Vous êtes sur la page 1sur 13

1.

INTRODUCTION :
Cest depuis lantiquit que les premires civilisations grecques et egyptiennes ont utilises la fermentation dans la production de certaines boissons comme : le vin et le vinaigre ainsi que dans la conservation de certaines denres alimentaires et cela de faon spontane. Cependant, avec lapparition de lre industrielle et la fin de la deuxime guerre mondiale, laccumulation des connaissances fondamentales surtout dans le domaine de la microbiologie et lutilisation de nouvelles technologies de pointe ont permis lemploi de la fermentation dans des procds industrielles bien tudies. Enfin, aujourdhui lhomme cherche toujours a amliorer le rendement industriel toute en rduisant les frais de la production .Alors, comment peut on donc amliorer les procds industriels ?

2. HISTORIQUE:
Quelques repres historiques sur le dveloppement de la culture en phase liquide et la naissance de la microbiologie industrielle : 1822-1895 : Les travaux de Pasteur et de Koch dfinissent la notion et les Conditions d'obtention de cultures pures. Le suivi des conditions de culture est Essentiellement empirique : Dbut de la microbiologie industrielle. 1915 : Durant la premire guerre mondiale Weizman russit faire produire par un Clostridium (anarobiose stricte) de l'actone et du butanol utiliss pour la fabrication Dexplosifs. 1942 :- tude de la culture en milieu liquide, pour la premire fois au laboratoire, Par Jacques Monod (1910 - 1976) dans sa thse soutenue en 1942 consacre Bacillus coli (qui deviendra Escherichia coli en 1954) ; Dfinition de conditions exprimentales de culture prcise permettant l'obtention des rsultats reproductibles Dfinition des paramtres de croissance (taux de croissance, rendement de transformation dun substrat en biomasse ou en un produit, ....) 1945 : Premire ralisation industrielle de culture submerge ralise par Florey et Chain aux USA pour la production de pnicilline, premier antibiotique dont les pouvoirs thrapeutiques ont t mis en vidence. Naissance de lindustrie des Antibiotiques. De nos jours : La culture submerge en milieu liquide est la technique la plus rpandue . [1]
Page | 1

3. GNRALITS SUR LA FERMENTATION INDUSTRIELLE :


La fermentation est un terme qui est beaucoup plus utilise dans le domaine de la microbiologie industrielle et de la biotechnologie ce dernier peut avoir plusieurs sens, parmi lesquels la culture en masse des microorganismes (ou mme de cellules vgtales et animales). [2] Le fermenteur ou le bioracteur est le dispositif qui permet la ralisation dune fermentation.

La fermentation se droule le plus souvent dans des milieux liquides dans des fermenteurs. Le fermenteur est mis en uvre selon trois modes de culture : a) Mode de culture en continu : Le fermenteur est aliment en substrat qui est introduit tout au long de la raction avec un sous tirage du milieu de culture un dbit qui est gale celui de lalimentation. Ce mode de culture est ralis en utilisant diffrents types de fermenteurs comme : - Le chmostat (apport constant dlments nutritifs). - Le turbidostat (une biomasse constante).

b) Mode de culture en discontinu alimente (Fed batch) : Dans ce mode de culture le fermenteur est partiellement aliment en substrat qui est introduit tout au long de raction mais sans quil y ait soutirage du milieu cest dire on arrte lalimentation lorsque le volume atteint une certaine valeur.

c) Mode de culture en discontinu (batch) : Dans ce cas le fermenteur nest pas aliment en continu en substrat car ce dernier est introduit uniquement au dbut de raction.

Page | 2

Les produits dune fermentation sont soit : De la biomasse (protines industrielles). Des mtabolites primaires (acides amins, alcools, etc.). Des mtabolites secondaires (antibiotiques).

4. LAMLIORATION DE LA PRODUCTION INDUSTRIELLE :


Lutilisation des microorganismes en industrie est un investissement coteux, car ces derniers, doivent tre cultiv dans des milieux spcifiques au sain denvironnement contrls qui coute cher ; pour arriver une production la fois importante et rentable toute en rduisant bien sur les charges ,La recherche est base sur deux axes fondamentales et qui sont :

4.1

LA MISE AU POINT DU MILIEU DE CULTURE :

