9020 ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD/CONTROL DE CALIDAD

Introduccin 1. Consideraciones generales El nfasis en los microorganismos en las normas de calidad del agua y actividades de aplicacin y su funcin permanente en la investigacin, control de procesos, y la vigilancia del cumplimiento requieren el establecimiento, documentacin, y el funcionamiento eficaz de un sistema de calidad (QS). El QS establece una prueba de medio ambiente y la operacin de gestin para describir tanto una garanta de calidad (QA) y la poltica o el programa de control de calidad (QC) y las tcnicas y prcticas operacionales. Estos estn diseados para demostrar la validez de los datos analticos y de garantizar el cumplimiento de los requisitos reglamentarios, las necesidades del cliente, y las normas aplicables de la acreditacin o certificacin. Las prcticas de laboratorio establecidas en la Seccin 9020 no son obligatorias, sino que representan las prcticas que se deben seguir. Cada laboratorio debe desarrollar su propio QS adecuado a sus necesidades y, en algunos casos, como es requerido por los organismos reguladores, organizaciones de normalizacin y certificacin de laboratorio o programas de acreditacin. Tienen documentos de laboratorio, las polticas de su sistema de calidad y los objetivos en un plan de gestin de calidad o manual de calidad. El documento denota el compromiso del laboratorio con el programa de control de calidad para la integracin de las actividades de control de calidad intra-e inter-laboratorio, la estandarizacin de los procedimientos de operacin de laboratorio y prcticas de gestin. Tambin define claramente las responsabilidades y obligaciones para asegurar que los datos sean del tipo, calidad y cantidad requerida. El programa debe ser prctico y slo requieren una cantidad razonable de tiempo o se anular. Una vez que un programa de control de calidad se establece, aproximadamente el 15% del tiempo de laboratorio en general debe ser dedicado a diferentes aspectos del programa. Sin embargo, tiempo adicional puede ser necesario para el anlisis de datos ms importantes, por ejemplo, los datos de medidas de ejecucin. Cuando se administra adecuadamente, un sistema equilibrado, aplicado concienzudamente la calidad ser optimizar la calidad de los datos, identificar pronto los problemas, y aumentar la satisfaccin con los resultados analticos sin afectar negativamente a la productividad del laboratorio.

Porque la medida de los anlisis microbiolgicos en constante cambio, los organismos vivos, son inherentemente variables. Las herramientas de control de calidad a disposicin de los microbilogos son diferentes de los utilizados por los qumicos debido a que muchas de las mediciones realizadas por los microbilogos involucran variables discretas en lugar de variables continuas utilizadas por los qumicos analticos. Las variables categricas son slo valores enteros, mientras que las variables continuas no se limitan a valores en particular, sino slo por la precisin de la herramienta de medicin utilizados. Por lo tanto, las diferentes estadsticas y distribuciones de probabilidad se utilizan para evaluar estos datos. Los sistemas documentados de calidad puede variar entre los laboratorios como resultado de diferencias en la misin de la organizacin, responsabilidades y objetivos, el tamao de laboratorio, capacidades y recursos, y habilidades del personal y capacitacin.

2. Directrices para un Sistema de Calidad El laboratorio debe desarrollar, documentar y poner en marcha sus procesos para dar lugar a condiciones experimentales controladas que cumplen con sus necesidades especficas y la utilizacin prevista de los datos. a. Responsabilidades de gestin: la gestin debe evaluar los riesgos asociados con los errores, reconocer y apoyar activamente la necesidad de que el QS, involucra al personal en el desarrollo y de operacin del programa, asigna los recursos monetarios y de personal, y asume un papel de liderazgo. La administracin debe reunirse con el supervisor del laboratorio y el personal para desarrollar y mantener un programa integral, para establecer responsabilidades especficas para la gestin, supervisores y analistas, y para mantener el conocimiento de las condiciones a travs de la revisin peridica y sistemtica de las funciones de laboratorio. La alta direccin tiene la responsabilidad general sobre el cliente final para el programa de QA / QC y las actividades realizadas por el analista de laboratorio. El oficial de control de calidad, el supervisor del laboratorio, y el analista de laboratorio pueden delegar responsabilidades para llevar a cabo una funcin de sus deberes de trabajo individuales por la alta direccin, sin embargo, la alta direccin es en ltima instancia, responsable del programa de control de calidad y no puede eludir sus responsabilidades de gestin, por delegacin a un autor menor de la organizacin.

b. La garanta de calidad oficial/director de calidad: En los laboratorios grandes, un oficial de control de calidad tiene la responsabilidad de la autoridad y la supervisin de la ejecucin del programa de control de calidad. Idealmente, esta persona tiene una posicin personal que depende directamente de la alta direccin y por lo tanto tiene independencia operativa. El oficial de control de calidad debe tener una formacin tcnica que incluye cursos en microbiologa, estar familiarizado con todos los aspectos del trabajo de laboratorio, y conocer y familiarizarse con el programa de control de calidad y prcticas de control de calidad y tcnicas estadsticas para la evaluacin de los datos. El oficial de control de calidad es responsable de iniciar el programa de control de calidad, convincente direccin y el personal de su valor, y proporcionar apoyo tcnico y capacitacin. Una vez que el programa de control de calidad est funcionando, el oficial de control de calidad debe llevar a cabo revisiones frecuentes (semanales o mensuales) con la direccin del laboratorio y el personal para determinar su conformidad con el programa y para identificar y resolver problemas. El oficial de control de calidad tambin informa peridicamente a la administracin para asegurar de nuevo de ING en las acciones necesarias para corregir los problemas que amenazan la calidad de los datos. En pequeos laboratorios de estas responsabilidades se asignan a uno o ms de los empleados sobre una base a tiempo parcial o el personal podr formar una unidad de control de calidad. c. Personal: el personal de laboratorio y de campo deben participar en la planificacin de la gestin del programa de control de calidad, la preparacin de procedimientos operativos estndar, y lo ms importante, la ejecucin del programa de control de calidad y actividades de control de calidad en sus tareas diarias de recoleccin de muestras, la realizacin de anlisis, la realizacin de controles de calidad, y el clculo e informar los resultados. Los miembros del personal son los primeros en identificar problemas potenciales y deben trabajar con el oficial de control de calidad y gestin / supervisor para corregir y prevenir ellos. Es fundamental para el xito del programa de control de calidad que los miembros del personal de entender lo que se espera de ellos y apoyar activamente el programa de control de calidad. 3. Objetivos del Sistema de Calidad Los objetivos de QS incluyen el suministro de datos de calidad conocida, lo que garantiza una alta calidad de desempeo de los laboratorios, el mantenimiento de la evaluacin continua de las operaciones de laboratorio, la identificacin de debilidades en las operaciones de laboratorio, la deteccin de necesidades de formacin, mejora de

la documentacin y de registros, el desarrollo de sistemas de informacin clara y adecuada, y asegurar el cumplimiento con las regulaciones y los requerimientos del cliente. 4. Elementos de un Manual del Sistema de Calidad Cada laboratorio implementa un QS y desarrolla un plan de manejo escrito o manual que describe las polticas del laboratorio y los planes para asegurar la calidad de su trabajo para sus clientes. Actualizado regularmente, el plan es firmado por la direccin superior y el oficial de control de calidad para indicar su aprobacin. Para un pequeo laboratorio, el propietario / operador firmar el plan. Tener la alta direccin y el oficial de control de calidad firmar en un plan de manejo escrito o manual que describe las polticas y actividades de laboratorio que hace la gerencia superior responsable. Esto significa que el personal de apoyo, instrumentos de anlisis, y los materiales son en ltima instancia la responsabilidad de la alta direccin y no pueden ser eliminados a travs de la delegacin a una autoridad inferior, tales como el oficial de control de calidad. El plan debe abordar los siguientes aspectos comunes bsicos: a. Declaracin de poltica de calidad, que describe los objetivos especficos y el compromiso del laboratorio y su gestin de calidad y la integridad de datos. Una declaracin de tica pueden ser incluidos. b. Organizacin y estructura de gestin, describiendo los aspectos funcionales del laboratorio y sus responsabilidades de gestin con un organigrama adjunto. c. Polticas de personal, lo que indica cualificacin especfica y las necesidades de formacin y las responsabilidades del trabajo de los supervisores y analistas. d. Requisitos del equipo y de instrumentos, lista de equipos crticos e instrumentos disponibles, teniendo en cuenta los requisitos del laboratorio y la frecuencia de los procedimientos de calibracin y mantenimiento pre-ventative, y que aseguran una funcionalidad aceptable antes que el equipo se ponga en servicio. e. Especificaciones para el suministro, sealando los procedimientos para asegurar que los reactivos y materiales son de calidad suficiente y aceptable para su uso. f. Especificaciones para la subcontratacin de ensayos y calibraciones, el establecimiento de normas para la supervisin del laboratorio y la aceptacin de los productos. g. Los procedimientos de muestreo (si se realiza en el laboratorio) y los criterios de aceptacin de la muestra, se describen los procedimientos para la recoleccin,

manipulacin (por ejemplo, tiempo y temperatura), la aceptacin y el seguimiento de las muestras enviadas, y los procedimientos requeridos para la cadena de custodia, si los datos pueden ser objeto de litigio. h. Los mtodos de anlisis, el alcance de la lista para las pruebas de laboratorio, y que denota la clase de acreditacin / certificacin de los distintos mtodos y, por mtodos estndar o nuevo, los procedimientos del laboratorio de validacin. i. Analtica medidas de control de calidad, indicando los requisitos del laboratorio para el aseguramiento de la medicin, por ejemplo, mtodo de verificacin y la documentacin, la prevencin de errores y controles analticos en anlisis repetidos, los controles positivo y negativo, los controles de esterilidad, y las pruebas de verificacin, as como los mtodos estadsticos utilizados . j. Procedimientos operativos estndar (SOP), que enumera todos los procesos de laboratorio genricas y especficas operaciones de laboratorio de rutina, documentada y firmada por la administracin, los cuales estn disponibles para los clientes bajo peticin y de fcil acceso para el personal. k. Documentacin de control y requisitos para conservar registros, la identificacin de los formatos de registros, copia impresa, por ejemplo, e-notebooks, y archivos de computadora, y los procedimientos para asegurar la revisin de datos, la capacidad de rastrear, y la rendicin de cuentas, teniendo en cuenta los procedimientos para asegurar la confidencialidad de los clientes, en su caso y otros requisitos, tales como el control, seguridad, almacenamiento, tiempo de retencin de registros, y la eliminacin de los registros de laboratorio. Cuando la confidencialidad y seguridad lo permiten, una copia de seguridad de los registros se deben almacenar fuera del sitio. l. Evaluaciones, descripcin de los procesos del laboratorio para monitorear e informar sobre la eficacia de su programa de control de calidad. 1) Las auditoras internas de las operaciones de laboratorio, realizados de forma rutinaria, por lo menos una vez al ao, por el oficial de control de calidad y supervisor. Para un pequeo laboratorio, un experto externo puede ser necesaria. Estas auditoras deben incluir todos los aspectos del labo-incluyendo laboratorio, por ejemplo, los anlisis realizados, los datos manipula-ciones, y la presentacin de informes. 2) evaluaciones sobre el terreno por expertos externos para garantizar que el laboratorio y su personal estn siguiendo un programa de control de calidad aceptable. Este es un componente necesario para el laboratorio de certificacin o acreditacin. Para los laboratorios que no buscan reconocimiento, esta actividad es una sugerencia.

