Bioqumica estructural Bibliografa recomendada: Biochemistry Zubay Biochemistry Matheus Bioqumica Rawn Bioqumica Voet & Voet Bioqumica

umica Herrera Proteins Creighton Introduction to protein structure Brandon & Tooze 1 Caractersticas qumicas de la materia viva. Los elementos de la vida. Se conocen unos 105 elementos qumicos, de los que 90 son naturales y, por tanto, susceptibles de formar parte de la materia viva. Sin embargo se observa que la composicin cuantitativa de los seres vivos es muy diferente a la del Universo, a la de la corteza terrestre y a la del agua de mar. Como se puede ver en la tabla, ms del 99% de la composicin de los seres vivos es hidrgeno, oxgeno, carbono y nitrgeno, siendo los dos primeros mucho ms abundantes. Tal distribucin responde a las primeras etapas de la evolucin de la vida, en las que las molculas sencillas sufran constantes cambios y transformaciones en un medio acuoso. Posteriormente se encapsularon determinadas sustancias en lo que se podra llamar una protoclula, con una composicin mayoritariamente acuosa, que ha llegado hasta hoy da. El agua es todava el disolvente bsico en cualquier reaccin que tenga lugar en un ser vivo. UNIVERSO H He O N C CORTEZA TERRESTRE O 47 Si 28 Al 7,9 Fe 4,5 Ca 3,5 Na 2,5 K 2,5 Mg 2,2 AGUA DE MAR H 66 O 33 Cl 0,3 Na 0,2 Mg 0,03 CUERPO HUMANO H 63 O 26 C 9,5 N 1,4 Ca 0,31 P 0,22

90 9,1 0,05 0,04 0,02

Los elementos que no proceden del agua se han seleccionado en los seres vivos en funcin de los beneficios que pudieran proporcionarles. Un caso notable es el del carbono, elemento prcticamente idntico al silicio en comportamiento qumico, pero que ha sido escogido por los seres vivos a pesar de su escasez en la corteza terrestre. Ambos elementos pueden formar cadenas largas y estables, enlaces mltiples consigo mismo y con otros tomos, pero el producto de la oxidacin del carbono, el CO2, es un gas ligero y soluble en agua, mientras que la oxidacin del silicio origina slice (SiO2) que es un slido altamente insoluble y del que las clulas encontraran graves problemas para deshacerse. El resto de los elementos que componen los seres vivos es muy escaso, dado que la seleccin se dio basndose en lo que haba, y descartando grupos de elementos segn sus caractersticas. Ahora podemos, con los datos analticos en la mano, fabricar unos criterios ms o menos rigurosos sobre la idoneidad de un elemento para formar parte de la materia viva segn, principalmente, el tamao y la densidad de carga: 1

 Los elementos muy pesados, a partir del nmero atmico 93, no estn disponibles por su escasez. Los elementos radiactivos se descartan por ser altamente inestables, a partir del nmero atmico 84. Los gases nobles no reaccionan en condiciones normales. Las tierras raras son muy escasas. Algunos son elementos muy txicos, como el plomo o el mercurio. Suelen ser metales pesados de los grupos 13 a 17 (IIIA a VIIA). Una vez hecha la seleccin queda un grupo de unos 50 elementos, de los que slo tres de los presentes en los seres vivos tienen nmeros atmicos por encima de 34: molibdeno, estao y yodo. Los ms abundantes son los no metales de bajo peso molecular, con nmeros atmicos 1, 6, 7 y 8, es decir, el agua (H y O) y los elementos con ms facilidades de realizar enlaces covalentes (C y N), tanto simples como mltiples, y entre ellos y con ellos mismos, adems de poder formar cadenas largas y estables solos o combinados. Por otra parte, estos elementos son los que necesitan menos nmero de electrones para llegar a una configuracin electrnica estable. La versatilidad de enlace del carbono, el nitrgeno y el oxgeno hay que buscarlo en la teora de orbitales atmicos. Los tres pueden hibridar los orbitales s y los p para formar orbitales hbridos sp3, sp2 y sp en enlaces simples, dobles o triples, respectivamente. Esta caracterstica es nica de estos tres elementos, no hay otros que puedan hacerlo. Funciones de los elementos esenciales. Los cuatro elementos bsicos descritos anteriormente, junto con el fsforo y el azufre, forman todas las estructuras bsicas de la materia orgnica: azcares, lpidos, protenas y cidos nucleicos. Hidrgeno, oxgeno, carbono y nitrgeno forman todas las estructuras plsticas de soporte, lo que se da en llamar el esqueleto o estructura de la molcula. El fsforo y el azufre cumplen funciones muy importantes al formar parte de aminocidos y coenzimas, aunque su cantidad est muy por debajo de la de los elementos estructurales de soporte. Otros elementos esenciales para la vida son los iones, y ms concretamente su proporcin y distribucin entre los distintos compartimentos celulares o extracelulares. Los ms importantes son: Cationes: Na+, K+, Mg2+, Ca2+. Aniones: Cl, SO42, PO43. La importancia de la distribucin correcta de cada ion es crucial para el mantenimiento de lo que consideramos vida. Todas las clulas tienen en su membrana una enzima llamada bomba de sodio, o Na+/K+ ATPasa, encargada de bombear cationes sodio afuera de la clula, y los cationes potasio adentro, manteniendo de este modo un gradiente electroqumico a travs de la membrana celular. El funcionamiento de la ATPasa es tal que por cada dos tomos de potasio que entran, salen tres de sodio, lo que unido a la abundancia de protenas intracelulares, mayoritariamente con carga negativa, provoca un potencial elctrico de membrana indispensable para el buen funcionamiento de las funciones celulares. El ejemplo ms evidente de la necesidad de mantener un potencial de membrana se da en las neuronas, que dejan de funcionar con potenciales menores a 70 mV. Adems, todas las clulas necesitan mantener su presin osmtica regulando la concentracin de sales dentro y fuera del citoplasma, adems de mantener la neutralidad de los fluidos fisiolgicos. Para esto se distribuyen los iones de una manera concreta, estando Na+, Ca2+ y C fuera de la clula, y K+ y Mg2+ dentro. De este modo se consigue el potencial negativo dentro y ordenar la posicin de los iones para una correcta actividad celular. Este hecho dio pie a la formulacin de la teora quimiosmtica. Los elementos ms raramente encontrados en los seres vivos son los llamados oligoelementos. Suelen ser 2

metales de gran tamao, generalmente de transicin, que cumplen un nmero muy reducido de funciones importantes para el ser vivo. Muchos, como el hierro o el manganeso, se asocian a protenas y mantienen su estructura tridimensional, o cumplen funciones esenciales en el centro activo de las enzimas como coenzimas de oxidorreduccin. Uno de los trabajos ms importantes es en el transporte de oxgeno, donde el hierro se necesita en cantidades tan grandes que no parece correcto hablar de oligoelemento. Algunos de estos elementos se sabe que son necesarios, pero no se sabe por qu. Por ejemplo, la falta de selenio provoca distrofia, la falta de vanadio provoca necrosis heptica y la falta de flor impide una osificacin correcta de las piezas dentales. Enlaces en la estructura biolgica. El enlace ms importante en las molculas biolgicas es el covalente. Adems, y teniendo en cuenta que todas las reacciones se realizan en medio acuoso, los inicos tienen mucha importancia por su abundancia. Este tipo de interaccin se da entre grupos cargados a pH fisiolgico, tales como carboxilos y aminas. Sin embargo, y paradjicamente, los enlaces ms importantes para una correcta funcin de las molculas biolgicas son los ms dbiles: enlaces de hidrgeno y enlaces de Van der Waals. Su importancia radica, no en que sean ms fuertes en un ser vivo, sino en que actan sinrgicamente y en grupos de miles o decenas de miles. Adems de todos los enlaces verdaderos anteriormente descritos, las interacciones hidrofbicas ayudan a que una protena alcance su conformacin definitiva funcional, llamada nativa, o a que los cidos nucleicos adquieran su forma caracterstica de doble hlice. Ello determina que en la superficie de una protena, expuesta al medio acuoso, se acumulen los aminocidos hidrfilos, mientras que en el interior se apelotonan los hidrfobos, repeliendo el agua. Hay que recalcar que las interacciones hidrofbicas no son fuerzas como tales, sino el resultado de todas las dems fuerzas descritas anteriormente, que provocan el acercamiento de los restos hidrfobos y su alejamiento del agua. Clasificacin de las biomolculas. La gran cantidad de sustancias que intervienen en la composicin de un ser vivo impide su memorizacin y aprendizaje fuera de un sistema jerrquico de clasificacin. ste consiste en la divisin de las biomolculas en dos grandes grupos: inorgnicas y orgnicas. En el primero encontramos como componente ms importante y mayoritario el agua, junto a todos los iones y sales necesarias para el mantenimiento normal de la actividad vital, antes mencionado. El segundo grupo engloba una variedad muy heterognea de sustancias, que pueden ser del orden de 5.000 en una clula simple de Escherichia coli, y hasta tres veces ms en una clula eucariota. La mayora de las biomolculas orgnicas (ms del 90% del peso seco de un organismo) son macromolculas de peso molecular entre las decenas de miles y los miles de millones de daltones. Todas son polmeros o combinaciones de un nmero comparativamente muy reducido de elementos estructurales de cuatro clases distintas: Veinte aminocidos que forman las protenas. Cinco bases aromticas (dos pricas: adenina y guanina, y tres pirimidnicas: citosina, timina y uracilo) que con otros elementos forman los nucletidos, y stos se ensamblan en cidos nucleicos. Dos azcares (uno de seis carbonos: glucosa, y otro de cinco: ribosa) cuyos derivados forman los polisacridos, y la ribosa interviene en la formacin de los nucletidos. Palmitato, glicerol y colina que son los precursores de los lpidos. La gran variedad de forma, funcin y tamao de las macromolculas se consigue en los seres vivos slo con un nmero muy reducido de enlaces qumicos. Todas las macromolculas son polmeros fabricados mediante tres tipos de enlace:

 Enlace peptdico entre aminocidos para fabricar protenas. Es un enlace tipo amida entre el grupo carboxilo de un aminocido y el grupo amino del siguiente, que repetido miles de veces da lugar a la formacin de una protena. Enlace fosfodister entre nucletidos para formar cidos nucleicos. Enlace glucosdico entre azcares para fabricar polisacridos. Una caracterstica comn a todos estos enlaces es que se basan en la ganancia o prdida de una sola molcula de agua, poniendo de relieve la economa de recursos tanto energticos como estructurales que utilizan los seres vivos en sus reacciones de sntesis de macromolculas. Las biomolculas se ensamblan entre ellas formando complejos estructurales, cada vez de mayor entidad, hasta llegar al nivel del organismo, pasando por la etapa de orgnulo, clula, tejido y rgano. Agua. Aunque todas las biomolculas son necesarias para la vida, el agua tiene la caracterstica de ser imprescindible, en su papel de disolvente universal y nico soporte conocido de las reacciones qumicas que ocurren en un ser vivo. Aun as, y a pesar de los esfuerzos que se llevan a cabo, se conoce muy poco acerca de la estructura del agua. Tal dificultad se debe, principalmente, a que el agua es lquida y es difcil estudiar su estructura con rayos X. Propiedades macroscpicas. Comparando los hidruros del grupo del oxgeno se observa que los puntos de fusin y ebullicin del agua son mucho ms altos que los de los dems. Esto permite que el agua se mantenga en estado lquido en el rango de temperaturas que normalmente se dan en la Tierra, permitiendo la aparicin de la vida dentro de ella. Adems, los calores especficos y de vaporizacin del agua son mucho mayores, y con diferencia, que los de la mayora de disolventes orgnicos utilizados en el laboratorio. Esta caracterstica hace que el agua tenga un efecto de tampn de temperatura, al variar muy poco la suya frente a cambios en el medio que rodea una clula, por ejemplo. El rango de temperaturas en el que se puede desarrollar la vida es de apenas 3 4 grados alrededor de los 35 C, mientras que los cambios de tiempo pueden ser de decenas de grados. Adems, en los animales homeotermos se aprovecha el gran calor de vaporizacin del agua, al sudar y hacerla evaporar para robar parte del calor que se produce en el metabolismo normal de mantenimiento. Otra propiedad macroscpica importante es la gran constante dielctrica del agua, cercana a 80. En tal ambiente, la interaccin de los solutos inicos es prcticamente nula, y de este modo se evita en una clula la agregacin masiva de estructuras y molculas, que estn cargadas, y las hara intiles. Esta caracterstica da al agua la funcin de tampn elctrico. Sin embargo, las reacciones que tuvieran lugar en ella seran extremadamente lentas en un medio tan opaco al campo elctrico. Esto lo solucionan los seres vivos utilizando catalizadores biolgicos, llamados enzimas, que crean un ambiente altamente hidrfobo en el que se permite una determinada reaccin qumica. Las enzimas suelen ser protenas enormes, con estructura compleja y replegada sobre s misma, fruto de las interacciones que se describieron anteriormente, que deja los aminocidos cargados o polares expuestos al medio acuoso, y los apolares apilados en el centro y lejos del agua. Pues bien, el sitio cataltico, llamado centro activo, suele ser un bolsillo hidrfobo formado por los restos de unos pocos aminocidos colocados estratgicamente cerca por el plegamiento exacto de la protena, y en el que el agua est fsicamente fuera, es decir, en el centro activo la constante dielctrica puede llegar a ser cercana a uno, y permitir con ello una reaccin rpida dentro de un medio acuoso. Por esto se explica por qu los seres vivos dedican tanto tiempo y recursos energticos a fabricar molculas extremadamente grandes, a pesar de que el centro activo es muy pequeo: para reducir al mnimo la constante dielctrica del agua y permitir que ocurra la reaccin deseada. Propiedades microscpicas. 4