La culture des microorganismes dans des environnements contrls ncessite une source de carbone, dazote, du phosphore et des nutriments essentielles pour leurs dveloppements dont le milieu de culture doit assurer. Il faut noter que selon les procds de 20-70 % du cot de la fermentation sont due la source du carbone. [3] Dans les fermentations industrielles grandes chelles la matire premire brute est souvent coteuse, cest pour cela que dans plusieurs cas les ingrdients dun milieu sont des sous produits dautres industries qui sont extrmement varis en composition et disponible eu bonne quantit comme le cas : des hydrolysats vgtaux bruts, sous produits de brasserieetc. (Voir le tableau 1). Tableau 1: Les principaux constituants des milieux de culture utiliss dans les procds industriels [2]
Source Carbone et nergie Matire brute Mlasse, petit-lait, grains de crales, dchets agricoles (pais de mais) . Eau de lavage de mais (corn steep liquor), farine de soja, dchets dabattoir (stick liquor), Amoniac et sels damonium, Nitrates, Vinasses (distillers solubles). Prparations brutes de produits vgtaux et animaux. Page | 3

Azote

Vitamines

Fer et oligo-lments Tampons Anti-mousses

Drivs chimiques inorganiques bruts. Craie ou carbonates bruts, Phosphates pour engrais. Alcools suprieurs, silicones, esters naturels, saindoux et huiles vgtales.

Loptimisation et le contrle des fermentations reposent sur les points essentiels suivants : Un milieu optimal et quilibr est obligatoire pour une production maximale ; un supplment en lments critiques doit dtre utilis si ncessaire (C/N/P quilibrs oligolments). Les milieux de cultures peuvent tre optimiss par des mthodes statistiques et par des programmes informatiques (plan dexpriences). La composition des milieux de culture doit tre constamment adapte au procd de fermentation et les nouveaux batch de substrats doivent tre minutieusement tests par essais, les rendements de production et la rcupration de produits doivent tre galement analyse. Si la rpression catabolique ou la rpression par les phosphates ne peuvent tre limins par loptimisation du milieu de culture ou par les techniques de fermentation (type dalimentation), des mutants drguls doivent tre utiliss pour la production. [3] Enfin ; il faut prendre en considration la puret de la matire premire qui peut altrer le rendement de la rcupration et que cette dernire ne prsente pas un cout lev de transport.

4.2 UTILISATION DES FERMENTEURS :


Aprs la mise au point du milieu de culture spcifique la croissance dun microorganisme donn ce dernier doit tre cultiv avec un contrle des conditions de croissance (temprature, aration ), ceci requiert lemploi dinstallation spcifique dter de systmes de contrle des diffrents paramtres limitant la croissance microbienne appel ainsi : fermenteur ou bioracteur. a) Dfinition dun bioracteur : Le fermenteur est un appareil dans lequel est ralise la croissance des microorganismes, la production de substances extracellulaires ou la bioconversion. [4]
Page | 4

Gnralement les fermenteurs possdent des volumes trs variables : De quelques litres jusqu' 50 litres pour les fermenteurs de laboratoire. De 50 a1000 litres pour les installations pilotes et des fermenteurs dinoculation. Un volume qui dpasse les 100 m3pour les cuves industrielles.

b) Composition : Un fermenteur est constitu essentiellement de : Cuve en verre ou en acier inoxydable ; Arateur pour fournir de loxygne surtout dans les procds arobies. Un agitateur. Un thermostat pour rguler la temprature. Dtecteur de pH et dispositifs de contrle. (Fig.1)

Fig 1: Schma des diffrents composs dun fermenteur


(http://cwx.prenhall.com/bookbind/pubbooks/brock/chapter12/deluxe.html)

Page | 5

c) Conception du processus de fermentation industrielle :

Le processus de fermentation ncessite les lments suivants : o Une culture pure de lorganisme choisis en quantit suffisante et dans ltat physiologique correct. o Une strilisation des diffrents composs de processus de fermentation. o Un mini-model de fermenteur de production pour dvelopper linoculum qui sera ensuite transfrer dans le fermenteur principal. o Un fermenteur de production possdant un volume important. o Les quipements assurant llaboration du milieu de culture dans un tat stable ,la sparation des cellules, la collecte du libre surnageant cellulaire et la purification du produit. [5]

d) Optimisation fermenteurs :

des

procds

industriels

par

rapport

aux

Conception : Dans les anciens procds de fermentation, les bioracteurs utiliss tait des cuves trs simples, non couvertes, faible volume .progressivement sont apparus des cuves couvertes, fabriqus en bois possdent ainsi des formes parallpipdiques ou cylindrique comme le cas des tonneaux utiliss dans la production du vinaigre ou du vin. Mais, cause des risques majeurs de contamination aujourdhui la plupart des bioracteurs sont construits en verre pour les plus petites et en acier inoxydable lorsque leur capacit augmente des volumes trs important.[6]