3) Capacidad de prueba (PT) estudios en los que participa el laboratorio. Estos estudios de colaboracin debe confirmar la capacidad de un laboratorio para generar datos comparables aceptable para el laboratorio de referencia y otros laboratorios e identificar los problemas potenciales. Estudios PT se realiza generalmente una vez o dos veces al ao. m. Actividades preventivas y correctivas, los procedimientos de identificacin utilizados para determinar las causas de los problemas identificados y para registrar, corregir y prevenir su repeticin. n. Servicio al cliente, describiendo el compromiso del laboratorio y actividades para responder a las solicitudes y quejas del cliente, y para garantizar la confidencialidad de los clientes y los derechos de propiedad. Las directrices de control de calidad discutidos en 9020B y 9020C son recomendados como material fuente til de los elementos que deben abordarse en las polticas de desarrollo de un programa de control de calidad y las actividades de CC. Informacin adicional est disponible en varias organizaciones de normalizacin, tales como la Asociacin Americana para la Acreditacin de Laboratorios (A2LA), AOAC International Inc., Organizacin Internacional de Normalizacin (ISO), Nacional de Medio Ambiente de Acreditacin de Laboratorios de la Conferencia (NELAC), Instituto de Nacional de Acreditacin de Laboratorios Ambientales (INELA), y los Estados Unidos Agencia de Proteccin Ambiental (USEPA).

9020 B. intralaboratorio Directrices de Control de Calidad Control de calidad (QC) prcticas estn diseadas para asegurar que los procesos del laboratorio estn en control. Todos los laboratorios tienen algunas prcticas de control de calidad intralaboratorio que se han desarrollado desde el sentido comn y los principios de la experimentacin controlada para indicar eficacia del mtodo y los resultados de laboratorio. QS Un laboratorio pone en marcha las polticas de control de calidad o de programas y actividades de control de calidad necesarias para minimizar los errores sistemticos y aleatorios como consecuencia de cambios en el personal, instrumental, equipos, agentes de re-, materiales, mtodos de muestreo y de anlisis, manejo de datos, y presentacin de datos. Es especialmente importante que los laboratorios que realizan slo una cantidad limitada de control de calidad microbiolgica estricta prueba de esfuerzo. Una lista de las prcticas de control de calidad clave se da en la Tabla 9020: I y se discute en 5. Otras fuentes de informacin

sobre las prcticas de control de calidad de laboratorio son disponible.1-10 laboratorios deben abordar todas las directrices de control de calidad discutidos aqu, pero la profundidad y los detalles pueden ser diferentes para cada laboratorio. Muchos de los artculos mencionados aqu son tambin aplicables a otros laboratorios, tales como los laboratorios qumicos y radiolgicos. Para los ensayos en los laboratorios de microbiologa Buenas Prcticas de Manufactura (GMP) / Buenas Prcticas de Laboratorio (GLP) los reglamentos, ciertas prcticas de control de calidad ser diferente de los mencionados aqu. 1. Personal Las pruebas microbiolgicas deben ser realizadas por un microbilogo o el tcnico profesional con un nivel adecuado de educacin, formacin y experiencia, en general, las tcnicas microbiolgicas. Si no, un microbilogo profesional debe proporcionar supervisin para guiar y capacitar a los analistas en los procedimientos bsicos de laboratorio de microbiologa para realizar sus funciones asignadas. El supervisor de rutina debe evaluar y documentar las habilidades de los tcnicos. La recogida de muestras (si se realiza en el laboratorio), manejo de la muestra, los medios de comunicacin y la preparacin de material de vidrio, esterilizacin, uso de batas habitacin limpia y requisitos de acceso, las tcnicas de asepsia, las pruebas analticas de rutina, contar, el manejo de datos, y las tcnicas de control de calidad para identificar y eliminar los problemas deben ser estrechamente monitoreados. La administracin debe ayudar al personal de laboratorio para obtener un trabajo de formacin y curso para mejorar sus habilidades tcnicas y avanzar en sus carreras. Un registro de capacitacin de los empleados y la puntuacin de rendimiento obtenido mediante el anlisis de un solo ciego muestras se deben mantener. Demostracin inicial de la capacidad antes de generar los datos, y un curso de demostracin de la capacidad de cada mtodo de anlisis llevado a cabo se debe registrar. 2. Los criterios de bioseguridad La bioseguridad es motivo de preocupacin para todos los laboratorios microbiolgicos para proteger al personal de laboratorio y otros que pueden estar potencialmente expuestos po-. Hay tres elementos que deben considerarse: las prcticas de laboratorio, equipos de seguridad y diseo de las instalaciones. La evaluacin de riesgos del trabajo a realizar con cada agente biolgico especfico determinar la combinacin adecuada de estos elementos necesarios para cada laboratorio.

Los Centros para el Control de Enfermedades (CDC) y la Prevencin de EE.UU. Servicio de Salud Pblica, clasifica los laboratorios de manipulacin de agentes biolgicos peligrosos potenciales en cuatro niveles de bioseguridad. Los cuatro niveles de bioseguridad (BSLs 1, 2, 3 y 4) consisten en una combinacin de prcticas de laboratorio y las tcnicas, equipos de seguridad e instalaciones de laboratorio. Cada combinacin es especialmente adecuada para las operaciones realizadas, las rutas de sospecha de transmisin de los agentes infecciosos, y la funcin de laboratorio o de la actividad. La siguiente es una breve discusin de los cuatro diferentes niveles de bioseguridad. Agentes indgenas, peligrosos o exticos que pueden causar enfermedades graves o potencialmente mortales, no se de-descrito en los mtodos estndar, por lo tanto, la informacin detallada sobre las prcticas especiales, contencin y las instalaciones para BSLs 3 y 4 no se incluyen aqu. Para ms informacin sobre todos los BSLs, protocolos de revisin de los CDC. a. Nivel de Bioseguridad 1 (BSL 1): Como se ha sealado por los CDC, BSL 1 es adecuado para el trabajo con agentes bien caracterizados que no se sabe que causan la enfermedad consistente en adultos sanos y de peligro mnimo potencial para el personal de laboratorio y el medio ambiente. El trabajo se realiza generalmente en mesas de trabajo abiertas usando prcticas microbiolgicas estndar. Los agentes que figuran en los mtodos estndar que debe ser manejado bajo un BSL prcticas son las bacterias coliformes totales y termotolerantes (fecales), E. coli, enterococos, hierro y azufre, bacterias, actinomicetos y otros microorganismos no patgenos. Es bajo la discrecin del director del laboratorio lo que las prcticas de bioseguridad deben ser respetados en funcin de las prcticas en cuestin. Las prcticas estndar y equipo de seguridad para este nivel son los siguientes: 1) El acceso al laboratorio es limitado o restringido a la discrecin del director del laboratorio mediante la publicacin de un signo, por ejemplo, "Zona restringida-Riesgos Biolgicos - El personal de laboratorio slo" cuando los experimentos o en el trabajo con las muestras estn en curso. Asegrese de que puertas y ventanas estn cerradas cuando el trabajo est progresando asptica. 2) Personal de lavarse bien las manos con agua y jabn despus de manipular materiales viables, despus de quitarse los guantes y antes de salir del laboratorio.

3) Comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto, la aplicacin de cosmticos, y almacenar los alimentos para consumo humano no estn permitidos en las reas de trabajo. 4) pipetear con la boca est prohibido. 5) Polticas para la manipulacin segura de objetos punzantes se instituyen. 6) Las superficies de trabajo deben descontaminarse antes y despus de cada uso y despus de cualquier derrame de material viable. 7) Todas las culturas, acciones y otros desechos regulados son descontaminados antes de su eliminacin mediante un mtodo de descontaminacin aprobado, como autoclave y que la informacin es grabada. 8) Un programa de control de insectos y roedores, est en vigor. Se recomienda que Batas de laboratorio, bata o uniforme debe usar para prevenir la contaminacin o suciedad de la ropa de calle. Se deben usar guantes si la piel de las manos se ha roto o si una erupcin cutnea. Todos los procedimientos deben ser realizados de manera que no se producen aerosoles o salpicaduras. b. Nivel de bioseguridad 2 (BSL 2): BSL 2 se basa en un BSL prcticas e implica trabajar con los agentes de peligro potencial moderado para el personal y el medio ambiente. Los agentes que figuran en los mtodos estndar que requieren prcticas BSL 2 son los microorganismos patgenos descritos en las secciones 9260, 9510, 9610 y 9711. Este nivel se diferencia de BSL 1 en lo siguiente: personal de laboratorio tienen una formacin especfica en el manejo de agentes patgenos, el acceso al laboratorio es limitado cuando se est trabajando, extremar las precauciones se toman con artculos contaminados aguda, y ciertos procedimientos en los que los aerosoles infecciosos pueden ser creados se llevan a cabo en cabinas de seguridad biolgica (BSC). Las vacunas se debe prestar si est disponible. Las prcticas estndar para este nivel de todos los enumerados para BSL 1 y otras prcticas especiales, entre ellas las siguientes: 1. Un alto grado de precaucin se toma siempre con los objetos contaminados cortantes, incluyendo agujas y jeringas, portaobjetos, pipetas, tubos capilares y escalpelos. 2. Las superficies de trabajo deben descontaminarse al concluir los trabajos o al final del da y despus de cualquier derrame o salpicadura de material viable, mediante el uso de desinfectantes que son efectivos contra los agentes de inters.

