AUMENTO DA ATIVIDADE DA GLUTATIONA PEROXIDASE EM RATOS INFECTADOS COM TRYPANOSOMA EVANSI.

INCREASE GLUTATHIONE PEROXIDASE ACTIVITY IN INFECTED RATS WITH TRYPANOSOMA EVANSI. ANSCHAU, Valesca1; TIZATTO, Mayara Vieira2; FLORIANI, Maiara Anschau3; PERIN, Ana Paula4; MILETTI, Luiz Cludio5. Resumo O objetivo desse estudo foi avaliar a capacidade antioxidante da glutationa peroxidase (GPx) de ratos infectados experimentalmente com Trypanosoma evansi utilizando mtodos parasitolgicos estabelecidos e bioqumicos. Os resultados indicaram que a infeco no grupo infectado (INF), resultou em uma parasitemia fulminante. A atividade da GPx no sangue de ratos infectados foram significativamente maiores (P<0.001, respectivamente) comparado com o grupo controle (CONT). Resultados obtidos indicaram que a tripanossomase causa estresse oxidativo e induo da atividade da GPx. Palavras-chave: T. evansi; glutationa peroxidase; estresse oxidativo. Trypanosoma evansi que um protozorio hemoflagelado da famlia Trypanosomatidae, cujo principal hospedeiro varia de acordo com a regio geogrfica, sendo comumente cavalos, camelos, burros, bovinos, zebunos, caprinos, sunos, ces, bfalos, elefantes, capivaras, pequenos roedores silvestres e at o homem (JOSHI, 2005; OMER, 2007). Os tripanosomas so parasitas que se reproduzem por fisso binria longitudinal quando esto no sangue de seu hospedeiro (BRUN, 1998). A forma aguda da doena conhecida popularmente como Mal das cadeiras o desenvolvimento da anemia seguida por febre alta, anorexia, e em alguns casos, morte (OMER, 2007). A eritrofagocitose ocorre devido ao traumtica direta dos protozorios sobre as hemcias, aumentam a fragilidade celular, mas o mecanismo exato da anemia provocada por T. evansi ainda no totalmente conhecido (SALEH, 2009). Durante a infeco h elevao na produo das Espcies Reativas de Oxignio (EROs), desencadeando um processo chamado de peroxidao lipdica que um dos indicadores de danos oxidativos em eritrcitos em ratos infectados com T. evansi (WOLKMER, 2009). Um alvo importante das EROs, so as membranas fosfolipdicas que causam reaes de oxidao em cadeia, aumentando a permeabilidade a ons, promovendo inativao de receptores de membrana e a produo de metblitos txicos (MACNEE, 2001). O processo de peroxidao lipdica est ligado a uma srie de processos patolgicos envolvendo EROs, como inflamao (MIDDLETON, et al., 2000). Para evitar a formao e reparar os danos oxidativos em tecidos e macromolculas, todos os organismos de metabolismo aerbico possuem um complexo de defesas antioxidantes que atuam para a eliminao de perxidos. Esse mecanismo governado por uma das principais enzimas antioxidantes chamada glutationa peroxidase (GPx). A GPx est distribuda em diferentes regies celulares, e varia _______________________
1: Autora: Valesca Anschau (estudante de mestrado) Universidade do Estado de Santa Catarina (UDESC). End residencial: Rua So Pedro n 147, Bairro: Vila Rica Herval d Oeste (SC), CEP: 89610-000. E-mail para contato: valesca_jba@yahoo.com.br. 2: Mayara Vieira Tizzatto (estudante graduao) UDESC 3: Maiara Anschau Floriani (estudante graduao) Universidade do Oeste de Santa Catarina (UNOESC) 4: Ana Paula Perin (estudante graduao) UDESC 5: Dr. Luiz Cludio Miletti (professor responsvel) UDESC.