Page | 6

Agitation : Il ya longtemps lhomognit tait obtenu naturellement par le dgagement gazeux .Aujourdhui on sait bien que lagitation est un facteur essentielle dans la russite des cultures en phase liquide. Cest pour cela quon a dvelopp des fermenteurs dter de systme dagitation mcanique avec un choix de vitesse dagitation et le type de pales utiliss. pour les microorganismes dont les cellules sont relativement rsistantes on utilise des systmes de type radial (Fig.2).ces dernier prsentent un gros inconvnient on crant des forces de cisaillement trop importantes, dou le dveloppement dun autre type de fermenteur agitation pneumatique (air lift) dans ce cas lagitation seffectue grce a linjection de lair par le bas (tower)ou par le haut (deep shaft reactors) .Enfin ,il faut noter que ces systme offrent de nombreux avantages tel que : laugmentation de la dissolution de loxygne et la diminution des risques de contamination (Fig.3) [6] [7]

Fig2 : Systmes dagitation de type radial [7]

Page | 7

Fig3 : Agitation par air (air-lift) de type tower [7]

Laration : Dans les anciens bioracteurs laration seffectue grce des trous que se trouve sur la surface de la cuve, par contre dans les fermenteurs modernes laration est ralise laide des pompes air qui injecte lintrieur de la cuve. [6] Le Maintien de la strilisation : La contamination est un grand problme rencontr dans les procdes industriels ; pour faire face ces problmes et maintenir la strilisation des bioracteurs on utilise souvent :

Page | 8

lautoclave pour la strilisation des petits fermenteurs. la vapeur pour les grands fermenteurs. Des filtres pours les substrats et lair. Parfois en utilise mme des produits chimiques.

Lutilisation de lanti mousse :


Dans certaines fermentations la constitution du milieu de culture (protines) et les changements dans les paramtres de croissance comme : le pH , la temprature ,ainsi que la viscosit joue un rle trs important dans la formation et la persistance de la mousse lintrieur du bioracteur ce qui peut gner et parfois arrter les procds de la fermentation. Traditionnellement ce problme est rgl par lajout des huiles naturelles ,animales ou vgtales ;mais dans les procds modernes on utilises souvent des substances anti mousses qui ne prsentent aucun pouvoir inhibiteur sur les microorganismes ,ces produit sont base de silicone, des copolymres doxydes ,de propylne ou desters organique longues chaines . [6] Les systmes de contrle des diffrents paramtres dans les bioracteurs : Le contrle des diffrents paramtres de la croissance au sain des anciens fermenteurs a t effectu grce a des mthodes trs simples comme : le calcul de temprature o on se servait gnralement des thermomtres mercure ou alcool, ainsi que la mesure de la vitesse dagitation qui a t ralis laide dune dynamo-tachymtrique .Mais cause des diffrents problmes lies lutilisation de ces systmes, aujourdhui , la plupart des ferments sont quips dautres types de systmes de contrle tel que : les capteurs ,les sondes .etc. qui sont relis des ordinateurs pour bien grs le processus de la fermentation. [6]

Utilisation du scale-up : cest une technique qui permet daugmenter la production en augmentant le volume du fermenteur. (Fig.4)

Page | 9

Fig4 : Schma qui illustre le scale-up lchelle industrielle.


www.interpharma.ch/img_grafik3.2.gif

5. EXEMPLES DAMELIORATION DE LA PRODUCTION INDUSTRIELLE:

5.1 La production de pnicilline :


La pnicilline est un antibiotique qui est produit grce la culture dun champignon penicillium .cette substance au pouvoir bactricide important tait dcouverte pour la premire fois par le microbiologiste cossai Alexander Fleming en 1928. Au dbut, la production de la pnicilline tait remarquablement trs faible (4 unit /ml une unit = 0 ,6micro-gramme) cause de nombreuses difficults rencontrs lors de la production : La pnicilline est instable dans le pH levs ou faible. La souche de Feliming P.notatum ainsi que ces drivs ne poussent que sur des cultures en surface. La faible productivit de la souche P.notatum . Les difficults rencontres lors de la purification. [8]

Pour surmonter tout ces problmes les chercheurs ont remplac des flacons utiliss dans la production du champignon qui produit la pnicilline par des bassines lancienne caractrises par une grande surface, un couvercle et un bras latral pour linoculation et le retrait. En 1941, ils russissent augmenter la production 40 unit /ml en raison de la modification du milieu de culture on utilisant un sous produit de lamidon (corne steep-liquor). [8]
Page | 10