3. Culturas o residuos potencialmente infecciosos se colocan en un recipiente con la etiqueta "residuos biolgicos peligrosos" con una cubierta que evita las fugas durante la recoleccin, manejo, procesamiento, almacenamiento, transporte o envo. 4. Cabinas de seguridad biolgica, preferentemente de Clase II, o de otro equipo de proteccin personal. se utilizan cada vez que los procedimientos con un gran potencial para la creacin de aerosoles infecciosos o salpicaduras se llevan a cabo y las altas concentraciones o grandes volmenes de agentes infecciosos que se utilizan. 5. Proteccin de la cara se utiliza para las salpicaduras anticipado o aerosoles de materiales infecciosos en la cara cada vez que debe ser el microorganismo manipulado fuera del BSC. 6. Capas de proteccin de laboratorio, batas o uniformes, y gafas de seguridad designado para uso de laboratorio se usan, mientras que en el laboratorio y se retira y se deja en el laboratorio antes de viajar a zonas fuera del laboratorio. 7. Se usan guantes cuando las manos pueden comunicarse con materiales potencialmente infecciosos, superficies contaminadas, o el equipo. c. Niveles de bioseguridad 3 y 4: BSLs 3 y 4 incluyen la colaboracin con los agentes indgenas, peligrosos o exticos que pueden causar enfermedades graves o potencialmente mortales, como resultado de la exposicin por inhalacin. Dado que los agentes en estas categoras no se describen en los mtodos estndar, prcticas especiales, contencin y las instalaciones para estos niveles se describen brevemente aqu. El personal debe ser entrenado en el manejo de materiales infecciosos. Todas las prcticas anteriores deben ser seguidas. El acceso debe ser limitado y asegur reas. El trabajo debe ser realizado dentro de los gabinetes de seguridad biolgica por personal vestido con ropa de proteccin adecuada y dispositivos. Nadie con heridas abiertas deben entrar en el laboratorio. Una zona de paso donde el personal puede transformarse en ropa de proteccin debe estar disponible entre las entradas desde el pasillo exterior y el interior de laboratorio. Evita que ambas puertas se abran al mismo tiempo. Todos los materiales potencialmente contaminados, tales como guantes, batas de laboratorio, etc, debern ser descontaminados antes de su eliminacin o reutilizacin. Nivel 4, como se seal anteriormente para BSL 3, consiste en agentes biolgicos, a menudo exticas, que son extremadamente peligrosos, tanto para el personal y / o el medio ambiente. Todas las prcticas anteriores deben ser seguidas. El acceso al laboratorio debe ser estrictamente controlada y situado en una zona claramente marcado

y retirado de las operaciones normales o en un edificio separado. Personal totalmente debe desvestirse y ponerse ropa de laboratorio antes de entrar en las reas de prueba y debern ser descontaminados antes de salir. 3. Instalaciones Desarrollar una poltica de control ambiental para asegurar que las condiciones ambientales no invaliden los resultados, afectan la calidad requerida de las mediciones, ni afectan negativamente a personnel.12 factores que deben considerarse y seguimiento para llevar a cabo se describen a continuacin. Gran parte de esta informacin se aplica a cualquier instalacin de laboratorio. a. Ventilacin: Plan de bien ventilada laboratorios que se puede mantener libre de polvo, corrientes de aire y cambios bruscos de temperatura. Instalacin de aire acondicionado y sistemas de temperatura y humedad para reducir la contaminacin, permitir un funcionamiento ms estable de las incubadoras, y disminuir los problemas de humedad con los medios de comunicacin y la instrumentacin. Ajustar las rejillas de ventilacin del sistema para que el flujo de aire no sopla directamente sobre las superficies de trabajo. Cuando sea posible, el flujo de aire debe ser negativa en el laboratorio (de modo que el flujo de aire es siempre en, ms que por el laboratorio) para evitar el riesgo de contaminacin del exterior. b. La utilizacin del espacio: Para garantizar la integridad de la prueba y la muestra y minimizar la contaminacin potencial de disear y operar el laboratorio para reducir al mnimo el trfico y los visitantes. No obstruya el acceso o puntos de salida. Asegrese de que hay espacio de trabajo suficiente para el volumen de trabajo a realizar. Por ejemplo, mantener reas de trabajo separadas para la recepcin de muestras, preparacin y esterilizacin, descontaminacin de los medios de comunicacin, material de vidrio y equipo, las pruebas y el cultivo y manejo de datos y almacenamiento. Mantener el calor de generacin de equipos, tales como autoclaves, en una habitacin separada de las incubadoras. El uso de una campana o cabina de seguridad biolgica para la distribucin y la preparacin de medios estriles, la transferencia de cultivos microbianos, o trabajar con materiales patgenos se recomienda. En los laboratorios ms pequeos, puede ser necesario, aunque indeseable poder, para llevar a cabo estas actividades en la misma habitacin. Sin embargo, no realizan estas actividades cerca de puertas abiertas o ventanas abiertas. Tener suficiente espacio de almacenamiento disponible en el laboratorio para que los materiales pueden

ser almacenados apropiadamente.

c. Las reas de laboratorio de banco: Proporcionar al menos 2 metros de espacio en la mesa lineal por el analista y otras reas para la preparacin y actividades de apoyo. Altura del banco debe ser razonable y cmoda para los tcnicos. De stand-up de trabajo, las dimensiones tpicas de banco pueden ir desde 90 hasta 97 cm de altura y profundidad 70-76 cm, y para sentarse a actividades tales como la microscopa y el recuento de placas, los bancos pueden variar de 75 a 80 cm de alto. Especifique mesas de trabajo de acero inoxidable, plstico epoxi, u otras superficies lisas, impermeables que son inertes y resistentes a la corrosin con un nmero mnimo de costuras y libre de grietas y hendiduras. Instalar, incluso, una iluminacin sin deslumbramiento con cerca de 1000 lux (100 ft-c) la intensidad en la superficie de trabajo. Prueba con un fotmetro. d. Paredes y pisos: Asegurarse de que las paredes estn cubiertas con un acabado suave que sea fcil de limpiar y desinfectar. Especificar los pisos de concreto liso, vinilo, baldosas de asfalto u otras superficies impermeables, lavables sellados. Especificar las superficies de techo que son suaves, no fibrosos, y con luces empotradas. e. El trabajo del rea de: Mantener altos estndares de limpieza en las reas de trabajo. Desinfectar las superficies antes y despus de la prueba. Instituir una poltica regular de mantenimiento preventivo de las reas de trabajo y equipos tales como incubadoras y refrigeradores. Esterilizar los suministros contaminados y los medios de comunicacin inmediatamente despus de su uso. Evitar la acumulacin de agua en una olla debajo del refrigerador y limpie todos los filtros de ventilacin. Desarrollar un programa de vigilancia ambiental para monitorear la calidad del aire de manera rutinaria, por lo menos mensualmente o ms frecuentemente si el rea es utilizada o el anlisis de riesgo biocontaminacin indica la necesidad de un control ms frecuente. El uso de aire placas de asentamiento densidad donde se lleva a cabo el trabajo asptico. Este es un proceso de muestreo pasivo en el que las partculas se depositan en la superficie del agar. Use muestreadores activos de aire si la evaluacin de riesgos indica posibles aerosol condiciones.4 RODAC (deteccin organismo replicar y contando), las placas de contacto o el metodo1 hisopo puede ser utilizado semanalmente o con mayor frecuencia para controlar la contaminacin banco de superficie. Los resultados promedio obtenidos en las pruebas durante un periodo de tiempo para establecer los lmites normales, es decir, establecer una lnea base para esa ubicacin. A

pesar de los lmites de uniforme para la densidad bacteriana no se han establecido, cada laboratorio puede utilizar estas pruebas para establecer una base para las reas de trabajo especficas, evaluar las tendencias, establecer niveles de alerta y accin, y tomar las medidas apropiadas cuando sea necesario. El nmero de colonias en la placa de la densidad del aire no debe exceder 160/m2/15 minutos de exposicin (15 colonies/plate/15 min). Adems de este sistema de vigilancia, el laboratorio podra identificar los contaminantes recuperados con los sistemas de identificacin automticos disponibles en el mercado. Prevenir los efectos de sonido adversos y los niveles de vibracin en el laboratorio. Instalar y fcil de limpiar toldos en las ventanas de cristal grandes para evitar la acumulacin de calor. f. Laboratorio de limpieza: salas de laboratorio Limpie y lave los bancos, estantes, pisos, ventanas, luces, y las superficies expuestas de la tubera. Hmedo trapear los pisos y tratar con una solucin desinfectante semanales; no barrer en seco o barrido. Limpiar mesas de trabajo y tratar con un desinfectante por lo menos una vez al da, o ms frecuentemente, dependiendo del nivel de bioseguridad requeridas para el trabajo que realiza (ver 9020B.2). No permita laboratorio para llenarse. Guarde los suministros y el papeleo fuera de mesas de trabajo. Eliminar o cubrir cualquier tubera de arriba que no se puede limpiar de forma rutinaria. Tiene jabn lquido para manos en un dispensador de accin de la gravedad y toallas de papel disponibles en los fregaderos de laboratorio. No permita fumar o el consumo de alimentos o bebidas en el laboratorio. g. Electricidad: asegurar una fuente estable de electricidad, un nmero suficiente de puntos de venta, interruptor de circuito (GFCI) protegido cuando sea necesario, y la colocacin de protectores de sobretensin. Una copia de seguridad de energa de emergencia y sistema de alarma puede ser necesario cuando el trabajo es fundamental. 4. Equipos de laboratorio e instrumentacin Contar con procedimientos para verificar que cada elemento identificado del equipo se ha instalado correctamente y est funcionando en un manner.13 consistente y satisfactoria Verificar mediante la supervisin constante, el mantenimiento de rutina, y un programa de calibracin peridica que cada pieza de equipo o instrumento cumple con las necesidades del usuario para la precisin y la minimizacin del sesgo. Procedimientos escritos sobre el uso, operacin, calibracin y mantenimiento de equipos e instrumentos pertinentes (ver 9020B.6) y mantener los manuales del

fabricante disponibles para su fcil recuperacin. Realizar la calibracin de los equipos que utilizan patrones de referencia y mantenimiento de los equipos de forma regular segn lo recomendado por el fabricante o para obtener contratos de mantenimiento preventivo en autoclaves, balanzas, microscopios y otros equipos crticos. Grabacin directa a todos los controles de calidad en los libros de registro permanente y mantener la documentacin. Desarrollar un sistema para "marcar" los problemas y las acciones necesarias para su correccin. Asegrese de que el laboratorio cuenta con todo el equipo y los suministros necesarios para la realizacin de pruebas ambientales y de calibracin. Cuentan con un equipo suficiente y suministros cuando sea necesario a fin de que habitualmente no se movi del rea de laboratorio a otro. Cuando el equipo est disponible slo fuera de las instalaciones, documento cmo el laboratorio se asegurar de que la calidad sea satisfactoria. Para las pruebas moleculares, el equipo del laboratorio y suministros necesitan ser destinada a gastos rooms.9 Mantener toda la documentacin que demuestra la determinacin de la aceptabilidad de los equipos, instrumentos y suministros, as como todos los anlisis analticos. Mantener los registros en un formato de registro permanente, como un cuaderno, bloc de notas electrnico, o archivo de computadora. Utilice los procedimientos de calidad tras el control de la base aplicada, as como el laboratorio de investigacin (equipos necesarios para las pruebas especializadas que no pueden ser enumeradas aqu): a. Sensor de temperatura y dispositivos de grabacin: Anualmente o, preferiblemente, dos veces al ao comprobar la exactitud de todas las temperaturas de trabajo de deteccin de dispositivos, tales como lquido en vidrio termmetros, termopares y los instrumentos de registro de la temperatura a la temperatura de uso en contra de un certificado del Instituto Nacional de Estndares y Tecnologa (NIST) o termmetro NIST un