sua expresso em diferentes tecidos (MATS, et al., 1999). A GPx tambm catalisa a reduo de hidroperxidos, gerando o dissulfeto da glutationa ou glutationa oxidada (GSSG), estando relacionado contra a atividade peroxidsica contra o perxido de hidrognio e perxidos orgnicos (HALLIWELL & GUTTERIDGE, 2007). A infeco por um tripanossomatdeo provoca elevao do estresse oxidativo, o que contribui para o dano celular. Foram utilizados 40 ratos Wistar machos de aproximadamente 220 10g, os ratos foram separados aleatoriamente em 02 grupos de 20 animais/grupo, assim denominados: Grupo CONT- ratos no infectados com o parasita - grupo controle; Grupo INF - ratos infectados com o parasita na concentrao de 104 tripomastigotas. Aproximadamente 8 mililitros foram coletados de cada animal de todos os grupos. Amostras de sangue foram centrifugadas por 1000 g por 15 min 4 C. O pellet contendo as clulas vermelhas foram lavadas 3x com tampo fosfato salino (pH 7,4). A atividade da GPx nos eritrcitos foi determinada usando perxido de terc-butil como substrato atravs do mtodo de Paglia e Valentine (1967). Os dados so expressos como mdia e.p.m, e submetidos anlise de varincia seguida de ps teste de t, com nvel de significncia para P < 0,001. Nossos resultados mostraram um aumento progressivo da parasitemia no grupo infectado (INF) dois dias ps-infeco. Os animais foram mantidos at 15 dias ps-infeco, quando o experimento foi encerrado. A Fig. 1 mostra um aumento significativo na atividade da GPx (Fig. 1) nos eritrcitos do grupo infectado (1367154.2 um/gHb) comparado ao grupo controle (244.9041.64 um/gHb). T. evansi causou uma infeco aguda em ratos. A deteco de parasitemia em ratos (entre 48h) ocorreu mais cedo do que relatado anteriormente em ratos infectados anteriormente (OMER, 2007), provavelmente devido a alta patogenecidade da espcie. Durante a infeco com T. evansi, eritrcitos produziram espcies reativas de oxignio (EROs) e perxido de hidrognio (H2O2), o que poderia explicar o aumento da atividade da GPx. Finalmente podemos concluir que a infeco causada pelo T. evansi em ratos est associado ao elevado estresse oxidativo, podendo ser uma das causas da anemia em tripanossomase aguda. REFERNCIAS BRUN R. et al. Trypansosoma evansi and T. equiperdum: distribution, biology, treatment and phylogenetic relationship (a review). Veterinary Parasitology, v.79, p.95-107, 1998. HALLIWELL, B.; GUTTERIDGE, J. Free Radicals in Biology and Medicine. Nova York: Oxford University Press, v.1, 2007. 851p. JOSHI, P. P. et al. Human trypanosomosis caused by Trypanosoma evansi in India: The first case report. American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. v. 73, n. 3, p. 491-495, 2005. OMER, O.H.; MOUSA, H. M.; AL-WABEL, N. Study on the antioxidant status of rats experimentally infected with Trypanosoma evansi. Veterinary Parasitology. n. 145, p. 142145, 2007. MACNEE, W. Oxidative stress and lug inflammation in airways disease. Eur. J. Pharmacol. n. 429, p. 195-207, 2001. MATS, J. M.; PERES-GOMES, C.; NUNES DE CASTRO, I. Antioxidant enzymes and human diseases. Clin. Biochem. n. 32, p. 595-603, 1999. PAGLIA, D. E.; VALENTINE, W. N. Studies on the quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutathione peroxidase. J. Lab. Clin. Med. n.70, p.158169, 1967.

SALEH, Mostafa A.; AL- SALAHY, M. Bassam; SANOUSI, Samera A. Oxidative stress in blood of camels (Camelus dromedaries) naturally infected with Trypanosoma evansi. Veterinary Parasitology. n. 162, p. 192-199, 2009. WOLKMER, Patrcia, et. al. Lipid peroxidation associated with anemia in rats experimentally infected with Trypanosoma evansi. Veterinary Parasitology. p.01-06, 2009.

Atividade GPx
2000 1500

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mU/g Hb

1000 500 0
C O N T IN F

Fig 1: Atividade da glutationa peroxidase (GPx) eritrocitria do grupo controle (CONT) e grupo infectado (INF) com T.evansi. (n= 20 ratos). * P<0.001 quando comparado ao grupo controle.