro postulante, no apresenta as faixas 5,8 e 11.

A identificao positiva do DNA de um suspeito pela tcnica mostrada na atividade, particularmente se for utilizado diferentes tipos de enzimas de restrio, atinge um ndice de acerto de mais de 99%. H uma probabilidade nfima de duas pessoas no-gmeas idnticas apresentarem o mesmo padro eletrofortico do DNA.

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