Todas las propiedades anteriormente descritas tienen una base en la estructura de la molcula de agua. El oxgeno presenta cuatro orbitales hbridos sp3, de los que dos estn llenos con dos electrones cada uno, y otros dos estn compartidos con el orbital 1s de un tomo de hidrgeno cada uno. Esto determina una molcula angular en la que se acumula una gran densidad elctrica relativa cerca del oxgeno, en el vrtice de la molcula, con lo que presenta un momento dipolar muy fuerte y por esto es capaz de orientarse en un campo elctrico. Adems el oxgeno es un elemento muy electronegativo, con lo que se permiten hasta cuatro enlaces de hidrgeno entre molculas de agua. Esta gran cohesin intermolecular en agua pura provoca la aparicin de una gran resistencia a la agitacin trmica, que es la base del gran calor especfico y de vaporizacin, as como de los altos puntos de fusin y ebullicin que se nombraban como propiedades macroscpicas. Una caracterstica muy curiosa e importante del agua, es que es menos densa en estado slido que lquido. Que el hielo flote en el agua ha permitido la conservacin de agua lquida hasta hoy porque, de haber sido al revs, probablemente ya no quedara ms que hielo hasta el fondo de los ocanos. La causa de la menor densidad del hielo es el mayor nmero de enlaces de hidrgeno que se establecen entre las molculas de agua, debido a la menor agitacin trmica. Dado que la distancia de enlace es fija, se establece una red ms o menos regular y cristalina, tetradrica, en la que cada molcula de agua establece los cuatro enlaces posibles con molculas circundantes, resultando una estructura esponjosa, con ms huecos que el agua lquida y, por tanto, menos densa. En el hielo se da, adems, otra estructura en lminas de hexgonos apiladas, a la vez que la anterior. Adems, hay 6 7 tipos distintos de hielo segn la presin a la que se someta. La estructura del agua lquida es un misterio. Se sabe que no se rompen todos los enlaces de hidrgeno, sino slo un 15%, con lo que permanecen las redes antes descritas. Sin embargo, Pauling describi estructuras no cristalinas, al menos en principio, en las que las molculas de agua se asociaran para formar temporalmente estructuras dodecadricas llamadas clatratos. Disolucin de sustancias en agua. Sustancias inicas. Al disolver sustancias inicas en agua se observan dos cosas: disminuye el volumen de la disolucin y disminuye la capacidad calorfica. Esto se debe a la rotura de la estructura cristalina del agua lquida por la inclusin de un ion, lo que provoca el ordenamiento de los dipolos de agua a su alrededor, formando una capa de dipolos orientados llamada capa I de hidratacin. En esta capa, las molculas estn ordenadas, pero a su alrededor se forma una capa II muy desordenada, de transicin hacia la capa III, que realmente es el retculo cristalino del agua sin modificar. Las molculas de la capa I se ordenan segn interacciones dipoloion alrededor del ion disuelto, y se mueven con l a travs de la disolucin. La disolucin de sales en agua es un proceso espontneo porque, a pesar de que se tiene que romper la estructura preexistente, y adems los dipolos luego se ordenan alrededor del ion, la gran cantidad de desorden que se crea en la capa II es suficiente para explicarlo. La capa II es tambin la razn por la que el plegamiento de las protenas es espontneo, que en principio parece contradecir todas las leyes de la termodinmica: al plegar una protena se crea una capa II de tal magnitud a su alrededor que permite el establecimiento de estructuras altamente ordenadas dentro de la propia protena. Se puede calcular el balance energtico segn este modelo, y se ajusta muy bien a las observaciones realizadas. Dada la naturaleza desordenada de la capa II, las molculas de agua estn mucho ms apiladas unas contra otras, que es la causa de la disminucin de volumen, por razones obvias, y de la disminucin de la capacidad calorfica, porque ahora las molculas vibran libremente y por tanto el agua puede absorber y emitir calor ms fcilmente. Sustancias no inicas. 5

La disolucin de sustancias no inicas es bien distinta; con ella se observa: aumento de la temperatura de fusin, y el mantenimiento de los calores de hidratacin, independientemente del soluto que se considere. Un posible modelo para explicar este fenmeno, ya adelantado por Pauling, es que los clatratos presentes en el agua se unen de alguna manera, a modo de cajas que encierran las molculas del soluto apolar. Esto implica una reordenacin de la estructura del agua, con lo que aumentara su calor de vaporizacin al haber ms estructuras para romper, y la formacin de esas cajas sera independiente del soluto, porque slo depende de la propia naturaleza del agua. Este modelo puede dar respuesta a la accin de los anestsicos, que suelen ser sustancias gaseosas apolares altamente insolubles, que al llegar a la sinapsis provocan un reordenamiento de la estructura del agua tal, que estorba el paso y reabsorcin de los neurotransmisores. 2 Glcidos. Definicin y clasificacin. Tambin se llaman hidratos de carbono y azcares. Qumicamente son aldehdos o cetonas polihidroxilados de entre tres y siete carbonos, de frmula emprica CnH2nOn. Son las biomolculas ms importantes en cantidad, ya que forman la celulosa, presente en cantidades enormemente grandes en los vegetales; quitina, que la utilizan los hongos y los animales; y las bacterias los incorporan en el peptidoglucano y los lipopolisacridos de su pared. Adems forman parte total o parcialmente de todos los sistemas de almacenamiento de energa conocidos, y siempre de manera ms o menos relevante. Por otro lado cumplen misiones importantes en la sealizacin y reconocimiento celulares, muchos todava desconocidas. Hay varios sistemas de clasificacin de los azcares segn el criterio que se considere: Nmero de tomos de carbono: Triosas, tetrosas, pentosas, hexosas o heptosas. Funcin carbonlica: Aldosas (funcin aldehdo) o cetosas (funcin cetona). Papel fisiolgico: Estructurales, de reserva u otros. Uniendo los dos primeros criterios de clasificacin se obtiene un esquema como el siguiente: Glcidos. Osas. Azcares libres. Aldosas. Aldotriosa, aldotetrosa... Cetosas. Cetotriosa, cetotetrosa... sidos. Azcares combinados. Hetersidos. Polmero de azcares distintos, o de un azcar y otra cosa. Holsidos. Polmero de un solo tipo de azcar. Oligsidos. Nmero pequeo de restos. Poligsidos. Nmero grande de restos. Todos los glcidos comienzan a numerar sus tomos de carbono desde el extremo ms cercano a la funcin carbonilo. La diferente disposicin de los sustituyentes de cada carbono hace posible la presencia de estereoismeros que son imgenes especulares uno del otro, y cada uno de ellos desva un haz de luz polarizada en un ngulo distinto. La frmula que se emplea en un polarmetro para determinar el poder rotatorio de una molcula es: , donde es el poder rotatorio a 20 C y utilizando la luz monocromtica de la franja D del sodio, R es el ngulo de rotacin obtenido, en grados, c es la concentracin y l es la longitud del tubo. Segn este resultado, aparecen sustancias dextrgiras o levgiras segn sea positivo o negativo. El diferente ngulo se debe a la sustitucin asimtrica de cada tomo de carbono, llamado carbono asimtrico, en el que los cuatro sustituyentes son distintos, y estn distribuidos de manera diferente en los dos estereoismeros. Cada uno de los carbonos asimtricos tambin se puede llamar carbono quiral, porque uno es la imagen especular del otro, 6

a semejanza de las manos. El azcar ms pequeo que presenta estereoismeros es el gliceraldehdo (aldotriosa). En l el carbono 2 est sustituido asimtricamente, y sus dos estereoismeros dan poderes rotatorios de +14 y 14 grados. Este hecho llev a Fischer y Rosanoff a nombrar los ismeros del gliceraldehdo como D y L segn tuvieran, en la proyeccin de Fischer, el hidroxilo a la derecha o a la izquierda. Esta nomenclatura define las familias de azcares que se puedan derivar del gliceraldehdo, segn hacia dnde tengan el hidroxilo del ltimo carbono asimtrico, pero no significa que todas esas molculas derivadas tengan que ser dextrgiras o levgiras por pertenecer a las familias D o L. Son conceptos totalmente distintos, aunque uno se basara trivialmente en el otro: uno es un resultado emprico y otro es una nomenclatura. La reaccin qumica en la que se basan para asignar un azcar a la familia D o L (filiacin qumica) es la sntesis de azcares de KilianiFischer. La nomenclatura completa de un azcar es D(+)glucosa, o D()fructosa, por poner dos ejemplos corrientes de molculas de la misma familia, pero distinto signo en el ngulo de rotacin. En la clula todos los azcares normales son de la serie D, porque aunque reaccionan qumicamente igual que los de la serie L y tienen las mismas propiedades, dado que todas las reacciones celulares estn catalizadas por enzimas altamente especficas, stas son capaces de discriminar entre estereoismeros. Adems cabe suponer que sera un gasto muy importante para la clula tener una batera duplicada de enzimas para cada estereoismero. Estructura cclica de los azcares. Los glcidos en disolucin no presentan todas las reacciones tpicas de aldehdos o cetonas lineales. Por ejemplo, no sufren reacciones de adicin, ni colorean la fuxina decolorada con bisulfito, y se forman hemiacetales, en lugar de acetales. Adems, en la reaccin anterior, si se usa metanol, se obtienen dos metilsidos diferentes, cuando lo normal es que se obtenga uno slo. Fischer se dio cuenta de ello al obtener dos metilDglucsidos con poderes rotatorios de +159 y 34 grados, que llam y respectivamente. Este descubrimiento implica la aparicin de un nuevo centro de asimetra en el carbono carbonlico. Otra caracterstica curiosa de los azcares en disolucin, es que tarda en fijarse el poder rotatorio despus de disolver una cantidad de azcar. Este fenmeno lo llam Lowry mutarrotacin, e implica la aparicin de dos formas en equilibrio, cada una con distinto poder rotatorio. Adems, sabiendo la estructura de la glucosa, la metilacin de la cadena lineal con sulfato de metilo debera formar un derivado heptametilado, pero ste nunca se obtiene, sino otro pentametilado. La solucin a todas estas cualidades anormales de los azcares en disolucin la dieron Colley y Tollens, formando un hemiacetal interno entre el carbonilo y uno de los hidroxilos de la cadena, llamado puente oxdico. La siguiente pregunta es dnde se sita este puente oxdico, que se resuelve con el mtodo del cido perydico para la glucosa, en este caso. El mtodo consiste en la oxidacin total de los radicales hidroxilo de dos carbonos adyacentes, en una reaccin estequiomtrica previsible para cada posible situacin del puente oxdico. Se saben las molculas de cido necesarias en cada caso y los productos que se obtendran: formaldehdo en caso de un alcohol primario, y un cido carboxlico en caso de un alcohol secundario. Contrastando el clculo terico con el resultado de la reaccin, se obtiene que la situacin del puente oxdico es 1!5, quedando la estructura de la glucosa en disolucin como un heterociclo de seis tomos: cinco de carbono y uno de oxgeno. La estructura obtenida es la ms estable para ciclos orgnicos, junto con los anillos de cinco elementos, teniendo en cuenta los ngulos de enlace, interacciones estricas, etc. Esta nueva estructura se representa mediante la proyeccin de Hayworth, en la que la semejanza de los anillos hexacclicos con el pirano, y los anillos pentacclicos con el furano, molculas que no estn relacionadas con los azcares, sugiri nombrarlos piranosas y furanosas, respectivamente. En nuestro caso anterior, sera glucopiranosa. 7