y conforme a las especificaciones del NIST. Registrar los resultados de la calibracin, junto con la fecha y firma del tcnico, en un registro de control de calidad. Marca el factor de calibracin correccin necesaria en cada dispositivo de medicin de temperatura calibrado de manera que slo con correccin de los valores de temperatura se registran. Verificar la exactitud del termmetro de referencia certificados especificados en el certificado de calibracin o por lo menos cada cinco. Algunas

organizaciones de acreditacin o agencias federales o estatales pueden requerir una calibracin ms frecuentes. Para fines de uso general termmetros graduados en incrementos de 0,5 C o menos. Mantener la bombilla en el agua o glicerol para las incubadoras de aire y refrigeradores. Por ejemplo, para un 44,5 0,2 C bao de agua, use un termmetro de inmersin total, amplia, por ejemplo, a corto y largo, graduado a 0,1 C. De las incubadoras de conveccin de aire, utilice los termmetros, por ejemplo, rango, a corto y largo, con bombillas inmerso en glicerol sellado en un frasco o tubo de ensayo con volumen equivalente a los contenedores que se utilizan en las incubadoras. Registro de la calibracin con correccin de lectura de la temperatura en un registro de control de calidad. Siempre que sea posible, dotar a las incubadoras y baos de agua con los instrumentos de registro de la temperatura que proporcionan un registro continuo de temperatura de funcionamiento. Abstenerse, en lo posible, el uso de termmetros de mercurio para evitar la posible liberacin de mercurio al medio ambiente cuando el termmetro se rompe. b. Balances: Localice los saldos en las zonas sin movimiento de aire rpido y balancea el nivel de la empresa, incluso las superficies para evitar vibraciones. Relevel equilibrio cada vez que se mud a una nueva ubicacin. Siga las instrucciones del fabricante para la operacin y el mantenimiento de rutina de balanzas analticas y de carga superior. Servicio de balances anuales o con mayor frecuencia a medida que cambian las condiciones o problemas. Antes de cada uso limpiar el balance con un cepillo suave y asegrese de que est en cero peso en vaco. Si es necesario a cero la pantalla, pulse el botn de tara. Use un peso de papel o el peso de tara y los barcos antes de aadir los reactivos. Coloque el punto de ser pesado en la sartn y leer el peso despus de que el smbolo indicador de estabilidad (si est disponible) aparece en pantalla. Sartenes limpias balance despus de su uso y limpie los derrames inmediatamente con un pauelo desechable de laboratorio. Vuelva a colocar los pesos si corrodos o cado. Utilice slo una pinza de punta de plstico para manejar pesos. Revisar el balance de rutina, preferiblemente todos los das antes de su uso, con al menos dos pesos de trabajo que soporte el rango de uso normal. Compruebe pesos mensuales trabajando con un conjunto de pesas de referencia de la conocida tolerance14 (por ejemplo, ANSI / ASTM Clase 1 o Clase S NIST acompaado de certificado correspondiente) para la exactitud, precisin y linealidad. Registrar los resultados junto con la fecha y las iniciales del tcnico. Recertificar pesos de referencia

como se especifica en el certificado de calibracin o por lo menos cada cinco aos.15, 16 Tenga en cuenta que algunas agencias reguladoras o los organismos de acreditacin pueden requerir recertificacin ms frecuentes de los pesos de referencia. c. medidor de pH: Utilice un medidor, se gradu en 0,1 unidades de pH o menos, que incluye la compensacin de temperatura, ya que la respuesta del electrodo de pH depende de la temperatura. Use medidores digitales, soluciones comerciales de amortiguacin, y los electrodos adecuados para un amplio rango de temperaturas. Un electrodo de cabeza plana se puede utilizar para medir los medios slidos de agar. Calibrar el pH-metro con al menos dos soluciones buffer de pH certificado que soporte el pH de la muestra que se est midiendo. El rango de temperatura ms deseado para la determinacin de pH es de 25 5 C. Tomar la medida del pH de la solucin de prueba cerca de la temperatura utilizada para calibrar el medidor. Registrar los resultados de la calibracin, la fecha y las iniciales del tcnico. Soluciones buffer Fecha en la botella y en el diario cuando se abre y cheque mensual en contra de otro medidor de pH, si es posible. Inmediatamente despus de su uso, deseche las soluciones tampn o single-use/ready-to-use paquetes de pH de la solucin utilizada para calibrar metros. Despus de una d, descartar todas las soluciones a partir de los paquetes. Vuelva a colocar los contenedores de suministro buffer de pH en la fecha de caducidad. Tienda electrodo inmerso en la solucin recomendada por el fabricante. No permita que los electrodos que se seque. Medir y registrar la pendiente del medidor de pH despus de la calibracin por lo menos una vez al mes, y de preferencia despus de cada uso, para ver si el medidor no funciona correctamente. Si el medidor de pH no tiene una funcin que calcula automticamente la pendiente, pero puede proporcionar el pH en milivoltios (mV), utilice la siguiente frmula para calcular la pendiente: Pendiente, en% = (mV a pH 7 - mV a pH 4 ) X 100/177. Si la pendiente es inferior al 95% o por encima de 105%, el electrodo o el medidor requiere de mantenimiento. Para ms detalles de uso del medidor de pH y de mantenimiento, consulte la seccin 4500-H + o seguir las instrucciones del fabricante. d. Sistema de purificacin de agua: Los sistemas comerciales disponibles que incluyen una combinacin de prefiltracin, el carbn activado, resinas de lecho mixto, y de smosis inversa con filtracin final para producir agua de grado reactivo. Estos sistemas

tienden a producir la misma calidad del agua hasta que las resinas o carbn activado son casi agotamiento y la calidad abruptamente se vuelve inaceptable. Algunos componentes de desionizacin que automticamente regenerar las resinas de intercambio inico estn disponibles ahora. No almacene el agua de grado reactivo a menos que un dispositivo de radiacin UV comercial se instala y se confirma para mantener la esterilidad. Monitorear el agua de forma continua o reactivo cada da de uso con un medidor de conductividad calibrado y analizar por lo menos una vez al ao para los metales traza. Determinacin mensual de bacterias hetertrofas pueden indicar problemas potenciales antes de que los parmetros de prueba. Aumento del nmero de bacterias en el sistema pueden afectar los ensayos con bacterias, ya que representan las fuentes de nutrientes para las bacterias estar aislado. La prueba de la calidad del agua se debe realizar anualmente y cuando hay una reparacin o un cambio en el sistema de abastecimiento de agua. Esta prueba de la calidad bacteriolgica no es necesario para el tipo II o mejor el agua tal como se define en el Standard Methods (ediciones 18 y 19), la Seccin 1080C, o medio-calidad del agua o, mejor, tal como se define en el Standard Methods (Ediciones 20, 21, y en lnea) , la Seccin 1080C, o como se define por otros ampliamente aceptado standards.17 mayora de los sistemas utilizados en la actualidad cumplen o superan estos estndares. Sustituir los cartuchos en los intervalos recomendados por el fabricante basado en el consumo estimado y la calidad del agua de la fuente. No espere a que el fracaso de la columna. Si las bacterias de agua libre que se desea, y un dispositivo de radiacin ultravioleta no est disponible, incluye la filtracin final asptica con un filtro de membrana de 0,2 JNM de poro y recoger en un recipiente estril. Monitor de agua tratada de la contaminacin y cambiar el filtro si es necesario. e. El agua sigue: Alambiques producir agua de buena calidad que caracteriza deteriora lentamente con el tiempo como la corrosin, la lixiviacin, y se producen incrustaciones. Estas condiciones se puede controlar con mantenimiento y limpieza adecuados. Alambiques eliminan eficazmente las sustancias disueltas, pero no se disuelve gases o compuestos orgnicos voltiles. De agua recin destilada puede contener cloro combinado y amonaco (NH3). En el almacenamiento, NH3 y el CO2 adicional se absorben en el aire. Utilizar agua blanda, como la fuente de agua para reducir la frecuencia de la limpieza del alambique. Vace y limpie todava y el depsito de acuerdo a las instrucciones del fabricante y su uso.

f. Aparato de medios mecnicos de dispensacin: Compruebe el volumen de distribucin en una probeta al inicio de cada cambio de volumen y peridicamente a lo largo corre extendida; registrar los resultados. Lave con un pequeo volumen de medio antes de dispensar y calientes de la bomba de agua de grado reactivo a travs de la unidad de enjuague entre carreras. Fugas correcta, conexiones sueltas, o mal funcionamiento de inmediato. Al final de la jornada de trabajo, descanso aparato en partes, para lavar, enjuagar con agua de grado reactivo y seco. Lubricar las partes de acuerdo a las instrucciones del fabricante o por lo menos una vez al mes. g. Esterilizacin de aire caliente del horno: Prueba de rendimiento mensual disponible en el mercado con tiras biolgica de esporas de un microorganismo formador de esporas, como atrophaeus Bacillus, preferiblemente con una densidad mnima de 1x106 esporas y se colocan en recipientes de vidrio similares a los elementos de la esterilizacin. Use un termmetro de bulbo colocado en la arena, precisa en los 160 a 180 C rango para medir la temperatura, o una sonda termopar tipo, o un registrador de temperatura continua de leer. Registrar los resultados y el contenido cuando est en uso. El uso de calor que indica la cinta para identificar los suministros y materiales que han sido expuestos a temperaturas de esterilizacin. h. Autoclave: Registre elementos esterilizados y la temperatura de esterilizacin, junto con el total de tiempo de ejecucin (la exposicin al calor), perodo de tiempo real en la temperatura de esterilizacin, establecer y lecturas de la presin real, y las iniciales de la persona responsable de cada ejecucin cycle.18 Las nuevas unidades se puede imprimir la mayora de las de esta informacin en la cinta de forma automtica. Para las unidades ms antiguas uso de un grfico termmetro de registro es muy recomendable. Para autoclaves nuevos un perfil de temperatura inicial puede llevarse a cabo para determinar las diferencias en los distintos lugares dentro del autoclave. Para el uso habitual, verifique la temperatura del autoclave semanales con un mximo registro de termmetro (MRT) para confirmar que 121 C se ha alcanzado. Prueba mensual de eficacia de la esterilizacin, con el tiempo de esterilizacin normal y la temperatura de los medios de comunicacin, con tal biolgica stearothermophilus Geobacillus comercialmente disponible en tiras de esporas, suspensiones, o cpsulas, preferentemente a una concentracin 1x106 y se colocan en vidrio con un lquido para simular la esterilizacin en autoclave real el rendimiento en media.19 Con cambios en los estndares, algunos de los indicadores biolgicos pueden requerir un perodo ms

largo en la temperatura de esterilizacin que se utiliza para la mayora de los medios de hidratos de carbono. Si un problema se ha sealado, el uso de indicadores biolgicos para tiradas autoclave que superen los 20 minutos, por ejemplo, la dilucin con agua y materiales contaminados. El uso adicional de un indicador de vapor qumico para cada ciclo es un mtodo prctico y rpido para mostrar si las condiciones mnimas de exposicin se cumplieron. El uso de calor que indica la cinta para identificar los suministros y materiales que han sido esterilizadas. Comprobar la sincronizacin trimestral mediante el uso de un cronmetro calibrado o seal horaria nacional. Mantenga autoclave limpia y libre de residuos mediante la comprobacin tanto de la trampa y los sellos. i. Refrigerador: Mantenga la temperatura entre 2 y 8 C con bulbo del termmetro en agua destilada o una solucin de glicerol. Un perfil de temperatura inicial se sugiere. Verificar y registrar la calibracin con correccin de temperatura todos los das cuando est en uso y limpiar anualmente o ms frecuentemente si es necesario. Identificar y almacenar los materiales de la fecha. Descongelar segn sea necesario y desechar materiales obsoletos mensuales. Libre de heladas unidades puede dar lugar a la deshidratacin rpida de contenidos multimedia almacenados. Refrigeradores y congeladores deben ser a prueba de explosin si se utilizan para el almacenamiento de materiales inflamables.

