AISLAMIENTO DEL ADN.

El ADN (acido desoxirribonucleico) es una macromolcula que forma parte de todas las clulas, contiene la informacin gentica usada en el desarrollo y funcionamiento de los organismos; desde la qumica es un polmero de nucletidos y cada nucletido est formado por un azcar, una base nitrogenada que puede ser Adenina, Timina, citosina o guanina y un grupo fosfato que acta como enganche de cada nucletido distinguindolo por su base nitrogenada. Los cidos nucleicos presentan unas propiedades fsico-qumicas como en disolucin, reactividad, hidrlisis qumica de cidos nucleicos, hidrlisis acida, hidrlisis alcalina y absorcin en el ultravioleta. El ADN en los organismos eucariotas esta dentro del ncleo celular y en los organismos procariotas esta en el citoplasma; gracias al conocimiento de la estructura del ADN se ha logrado analizar problemas concretos. PALABRAS CLAVES: ADN, POLIMERO, DESOXIRRIBOSA, ADENINA, GUANINA, TIMINA, CITOSINA, ARN, FOSFODIESTERES INTRODUCCION El ADN se encuentra en el ncleo de las clulas eucariticas donde aparece unido a protenas formando la cromatina. Es la molcula portadora de la informacin gentica, donde se encuentra la clave de los caracteres hereditarios que se traspasan de la clula madre a las clulas hijas y en definitiva de padres a hijos. Cada persona tiene su propia informacin gentica, heredada del padre y de la madre. Y por tanto, el ADN de cada persona es nico y constituye sus seas moleculares de identidad. Sin embargo, la estructura de la molcula del ADN es igual en todos los seres vivos y consta de una doble cadena de nucletidos de A (Adenina), T (Timina), C (Citosina) y G (Guanina) enrollados en hlice. La estructura del ADN, llamada la doble hlice, fue descubierta por Watson y Crick en 1953 y abri el camino de la Gentica Molecular El modelo de ADN consta de dos bandas o cadenas de ADN entrelazadas que se enrollan sobre s mismas en direcciones opuestas.

Esta doble cadena mantiene su estructura gracias a puentes de hidrogeno, formando una estructura tridimensional, en forma similar a una escalera en espiral. Cada cadena es una larga secuencia de nucletidos; cada nucletido posee un grupo fosfato, un azcar de cinco carbonos (desoxirribosa) y una de cuatro bases nitrogenadas distintas. Cada peldao de la escalera en espiral se forma de un par de bases de nucletidos, una base de cada cadena. Una de las caractersticas fundamentales del ADN es que segmentos muy cortos del mismo contienen genes, los cuales especifican el orden en que cada aminocido se une para construir una protena. A su vez, las proteinas rigen el desarrollo de los rasgos de un individuo. El modelo de la doble cadena explica la forma en que el ADN puede transmitir la informacin gentica. Si las cadenas opuestas son complementarias y aunque existen restricciones respecto al apareamiento de las bases nitrogenadas, el nmero de combinaciones en cada cadena es casi limitado, y las diversas secuencias codifican diferente informacin. Como las molculas de ADN en una clula pueden tener millones
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de nucletidos, la secuencia de bases en una cadena puede almacenar inmensas cantidades de informacin. Con base en la informacin anterior, en la prctica se busco la extraccin del ADN de los guisantes de una forma sencilla utilizando los materiales llevados al laboratorio y preparando las muestras, teniendo como objetivo romper la cadena de ADN y como resultado observar los hilos en las muestras preparadas. ASPECTOS METODOLOGICOS El ADN (Acido desoxirribonucleico) es la molcula que guarda los secretos de los genes y se encuentra en el ncleo de cada clula. Una sola molcula de ADN es muy pequea para verla a simple vista. Pero si tienes muchas molculas de ADN juntas, ellas se pegan unas a otras y se forman filamentos blancos. Para poder extraer el ADN de las clulas de lentejas, primerio se hizo la realizacin del tampn salino (se toma un vaso precipitado de 250ml, se hace una mezcla de 200 ml de agua destilada, 2 gramos de sal comn y 5 gramos de bicarbonato de sodio.); previamente este es llevado al la nevera por un periodo de tiempo de aproximadamente de 15 a 20 minutos. Posteriormente en el vaso de la licuadora, se tritura las lentejas en 4 secciones de 15 segundos, esto permite romper y liberar las molculas del ADN, a esta mezclar se le agrega la preparacin tampn salino y se deja accionar en la licuadora por un minuto. En un vaso precipitado de 250ml, se tomo la mezcla y se filtro utilizando la coladera (al filtrar separamos el ADN de la pared celular, algunas protenas y restos de las lentejas), al filtrado obtenido, se le aadi 30ml de detergente liquido con la pipeta de 10ml (Si a travs del filtro an pasan clulas, cloroplastos o membranas que no fueron trituradas por la licuadora, las rompemos