Se puede comprobar cmo la formacin del hemiacetal interno provoca la aparicin de un nuevo centro de asimetra en el carbono 1. Este carbono se llama anomrico, y los ismeros resultantes de la ciclacin son anmeros. stos se nombran o segn el hidroxilo del C1 se encuentre por debajo o por encima del plano que forma la molcula en la representacin de Hayworth. Todos los azcares van a reaccionar mediante su carbono anomrico, porque la proximidad del oxgeno en el ciclo confiere al hidroxilo en C1 propiedades mucho ms cidas que las del resto de los grupos. Una vez ms la nomenclatura es confusa porque deriva de la de la glucopiranosa, en la que la forma tiene un poder rotatorio de +159 grados, y la forma un poder rotatorio de 34 grados, pero esto no implica que todas las formas tengan un poder rotatorio positivo, ni que todas las formas lo tengan negativo. Sin embargo, hay una ley emprica, llamada regla de Hudson, que dice que los anmeros tienen un poder rotatorio mayor que los en la serie D. Es de extrema importancia saber qu anmero tenemos en disolucin porque las enzimas son especficas. Sirva como ejemplo la celulosa y el almidn, ambos homopoliglucsidos que difieren en el anmero utilizado: en el almidn, y en la celulosa. Los humanos pueden metabolizar el almidn, pero no la celulosa porque falta la enzima especfica para romper enlaces entre anmeros . Algunos medios para determinar el anmero en cuestin son: la regla de Boeseken de formacin de complejos con boro entre cuatro hidroxilos que estn en el mismo lado del plano, siendo uno de ellos el anomrico, pero es muy engorrosa por tener que calcular constantes de equilibrio; la regla de Hudson antes citada; o la utilizacin de anlisis enzimtico de modo parecido a lo expresado en el ejemplo anterior de la celulosa y el almidn, mediante el uso de o glucosidasas. Conformacin espacial de los azcares. Un ciclo de seis tomos puede tomar dos conformaciones bsicas, llamados conformmeros: silla o bote. La primera es unas 9 Kcal/mol ms estable que la segunda, porque los sustituyentes no se estorban y estn ms alejados unos respecto de otros. Ambas conformaciones se pueden describir desde un mismo plano formado por cuatro tomos contiguos dos a dos, del que sobresalen dos solapas, cada una conteniendo uno de los dos tomos que faltan. La diferencia es que en la conformacin de silla cada solapa sobresale hacia lados distintos, en trans, mientras que en la conformacin de bote ambas solapas sobresalen hacia el mismo lado, en cis; lo mismo ocurre con todos los sustituyentes vistos en la representacin de Newman, de ah la mayor estabilidad de la forma de silla. La especial distribucin de los sustituyentes en silla provoca la aparicin de sustituyentes ecuatoriales, que sobresalen paralelamente al plano base que forman los cuatro tomos del ciclo, y sustituyentes axiales que sobresalen perpendicularmente a dicho plano. En el caso particular de un heterociclo tipo pirano, la presencia del oxgeno provoca un acortamiento del enlace OC y, consecuentemente, una deformidad en la geometra (se abre el ngulo de enlace de 109 a 111). Sin embargo se puede seguir hablando de conformmeros en bote y en silla. Dependiendo de la distribucin de los tomos en las distintas conformaciones, cabe considerar ocho tipos distintos de configuracin: seis en bote y dos en silla. Centrndonos en la glucopiranosa, podemos descartar una conformacin en bote por ser menos estable que en silla, pero entre las dos posibilidades que permite esta ltima, a saber: con el C4 arriba y el C1 abajo (C1 ), o al revs (1C o ), resulta que en la primera todos los sustituyentes son ecuatoriales, mientras que en la segunda todos son axiales, y fsicamente es imposible que quepan sin deformar la molcula. Por todo esto, la conformacin ms probable y que de hecho se observa para la Dglucopiranosa es la C1. El efecto anomrico es otro de los condicionantes para la libre eleccin de anmero al ciclar una molcula de azcar. En principio podra ser igualmente probable cualquiera de los dos anmeros, pero la interaccin entre el oxgeno del ciclo y el hidroxilo del carbono anomrico provoca que el anmero sea ms estable que el en la conformacin C1. Adems hay que sumar a este efecto, el que provoca el hidroxilo en C2 (efecto ), bastante ms pequeo pero tambin influyente.

Sumando todos los efectos debidos a la conformacin y a las interacciones de los distintos momentos dipolares, resulta un anmero y un conformmero ms corriente para cada molcula de azcar, que depender de la distribucin de los sustituyentes. Todo lo anteriormente dicho para los ciclos tipo pirano se puede extrapolar para los ciclos tipo furano, con la salvedad de que stos adquieren conformaciones E (de envelope, sobre en ingls) y T (de twist, retorcido en ingls). La primera consiste en que cuatro de los tomos forman un plano y el quinto sobresale a modo de solapa, como en un sobre. Las conformaciones T son parecidas, pero en ellas el plano que formaran los tomos est retorcido. De cada una de las conformaciones se pueden construir diez conformmeros. La especificidad de conformmero en las molculas biolgicas es crucial, porque la conformacin de la ribofuranosa en el ARN, o de la desoxirribofuranosa en el ADN es la que permite la estructura caracterstica en doble hlice y, por tanto, la funcionalidad de la molcula ms valiosa de cualquier clula. La conformacin del azcar en los cidos nucleicos es la E. Puede ser necesario saber el conformmero que se tiene en un momento dado. Esto se consigue fcilmente por mtodos fsicos (rayos X, resonancia magntica nuclear, espectroscopa de infrarrojos o espectrometra de masas), pero mucho ms difcilmente por mtodos qumicos. Algunos de ellos son la formacin de complejos cuproamnicos entre hidroxilos adyacentes eclipsados o la formacin de complejos de boro tridentados, en los que el boro establece enlaces covalentes con los mismos sustituyentes. Propiedades qumicas de los azcares. Los azcares presentan las propiedades de los aldehdos y cetonas, ms las de los alcoholes y ms las de la combinacin de ambas funciones. Aqu se resaltan las ms importantes desde el punto de vista bioqumico. Deshidratacin en medio cido. Los azcares se deshidratan en medio cido dando furfurales, si se trata de una pentosa, o 5hidroximetilfurfurales si se trata de una hexosa. Esta diferencia permite saber si lo que tenemos son unas u otras, porque los furfurales son sustancias coloreadas con colores distintos segn sea un caso u otro. Reordenameintos en medio alcalino. Los azcares pueden sufrir reordenamientos espontneos en medio ligeramente alcalino a travs de tautomeras cetoenlicas, como los sufridos por la Dglucosa para obtener, en equilibrio, Dfructosa y Dmanosa. Exactamente as es como la clula interconvierte unos azcares en otros, salvando el medio bsico mediante el empleo de enzimas para poder asimilar como glucosa casi cualquier hexosa que se ingiera en la dieta. Mediante este mtodo se obtienen diferentes epmeros de cada azcar, que son ismeros en los que slo uno de los carbonos asimtricos est sustituido de modo distinto. Reduccin del grupo carbonilo. Los azcares se transforman en polialcoholes, al reducirse el grupo carbonilo a hidroxilo. De este modo se obtiene glucitol de la glucosa, comercialmente llamado sorbitol y utilizado como edulcorante artificial. En caso de reduccin de un aldehdo, slo hay posibilidad de formar un polialcohol correspondiente y se utiliza esto para identificarlo, pero la reduccin de una cetona implica la formacin de un nuevo centro de asimetra en el que hay dos posibilidades para colocar el hidroxilo. As, la reduccin de la fructosa da una mezcla de glucitol y manitol (como si proviniera de la manosa) al 50%, con lo que con slo observar los productos de la reduccin no es posible determinar la molcula de partida. Otras reducciones importantes son la del gliceraldehdo para dar glicerol, y la de la ribosa para dar ribitol. La importancia comercial de estos polialcoholes radica en que mantienen prcticamente invariadas, e incluso 9

potenciadas, las cualidades organolpticas de los azcares de origen porque todos saben dulce, de ah su uso como edulcorantes artificiales, ya que no se pueden metabolizar. Adems, al no ser substratos fermentables por las bacterias de la boca, no se crean los productos cidos de la fermentacin y se evita con ello el dao al esmalte, por esto los chicles sin azcar llevan sorbitol. Sin embargo, la imposibilidad de eliminar eficazmente estos productos, que no son naturales, limita la ingesta mxima por los daos que pudiera causar una alta concentracin en la sangre. Esto de debe a que estos edulcorantes son similares o idnticos a los polialcoholes txicos que se acumulan en la sangre en casos de diabetes no tratada, dada la gran abundancia de glucosa que no se ha podido asimilar. Aunque son inocuos en pequeas dosis, pueden ser cancergenos en grandes cantidades. Oxidacin del grupo carbonilo. La oxidacin de un aldehdo provoca la aparicin de un cido aldnico, que se cicla espontneamente dando una o lactona, segn sea el puente 14 15. Estos productos son muy importantes en el metabolismo, siendo el comienzo de la ruta de las pentosasfosfato. Si adems el medio oxidante es fuerte, el C6 tambin se oxida, adems del aldehdo, formando un cido dicarboxlico llamado aldrico. Por ejemplo, la glucosa puede oxidarse ligeramente dando cido glucnico, una gluconolactona o, ms enrgicamente, un cido glucrico. La oxidacin de una cetona implica la ruptura de la molcula, al pasar de una funcin lineal a otra terminal. Este tipo de oxidaciones slo se consigue con un oxidante fuerte. Como ejemplo, la fructosa se oxida dando cido oxlico y cido tartrico, ambos dicarboxlicos. Adicin al grupo carbonilo. Se da siempre en presencia de reactivos nuclefilos: Aminas que dan azcares aminados, muy corrientes y capaces de ciclarse. Tioles que dan tiohemiacetales o mercaptanos. Alcoholes que forman hetersidos que pueden tambin ciclarse. Tambin reaccionan con otros azcares. Hidroxilamina que forma Nhidroxihetersidos. No es una reaccin fisiolgica. Condensacin aldlica. Consiste en la unin reversible de dos glcidos: una aldosa y otro cualquiera, a travs del grupo carbonilo de la primera, que sufre un ataque nucleoflico por parte del ltimo carbono del otro glcido, cuyo hidroxilo es muy cido por fenmenos de resonancia, y puede liberar el hidrgeno como protn dejando el carbono como un carbanin. ste ataca el carbono carbonlico (o al revs), que es electrfilo y pasa a ser un carbocatin, estableciendo el enlace y obligando al oxgeno carbonlico a estabilizar el electrn libre que le queda tomando un protn. Un ejemplo importante es la formacin de fructosa a partir de dihidroxiacetona y gliceraldehdo, con la salvedad de que en la clula se hace al revs en la ruta glucoltica. Estas reacciones son la base de dos ciclos muy importantes en los seres vivos: la ruta de las pentosasfosfato y el ciclo de Calvin, adems de ser el mecanismo bsico de interconversin de azcares de distinto nmero de tomos de carbono. Reacciones con fenilhidracina. Este tipo de reacciones se realiza en el laboratorio para revelar en las cromatografas la posicin de cada azcar. Es una reaccin de sustitucin que, en fro implica slo al grupo carbonilo, formando una hidrazona de color amarillo plido y muy tenue, pero que en caliente, y a travs de un intermediario inestable, se llegan a sustituir ms carbonos hasta formar una osazona de color amarillo anaranjado bien visible. 10