j. Congelador: Congelador rango de temperatura ser determinada por la necesidad de anlisis, por ejemplo, el congelador de laboratorio estndar puede variar desde -10 hasta -20 5 C y un congelador ultra-fros que pueden ir de -70 a - 90 C. Verificar y registrar la temperatura diaria. Un termmetro de registro y sistema de alarma son muy deseables. Identificar y almacenar los materiales de la fecha. Descongelar y limpiar al menos una vez al ao (cada seis meses si es necesario), deseche los materiales obsoletos. k. Equipos de filtracin por membrana: Antes del uso inicial, montar unidades de filtracin y verificar si hay fugas. Desechar las unidades si las superficies se rayen el interior. Lavar y enjuagar las asambleas de filtracin tras su uso, envuelva en papel de aluminio o txicos, y esterilizar. Cuando las marcas de graduacin volumtrica se utilizan para medir los volmenes de muestra, verificar la exactitud de la graduacin de las marcas de inicialmente con una clase de una pipeta volumtrica o probeta graduada. Registrar los resultados. Para esterilizado de un solo uso embudos comprobar uno por

lote o utilizar un porcentaje determinado, por ejemplo, de 1 a 4%, para la exactitud de la marca de graduacin volumtrica. l. Lmparas de rayos ultravioletas: Cuando se utiliza, desconecte bombillas lmparas mensuales y limpie con un pao suave humedecido con etanol, 70% methanol/30% de grado reactivo de agua, o el uso de espectroscopia de grado 2-propanol en el horno, el material puede ser recogida. Lmparas de prueba de tres meses con una luz apropiada * (onda corta) UV metros y reemplazar las bombillas si la produccin es inferior al 70% del original. Por otra parte, exponer las placas de recuento en placa de agar difusin que contiene 200 a 300 unidades formadoras de colonias (UFC) / ml de una suspensin de bacterias seleccionadas, durante 2 minutos. Incubar las placas a 35 C durante 48 horas y Colonias. Reemplace la bombilla si el recuento de colonias no se reduce al 99%. PRECAUCIN: A pesar de onda corta (254 nm) la luz ultravioleta es conocida por ser ms peligrosa que la longitud de onda UV (365 nm, que se utiliza para detectar la fluorescencia), ambos tipos de rayos UV puede daar los ojos y la piel y, potencialmente, son cancergenos. 20 Proteger los ojos y la piel de la exposicin a los rayos UV. Considere la posibilidad de un mecanismo de bloqueo para que las luces de laboratorio no se puede activar sin necesidad de apagar las luces de arriba UV si se utiliza. (Ver Seccin 1090B). m. Biohazard gabinete de seguridad (BSC): Con el mantenimiento adecuado de Clase I y II BSC, cuando se utiliza junto con las buenas tcnicas microbiolgicas, proporcionar un sistema de contencin eficaz para la manipulacin segura de los microorganismos moderado y de alto riesgo (nivel 2 de bioseguridad y los agentes 3). Ambos BSC de clase I y II tienen velocidades hacia adentro frente a (75 a 100 pies lineales / min) que proporcionan unos niveles comparables de contencin para proteger a los trabajadores de laboratorio y el entorno inmediato de aerosoles infecciosos generados en el interior. CSB de clase II tambin protegen el material en s mismo a travs de alta eficiencia de filtracin de partculas de aire (filtros HEPA) del flujo de aire hacia abajo a travs de la superficie de trabajo (flujo laminar vertical). Procedimientos operativos estndar son los siguientes: 1) Antes de su uso y despus de su uso, de purga de aire de 10 a 15 minutos y limpie la unidad con un desinfectante. Garantizar el flujo de aire hacia el interior con un pedazo de tejido. 2) Introducir directamente en el gabinete y realizar el trabajo de una manera metdica lento. Coloque el material dentro del gabinete - no en la parrilla delantera - y no

interrumpir o bloquear el flujo de aire laminar. Coloque la bandeja de descarte en el gabinete.

3) Descontaminar interior del BSC despus de la finalizacin del trabajo y antes de la extraccin. Permitir gabinete para funcionar de 10 a 15 minutos y luego se cerr off.21 Proporcionar las pruebas y la certificacin de Clase I y II BSC in situ en el momento de la instalacin, en cualquier momento, el BSC se mueve, y al menos anualmente. Mantener los gabinetes como lo indique el fabricante. n. Bao de agua incubadora: Verifique que el agua del bao incubadoras mantener la temperatura, por ejemplo, 35 0,5 C o 44,5 0,2 C. Use un termmetro de inmersin total ( 4 bis, arriba) que los incrementos apropiados necesarios para probar la temperatura de incubacin. Cuando la incubadora est en uso, el seguimiento y registro de calibracin corregida por la temperatura dos veces al da. Llene la unidad slo con agua de calidad reactivo. Mantener el nivel de agua de modo que est por encima del nivel superior del medio en tubos o frascos. Para un ptimo funcionamiento, equipamiento bao de agua con una cubierta a dos aguas para evitar la evaporacin y con una bomba de circulacin para mantener una distribucin uniforme de la temperatura. Utilice slo acero inoxidable, recubierto de plstico, u otros bastidores resistentes a la corrosin. Utilice las pantallas o los pesos para mantener los materiales de la flotacin. Bao de vaciar y limpiar cuando sea necesario para evitar la acumulacin de sales y el crecimiento microbiano y desinfectar antes de rellenar. o. Incubadora (de aire, con camisa de agua o bloque de aluminio): Medir y establecer que las incubadoras mantener la temperatura espacial adecuada y uniforme de prueba. Deje suficiente espacio entre los elementos que permitan el flujo de aire sin obstrucciones. No placas de Petri de sobrecarga ni apile ms de cuatro platos de alta. Verificar inicialmente que el fro los medios de prueba de muestra se incuban a la temperatura de ensayo durante el tiempo necesario. Tenga en cuenta que las incubadoras esttica del aire tardar ms en llegar a temperatura de incubacin. Lleve todas las muestras de fro en los medios de comunicacin a la temperatura ambiente antes de incubadoras de insercin y el uso de un tamao suficiente para evitar un llenado excesivo incubadoras con las muestras fras. Durante los perodos de uso del cheque y el registro de calibracin con correccin de la temperatura dos veces al da (maana y tarde, separadas por al menos 4 h) en los estantes en uso, o por lo menos uno

en el estante superior y uno en el estante inferior, a garantizar y registrar la temperatura consistencia a travs de la unidad. Si un termmetro de vidrio se utiliza, se sumergen bulbo y el tallo en agua o glicerina a la marca de inmersin. Para obtener los mejores resultados, utilice un termmetro y un sistema de alarma. Lugar en incubadora, en un rea donde se mantiene la temperatura ambiente entre 16 y 27 C (60 a 80 F). Por otra parte, el uso bien aislado cita en las salas de incubadora con circulacin forzada de aire. Limpiar y desinfectar despus incubadoras de forma rutinaria. p. Microscopios: Verifique la iluminacin de Kohler cada vez que se pone el microscopio para su uso. ptica limpia y la etapa despus de cada uso con papel ptico y microscopio tapa cuando no est en uso. Ms informacin est disponible en la seccin 9030 y elsewhere.22 Permitir que slo los tcnicos capacitados para utilizar microscopio de fluorescencia y fuente de luz. Monitor de la lmpara de fluorescencia y sustituir en caso de una prdida significativa de la fluorescencia se observa, cuando el fabricante recomienda la sustitucin, o cuando una regla o un documento de orientacin de laboratorio especifica el uso de horas mximo, lo que ocurra primero. Lmpara de operacin en tiempo record / uso, eficiencia y alineacin. Siempre alinear la lmpara despus de bombilla ha sido reemplazado. Uso conocido lminas positivas de fluorescencia como controles. q. Medidor de conductividad: Las mediciones de conductividad son dependientes de la temperatura y el efecto de la temperatura puede variar con diferentes soluciones. Por lo tanto, calibrar metros mensuales utilizando certificados bajo nivel estndar a 25 C o determinar la constante de celda

utilizando certificados bajo nivel estndar a 25 C. Cuando las soluciones deben ser medidos a una temperatura diferente, utilice un medidor con compensacin automtica de temperatura o de tomar la temperatura de la lectura de registro de la solucin, y luego la lectura correcta a 25 C con las frmulas de la seccin 2510B.5b (generalmente de 2% / C) . r. Microondas: Las unidades varan en potencia y colocacin de material aceptable, sin embargo, las microondas han utilizado con xito para derretir preesterilizado medios de agar. Su uso en un tiempo mnimo y la posicin de ajuste de la potencia. Compruebe la unidad para la calidad y el rendimiento en comparacin con los procedimientos estandarizados de fusin mediante la realizacin de estudio de comparacin.