Ensuite, ils ont arriv isoler la souche P.chrysogenum , cette dernire qui peut de dvelopper dans la culture submerge .Initialement, la production tait men en milieu dans des cuves en mode continue, mais le dveloppement dune technique de fermentation en profondeur dans des fermenteurs agitation mcanique permet daugmenter la production jusqu 250 unit/ml. Enfin ; la continuit des recherches bases sur la slection et la mutagnse des souches, lutilisation du scale-up , ladition des nutriments ainsi que le dveloppement des techniques de purification de la pnicilline 50 000 unit /ml, dont le processus de production est rsum comme suite : Procds de culture en profondeur . Cuve cylindrique de 20-40 000 litres en acier inoxydables. Avant lutilisation .les cuves sont strilises avec de la vapeur haut temprature. Les nutriments : source de carbone (glucose), source dazote (NH4+/NO3--, acides amins et sels minraux). Le pnicillium est exigeant en oxygne, lair introduit est strilis fin quaucune bactries ou microorganismes ne contamine la culture. Le liquide de culture agit pour mlanger le contenu et distribuer quitablement nutriments et oxygne. La temprature doit tre monitore pour viter la surchauffe qui tue le penicillium.la diminution de la temprature seffectue pompant de leau froide dans la gaine externe du racteur. Lacidit doit tre constamment monitore pour viter des excs ltaux pour le pnicillium le pH est corrig par rajout dacides ou de bases. Aprs un certain temps de croissance, suivi par la production dantibiotique, le contenu est subi de la cuve, filtrs et labor pour extraire le pnicillium. [9]

5.2 Le vinaigre : Le vinaigre est un produit qui drive de la fermentation arobie de lthanol par des bactries actiques pour donner la fois lacide actique. Il existe plusieurs mthodes de la fabrication du vinaigre dont : les mthodes traditionnelles et les mthodes modernes. a) La mthode traditionnelle (mthode dOrlans) : Cette mthode t dveloppe en 1394 .elle est base sur la culture de certains bactries actifiantes qui ont la possibilit de former de fine pellicules la surface des solutions alcooliques. Le procd de fermentation se droule dans des tonneaux (barriques) en bois possdant un volume de 6 10 litres et qui sont remplis par le substrat qui tait le plus souvent du vin altr o en ajoute des fragments de bois lgres, ces derniers
Page | 11

contribuant stabiliser la pellicule de microorganismes et ainsi amliorer la productivit . Les bactries actifiantes utilises taient du genre Acetobacter (A.orleanese ,A.aceti,A.pasteurianus ) . Enfin ; avec le dmarrage de la fermentation en ajoute 2% dacide actique au milieu de culture pour empcher la croissance des autres microorganismes , puis en passe au contrle de la fermentation dont le contrle de la temprature (temprature optimale est de(25 30C) et aprs 67 semaines en soutire du vinaigre . [10] b) La mthode moderne (culture immerg rapide) : Les microorganismes utiliss sont des espces dActobacter labors en culture et de trempe (vin, vin alcool, acide actique 1% dlments nutritifs dans un racteur dinoculation . La fermentation se droule en mode discontinue dans des grands fermenteurs en acier ou lair est inject directement la base de la cuve sous forme de fine bulles, ce qui favorise le dveloppement des bactries dans tout le liquide. La temprature est rgule entre 28 et 32 C par un systme de refroidissement. Enfin ; le prlvement du vinaigre se fait travers un systme de filtration membranaire, le produit sera ensuite pasteuris puis dilu leau pour en faire du vinaigre normalis (5% dacidit) . [3]

6. CONCLUSION: Bien que lamlioration des procds industriels a permis de dvelopper la production industrielle de diffrents types de produit, la recherche dans ce domaine reste toujours une proccupation primordiale et cela fin de minimiser beaucoup plus les charges et augmenter le taux de la production.

Page | 12

Rfrences bibliographiques :
[1] : http://www.ppc.ups-tlse.fr/bioprocede.pdf [2] : M. Prescott,John P. Harley,Donald A. Klein,Claire-Michle BacqCalberg,Jean Dusart- Microbiologie,deboeck,5eme edition. [3] : www.scribd.com/doc/.../cours-microbiologie-Industrielle-3 [4] : http://membres.multimania.fr/csse/bioreacteur-conception.PDF [5] : www.bioprocess-maulik.blogspot.com [6] : SCRIBAN R- BIOTECHNOLOGIE. Tec et Doc,1999,5emeedition. [7] : MEYER A,DEIANA J ,LECCLERE H .cours de la microbiologie gnrale ,doin diteur( Paris) . 1999 [8] : : http://botit.botany.wisc.edu/toms_fungi/nov2003.html [9] : http://www.slideahare.net/morabito/les-penicillines-319487. [10] : http://pmb.sicac.org/opac_css//doc_num.php?explnum_id=111

Page | 13