Formacin de steres a partir del grupo hidroxilo. Dado que los azcares estn ciclados en medio fisiolgico, se comportan como polialcoholes que pueden llevar a cabo reacciones de esterificacin en presencia de algn cido. En condiciones normales, nunca se podr llevar a cabo si no se activa antes el cido, por ejemplo con su forma anhidra. De este modo se obtendra con anhdrido actico un azcar totalmente sustituido con radicales acetilo. Sin embargo tal reaccin no es conveniente en el metabolismo normal de la clula, que para ello utiliza enzimas y cidos grasos de cadena larga (18 20 carbonos), adems de derivados de acetato. Sin duda los steres de azcares ms importantes son aqullos que implican un cido inorgnico; hasta tal punto que todos los azcares de una clula estn fosforilados. Esto responde a varias razones: la fosforilacin activa la molcula para hacerla ms reactiva, se evita una concentracin interna excesiva de glucosa libre para no romper el gradiente establecido entre el intestino y el citoplasma de las clulas en cepillo, y sobre todo y ms importante, se evita la difusin a travs de la membrana celular al aadir carga neta negativa a la molcula, porque el fosfato est ionizado a pH fisiolgico. Algunos azcares tambin se combinan con cido sulfrico. Formacin de teres a partir del grupo hidroxilo. El enlace ter entre dos molculas de azcar es la base de la formacin de polisacridos. Todos los enlaces entre glcidos implican el carbono anomrico de uno y cualquiera de los otros hidroxilos de otro. Este enlace caracterstico se llama glucosdico. Oxidacin del grupo hidroxilo. Un azcar ya ciclado puede oxidarse en el C6 totalmente hasta dar un cido urnico, distinto del cido aldrico, que estaba oxidado en C1 y C6, sin posibilidad de ciclarse. Los cidos urnicos son muy importantes en la formacin de polisacridos, sobre todo en vegetales. En el laboratorio se necesita bloquear el carbono anomrico para evitar que reaccione, dado su carcter ms cido que el del resto de grupos hidroxilo. Oligosacridos. Se forman por la unin de dos a diez monosacridos mediante enlaces glucosdicos. Este enlace es estable en medio bsico, pero es rpidamente hidrolizado en medio cido o mediante enzimas, mecanismos que utilizan los animales conjuntamente para romper grandes cantidades de polisacridos en el estmago. Segn la especial disposicin en el espacio de las molculas y los enlaces constituyentes, pueden quedar expuestos algunos carbonos anomricos libres, de modo que el oligosacrido tenga propiedades reductoras al poder todava linealizarse y oxidar el carbonilo. Si un oligosacrido no es reductor significa que todos los carbonos anomricos de todos los restos glucdicos estn ocupados formando enlaces, de modo que la molcula se comporta como un polialcohol. En caso contrario presenta todas las caractersticas propias de los azcares libres (reductor, mutarrotacin, anomera...). Determinacin de la estructura de un oligosacrido. Se utiliza el siguiente protocolo: Determinacin del poder reductor. Para ello se utiliza un test de azcares reductores (test a la gota), como la reaccin de Fehling o la reaccin de Benedict, ambas basadas en la reduccin de una sal de Cu2+ a Cu+ en medio bsico, o tambin la reaccin de Tollens, consistente en la deposicin de una capa de plata elemental a partir de una sal de Ag+. Si la reaccin es positiva, significa que el polisacrido es capaz de reducir porque tiene algn carbono anomrico libre, que en definitiva acta como un carbonilo y se oxida dando un cido. Esto implica que no todos los carbonos anomricos estn formando un enlace glucosdico, 11

con lo que ahora hay que averiguar cul o cules son los restos que tienen el carbono anomrico libre. Hidrlisis cida con clorhdrico, por ejemplo. Identificacin de los monosacridos constituyentes en una cromatografa en papel, capa fina o gaseosa. En las dos primeras se revelan los azcares mediante la reaccin con fenilhidracina. Adems se hacen pruebas de poder rotatorio de los distintos azcares. La cromatografa en fase gaseosa se basa en el mismo principio que las cromatografas convencionales, es decir, en el coeficiente de reparto de una sustancia determinada entre dos disolventes de distinta polaridad. La salvedad es que en este caso la fase estacionaria est impregnada en un relleno inerte dentro de una columna de tamaos variados, que se vende ya hecho, y la fase mvil es un gas inerte (generalmente nitrgeno o helio) en el que se inyecta la muestra volatilizada. El gas entonces la arrastra a travs de la columna y las distintas molculas se separan en funcin de las distintas afinidades hacia la fase estacionaria. El problema radica en que se necesita calentar mucho la muestra para volatilizarla, y los azcares se caramelizan, lo que estropeara el aparato. Esto se soluciona fabricando derivados voltiles mediante la reaccin con cloruro de trimetilsililo , formando trimetilsililsidos. La ventaja de esta reaccin es que es prcticamente equimolar independientemente del azcar que se trate. Despus de someter la muestra a esta reaccin, al final del aparato hay un detector ptico que mide la cantidad del azcar separado y lo representa en una pantalla o en una cinta de papel. Determinacin del monosacrido reductor, si es que lo hay en la molcula. Para ello se somete el oligosacrido a una oxidacin leve, de tal modo que obtengamos un cido nico del azcar en cuestin. Luego realizamos una hidrlisis cida y una cromatografa para determinarlo, ya que ahora buscamos un cido y no un azcar y ser fcil de encontrar. Determinacin de la posicin del enlace entre los diversos restos de azcares. Para ello se metila completamente el oligosacrido con sulfato de metilo, se sigue de una hidrlisis cida y se somete a cromatografa para separar los distintos azcares metilados en diferentes posiciones segn los grupos hidroxilo que estuvieran libres, es decir, segn su lugar en la molcula. Estos grupos no metilados son los que estaban formando parte del enlace entre los distintos monosacridos. Hay que decir que los azcares reductores con carbonos anomricos libres, despus de metilarse vuelven a dar carbonilos porque se disocian del metilo en la hidrlisis; al fin y al cabo, ese enlace no deja de ser una especie de glucosdico, porque es un ter, y se rompe con los dems en el proceso. Los dos pasos anteriores se pueden realizar a la vez, oxidando, metilando, hidrolizando y realizando la cromatografa sobre la misma muestra. Determinacin de la configuracin del enlace. Despus de realizar todas estas pruebas, se necesita saber si el enlace glucosdico est en configuracin o . Para esto utilizamos una prueba bioqumica, sometiendo la muestra a digestin enzimtica con o glucosidasas. Los mtodos qumicos son extremadamente complejos y ni se mencionan. Oligosacridos naturales. Como producto final de rutas anablicas. Estos oligosacridos son muy pocos y fabricados expresamente por las clulas, no son producto intermedio de la degradacin de polisacridos mayores. Sacarosa. Es el producto final de la fotosntesis de azcares en las plantas. Est formado por glucosa y fructosa, de frmula Dglucopiranosil(1!2)Dfructofuransido. De lo anterior se desprende que no es un azcar reductor, ya que tanto la glucosa como la fructosa tienen sus carbonos anomricos formando el enlace glucosdico (recordar que en la forma de fructofuranosa el carbono anomrico es el segundo), como indica la terminacin sido (ver esquema anterior: sido significa azcar combinado). Como producto natural se 12

encuentra en grandes cantidades en la fruta, las semillas, las hojas donde se fabrica, y en la miel, donde posiblemente sea el nico oligosacrido puramente energtico fabricado expresamente por animales, y no el resultado de degradar otros. Industrialmente se explota en la remolacha azucarera y en la caa de azcar para fabricar azcar comn. La sacarosa tiene un poder rotatorio de +66, mientras que los de sus monosacridos constituyentes son +52 y 92 para la glucosa y la fructosa, respectivamente. Si midiendo el poder rotatorio en un control de calidad se observa este cambio, llamado inversin de azcares, significa que el azcar se est degradando y ya no se puede vender como tal, y supone una prdida econmica para la empresa. Este fenmeno origina la caramelizacin del producto; para mantener el color blanco se pasa el azcar por negro de carbn, que luego se elimina. Dada la abundancia de este azcar en el reino vegetal, todos los animales (y los vegetales, naturalmente) tienen una disacaridasa especfica, que en el caso de los mamferos est en la superficie de las clulas en cepillo del intestino delgado. Puede romperse este azcar con la disacaridasa especfica, que es una Dfructosidasa, tambin llamada sacarasa o invertasa (porque provoca el fenmeno de inversin de azcares), o por una Dglucosidasa cualquiera. Trehalosa. Tiene la frmula Dglucopiranosil(1!1)Dglucopiransido, con lo que evidentemente no es reductor. Es un azcar mayoritariamente utilizado por los llamados rdenes inferiores (bacterias, hongos e invertebrados) como fuente de energa bsica y regulador de la osmolaridad, papeles que en los vertebrados cumple la glucosa sola. Se degrada con la trehalasa, que es una Dglucosidasa. Lactosa. Azcar mayoritario presente en la leche de mamfero, con la siguiente frmula: Dgalactopiranosil(1!4)Dglucopiranosa. Es un oligosacrido reductor como indica la terminacin osa, pero la caracterstica principal es que incorpora un azcar muy raro como es la galactosa, nicamente sintetizado por las madres en los periodos de lactancia. Adems, el enlace en conformacin , normalmente asociado a funciones estructurales, aparece aqu en un oligosacrido pensado para el consumo, es decir, para la degradacin. Sin embargo, todava ms interesante es lo que hace el beb con este azcar. La parte de glucosa es rpidamente metabolizada para producir la energa necesaria para el desarrollo, pero la galactosa incorporada no se utiliza como fuente de energa, sino como un componente estructural muy importante de los lpidos complejos que rodean las clulas nerviosas en el cerebro, llamados galactolpidos por su abundancia en galactosa. Dado el pobre estado de desarrollo del cerebro en un recin nacido, el aporte de galactosa en forma de lactosa es clave para un correcto desarrollo del sistema nervioso, ya que la capacidad de asimilar la galactosa se pierde muy rpidamente despus del periodo de lactancia. La enzima capaz de hidrolizar la lactosa, la lactasa, se encuentra, como la mayora de las disacaridasas, en la superficie de las clulas en cepillo del intestino delgado. Todos los mamferos, incluido el hombre, tienen un periodo de lactancia muy estricto durante el cual se sintetiza esta enzima, y despus su expresin se reduce a mnimos o desaparece totalmente. Sin embargo el hombre, por presiones sociolgicas, sigue tomando leche despus del periodo que biolgicamente tiene establecido, y entonces la expresin de la lactasa se induce ligeramente a fin de evitar trastornos intestinales graves. Tales trastornos se producen cuando los azcares, que son altamente higroscpicos, no se pueden metabolizar y asimilar porque falta la enzima hidrolasa especfica, con lo que se acumulan y provocan el paso de agua hacia la luz del intestino, con la siguiente diarrea que puede llegar a ser mortal. Hay poblaciones humanas que no tienen la costumbre de tomar leche, y podran llegar a morir si tomaran un solo vaso porque la expresin de la lactasa en estos individuos est prcticamente bloqueada. Adems hay personas especialmente intolerantes a la lactosa porque en ellos no se induce la expresin de la enzima tanto como en los dems pero siguen tomando leche por presiones sociales, 13