s. Micropipetas: 23,24 micropipetas son de alta precisin oratoria laboratorio de instrumentos para administrar volmenes muy pequeos. El uso con puntas de precisin suministrados por el fabricante y segura solucin para el cono de la nariz para asegurar un sello hermtico. Mantener la coherencia en la accin de pipeteo como pre-remojo, la liberacin de mbolo, y la profundidad de inmersin de la punta (entre 1 y 3 mm). Funcionar en una posicin vertical y tienen tanto de la muestra y el equipo a temperatura equivalente. Evitar el exceso de marcacin de los lmites recomendados de la pipeta para evitar daos mecnicos. Siga las instrucciones del fabricante para realizar el mantenimiento de rutina, tales como la limpieza, reemplazo de sellos, y relubricacin-y hacer que cada operador de pipeta de verificacin de la exactitud y la precisin del volumen dispensado a una frecuencia en relacin con su uso, por ejemplo, trimestralmente o antes si pipeta est mostrando signos evidentes de que es incorrecto o si cambia la punta del fabricante. Calibrar al menos una vez al ao ya sea en casa o enviar al fabricante. Tenga en cuenta que la pipeta se calibra con agua, cambios en la viscosidad del lquido puede dar lugar a un cambio en el volumen dispensado. Mantener la documentacin. 5. Suministros de Laboratorio Mantener los registros y certificados de anlisis del fabricante, la pureza, o nivel de tolerancia, si se suministran, para todos los suministros de laboratorio. a. Cristalera: El trmino "cristal" se refiere a vidrio de borosilicato y resistente al calor, los materiales plsticos. Volumtricos de vidrio, pipetas, probetas graduadas, y vasos con marcas de calibracin debe tener una precisin de las tolerancias volumtricas especificado. Sede estableci standards25 para la calibracin de aparatos volumtricos de laboratorio. Cristalera volumtrica es general, ya sea de clase A o clase B (sin designar). La Clase A es la cristalera volumtrica ms precisa. Determinar la tolerancia una vez por lote o en un porcentaje fijo, por ejemplo, de 1 a 4%. Antes de cada uso, examine la cristalera y deshacerse de objetos con bordes astillados o grabado superficies internas. En particular, examinar con tapn de rosca de botellas y frascos de dilucin para los bordes astillados que podra escaparse y contaminar la muestra, el analista, y el rea. Inspeccione la cristalera despus del lavado de cuentas excesiva de agua, las manchas, y la nubosidad y vuelva a lavar si es necesario. Vuelva a colocar la cristalera con la escritura excesiva, si las marcas no se pueden quitar. Ya sea la cubierta de vidrio o cristal, con su tienda de abajo hacia arriba para evitar que el polvo se asiente en su interior.

Realizar las siguientes pruebas para artculos de vidrio limpio; 1) pH check-Debido a que algunos productos de limpieza son difciles de eliminar por completo, revise de lotes de material de vidrio limpio para la reaccin de pH, especialmente si se remojan en lcalis o cidos. Para probar la cristalera limpia para un residuo alcalino o cido aadir unas gotas de bromotimol 0,04% azul (BTB) o el indicador de pH otros y observar la reaccin de color. BTB debe ser azul-verde (en el rango neutral aceptable).

Para preparar la solucin de 0.04% el indicador azul de bromotimol, aadir 16 mL0.01 NNaOH a 0,1 g BTB y diluir a 250 ml con agua de grado reactivo. 2) Prueba de residuos de inhibidores de vidrio y plstico-Ciertos agentes humectantes o detergentes utilizados en el lavado de cristalera pueden contener sustancias bacteriostticas, inhibidores o estimulantes que requieren de 6 a 12 lavados para eliminar todos los rastros y asegurar la libertad de accin bacteriosttica residual. Siempre y cuando la prueba de azul de bromotimol que se est haciendo en cada lote de material de vidrio, ejecute esta prueba antes del primer uso de un compuesto de lavado y cada vez que un nuevo procedimiento de lavado se utiliza. Si la prueba de azul de bromotimol no se hace siempre tambin ejecutar la prueba de toxicidad sobre una base anual. Registrar los resultados. Aunque el procedimiento siguiente se describe el ensayo de placas de Petri de residuos inhibitorios, es aplicable a otros tipos de vidrio o recipientes de plstico. a) Procedimiento de lavado y enjuague, seis placas de Petri de acuerdo con la prctica habitual de laboratorio y designar como Grupo A. Wash seis placas de Petri que el anterior, lavar 12 veces con porciones sucesivas de agua de grado reactivo, y designar como Grupo B. Enjuague seis cajas de petri con detergente lavado con agua (en la concentracin de uso), aire seco, sin ms aclarado, y designar como el Grupo C. Esterilizar los platos en A, B, C y Grupos por el procedimiento habitual. De recipientes de plstico esterilizado, establecido seis placas petri de plstico y designar como el Grupo D. Preparar y esterilizar a 200 ml de agar recuento en placa y mantener en un 44 a 46 C bao de agua. Preparar un cultivo de Enterobacter aerogenes se sabe que contiene 50 a 150 unidades formadoras de colonias / ml. Las pruebas preliminares que sean necesarias para lograr este rango de contaje. Se inoculan tres platos de cada grupo de ensayo con 0,1 ml y los otros tres platos de cada grupo con la cultura de 1 ml. Siga el mtodo de recuento en placa heterotrfica (Seccin 9215B) para todas las placas inoculadas y se incuba a 35 C durante 48 h. Contar con placas de 30 a 300 colonias y registrar los resultados en UFC / mL. b) Interpretacin de los resultados, la diferencia en el recuento promedio de las placas en los grupos A a D debe ser inferior al 15% si no hay efectos txicos o inhibidores. Las diferencias en el recuento de un promedio de menos del 15% entre los grupos A y B, y superior al 15% entre los grupos A y C indican que el detergente de limpieza tiene

propiedades inhibitorias que se eliminan durante el lavado de rutina. Las diferencias entre B y D ms del 15% indican un residuo inhibitorio est presente y utensilios de plstico no deben ser utilizados para los anlisis microbiolgicos. Un procedimiento de lavado, equipos, o el suministro de detergente puede ser necesaria. b. Utensilios y recipientes para la preparacin de los medios de comunicacin: Use utensilios y recipientes de vidrio de borosilicato, acero inoxidable, aluminio, u otros resistentes a la corrosin de materiales (vase la Seccin 9030). No utilizar los utensilios de cobre. c. Botellas de agua de dilucin: botellas de uso descritos en 99 ml y de vidrio de borosilicato no reactivo o de plstico con tapn de rosca equipadas con cubiertas inertes. Limpie antes de su uso. Botellas precargada con agua de dilucin disponibles en el mercado son aceptables. Antes del uso de cada lote o una prueba mucho realizar la esterilidad, marque una por lote o por un porcentaje fijo, por ejemplo, de 1 a 4%, el pH y el volumen (99 2 mL), y examinar las botellas de agua de dilucin de un precipitado, descartar si est presente . Vuelva a limpiar las botellas con cido si es necesario, y rehacer el agua de dilucin. Si se repite precipitado, obtener una fuente diferente de las botellas. Vuelva a revisar el volumen a intervalos regulares para determinar la tasa de prdida de volumen en condiciones de explotacin. Desechar por fecha de vencimiento. d. Botellas de muestra: El uso de boca ancha de vidrio de borosilicato no reactivo o botellas de plstico con tapn de rosca (el cual debe contener los revestimientos) o preparados comercialmente esterilizados bolsas de plstico con lazos de tamao suficiente para recoger la muestra que se necesita y an as tener un espacio libre suficiente para permitir que sacudir de la muestra en el contenedor. Limpiar y esterilizar los biberones antes de su uso y, dependiendo del uso, aadir agente de decloracin suficiente para neutralizar el cloro residual (9060A.2). Mnima de prueba para una botella de muestra esterilidad por lote se esterilizan en el laboratorio o en una botella de muestra por lote comprado como esterilizado, o en un porcentaje fijo como el 1 y el 4%. Documentar los resultados. Vuelva a esterilizar todo el lote o lotes, se produce el crecimiento. Verificar y registrar la eficacia del agente de decloracin, uno por cada partida o lote. Tambin, verificar la exactitud de la marca de 100 ml (si existe) y autofluorescencia propiedades (si se utiliza la fluorescencia cin de pruebas), una por cada lote. Registrar los resultados.

e. Multi-as bandejas y selladores: Cuando se utiliza para estudios de crecimiento, comprobar la esterilidad de mltiples bandejas y una por cada lote aadiendo aspticamente 100 ml de caldo de soja trptico u otro medio no selectivo, sello, e incubar a 35 0,5 C hasta 48 h. No indica el crecimiento de la esterilidad. Tenga en cuenta que si los pozos se vuelven muy turbia (lo que indica condiciones no estriles), podra haber produccin de gas y explosin concomitante entre los pozos. Evaluar el desempeo de sellado de la unidad de calor sellador mensual mediante la adicin de una o dos gotas de un colorante alimentario de color a 100 mL de muestra de agua desionizada, ejecute a travs de sellador, y comprobar visualmente cada pocillo de fugas. Realizar la limpieza y el mantenimiento preventivo de sellador anualmente o ms frecuentemente si es necesario. Placas de microtitulacin se utilizan en una variedad de procedimientos analticos, por ejemplo, la hibridacin de ADN y los estudios inmunolgicos, y puede contener> 96 pozos. El laboratorio debe examinar los pozos de la bandeja para mantener la coherencia y ejecutar los controles adecuados. El laboratorio puede ser necesario para desintoxicar las placas si su uso requiere. f. Grado reactivo agua: Use agua de grado reactivo para la preparacin de soluciones y medios de comunicacin y para el enjuague final de la cristalera. El agua debe ser demostrado estar libre de sustancias inhibitorias y bactericidas. La calidad del agua puede obtenerse de un sistema de purificacin de agua se diferencia con el sistema utilizado y su mantenimiento. Ver es 4d y E anteriores. Los lmites recomendados para la calidad de los reactivos de agua para el laboratorio de microbiologa se dan en la Tabla 9020: II. Si estos lmites no se cumplen, investigar y corregir o cambiar la fuente de agua. Aunque la medicin de pH del agua de grado reactivo se caracteriza por la deriva, las lecturas extremas son indicativos de contaminacin qumica. 1) Prueba de la calidad bacteriolgica-Esta prueba, tambin conocida como la prueba de aptitud del agua, se basa en el crecimiento de Enterobacter aerogenes en un mnimo de constitucin qumica definida de crecimiento medio. La presencia de un agente txico o de una sustancia promotora del crecimiento va a alterar la poblacin de 24 horas por un aumento o una disminucin del 20% o ms en comparacin con un control. Realizar la prueba al menos una vez al ao, cuando la fuente de agua de grado reactivo se cambia, y cuando se produce un problema analtico. Esta prueba de la calidad bacteriolgica no es necesario para el tipo de agua II o superior, tal como se define en el Standard Methods

(ediciones 18 y 19), la Seccin 1080C, o medio-calidad del agua o, mejor, tal como se define en el Standard Methods (Ediciones 20, 21, y en lnea ), la Seccin 1080C. Prueba para asegurar la calidad constante de esta agua para cumplir con estos estndares alternativos. La prueba es compleja, requiere habilidad y experiencia, y no es fcil de hacer de forma poco frecuente. Se requiere de un trabajo de ms de 4 d, un agua ultra pura de una fuente independiente como control, reactivos de alta pureza y la limpieza extrema de los frascos de cultivo, placas de Petri, tubos de ensayo, pipetas y otros equipos. un aparato) y material de uso de vidrio de borosilicato de todas las medidas, aunque preesterilizado placas Petri de plstico se puede utilizar en los pasos de galvanoplastia. Enjuague en agua bidestilada recin a partir de un alambique de cristal y luego esterilizar con calor seco, la esterilizacin por vapor a volver a contaminar estos elementos especialmente limpiado. La sensibilidad y reproducibilidad depender en parte de la limpieza de los contenedores de muestras, frasco, tubos y pipetas. A menudo es conveniente dejar a un lado la cristalera nueva para uso exclusivo en esta prueba. El uso de cualquier otra cepa de bacterias coliformes de tipo IMViC - - + + (E. aerogenes) obtenidos a partir de un agua a temperatura ambiente o la muestra de aguas residuales o la cultura de referencia. b) Los reactivos, deben utilizarse nicamente reactivos y productos qumicos de grado ACS. La sensibilidad est controlada en parte por la pureza de los reactivos. Preparar los reactivos en agua recin redestilado de un alambique de cristal de la siguiente manera: Solucin de citrato de sodio: Disolver 0,29 g de citrato de sodio, Na3C6H6O7 2H2O, en 500 ml de agua.

