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INGRIDI DIAS CESARIO ISABELA BORTOLLETO JUCILEIDE SOUSA TABITA MAIRA MURARO LUIZA BRISA RODRIGUES LUCIA LITWIN TEIXEIRA EDUARDO PEREZ MANZO JUNIOR

DESENVOLVIMENTO E APLICAO DE CULTURA DE BACTERIAS

Trabalho apresentado para obteno de nota no mdulo de Estudo do MIP, do curso de Medicina Veterinria, turno matutino, da Universidade Metodista de So Paulo. Orientao: Prof Ms. Leandro Ribeiro

SO BERNARDO DO CAMPO

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2012

RESUMO

Durante o procedimento foi utilizado suabis para coletar diversas amostras de possveis locais contaminados. O material coletado foi aplicado em placas de bactrias em Agar e com o mesmo material foram feitos algumas laminas. As placas de cultura foram levadas para estufa por 24 horas para desenvolvimento das culturas. Com o material coletado foi feito novas laminas, e juntas, antes da cultura e ps cultura foi feita a colorao (utilizamos o mtodo de colorao de Gran aps o material ser fixo na lamina por fogo). Com as laminas prontas avaliamos em microscopio, utilizando aumento de 1000x que leo de imerso.

Palavra chave: Bactria; Cultura.

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SUMRIO

1 INTRODUO......................................................................................................................6

1.1 CLULAS.................................................................................................................6
1.2 PERMANGANATOS DE POTSSIO................................................................................8 1.3 SULFATO DE COBRE PENTA-HIDRATADO.................................................................8 1.4 DILUIO...........................................................................................................................9 2 OBJETIVO.............................................................................................................................9 2.1 OBJETIVOS SOLUO.....................................................................................................9 2.2 OBJETIVO DILUIO.......................................................................................................9

3 MTODOS E MATERIAIS......................................................................................10 3.1 MTODOS.....................................................................................................................10

3.1.1 Preparo da soluo 1........................................................................................................10 3.1.2 Preparo da soluo 2........................................................................................................11 3.1.3 Preparo de diluio da soluo 1......................................................................................12 3.1.4 Preparo de diluio da soluo 2......................................................................................13 3.2 MATRIAS PARA PREPARO DAS SOLUES...........................................................13 3.3 MATRIAS PARA PREPARO DAS DILUIES.........................................................14 3.4 CALCULOS PARA O PREPARO DAS SOLUES 1 E 2.............................................16 3.5 CALCULOS PARA O PREPARO DAS DILUIES A E B...........................................17 4 RESULTADOS.....................................................................................................................18 5 DISCUSSSO......................................................................................................................19 5.1 DISCUSSAO SOLUES.................................................................................................19 5.2 DISCUSSAO DILUIO..................................................................................................19 6 CONCLUSO......................................................................................................................20 REFERNCIAS......................................................................................................................21

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1 INTRODUO

O estudo dos microrganismos est muitas vezes dependente da possibilidade de cultivar e manter microrganismos viveis no laboratrio. As necessidades nutricionais especficas dos microrganismos variam de espcie para espcie, sendo possvel distinguir vrios grupos nutricionais de microrganismos. Com o conhecimento dos nutrientes necessrios ao crescimento dos microrganismos, possvel a formulao de meios de cultura que promovam o crescimento de um determinado microrganismo no laboratrio. O isolamento de um determinado microrganismo em cultura pura a partir de uma populao mista (por exemplo, presente numa amostra de solo, na gua de um rio, num esgoto, num alimento ou tecido contaminado, etc.) envolve, em geral, o uso de meios de cultura slidos e o recurso a tcnicas de isolamento de colnias, como seja pelo mtodo de espalhamento em placa, ilustrado na animao ao lado. Este mtodo permite obter colnias individualizadas e espacialmente separadas que, teoricamente, so originadas a partir de uma nica clula, correspondendo, por isso, a uma cultura pura de um microrganismo particular. Sabe-se, contudo, que cerca de 90% a 99% do nmero total de microrganismos que existem no Ambiente (por exemplo, no solo, gua ou ar) no so cultivveis em meios de cultura e outras condies laboratoriais conhecidos. Este fato tem limitado a possibilidade de serem isolados, a partir do Ambiente, microrganismos com potencial interesse para aplicaes biotecnolgicas. Contudo, presentemente, em consequncia do grande desenvolvimento das tcnicas da Biologia Molecular nas ltimas dcadas, o microbiologista pode identificar e estudar os microrganismos com base na anlise direta das suas macromolculas (em particular do seu DNA), sem que seja necessrio isol-los em meios de cultura laboratoriais. Entre as tcnicas da Biologia Molecular que permitem este progresso salienta-se a Reao em Cadeia da Polimerize. (PELCZAR, 2005).