aunque debidamente tratada para que no tenga lactosa, con el consiguiente aumento de precio. Oligosacridos producto de la degradacin de polisacridos. Son muchos y muy variados, dependiendo del polisacrido de partida y de lo avanzado del proceso de degradacin, pero los productos finales ms importantes reconocibles como oligosacridos son los siguientes. Maltosa. Producto de la degradacin del almidn o del glucgeno por las enzimas digestivas, no por las hepticas. Es un disacrido reductor formado por dos unidades de glucosa segn la frmula Dglucopiranosil(1!4)/Dglucopiranosa. Es el llamado azcar de malta utilizado industrialmente en la elaboracin de bebidas alcohlicas tales como la cerveza o el whisky. En este proceso industrial, la malta se obtiene despus de dejar germinar parcialmente (macerar) las semillas de centeno, y el producto ser mejor cuanta ms proporcin de maltosa haya, y menos de los dems productos de la degradacin del almidn. La enzima que lo degrada es la maltasa. Isomaltosa. Como la anterior, resulta de degradar el almidn, ms concretamente la amilopectina, y adems de los dextranos bacterianos. La composicin es la misma de la de la maltosa, con la salvedad de que el enlace es 1!6 en lugar de 1!4. Celobiosa. Disacrido idntico a la maltosa, salvo que la conformacin del enlace es , con lo que se denota su carcter estructural. Es un producto intermedio en la degradacin de la celulosa y las liquenanas, para lo que se necesita una Dglucosidasa, que son muy raras y slo existen en microorganismos como las bacterias simbiontes del tracto intestinal de los rumiantes. Otros oligosacridos. Rafinosa. Dgalactopiranosil(1!6)Dglucopiranosil(1!2)Dfructofuransido. Es un trisacrido vegetal presente en el azcar de la remolacha y que se elimina durante el refinado de la sacarosa, porque da color y sabor distintos a los deseados, generndose azcar moreno. Segn la frmula no es reductor. Adems de ste, los vegetales fabrican muchos ms trisacridos partiendo de un ncleo de sacarosa, con la caracterstica comn de no ser reductores, y muy frecuentemente, de funcin desconocida: gentianosa (Glc(16)Fru(21)Glc), meleztosa (Glc(13)Fru(21)Glc), planteosa (Gal(16)Fru(21)Glc), etc. Los oligosacridos reductores no suelen estar expresamente fabricados, sino que ms bien son el producto de degradacin de polisacridos ms complejos, as de la celulosa se produce celotriosa, celotetrosa, celopentosa, etc., y de la amilosa se obtiene maltotriosa, maltotetrosa, maltopentosa, etc. Glucsidos. Los glucsidos generalmente as llamados, son la combinacin de uno o dos monosacridos y otra cosa 14

muy variable llamada aglucn o aglucona, mediante un enlace glucosdico. Los glucsidos son muy importantes en la farmacologa natural, hasta tal punto que aproximadamente la mitad de los compuestos naturales utilizados en farmacia pertenecen a esta clase. Adems muchos tienen cualidades colorantes y se utilizan industrialmente. Las caractersticas anteriores las da el aglucn, y no el azcar que sirve como mero transporte y de sealizacin para el almacenaje. Estas sustancias se utilizan en la naturaleza como toxinas, feromonas y marcadores de toxicidad, amistad o peligro gracias a los colores, tanto en plantas como en animales, y tambin tienen otras funciones de comunicacin celular. El estudio de estas sustancias se ha dado en llamar Bioqumica Ecolgica, que es el estudio de la utilizacin de estas sustancias por los seres vivos. El enlace entre la parte glucdica y el aglucn se puede dar a travs de un puente de oxgeno (enlace Oglucosdico), de nitrgeno (enlace Nglucosdico) o de azufre (enlace Sglucosdico), formado mediante una reaccin de sustitucin con ataque de reactivos nucleoflicos como los que se describieron anteriormente para radicales hidroxilo, amino o tiol. No todos los azcares son susceptibles de entrar a formar parte de un glucsido, sino que la lista se limita a unos cuantos: Hexosas: Glucosa, fructosa, manosa y galactosa. Pentosas: Arabinosa y xilosa. Azcares raros pertenecientes a las series L: Lramnosa y Lfucosa, ambos producto de la desoxigenacin en C6 de Lmanosa y Lgalactosa, respectivamente (6desoximanosa y 6desoxigalactosa). La mayora de los compuestos son de origen vegetal, dado el complicado metabolismo de glcidos que tienen. Ohetersidos. Son hetersidos con enlace Oglucosdico. Hay mucha variedad y cumplen funciones muy importantes. Derivados de alcoholes. Estos compuestos son producto de la condensacin del azcar con un alcohol. etilDglucopiransido. Compuesto presente, junto al metilDglucopiransido en las hojas de los rboles. Floridsido. La frmula es 2Dgalactopiranosilglicerol, y no deja de ser curioso que la condensacin haya sido en el C2, y no en el anomrico como cabra esperar. Este glucsido no tiene color, lo que tambin es una caracterstica que se sale de lo normal. Se encuentra en los ptalos de las flores. Cianogenticos. As llamados porque incorporan en su composicin anhdrido cianhdrico. Esta familia parte de la base estructural de la amigdalina (Glc(16)Glcmandelonitrilo). El mandelonitrilo produce al hidrolizarse en medio cido (en el estmago), una molcula de aldehdo mandlico y otra de cido cianhdrico, que es un veneno muy potente que afecta la cadena respiratoria de transporte de electrones. Esto provoca cianosis, y de ah el nombre de esta familia de compuestos. Se encuentran cianogenticos en las almendras amargas, que saben a cianuro, y en determinados trboles y plantas de la familia, que los desarrollan para no ser comidos por el ganado. Una manera de revertir una intoxicacin de cianuro es utilizar la reaccin al revs, ingiriendo gran cantidad de 15

azcar. Derivados de fenoles. Se suelen utilizar para dar color a los vegetales y a los animales, en el contexto de relaciones interespecficas tanto de atraccin como de precaucin y amenaza o toxicidad. Por ejemplo la arbutina da el color rojo anaranjado que hace apetecible del madroo y adems tiene aplicaciones farmacolgicas. Derivados de esteroles. Son derivados del ciclopentanoperhidrofenantreno (CPPHF), muy utilizados en la farmacologa. El enlace siempre se realiza con el hidroxilo en C3 del anillo A del CPPHF. Cardiotnicos. Son frmacos cardiovasculares. Regulan el pulso, la frecuencia y la fuerza del latido cardiaco, generalmente reducindolo. Se extraen de la familia del digital o dedalera, aunque en la planta est como una toxina. El ms utilizado es la digitoxina (azcar + digitoxigenina), usado en la Edad Media en los Juicios de Dios, de modo que si el reo sobreviva a la ingesta de una infusin de dedalera sera considerado inocente por Dios, pero si mora significaba que era culpable. Otro cardiotnico ampliamente utilizado es la ouabana (Lramnosa + ouabagenina), que es un inhibidor de la Na+/K+ATPasa en las clulas diana, mayoritariamente el msculo. ste es un medio de accin comn a todos los cardiotnicos: varan el potencial de membrana de las clulas diana. Saponinas. Son muy buenos detergentes naturales porque son tensioactivos y buenos emulsionantes de grasas. Por esto son el veneno hemoltico perfecto, ya que rompe las membranas plasmticas de las clulas y libera la hemoglobina de los glbulos rojos, por eso se ve rojo alrededor de la mordedura de una serpiente. Como ejemplo vale la digitonina (dos azcares + digitogenina). Alcaloides. Son sustancias conocidas desde antiguo por las propiedades psquicas que tienen. Son sustancias muy distintas aunque la mayora son glucsidos, con la generalidad de tener grupos amino y ser bsicos o lcalis, de donde deriva el nombre. Pigmentos naturales. Son glucsidos cuyo aglucn presenta varios enlaces conjugados capaces de absorber y emitir radiacin. Tambin participan en el juego de seales de atraccin y repulsin entre los distintos seres de un ecosistema. Abundan los anillos bencnicos y pueden estar unidos a uno o dos restos glucdicos. Destacan la purpurina, el indicn y los taninos. Estos ltimos se utilizan para curtir pieles por su propiedad de precipitar las protenas, evitando as su degradacin y el mal olor que producen, adems de mejorar la conservacin de la piel. Esta cualidad se utiliza para combatir las diarreas, precipitando las protenas y haciendo una fase slida. Naturalmente se encuentran en las cortezas de los rboles y en las hojas marrones, adems de dar color al vino tinto. Los taninos son buenos antioxidantes porque tienen varios pares redox; sta es la razn de que se recomiende una copa de buen vino tinto (el barato tiene pocos de stos) al da, dada su capacidad para eliminar radicales libres y, por tanto, reducir la probabilidad de cncer. Shetersidos. 16

stos son pocos y poco importantes. Suelen derivar de la glucosa. Nhetersidos. Son glucsidos extremadamente importantes, si no los que ms. Todos los nuclesidos componentes de los cidos nucleicos son Nhetersidos, en los que el aglucn es la base nitrogenada y el azcar es la ribosa o la 2'desoxirribosa. El aglucn puede ser tambin un residuo aminado de una cadena polipeptdica, en cuyo caso sera ms correcto hablar de glucoprotenas, que se tratar ms adelante. Todas las protenas extracelulares son de este tipo. Polisacridos. Son polmeros de hasta millones de restos de azcar con estructura, propiedades y fines muy variados, pero fabricados segn un mismo mtodo muy sencillo y repetitivo, consistente en la unin de los monosacridos constituyentes mediante enlaces Oglucosdicos. La repeticin sistemtica de un enlace qumico para formar un polmero se da muchas veces en la Naturaleza. En estos polmeros se cambia la terminacin osa por ana, pero se utiliza ms el nombre no sistemtico. Clasificacin de los polisacridos. Segn su origen: Vegetal: Fitopolisacridos. Animal: Zoopolisacridos. Bacteriano: Bacteriopolisacridos. Fngico: Micopolisacridos. Segn su papel fisiolgico. De sostn: Celulosa. De cemento: Gomas, muclagos, pectinas. De reserva: Almidn, glucgeno. Inmunitario: Bacteriopolisacridos. Segn su estructura. Homopolisacridos compuestos slo por un tipo de azcar: Hexosas: Glucanas. Pentosas: Arabanas, xilanas. Aminosas compuestas de azcares aminados: Quitina. Derivados cidos de azcares: Pectinas. Heteropolisacridos en los que intervienen ms de una clase de azcares: Hemicelulosas. Gomas. Muclagos. Mucopolisacridos. Caractersticas qumicas de los polisacridos. Los polisacridos son qumicamente sencillos, ya que se componen de una serie limitada de monmeros unidos siempre por un enlace Oglucosdico. No todos los azcares se encuentran naturalmente formando parte de polisacridos; los ms corrientes son: 17

 Hexosas: Glucosa, galactosa, manosa y fructosa. Pentosas: Xilosa, arabinosa y alguna vez Larabinosa. 6desoxiazcares: Lfucosa y Lramnosa, que adems son raros por pertenecer a le serie L. cidos urnicos: cidos glucurnico, galacturnico, manurnico y Lgulurnico, que aparecen muchas veces en los polisacridos. En las molculas enormemente largas que se forman, suele haber un error de unin cada 700 restos, aproximadamente. Esto puede ser debido a un fallo enzimtico, o a una enzima equivocada, sobre todo en los polisacridos destinados a la reserva, dado su elevado ndice de sntesis y degradacin constante. Como ejemplo de esto ltimo sirva que el glucgeno almacenado en el hgado puede llegar a aumentar el peso un 15% despus de una comida, pero ese aumento se reduce a niveles nfimos antes de comer, con lo que se sintetiza y degrada muchas veces y muy rpido en un solo da. Cuando ocurre un error que se hace irreconocible para el sistema de degradacin, se hace imposible eliminarlo y puede resultar en una situacin patolgica. Determinacin de la estructura de un polisacrido. En principio, y en determinadas situaciones, se podra realizar un proceso anlogo al de la determinacin de la estructura de un oligosacrido, pero realmente es complicado por la semejanza entre los distintos azcares y porque se necesita incluir la determinacin de la conformacin espacial, dadas las enormes dimensiones de estas molculas, visibles al microscopio ptico en determinados casos. Para la determinacin del tipo de enlace se procede a metilar todo el azcar y luego a hidrolizarlo en sus distintos componentes. De las proporciones entre las distintas formas metiladas y con suerte y experiencia se puede deducir el tipo de enlace principal, la frecuencia de las ramificaciones y con qu enlace se unen a la cadena principal, as como la longitud aproximada de cada rama. Los extremos de un polisacrido pueden ser reductores o no reductores segn tenga el ltimo resto su carbono anomrico libre o no. La determinacin de la configuracin espacial se lleva a cabo mediante tcnicas fsicas iguales o muy parecidas a las utilizadas para el caso de molculas muy grandes como las protenas, tales como cristalografa de rayos X y espectrometra. Almidn. Es una glucana compleja formada por dos componentes distintos: amilosa (25%), de estructura lineal, y amilopectina (75%), ramificada; las proporciones dependen de la especie concreta. Es el polisacrido de reserva ms ampliamente utilizado en el reino vegetal y forma agregados tan grandes que se pueden ver con el microscopio ptico como grnulos de entre 3 y 100 micras. Los dos componentes se pueden separar en disolucin acuosa y en disolventes orgnicos, en los que precipita la amilosa y queda disuelta la amilopectina. La amilosa se purifica luego por recristalizacin en butanol. Estructura de la amilosa. Polmero lineal de hasta 4000 monmeros de glucosa unidos mediante enlaces Oglucosdicos (1!4). Dada la especial geometra del enlace y la conformacin en silla de los restos de glucosa, la molcula adquiere una estructura helicoidal dextrgira en la que hay 6 7 restos de glucosa por cada paso de vuelta. La repeticin de estructuras en hlice o en fibra es una constante en las molculas naturales. En la cadena puede haber enlaces errneos en (1!3), (1!4) y (1!6) con cierta frecuencia. La molcula es estable en disolucin acuosa, y puede desnaturalizarse por calor. La renaturalizacin puede ocurrir de dos modos segn sea rpido o lento el enfriamiento: en el primer caso se generan geles en los que las cadenas de amilosa estn entrecruzadas ms o menos al azar y entre las que se establecen pocos enlaces de 18