Solucin de sulfato de amonio: Disolver 0,26 g (NH4) 2SO4 en 500 ml de agua. Sal-mezcla: Se disuelven 0,26 g de sulfato de magnesio, MgSO4 7H2O, 0,17 g de cloruro de calcio, CaCl2-2H2O, 0,23 g de sulfato ferroso, FeSO4 7H2O y 2,50 g de cloruro sdico, NaCl, en 500 ml de agua. Solucin tampn fosfato / agua de dilucin: Diluir la solucin madre de fosfato buffer (9050C.1a) 1:25 en el agua. Hervir todas las soluciones de reactivo 1 a 2 minutos para matar las clulas vegetativas. Las soluciones de tienda en esterilizar con tapn de vidrio de botellas en la oscuridad a 5 C durante un mximo de varios meses, siempre y cuando se ponen a prueba para

determinar la esterilidad antes de cada uso. Debido a que la solucin de sal y la mezcla se desarrollar una ligera turbidez dentro de 3 a 5 das como la sal de hierro se convierte en estado frrico, preparar la solucin de sal y mezcla sin FeSO4 para almacenamiento a largo plazo. Para utilizar la mezcla, aadir una cantidad apropiada de sal de hierro recin preparada y cocida recin. Deseche las soluciones que con una turbidez fuerte y preparar una nueva solucin. Desechar si la solucin se vuelve turbia. c) Las muestras-Para preparar las muestras de prueba recolectar 150 a 200 ml de agua de grado reactivo de laboratorio y control (bidestilada) de agua estril en frascos de vidrio de borosilicato y dejar hervir durante 1 a 2 min. Evite ya hirviendo para evitar que los cambios qumicos. d) Procedimiento de etiquetas y cinco frascos o tubos, A, B, C, D y E. Aadir las muestras de agua, reactivos de los medios de comunicacin, y el agua bidestilada a cada frasco, como se indica en la Tabla 9020: III. Aadir una suspensin de E. aerogenes (IMViC tipo - - + +) de la densidad de tal manera que cada frasco se contienen de 30 a 80 clulas / ml, preparada segn se indica a continuacin. Las densidades de clulas por debajo de este rango de resultados de los ratios de inconsistentes, mientras que las densidades por encima de 100 clulas / ml en consecuencia disminucin de la sensibilidad de los nutrientes en el agua de ensayo. e) Preparacin de la suspensin bacteriana-El da antes de hacer la prueba de aptitud de agua destilada, inocular una cepa de E. aerogenes en un agar nutritivo inclinado con una pendiente de aproximadamente 6,3 cm de largo contenido en un 125 - X 16 mm con tapn de rosca tubo. Racha de toda la superficie del agar para desarrollar una pelcula continua de crecimiento e incubar 18 a 24 horas a 35 C. f) La recoleccin de clulas viables-Pipet 1 a 2 ml de agua de dilucin estril de un blanco de agua de 99 ml en los 18 - a 24 h la cultura. Emulsionar el crecimiento en la inclinacin por la vibracin, entonces la suspensin pipeta de nuevo en blanco original de agua de 99 ml. g) La dilucin de la suspensin bacteriana-Hacer una dilucin de 1:100 de la botella original en un blanco de agua en segundo lugar, una dilucin 1:100 de la segunda botella en un blanco de agua en tercer lugar, y una dilucin 1:10 de una tercera botella en un cuarto blanco de agua, agitando enrgicamente despus de cada traslado. Pipetear 1,0 ml de la dilucin cuarto (1:105) en cada uno de los frascos A, B, C, D y E. Este procedimiento se debe producir una dilucin final de los organismos a un rango de 30 a 80 clulas viables por mililitro de prueba solucin.

h) Verificacin de la densidad bacteriana, las variaciones entre las cepas del mismo organismo, los diferentes organismos, medios de comunicacin, y la superficie de pistas de agar, posiblemente, ser necesario ajustar el procedimiento de dilucin para llegar a un rango de densidad especfica entre 30 y 80 clulas viables. Para establecer el rango de crecimiento numrico de un organismo especfico y medianas empresas, realizar una serie de recuentos en placa de la dilucin de terceros para determinar la densidad bacteriana. Elegir el volumen adecuado de esta dilucin en tercer lugar, que cuando se diluyen en el 30 ml en frascos A, B, C, D y E, que contienen de 30 a 80 clulas viables / mL. Si los procedimientos son estandarizados en cuanto a superficie inclinada y la tcnica de laboratorio, es posible reproducir los resultados en experimentos repetidos con la misma cepa del microorganismo. i) Procedimientos dificultades, los problemas en este mtodo puede ser debido a: el almacenamiento de la muestra de agua en suave vidrio contenedores o en envases de vidrio sin revestimiento de las tapas de metal, el uso de productos qumicos en la preparacin de los reactivos de grado analtico no-reactivo o no de los ltimos fabricacin, la contaminacin del reactivo con el agua destilada con un fondo de bacterias (para evitar esto, hacer un recuento en placa heterotrfica en todos los medios y los reactivos antes de comenzar la prueba de aptitud, como un freno a la contaminacin de la solucin madre), la imposibilidad de obtener la densidad bacteriana o eleccin errnea de dilucin para obtener 24 horas de recuento en placa, retraso en placas de vertido, y la prolongacin del tiempo de incubacin ms all de 26 horas lmite, que provoca una respuesta de crecimiento insensibilizados. j) El clculo para el crecimiento-la inhibicin de sustancias: recuento de colonias / ml, matraz B Ratio = recuento de colonias / mL, Frasco A Una proporcin de 0,8 a 1,2 (inclusive) no muestra las sustancias txicas, una proporcin de menos de 0,8 muestra un crecimiento sustancias inhibidoras en la muestra de agua. Para las fuentes de nitrgeno y de carbono que promueven el crecimiento:

recuento de colonias / mL, Frasco C Ratio = recuento de colonias / mL, Frasco A Para las fuentes de nitrgeno que promueven el crecimiento:

recuento de colonias / mL, Frasco D Ratio = recuento de colonias / mL, Frasco A Para las fuentes de carbono que promueven el crecimiento de bacterias: recuento de colonias / mL, Frasco de E Ratio = recuento de colonias / mL, Frasco A No calcule los ltimos tres relaciones cuando la primera relacin indica una reaccin txica. Por estas razones un valor superior a 1,2 indica una fuente disponible para el crecimiento bacteriano. k) La interpretacin de los resultados El recuento de frasco A despus de 20 a 24 horas a 35 C depender del nmero de organismos inicialmente plantado en el frasco A y la cepa de E. aerogenes utilizados. Por esta razn, ejecutar el control, frasco A, para cada serie de pruebas individuales. Sin embargo, para una determinada cepa de E. aerogenes en las mismas condiciones ambientales, el nmero de terminales deben ser razonablemente constante, cuando la planta inicial es el mismo. La diferencia en la planta inicial de 30 a 80 ser de unos tres ms grandes de los 80 organismos inicialmente inoculado en el frasco A, siempre que la tasa de crecimiento se mantiene constante. Por lo tanto, es esencial que los cargos iniciales colonia en frascos A y B son aproximadamente iguales. Cuando la relacin es superior a 1,2, supone que el crecimiento estimulante de sustancias estn presentes. Sin embargo, este procedimiento es extremadamente sensible y ratios de hasta 3,0 tienen poca importancia en la prctica. Por lo tanto, si la relacin es entre 1,2 y 3,0, no hacer pruebas C, D y E, excepto en circunstancias especiales. Por lo general, C frasco ser muy bajo y frascos D y E tendrn una proporcin de menos de 1,2 cuando la relacin entre matraz B al matraz A se encuentra entre 0,8 y 1,2. Factores que limitan el crecimiento en un frasco son el nitrgeno y el carbono orgnico. Una cantidad muy grande de nitrgeno amoniacal sin carbono orgnico podra aumentar la proporcin de D frasco por encima de 1,2, o la ausencia de nitrgeno con la concentracin de carbono podra dar porcentajes por encima de 1,2 en E frasco, con una B, la relacin entre 0,8 y 1,2. Una relacin inferior a 0,8 indica que el agua contiene sustancias txicas, y esta relacin se incluyen todas las tolerancias permitidas. Como se indica en el prrafo anterior, la relacin podra ir tan alto como 3.0 de 1,2 sin ningn tipo de consecuencias indeseables.

Medidas correctivas especficas no pueden ser recomendados para todos los casos de aparatos defectuosos de destilacin. Sin embargo, hacer una inspeccin cuidadosa de los equipos de destilacin y la produccin de la revisin y manejo de agua destilada para ayudar a localizar y corregir la causa de la dificultad. Agua de alimentacin a un todava a menudo se pasa por una columna de ionizacin y un filtro de carbn. Si estas columnas estn bien cuidadas, la mayora de los contaminantes orgnicos e inorgnicos sern eliminados. Si el mantenimiento es deficiente, el agua de entrada puede ser degradada a una calidad inferior a la del agua del grifo primas. El mejor sistema de destilacin es de cristal de cuarzo o de alto contenido de slice contenido de borosilicato con resistencia trmica especial. Revestidas con estao imgenes fijas no son recomendables. Para la conexin de tuberas, el uso de acero inoxidable, vidrio de borosilicato, o especiales tubos de plstico de cloruro de polivinilo (PVC). Proteger los depsitos de almacenamiento de polvo.