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1.1 MEIO DE CULTURA

Os meios

de

culturas so

preparaes

qumicas

que

possuem

em

sua

formulao, nutrientes necessrios para que os microrganismos possam multiplicar-se permitindo seu estudo. Entre os principais componentes de um meio de cultura esto as fontes de carbono e energia como os acares, as fontes de nitrognio, fsforo e sais minerais. Outros componentes mais especficos podem ser encontrados em um meio especifico para um determinado organismo (meio seletivo), estes so os Fatores de Crescimento como

as vitaminas, aminocidos, e outros mais. Por outro lado podemos ter num meio agentes/constituintes que inibam o crescimento de determinados microrganismos, sendo estes tambm considerados meios seletivos. Alm de meios seletivo existem tambm meios que permitem diferenciar microrganismos (meios diferenciadores ou diferenciais), o exemplo mais simples a existncia de um indicador de pH que permite verificar se, por exemplo, um acar presente no meio '''metabolismo''' pois, ao ser, implica a produo de metablitos que acidificam o meio alterando o seu pH e consequentemente a alteram a cor do indicador de pH.
Quanto consistncia existem trs: slido, semi-slido, liquido. Quanto funo existem quatro: enriquecedor, seletivos, diferenciadores, manuteno. Quanto natureza existem duas: animados, inanimados. Meio de cultura utilizado: Agar sangue: meio no seletivo, crescimento

de bactrias gram e +, e Agar MacConkey: Seletivo gram -, inibe crescimento bactrias gram+.

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2 OBJETIVO

Desenvolver culturas de bactrias em placa de petri para observao e classificao em microscpio.

3 MATERIAIS

Placas de Petri; Suabes; Estufa 37C; BHI; Bico de bunsen/Gs; Lmina; Meio de cultivo; Microscpio; leo de imerso; Cristal de Violeta; Luzol; lcool/acetona; Fucsina.

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4 MTODOS

4.1 MTODOS DE MEIOS DE CULTURA

Com alguns suabes foram coletados amostras de bactrias; Utilizando a tcnica do esfregasso foi semeado a amostra de bactrias nos gares Sange e MacConkey. Incubou-se os meios de cultivo slidos. Posteriormente observou-se as caractersticas das colnias que cresceram nos dois gares.

4.2 MTODOS DE COLORAAO DE GRAN

Cubra o esfregao com violeta-de-metila e deixe por aproximadamente 60 segundos; Escorra o corante e lave em um filete de gua corrente; Cubra a lmina com lugol diludo (1/20) e deixe agir por aproximadamente 60 segundos; Escorra o lugol e lave em um filete de gua corrente; Adicione lcool etlico (99,5 GL) sobre a lmina; deixe agir por aproximadamente 15 segundos; Lave em um filete de gua corrente; Cubra a lmina com fucsina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos; Lave em um filete de gua corrente; Deixe secar ao ar livre; Coloque uma gota de leo de imerso sobre o esfregao; e Leia em objetiva de imerso (100 X).

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5 RESULTADOS
1 Agar: Conduto auditivo: Uma colnia de aspecto gelatinoso, transparente. Obs.: mudou o tom da Agar sangue. Banheiro masculino: Varias Colnias no Agar sangue de aspetos cremosos brancos e duas colnias amarelas.

2 Agar:

7 CONCLUSO

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Conclumos que atravs do mtodo de exames com o uso do espectrofotmetro, torna- se mais eficaz, de custo mais aceitvel para um laboratrio e com grande variedade para exames de investigaes biolgicas e fsico-qumicas. Os mtodos espectrofotomtricos em bioqumica residem basicamente sobre duas leis, que combinadas so conhecidas como a Lei de Lamber Beer que afirma que a frao de luz absorvida por um meio independente da intensidade da luz incidente e que cada camada sucessiva do meio absorve a mesma proporo de luz passando por ela, gerando um decaimento exponencial atravs do caminho percorrido na amostra. Isso expresso matematicamente pela equao que o grupo chegou com o uso dessa para o calculo esperados para obter os resultados com o uso do espectrofotmetro.