hidrgeno; o pueden formarse micelas con aspecto mucho ms granulado en el segundo caso, en los que las cadenas de amilosa se alinean unas respecto a las otras y se estabiliza la estructura mediante numerosos enlaces de hidrgeno. Este fenmeno se conoce como retrogradacin, y se explota industrialmente en la fabricacin de aditivos gelificantes y que dan consistencia a los alimentos, y de geles propiamente dichos. La amilosa interacciona con el yodo formando un complejo de coordinacin de color azul intenso, que es la base del reactivo de lugol para detectar almidn. El complejo se crea porque los yoduros encajan en el hueco central que deja la hlice de amilosa, y se establecen interacciones con los grupos libres de la cadena. Esta interaccin se puede revertir por calor al perder la amilosa la conformacin helicoidal. Estructura de la amilopectina. En principio se podra partir tericamente de una molcula de amilosa a la que se le aaden ramas cada 20 23 restos mediante enlaces (1!6). De este modo hay un solo extremo reductor y muchos no reductores. Segn los ltimos modelos, la estructura de cada rama se parecera a la de la molcula en su conjunto pero a menor escala (1926 restos), sin un patrn aparente de ramificacin, aunque tambin hay otras representaciones posibles. Esto permitira un mejor aprovechamiento del espacio para almacenar ms molculas de glucosa. La presencia de las ramas imposibilita la adquisicin de una estructura helicoidal, por lo que la amilopectina no presenta el complejo de coordinacin con yodo ms que muy levemente (una interaccin cada 1922 restos) y de color rojo teja. Adems, no presenta el fenmeno de la retrogradacin porque la estructura no es tan regular como la de la amilosa e imposibilita el ordenamiento en micelas. La hidrlisis parcial de la amilopectina produce varias molculas: glucosa, maltosa, maltotriosa, isomaltosa, panosa (Glc(1!6)Glc(1!4)Glc), y otras. Se pueden dar varios fallos como enlaces (1!3) y, muy raramente, steres con fosfato en posicin 6 que son ms frecuentes en otros azcares. Enzimas amilolticas. Tienen una importancia crucial para los animales, ya que una de las principales fuentes de energa proviene del almidn acumulado en los vegetales. En los mamferos hay varias familias de enzimas que actan secuencialmente sobre el almidn, principalmente presentes en la saliva y los jugos pancreticos secretados al duodeno. amilasas. Son enzimas (1!4) Dglucana glucanohidrolasa, es decir, rompen glucanas con este enlace y obtienen glucanas ms pequeas. Esta est en la saliva y en el jugo pancretico. El mecanismo de accin es la hidrlisis del enlace Oglucosdico, pero aadiendo siempre el tomo de oxgeno en el carbono anomrico y en configuracin . Es una metaloenzima que necesita un catin calcio para mantener su estructura tridimensional, y as mantener su funcin. La falta de calcio da problemas patolgicos precisamente por esta cualidad. Se utiliza como marcador bioqumico en cnceres de pncreas, en los que sintetiza en grandes cantidades. Esta enzima corta las cadenas de glucosa desde dentro, es decir, es una endoamilasa. Los productos de la amilosa son glucanas de 6 restos de glucosa, es decir, que corta cada paso de vuelta. Algo parecido ocurre con la amilopectina, pero en este caso lo nico que puede hacer es podar la molcula hasta que la cercana de una ramificacin (hasta 68 restos antes) impida seguir cortndola. El producto de la poda se llama dextrina.

19

amilasas. A pesar del nombre, estas enzimas no reconocen los enlaces glucosdicos en configuracin . stas son (1!4) Dglucana maltohidrolasas, cuyo substrato es el producto de las enzimas anteriores, y que liberan maltosa como producto. El mecanismo de la reaccin es parecido al de las anteriores, pero con la salvedad de que la maltosa se libera con su carbono anomrico libre en configuracin (inversin de Wolden) a pesar de que la glucana de partida tiene enlaces en conformacin , de ah el nombre. Una diferencia importante respecto las anteriores es que estas enzimas comienzan a cortar siempre por los extremos no reductores, aunque no liberen unidades individuales de glucosa. Cuando el substrato es la dextrina, esta enzima puede cortar hasta 2 3 restos antes de la ramificacin, dejando una molcula bastante ms podada y llamada dextrina lmite. La maltosa producida por esta enzima es directamente asimilable por las disacaridasas presentes en las paredes del intestino delgado. Las dextrinas, tanto lmite como no, se utilizan en la industria alimentaria como aditivo de alimentos, particularmente los llamados energizantes, ya que se prefieren hoy da a las pastillas de glucosa pura a la hora de tener una reserva rpida de hidratos de carbono metabolizables. El problema que provocan esas pastillas es la desproporcionada y violenta liberacin de insulina por parte del pncreas, al detectar enormes cantidades de glucosa en la sangre. Evidentemente, no hace ms que cumplir con su misin, pero la insulina es una hormona que regula muchas otras facetas del metabolismo, y en tales cantidades provoca efectos secundarios graves. Las dextrinas permiten mantener un alto ndice de glucosa en la sangre, ms rpida de asimilar que el almidn al estar parcialmente digerida, pero la van liberando poco a poco y no de golpe, con lo que se evita el rebote de insulina. Enzimas desramificantes. Es un grupo ms heterogneo que los anteriores, en el que todas las enzimas tienen la particularidad de eliminar las ramificaciones en (1!6) para dejar slo productos asimilables por las otras dos familias de enzimas. Algunas enzimas representativas de este grupo son: Enzima R: Elimina las ramificaciones de la amilopectina y de las dextrinas lmite. Isoamilasa: Rompe amilopectina y glucgeno (ver ms adelante). Pululanasa: Rompe amilopectina y glucgeno, y debe el nombre al hongo Pululana pululans. Glucgeno. Es el polisacrido de reserva ms importante en animales superiores, con funciones anlogas a las del almidn en los vegetales. Se almacena en el hgado y, sobre todo, en los msculos, donde sufre una elevada tasa de metabolismo, tanto de sntesis como de degradacin al utilizarse como reserva energtica a corto plazo. Es una glucana y tiene propiedades y estructura parecidas a las de la amilopectina, pero con las ramificaciones mucho ms apretadas, cada 10 12 restos de glucosa. Esto optimiza el almacenamiento de azcares, al ser mucho ms compacto que el almidn (llega a tener millones de daltones de masa molecular), e imposibilita la formacin de complejos con yodo. Los errores en la estructura de los enlaces del glucgeno son mucho ms escasos y de menor importancia que los del almidn, ya que si llega a producirse un error grave, lo ms probables es que se acabe con la vida del individuo. Por esto nunca se ven enlaces en configuracin fuera de cuadros patolgicos graves, nicamente algunos enlaces (1!3), que hidrolizado da un disacrido llamado nigerosa (Glc(1!3)Glc), dos enlaces (1!6) consecutivos, que generan al hidrolizarse un resto de isomaltotriosa (Glc(1!6)Glc(1!6)Glc), o la inclusin de fructosa en lugar de glucosa.

20

La degradacin del glucgeno puede darse por las enzimas amilolticas, si es parte del alimento ingerido, o gracias a la glucgeno fosforilasa heptica, que degrada el glucgeno por los extremos no reductores mediante una fosforlisis, liberando molculas de glucosa6fosfato para su inclusin directa en las vas catablicas a travs de la va glucoltica. Celulosa. Es el polisacrido estructural ms importante de lejos, utilizado en el reino vegetal. Representa la mayor proporcin de carbono fijado en la Naturaleza, y por tanto es tambin el polisacrido ms abundante, evidentemente. Es una glucana lineal de entre 3000 y 15000 monmeros, en la que los restos de glucosa se unen mediante enlaces (1!4). Esta conformacin del enlace glucosdico, en principio irrelevante, es la causa de las propiedades tan radicalmente opuestas a las del almidn o el glucgeno, ambos con enlaces tipo . La geometra del enlace provoca que cada resto de glucosa est totalmente girado 180 uno respecto al otro, lo que posibilita el acercamiento del oxgeno del heterociclo al hidroxilo en C3 del resto siguiente, y del hidroxilo en C2 al que est en C6 tambin del siguiente resto. Esta configuracin espacial estabiliza la estructura impidiendo el libre giro mediante la formacin de puentes de hidrgeno entre los tomos o grupos anteriormente mencionados Un puente de hidrgeno es exactamente igual a un enlace de hidrgeno, pero entre tomos dentro de una misma molcula, aunque mucho ms frecuentes entre O y C3 que entre C2 y C6, con lo que se genera una fibra lineal altamente resistente a la torsin y a la tensin, ms que una protena fibrosa, y que adems es poco higroscpica (para un azcar) porque muchos de sus grupos polares estn ya estableciendo enlaces que no son con el agua. Por esto no es soluble. Estas molculas tienen adems la capacidad de apilarse unas sobre las otras siguiendo un determinado orden, formando una estructura cristalina estabilizada por numerosos enlaces de hidrgeno y que pertenece al sistema triclnico. Este apilamiento de molculas se llama microfibrilla, que vueltas a apilar forman una fibrilla de celulosa, y a su vez pueden asociarse para dar fibras mayores. Las microfibrillas contienen celulosa casi pura y fcilmente extrable, como en el algodn. Sin embargo, la celulosa no se presenta pura en los rboles; todo el mundo sabe que la madera se hincha cuando se moja, lo que sera contrario a la estructura cristalina de la celulosa porque indica que interacciona con agua. En la madera hay partes amorfas en las fibras de celulosa, a distancias fijas y ms o menos constantes, en las que cada microfibrilla est ms o menos dispuesta al azar, con lo que es capaz de perder su conformacin en funcin de las condiciones ambientales para evitar una rotura en caso de grandes fuerzas. La estructura de la celulosa es tan estable qumicamente, que hacen falta tratamientos muy violentos para degradarla o hacerla reaccionar. Las nicas enzimas celulolticas (glucosidasas) capaces de degradar enlaces glucosdicos Glc(1!4) se encuentran en determinados microorganismos, la mayora de ellos simbiontes en el tracto intestinal de los animales herbvoros y de los insectos xilfagos. La industria papelera, sin embargo, necesita cantidades enormes de energa y reactivos muy potentes para romper la celulosa y fabricar papel, que una vez utilizados son de muy difcil eliminacin y control. Los derivados ms importantes de la celulosa son sus teres y steres, reacciones ambas tpicas de los azcares. Sin embargo, como la mayora de los radicales se encuentran formando enlaces, los steres se suelen dar en C6 y los teres en C2, que son los carbonos ms accesibles. Si se hace reaccionar con cido ntrico en determinadas proporciones se producen nitrocelulosas, que se utilizan como explosivos, combustibles de alto grado, plsticos, lacas, adhesivos, etc.; la reaccin con cido actico anhidro en diferentes proporciones, da plsticos, pelculas (acetatos de transparencias) y rayn. Los teres metilados de celulosa generan estabilizantes de alimentos. Quitina. Uno de los pocos polisacridos estructurales del reino animal y el ms abundante en el reino de los 21