con el jabn.), se mezcla con la varilla de vidrio evitando ocasionar emulsin (espuma), dejando reposar por 15 o 20 minutos. En una gradilla se toman 4 tubos de ensayo se le aplica 5ml a cada tubo de la muestra elaborada, se le agrego 5ml de alcohol isopropilico enfriado a 0c (El ablanda carne rompe algunas protenas y hace que el ADN se haga menos compacto.) se dejo deslizar el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo este inclinado. Se deja actuar el alcohol isopropilico durante 20 minutos. Durante este tiempo se formaron 3 fases, la primera que es la parte inferior del tubo y corresponde al caldo molecular, la segunda fase en la fase superior y corresponde al alcohol isopropilico y en la tercera fase la unin del caldo molecular y el alcohol donde se formo una fibrillas de color blancuzco que son las fibrillas de ADN. RESULTADOS Y ANALISIS Para obtener los resultados del aislamiento del ADN, procedimos a preparar el tampn salino con 200 ml de agua destilada, 2 gramos de sal y 5 gramos de bicarbonato de sodio, formamos la mezcla y dejamos enfriar en la nevera durante 20 minutos. Luego en la licuadora, depositamos los guisantes en este caso decidimos utilizar lentejas, con un poco de agua y accionamos 4 veces las cuchillas durante 15 segundos cada una, lista la preparacin agregamos la mezcla realizada en la licuadora con el tampn frio y la volvemos a colocar en la licuadora. En un vaso aparte tomamos la mezcla que resulto y la filtramos con el colador, al filtrado aadimos 30 ml de detergente, en este caso fue jabn lquido de manos antibacterial con ayuda de la pipeta, lo

mezclamos y dejamos reposar durante 20 minutos.

Luego de dejar reposar la muestra, las depositamos en los 4 tubos de ensayo en cada uno 5 ml de la muestra. Luego agregamos 5 ml de alcohol isopropilico a 0C a cada uno de los tubos de ensayo, haciendo que se resbale por las paredes del tubo, esto lo dejamos durante 20 minutos. Examinamos las muestras en los tubos y observamos que se formaron tres capas, en la parte superior donde se encuentra la tercera capa se logran ver las fibras de ADN en la forma de unos hilos blancos.

Se observan tres capas, la parte de abajo es la mezcla de las lentejas con el detergente, la segunda fase es el alcohol isopropilico y la tercera fase es la reaccin de la mezcla con el alcohol isopropilico donde se forman las fibras del ADN

El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solucin, donde puede ser visto. Adems de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa. Introducimos la varilla atravesando la capa de alcohol, es decir hasta la segunda capa, las fibras de ADN quedan adheridas, como si fuera hilos de algodn. Eso nos confirma que para el aislamiento del ADN se requiere unas etapas bsicas: primero tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmtica
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para poder acceder al ncleo de la clula, esto se realiza gracias al procedimiento en la licuadora. Luego debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. El detergente emulsiona los lpidos de las membranas celulares y las rompen, por esto se necesita un detergente fuerte. Luego para aislar el ADN se agrega alcohol para que precipite en el. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Y nos permite ver las fibras de ADN en la capa superior. DISCUSION En este laboratorio queramos distinguir el aislamiento del ADN ya que se debe a varios procesos y etapas de enfriamiento, en la primera parte procedimos a preparar el tampn salino con los 250 ml de agua destilada, 2 gramos de sal y 5 gramos de bicarbonato de sodio, formamos la mezcla y dejamos enfriar en la nevera durante 20 minutos, pudimos observar que la mezcla se encontraba refrigerada y procedimos a la segunda parte de la cual procedimos a licuar pero tenemos en cuenta que utilizamos lentejas las que disolvimos dndole cuatro veces a la hojilla de la licuadora, observamos una masa espesa de grnulos de lentejas pasamos a colarlo y agregarle el detergente, luego se dejo reposar y agregamos el alcohol y observamos las tres capas que se formaron, al reposar vimos como precipito las fibras del ADN en la capa superior. REFERENCIAS Oru, A., Martnez, C., Mendoza, A. 2008. Identificacin de una secuencia de ADN genmico de Leishmania especifica del subgnero Leishmania, Caracas, Revista de la Sociedad

Venezolana 28:6-13

de

Microbiologa;

Fernndez, N., Ramrez, A., Ortega Y. Modelacin Dinmica de Una Comunidad de Macro invertebrados Bentnicos Frente a Un Gradiente Temporal de Contaminacin Orgnica. Propuesta Metodolgica, Colombia. Bustamante C., Principios Bsicos de Biologa, Fascculo 2: Molculas de Importancia Biolgica, Estructura y Funcin de La Clula Eucariota.

ANEXO Cul es la funcin de utilizar tampn salino en el procedimiento? La extraccin del ADN, requiere una serie de etapas bsicas. En primer lugar tienen que romper la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. Rompindose la membrana nuclear se deja libre el ADN. La solucin de sal (tampn salino), ayudada por la licuadora es capaz de romper la pared celular y las membrana plasmticas y nuclear. Qu finalidad tiene el exponer las clulas a un detergente fuerte? Es posible romper la membrana celular e incubar las nucleasas intracelulares al mismo tiempo. Por ejemplo, el detergente permite que se solubilicen las membranas celulares y sales caotropicas fuertes que inactiven las enzimas intracelulares. Posteriormente tras la lisis celular y la inactivacin de las nucleasas, los restos de clulas se eliminan fcilmente por filtracin o precipitacin.

Qu accin tiene el alcohol isopropilico sobre la molcula de ADN? El alcohol se utiliza para precipitar el ADN, que es soluble en agua pero, cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y se precipita en la interface entre el alcohol y el agua.