hongos, donde cumple las mismas funciones que la celulosa. Es un polmero de 2acetamido2desoxiglucopiransido(1!4), tambin llamado Nacetilglucosamina (NAGA), que a veces tambin se da con galactosa (NAGalA). Es el polisacrido aminado ms grande y abundante, de estructura anloga a la de la celulosa aunque mucho ms duro y resistente, y est presente en el exoesqueleto de artrpodos. La quitina es insoluble en agua y disolventes orgnicos, por lo que prcticamente no hay nada capaz de destruirla, salvo cidos muy fuertes o la enzima quitinasa, extremadamente rara y encontrada slo en un grupo muy reducido de microorganismos. Otras glucanas. Liquenina. Polmero con enlaces alternados (1!3) y (1!4), presente en lquenes y con funciones anlogas a la de la celulosa en plantas. Tambin se encuentra en algunas plantas. Dextranas. Polmero con enlaces (1!6) y ramificado mediante enlaces (1!2), (1!3) y (1!4). Presente en bacterias como reserva de glucosa. Industrialmente es importante por su uso en la fabricacin de plasma sinttico, dado que es inerte para los animales, y sobre todo en la fabricacin de Sephadex, que es un gel artificial en la que la malla densa de dextrana tiene controlado el tamao del poro, lo que es clave para separar con mucha precisin macromolculas de distinto peso en una cromatografa de exclusin molecular. Tiene un poder analtico muy grande y es muy utilizado en el laboratorio. Hay otros homopolisacridos, tanto estructurales como de reserva que no estn constituidos por restos de glucosa. Galactanas. Polisacridos formados por la unin de molculas de galactosa. Son bastante escasos porque la galactosa no es muy corriente. El ms importante por abundancia es el agaragar, formado por una mezcla de dos tipos de molculas: agarosa lineal y agaropectina ramificada, de modo semejante al almidn. Es un polisacrido estructural en algas con funciones anlogas a las de la celulosa en plantas superiores, utilizado industrialmente en la fabricacin de geles para diversos usos como gelificante y estabilizante de la forma de los alimentos para dar consistencia en flanes y yogures, y en el laboratorio como el cultivo ideal de microorganismos, porque es altamente higroscpico y retiene bien los nutrientes del medio. La agarosa repite numerosas veces el oligosacrido fundamental cuya frmula es Dgalactopiranosil(1!4)L3,6anhidrogalactopiransido(1!3). La presencia de un azcar raro de la serie L, que adems tiene un ter interno entre los carbonos 3 y 6, no debera permitir la inclusin de la agarosa en el grupo de los homopolisacridos, pero no hay que perder de vista que es qumicamente un derivado de la galactosa. La agarosa est muy sulfatada, habiendo muchos restos de sulfato esterificados en C6, que le da la gran capacidad de acumular agua, y hay que mencionar que los enlaces alternados (1!4)(1!3) son muy corrientes entre los polisacridos junto con la sulfatacin. La molcula lineal adquiere una conformacin en el espacio de doble hlice con tres restos de azcar por vuelta, pero se puede desnaturalizar a 100 C y renaturalizar de diversos modos hasta obtener un gel ultrapuro con el tamao de poro buscado, ampliamente utilizado en el laboratorio para realizar cromatografas de exclusin y electroforesis de cidos nucleicos. La doble hlice de la agarosa, as como muchas de las estructuras tridimensionales de los polisacridos que se estn descubriendo ltimamente recuerdan mucho a las estructuras secundarias de las protenas, y no hacen ms que abundar en que las estructuras en la Naturaleza se 22

repiten ms o menos iguales, pero con sustancias muy diferentes. Hay que mencionar que es muy difcil estudiar la estructura tridimensional de los polisacridos, adems de su composicin, porque los azcares se parecen endiabladamente los unos a los otros. La agaropectina es una sucesin de Dgalactopiransido(1!4), en la que de vez en cuando se aade una rama de la misma composicin, pero mediante un puente con un resto de L3,6anhidrogalactopiransido(1!3). Tambin hay sulfatos en la agaropectina, pero muchos menos que en la agarosa. Mananas. Junto con el agar son el segundo polmero estructural en importancia en algas. Las hay de muchos tipos, pero las ms corrientes son las unidas con enlaces (1!4). Tiene propiedades parecidas al agar. El carcter estructural o de almacenamiento de un polisacrido lo da que el enlace glucosdico est en trans o en cis entre los distintos restos de azcar, ms que si la conformacin es o , ya que el hecho de estar en trans obliga a los restos a disponerse alternativamente girados 180 unos respecto de otros, de modo parecido a como se disponen los restos de glucosa en la celulosa. Fructanas. Un ejemplo es la inulina, que es un polmero de Dfructofuransido(1!2), utilizado como reserva (cis) en el bulbo de las plantas lilceas, de donde se obtiene. Se hidroliza muy fcilmente en medio cido y es muy soluble en agua, formando una suspensin turbia que se utiliza industrialmente para dar el aspecto deseado a las bebidas refrescantes de pia, naranja y limn. Como uso clnico se utiliza para ver la capacidad de filtrado del rin, porque la inulina no pasa por los tbulos renales. Poliurnidos. Homopolisacridos formados por unidades de cidos urnicos, generalmente estructurales y encargados de dar consistencia porque son muy resistentes. Tienen carga neta negativa a pH fisiolgico, por lo que se estabilizan quelando cationes divalentes como Ca2+ o Mg2+. Pectinas. Formadas por la unin de unidades de cido Dgalacturnico(1!4); aqu se ve un polmero con enlaces , pero que es estructural porque est en trans respecto a resto siguiente. Est presente en frutos y es ste y no la celulosa el polisacrido que les da la consistencia ms o menos dura. Es importante desde el punto de vista comercial porque durante la maduracin las enzimas pectinasas (Dgalacturonidasas) la van degradando y haciendo que la fruta parezca pocha e invendible, por eso es necesario controlar o regular la expresin de la enzima mediante ingeniera gentica para ralentizar este proceso, y vender la fruta como transgnica. En la industria de los aditivos, se utilizan tanto las pectinas como las pectinasas para dar o quitar consistencia a los alimentos derivados de frutas, como las mermeladas. cidos algnicos Formadas por la sucesin de cido Dmanurnico(1!4). Son polmeros estructurales en las algas marrones y frutos, con la particularidad de ser repentinamente solubles a 100 C, formando una suspensin turbia. Esta cualidad se aprovecha industrialmente para dar la consistencia a las sopas de sobre, de modo que lo parezcan, y para dar el sabor a carne se utiliza glutamato sdico y tenemos un plato del da Knorr o cerdo agridulce en el chino de la esquina. Adems se puede desecar y prensar y as no se estropea y se puede llevar y transportar fcilmente.

23

Los polisacridos estructurales utilizan enlaces glucosdicos en trans porque disponen unos restos respecto a los otros, de modo que se pueden formar fibras capaces de apilarse unas sobre las otras y formar estructuras fuertes y estables, de un modo parecido a como lo hace la celulosa. Los poliurnidos establecen el enlace de tal modo que los restos de cada polmero se apilan unos sobre otros exponiendo al exterior los grupos cargados en C6. Esta disposicin permite la multimerizacin de las molculas de poliurnido mediante el establecimiento de enlaces de coordinacin con cationes divalentes como los mencionados anteriormente. La estructura resultante es muy dura y funciona naturalmente como una cadena de intercambio de iones. Heteropolisacridos. Son largas cadenas de azcares distintos, con muy diversas funciones que suelen tener funcin estructural o funcional, nunca de reserva. Heteropolisacridos de origen vegetal. Son muchos y de muchos tipos de azcar distintos, lo que no es ms que un exponente del complejo uso que hacen los vegetales de los azcares. Suelan asociarse con la celulosa para formar las estructuras leosas de los rboles y los diversos tejidos de sostn, o tambin formar resinas o gomas como la arbiga de poca consistencia. Heteropolisacridos de azcares neutros. Glucosaminoglucanas (hemicelulosas), que son parte importante de la madera. Galactomanoglucanas presentes en el endosperma de semillas. Arabinogalactoglucanas que son una parte de la hemicelulosa de conferas. Arabinoxiloglucanas que son una parte de la hemicelulosa en gramneas. Heteropolisacridos con cidos urnicos. Goma arbiga, producida por determinadas especies de acacia. Es soluble en agua, dando una solucin viscosa adhesiva que contiene Ca2+, Mg2+ y K+. Se compone de LAra, Lramnosa, DGal y cido Dglucurnico. Goma de tragacanto, producida por rboles del gnero Astragalus, con partes solubles e insolubles en agua. Contiene LAra, Lfucosa, DXyl y cido Dgalacturnico. Heteropolisacridos de origen animal. Tienen una importancia vital en la vida de los animales, pues son el componente estructural ms importante del tejido conjuntivo no seo junto con el colgeno, desde la resistencia de los tendones, pasando por los cartlagos hasta llegar al lquido sinovial. Su estructura bsica, que es la que se repite, consiste en la condensacin de una hexosamina (2amino2desoxiosa) mediante un enlace (1!4) con un cido hexurnco. Este dmero fundamental se une a otro mediante un enlace (1!3), y suele estar sulfatada en diferentes sitios. El polmero entero se nombra glucosaminoglucuronoglucano, pero tambin reciben el nombre ms corriente de mucopolisacrido, precisamente porque se extrajeron del tejido conjuntivo. En la matriz extracelular sirven de apoyo y anclaje de diversas protenas estructurales, tales como el colgeno y la elastina, y forman los proteoglucanos en estado nativo; se utilizan como lubricantes en las articulaciones; ejercen el papel de fijador de cationes; actan en el reconocimiento y la comunicacin celular; influyen en los procesos de regeneracin de la matriz extracelular, como la cicatrizacin; y actan como molculas intercambiadoras de iones. Llegan a tener tal tamao que son antignicos, y la falta o mala regulacin de su expresin a cualquier nivel, tanto de sntesis como de degradacin, origina patologas y sndromes muy graves, como distrofias y retrasos mentales, que en conjunto tienen tal importancia que se les llama mucopolisacaridosis. Esto no hace ms que recalcar la importancia de estas molculas. 24

cido hialurnico. Formado por repeticiones de DNAGA(1!4)Dglucurnico(1!3). Son molculas extremadamente largas y lineales o muy poco ramificadas, de hasta 25000 restos y de 10 a 12 millones de daltones de peso molecular, que constituyen la parte fundamental del tejido conjuntivo y el lubricante en las articulaciones (lquido sinovial). Este tamao hace que sean las molculas vivas ms grandes que posiblemente existan, mxime cuando se encuentran asociados a protenas globulares y acumulan mucha agua de hidratacin. Se degrada con la hialuronidasa, que hidroliza el enlace (1!4) y rompe de este modo el tejido intersticial. Esta enzima est presente en la cabeza del espermatozoide para romper la cubierta del vulo y permitir la fecundacin, y es utilizada como factor de difusin por los animales que inyectan veneno para que ste llegue sin tropiezos a travs del tejido conjuntivo hasta la sangre. Clnicamente se usa de un modo anlogo en las inyecciones, como aditivo para romper el tejido muscular. Esta molcula puede tomar muchas conformaciones diferentes en el espacio, segn las condiciones de presin, temperatura, pH, fuerza inica, etc. La variedad va desde molculas aisladas en distintos grados de plegamiento en zigzag, pasando por asociaciones helicoidales estabilizadas por puentes de hidrgeno y una cantidad determinada de iones en cada conformacin, incluyendo una especia de copia de la hlice de colgeno (3 residuos por vuelta levgira), e incluso la hlice ms rara que puede formar una biomolcula: una doble hlice plectonmica como la del ADN. Esto hace del cido hialurnico el mejor lubricante, porque puede variar sus caractersticas de viscosidad segn las condiciones de utilizacin. Esta gran variedad de conformaciones permite en algunos casos que el hialuronato tenga una gran resistencia a la traccin. Condroitina y condroitnsulfato. Se encuentra libre en muy pequeas cantidades en el tejido conjuntivo, con funciones semejantes al cido hialurnico, aunque prcticamente nunca actan como lubricante. Su composicin es como la del cido hialurnico, salvo que se cambia la NAGA por NAGalA. La forma sulfatada acta como agente quelante de cationes divalentes como el calcio y el magnesio, y nunca en el tejido intersticial como el anterior. Hay tres tipos de sulfato, cuya localizacin es altamente especfica de tejido y rgano: Condroitnsulfato A: El C4 del cido glucurnico se encuentra sulfatado. Se encuentra en cartlagos y en el hueso en crecimiento. Condroitnsulfato C: El C6 del cido glucurnico est sulfatado. Se encuentra en cordn umbilical, los tendones y el cartlago. Condroitnsulfato B: Ambas posiciones anteriores estn sulfatadas; tambin se llama hipersulfatado. Dermatnsulfato. Hay varios tipos distintos de dermatnsulfato, pero como regla general se pueden describir con la frmula DNAGalA(1!4)Lidurnico(1!3) repetido muchas veces. El cido Lidurnico deriva de la Lidosa (altamente parecida a la DGlc) y que a veces se sustituye por glucuronato. Se encuentra en los tendones y las vlvulas cardacas, donde son el componente mayoritario. Est sulfatado como el condroitnsulfato A, y se parece tanto que pueden llegar a confundirse, como de hecho ocurra anteriormente. La gran inmunogenicidad de los heteropolisacridos obliga a, en el caso de un transplante, buscar los donantes ms parecidos a fin de evitar el rechazo. En nuestro caso el organismo cuyos heteropolisacridos son ms parecidos a los nuestros es el cerdo, para el caso de los transplantes de corazn. Queratnsulfato. Se encuentra en las partes duras de la crnea, y es caracterstico porque no tiene derivados cidos. Es un 25

polmero de Dgalactopiranosil(1!4)DNAGA(1!3), y todos los C6 se encuentran sulfatados. Tambin hay que buscar la compatibilidad en los transplantes de crnea. Heparina. Es el nico mucopolisacrido secretado, y por tanto es el nico verdaderamente soluble en agua, no slo forma suspensiones turbias. Lo secretan los mastocitos asociado a protenas. Estructuralmente tiene una rareza, al presentar un enlace en cis, como si fuera un polisacrido de reserva, en lugar del corriente en trans, lo que da la solubilidad y elimina el componente estructural, porque la heparina tiene una misin funcional. Adems el resto aminado est sulfatado, con lo que la heparina es cido D2sulfatidilamida2desoxiglucosil(1!4)Dglucurnico(1!3) repetido numerosas veces. El primer resto es como la NAGA, pero en lugar de un radical acetilo tiene un radical sulfatidilo (sulfato; NsulfatidilGA; NSGA), y adems puede tener sulfatos en posicin C4. La heparina no est nunca ramificada y es bastante ms corta que los polisacridos vistos hasta ahora, para facilitar la solubilidad. Tiene funciones anticoagulantes en animales superiores bien conocidas, y se utiliza clnicamente para eliminar los trombos. Hay muchas clases que difieren en la rapidez con la que actan, segn tengan ms o menos restos, la frecuencia con la que se sustituye el enlace (13) en trans por un (14) en cis y la cantidad de sulfatacin que tenga. Adems se conoce que activa la lipoprotenlipasa e inhibe la ribonucleasa. Sin embargo las funciones de la mayora de los tipos no se conocen todava. Proteoglucanos. Los mucopolisacridos se asocian fija y especficamente para formar complejos enormemente grandes, segn las funciones y el tejido en el que se encuentren, a travs de pequeas protenas de unin. Adems siempre se unen a determinados restos de aminocidos, que pueden ser hidroxilados, como la serina o la treonina, o aminados como la asparagina, y siempre mediante un enlace O o bien Nglucosdico. Adems siempre se unen de manera especfica mediante un puente de restos de azcares concretos: Condroitn y dermatnsulfato se unen siempre a serina o treonina por el trisacrido (1!3)Gal(1!3)Gal(1!3)xilopiranosaOSer/Thr, que se aade despus del cido galacturnico en el caso de la condroitina o el condroitnsulfato, o bien despus del cido Lidurnico en el caso del dermatnsulfato. La xilopiranosa es curiosa porque es un azcar de cinco carbonos, pero se ha ciclado en forma pirano, con lo que no tiene el CH2OH libre tpico de las aldohexopiranosas. Queratnsulfato se une a asparagina por sencillo (1!4)NAGANAsn, es decir, la unin es directa a travs del ltimo resto de la cadena del polisacrido. Los mucopolisacridos solos o ya combinados, es decir, los proteoglucanos, tambin interaccionan entre s y con otras protenas de forma no covalente, pero siempre son interacciones complejas que dependen del tipo de molculas que de trate. En el tejido intersticial se forman complejos mediante enlaces de hidrgeno entre el condroitnsulfato asociado a pritenas y el colgeno, segn el modelo de Matheus. Las uniones covalentes, independientemente de la funcin concreta de la molcula final, siguen con variantes el modelo de Rosenberg del cartlago de rata, en el que una enormemente larga molcula de cido hialurnico se asocia a cada nmero determinado de restos con una protena de unin y un polipptido, de modo que queda una estructura en forma de rbol de Navidad o de cepillo. Sobre estas ramas de polipptido se unen las condroitinas, el dermatn y el queratnsulfato mediante los enlaces que se describen arriba, con lo que resulta un cepillo dentro de un cepillo. Toda la malla formada por estos proteoglucanos constituye la matriz extracelular, que no es slo lo de fuera de las clulas, sino el soporte, el anclaje y el medio de comunicacin y de reconocimiento intercelular. Su estructura y disposicin espacial ejerce tareas tan importantes como la regulacin del crecimiento y el desarrollo celulares, que es un campo de investigacin muy importante en Biologa del Desarrollo. No en 26

vano, ms del 75% de los tumores estn relacionados con un fallo en la matriz o con la falta de reconocimiento de los inhibidores del crecimiento por parte de las clulas porque su receptor est mutado. Adems de en los proteoglucanos, todas las protenas no citoplasmticas tienen restos de oligosacrido en determinadas posiciones y unidos a los mismos aminocidos a los que se unen los mucopolisacridos, es decir, son glucoprotenas. Los patrones de unin son parecidos a los de los proteoglucanos: Oderivados: Los oligosacridos se unen a serina o a treonina mediante un enlace Oglucosdico, y son de tres tipos: Gal(1!3)NAGalAOSer, XylOSer/Thr o bien ManOSer/Thr. Nderivados: Estos oligosacridos son ms complicados y pueden ser de tres tipos: ricos en manosa, complejos o hbridos, segn se compongan slo de manosa en el primer caso; tengan restos de muy distintos azcares, incluyendo cido silico, que es cido Nacetilneuramnico (NANA), y qumicamente es una cetonanosa aminada y acetilada en C5 y ciclada con un puente oxdico (2!6) en el segundo caso; o haya una mezcla ms o menos clara de los dos tipos anteriores en el tercer caso. En cualquiera de ellos el ncleo es: Man(1!3)Man*(1!4)NAGA(1!4)NAGANAsn, con un resto de manosa unido en (1!6) a la otra manosa sealada. La mayora de los receptores tumorales son glucoprotenas, ya que son protenas asociadas a la membrana (CDxx) o a la matriz extracelular y estn todos implicados de algn modo en la comunicacin celular. Heteropolisacridos bacterianos. Las bacterias son organismos unicelulares que necesitan proteger ms su membrana plasmtica, que es muy lbil, frente a las agresiones externas que las clulas de un organismo pluricelular. Por ello se rodean de paredes duras y resistentes a la presin, la fuerza inica y el rozamiento, y estas paredes estn constituidas por peptidoglucanos. En ellas hay muchas veces azcares raros, que son el blanco de la inmensa mayora de los antibiticos, pueden estar ramificados y adems, como son muy grandes, del tamao de la propia bacteria, son inmunognicos. Hay muchos tipos y variedades, pero se pueden dividir en dos clases distintas segn retengan o no la tincin de Gram: Gram y Gram+. ste es adems un criterio taxonmico entre las bacterias porque depende del contenido en lpidos de la membrana. El mecanismo ms comn de accin de los antibiticos es inundar el medio con anlogos de los azcares raros de las paredes bacterianas, de modo que las enzimas puedan incorporarlos y fabricar una pared defectuosa incapaz de sostener la presin osmtica y provocar su lisis. Gram+. Son las paredes ms sencillas, formadas bsicamente por dos componentes. Murena. Polmero del cido DNAGA(1!4)DNAmurmico(1!4) repetido de 10 a 70 veces. El cido NAmurmico (NAM) es, qumicamente pero no fisiolgicamente, una NAGA a la que se le ha aadido en posicin C3 un lactato, unido por un enlace ter con el C del lactato. ste es el esquema bsico, obtenido de la pared de Staphylococcus aureus, pero hay muchos ms, cada uno con ligeras variaciones. Al carboxilo libre del lactato se une mediante un enlace peptdico el siguiente tetrapptido: LAlaDGluLLysDAla, en el que la bacteria coloca dos aminocidos raros de la serie D (la serie corriente en los aminocidos es la L) para evitar la rotura con proteasas normales, y adems utiliza un enlace raro con el glutamato, porque une el aminocido siguiente mediante su carboxilo terminal, y no mediante el carboxilo en C1, que es lo corriente. El primer resto tambin puede ser serina o glicina. Las molculas de polisacrido as formadas se disponen paralelas entre s y a la membrana plasmtica, y se unen para formar una verdadera caja casi indestructible mediante un pentapptido de glicina entre la DAla terminal de una de las cadenas y la LLys de otra cadena cercana. 27

cidos teicoicos. Forma una estructura a modo de base sobre la que se entrama el peptidoglucano. cidos glicerol teicoicos. Polmeros de seis a diez unidades del monmero bsico formado por la condensacin de dos molculas de glicerol a travs de un enlace fosfodister (13), a travs del que tambin se unen los monmeros entre s. Cada glicerol soporta, alternativamente en su C2, una DAla (enlace ster) y un monosacrido (o di o trisacrido) con azcares raros como Lramnosa (enlace ter). cidos ribitol teicoicos. Polmeros de seis a diez unidades del monmero bsico formado por una molcula de ribitol, al que se unen en C2 y C4 los mismos radicales que, alternativamente, se unen a cada molcula de glicerol en el tipo anterior. Tambin se unen entre s mediante enlaces fosfodister (15). Los cidos teicoicos se pueden anclar en la membrana cuando en lugar de unos restos de azcar tienen un radical acilo, que penetra en la bicapa lipdica. Adems pueden unirse mediante un enlace ster pirofosfato a la murena, en el CH2OH en C6, con lo que fijan en cierto modo la pared a la membrana, pero no demasiado para permitir el movimiento de la bacteria y los necesarios cambios de volumen citoplasmticos para adecuarse a las circunstancias. Gram. La principal diferencia con las anteriores bacterias es que stas tienen dos bicapas lipdicas: una interna que se corresponde con la membrana plasmtica, y otra externa. Entre ellas existe un espacio periplasmtico en el que est la red de murena, mucho ms fina y difusa que la de las Gram+. Adems, asociado a la membrana externa por el lado periplasmtico hay protenas hidrofbicas pequeas de 57 aminocidos, que unen la lisina Cterminal a la murena mediante un enlace amida, y la serina Nterminal con un cido graso que se introduce en la membrana externa, con lo que se fija el peptidoglucano a la membrana externa y no a la plasmtica. Adems hay protenas de la cubierta. Por el exterior de la membrana externa se disponen los antgenos O, que son las molculas que reconoce el sistema inmune y el blanco en las pruebas de diagnosis de enfermedades. Los antgenos O se dividen en tres partes. La parte externa es la repeticin hasta cincuenta veces del monmero fundamental ManramnosaGal, y al que se une en C6 de la manosa un 3,6desoxiazcar que puede estar derivado de la glucosa (paratosa), la galactosa (abecuosa) o la manosa (tirelosa). sta es la parte ms externa, y por tanto es la responsable de la inmunogenicidad. La parte interna de los antgenos O, que sigue a la parte externa, es un polisacrido corto que tiene los azcares raros Dmanoheptulosa (una heptosa) y el cido 2ceto3desoxioctanoico (KDO), que no es fisiolgicamente un azcar, pero s qumicamente. La base del antgeno O es una malla de Nacilglucosamina*(1!6)Nacilglucosamina unidas mediante enlaces ster pirofosfato (14), donde el radical acilo puede ser de 18 20 carbonos y sirve para anclar firmemente los antgenos a la membrana externa, pudiendo as la bacteria moverse libremente porque la membrana plasmtica no est fija. La parte interna del antgeno se une al C6 de la primera NacilGA (sealada). Todo lo que hasta ahora se ha venido llamando antgeno O tambin se puede llamar lipopolisacrido (LPS), y reservar la denominacin de antgeno O a la parte externa del LPS.

28