1) Prueba de la sensibilidad-Tomando el cobre como una medida relativa de la toxicidad del agua destilada, la sensibilidad mxima de la prueba es de 0,05 mg Cu / L en una muestra de agua destilada. 2) El uso de pruebas para la evaluacin de agua de grado reactivo, los medios de comunicacin, y las membranas-Cuando una nueva fuente de agua de grado reactivo o un nuevo lote de medio de cultivo o de filtros de membrana se utiliza, la comprobacin de equivalencia de productos poniendo a prueba el lote actual en uso ( de referencia del lote) en contra de la gran prueba con la cultura de referencia se recomienda. No siempre es posible llevar a cabo la prueba de uso de nuevas fuentes de agua de grado reactivo, ya que el sistema anterior ya no estarn disponibles. a) Procedimiento de uso de un nico lote de control de agua (agua bidestilada o agua destilada pulidas por desionizacin), artculos de vidrio, filtros de membrana, o de otros materiales necesarios para controlar todas las variables excepto el factor en estudio. Realizar replicar verter o propagacin de placa o membrana de filtro de placa en las pruebas de referencia del lote y el lote de prueba, de acuerdo a los procedimientos en las secciones 9215 y 9222. Como mnimo, hacer los anlisis individuales en cinco muestras de agua de diferentes positivo para el organismo a combatir o los controles de la cultura de densidad conocida. Anlisis repetidos y de muestras adicionales pueden ser probados

para aumentar la sensibilidad de la deteccin de diferencias entre la referencia y un montn de pruebas. Al llevar a cabo la prueba de uso de agua de grado reactivo, realizar las pruebas cuantitativas de bacterias en paralelo con las conocidas de alta calidad del agua, control de agua. Preparar la dilucin / enjuague de agua y medios de comunicacin con nueva fuente de agua de grado reactivo y el control. Prueba con agua para todos los usos (dilucin, aclarado, la preparacin de los medios de comunicacin, etc.) b) Contar y clculos-Despus de la incubacin, las colonias de bacterias a partir de comparar los dos lotes de tamao y apariencia. Si las colonias en las placas de prueba de muchos son atpicos o ms pequeo que las colonias en las placas de referencia del lote, el registro de pruebas de inhibicin o cualquier otro problema, independientemente de las diferencias cuentan. Contar con placas y calcular la cuenta individual por 1 ml por 100 ml. Transformar el recuento de los logaritmos y entrar en el registro de resultados transformado para los dos lotes en columnas paralelas. Calcular la diferencia, d, entre los dos resultados transformado para cada muestra, incluyendo el signo + o -, la media, d, y la desviacin estndar sd de estas diferencias (vase la Seccin 1010B). Calcular estadstica de la t de Student, utilizando el nmero de muestras como n: d Estos clculos se pueden hacer con diferentes paquetes de software estadstico para computadoras personales. c) Interpretacin-Utilice el valor t crtico de la tabla de t de Student para la comparacin con el valor calculado. En el nivel de significacin de 0.05 este valor es 2,78 para cinco muestras (cuatro grados de libertad). Si el valor t calculado no exceda de 2,78, los lotes no producen resultados muy diferentes y el lote de prueba es aceptable. Si el valor de t calculada supera 2,78, los lotes de producir resultados significativamente diferentes, y el lote de prueba es inaceptable. Los paquetes de software estn disponibles para su uso en ordenadores personales para realizar estos clculos. Si las colonias son atpicos o sensiblemente menor en el lote de prueba o la t de Student supera 2,78, examinar las condiciones de prueba, repita la prueba, y / o rechazar el lote de prueba y obtener otra. g. Reactivos: 26 Porque los reactivos son una parte integral de los anlisis microbiolgicos, la calidad debe estar garantizada. Use solamente productos qumicos de grado ACS o su equivalente porque las impurezas pueden inhibir el crecimiento

bacteriano, aportan nutrientes, o no produce la reaccin deseada. El mantenimiento de cualquier Material Safety Data Sheets (MSDS), siempre con los reactivos o las normas y tener a disposicin de todo el personal. Productos qumicos y reactivos de la fecha cuando se reciben y cuando abri por primera vez para su uso. Mantener registros de recepcin, de caducidad, y posterior elaboracin. Durante la preparacin de los reactivos a temperatura ambiente, los reactivos a volumen en matraces aforados, y la transferencia para el almacenamiento de buena calidad o de plstico inerte borosili cate-botellas de vidrio de borosilicato con polietileno, o de otros tapones de plstico o tapas. Etiqueta con el nombre de los reactivos preparados, la concentracin, la fecha de preparacin, el nombre del preparador y fecha de caducidad si se conoce. Almacenar en condiciones adecuadas y de descarte por fecha de vencimiento. Incluyen cultivos de control positivos y negativos en cada serie de pruebas culturales y bioqumicas. h. Tintes y colorantes: En los anlisis microbiolgicos, qumicos orgnicos se utilizan como agentes selectivos (por ejemplo, verde brillante), los indicadores (por ejemplo, rojo fenol), y las manchas (por ejemplo, la tincin de Gram). Colorantes de los proveedores comerciales varan de un lote a otro en medio de contraste por ciento, el complejo colorante, insolubles, y los materiales inertes. Debido a los tintes para microbiologa debe ser de fortaleza y estabilidad para producir reacciones correctas, uso de tintes slo ha sido homologado por la Comisin de manchas biolgicas. Compruebe manchas bacteriolgicos antes de su uso por lo menos una cultura de control positivo y otro negativo y registrar los resultados. Para las manchas fluorescentes, prueba de reactividad positiva y negativa de cada da de uso. i. Los filtros de membrana y los cojines: La calidad y el rendimiento de los filtros de membrana varan con el fabricante, tipo, marca, y mucho, como resultado de diferencias en los mtodos de fabricacin, materiales, control de calidad, condiciones de almacenamiento, y application.27 1) Especificaciones de los fabricantes de filtros de membrana y las almohadillas para los anlisis de agua debe cumplir con las especificaciones estndar para las caractersticas de retencin, recuperacin, extrables, y velocidad de flujo. Algunos fabricantes proporcionan informacin adicional a la requerida por las especificaciones y certificar que sus membranas son satisfactorios para el anlisis de agua. Que informe de la retencin, el tamao del poro, el caudal, la esterilidad, pH, porcentaje de recuperacin y lmites especficos para extractables qumicas orgnicas e

inorgnicas. A pesar de las pruebas de la membrana de filtro estndar de evaluacin se han desarrollado para los fabricantes, un laboratorio puede realizar sus propias pruebas, si lo desea. 2) El uso de pruebas de cada nuevo lote de filtros de membrana debe realizar de manera satisfactoria en la prueba de uso para asegurar que no produce recuperaciones bajas, la diferenciacin de los pobres, o malformacin de las colonias debido a la toxicidad, composicin qumica, o defectos estructurales. Para el procedimiento, vase f2) anterior. 3) Pruebas de control de calidad estandarizados mantener inspeccionar cada lote de membranas antes de su uso y durante la prueba para asegurarse de que son redondos y flexibles. Crticamente para ver si mucha fragilidad se mantiene durante uno o ms aos. Descartar un montn mostrando su fragilidad. Nmero de registro de lote y fecha de recepcin para mantener un registro de tiempo en el laboratorio. Confirmar la esterilidad por ausencia de crecimiento en un filtro de membrana se coloca sobre una toalla saturada con el caldo de triptona extracto de la glucosa (o su equivalente no selectivo caldo o agar) e incubadas a 35 0,5 C durante 24 h, o mediante la ejecucin de un control de esterilidad para cada prueba de anlisis de ejecucin. Despus de la incubacin de la muestra, las colonias deben estar bien desarrollados con el color y la forma apropiados segn lo definido por el procedimiento de prueba. La tinta de las lneas de divisin no debe canalizar el crecimiento a lo largo de la lnea de tinta, ni restringir el desarrollo de la colonia. Las colonias deben ser distribuidos uniformemente a travs de la superficie de la membrana. Rechazar mucho membrana si estos criterios no se cumplen y, informar al fabricante. j. Los medios de cultivo: Debido a los mtodos de cultivo dependen de los medios de comunicacin debidamente preparados, utilizamos los mejores materiales disponibles y tcnicas consistentes en la preparacin de los medios de comunicacin, almacenamiento y aplicacin, y preparar el medio correcto para la aplicacin deseada. Para el control de calidad, el uso de medios preparados comercialmente disponibles, pero cada vez que tenga en cuenta que estos medios pueden variar en calidad entre los fabricantes e incluso entre lotes del mismo fabricante. Por esta razn, una prueba de uso se recomienda para confirmar que el nuevo lote de medios de comunicacin es equivalente a los medios de comunicacin ms. Tambin es la responsabilidad del laboratorio para asegurar que los medios de comunicacin cumplen con los requisitos microbiolgicos

de promocin del crecimiento mediante la ejecucin de la cultura, tanto controles positivos y negativos que tiene una densidad estimada en tanto el lote de los medios antiguos y los nuevos medios de comunicacin mucho. El mantenimiento de cualquier MSDS. Para los medios de comunicacin de las cantidades que no duran ms de un ao, preferiblemente no ms de 6 meses despus de la apertura. Para los medios de comunicacin preparados comercialmente en cantidades tales que es utilizado por la fecha de caducidad del fabricante. Utilice los medios de comunicacin en una primera en entrar, primero en salir. Cuando los medios prcticos, el orden en pequeas cantidades, por ejemplo, de 0,25 libras o 125 g, en lugar de botellas de 1 libra o 500 g, para mantener la oferta sellada el mayor tiempo posible. Tipo de registro, la cantidad y la aparicin de los medios de comunicacin recibidas, nmero de lote, fecha de vencimiento, y las fechas de recepcin y apertura de en un registro o archivo de computadora, tambin la fecha de vencimiento y lugar de la fecha de apertura en el recipiente. Verificar el inventario trimestral de reordenamiento. Guarde todos los medios de comunicacin en condiciones controladas para asegurar la calidad hasta la fecha de vencimiento. Almacene el material deshidratado en un envase hermticamente cerrado en un lugar fresco (15 a 25 C), seco, controlado por la temperatura ambiente o secador de la luz solar directa. Deseche los medios de comunicacin que la torta de color o muestran otros signos de deterioro. Deseche los medios de comunicacin utilizados por la fecha de caducidad del fabricante. Un lmite de tiempo conservador para botellas sin abrir es de 2 aos a temperatura ambiente. El uso de los medios de comunicacin ha caducado, no se recomienda. Comparar la recuperacin del crecimiento de los lotes que acaba de adquirir los medios de comunicacin en contra de un montn demostrado, a partir de cultivos de referencia, preferentemente, o los ltimos aislamientos en cultivo puro, o muestras naturales [vase f2) arriba], porque muchos-a-lot variabilidad puede ocurrir. Use los frascos abiertos de los medios de comunicacin dentro de 6 meses. Medios deshidratados son higroscpicos, evitar el exceso de humedad. Botellas de cerca tan firmemente como sea posible, inmediatamente despus de su uso. Si apelmazamiento o decoloracin de los medios de comunicacin ocurre, deseche los medios de comunicacin. Guarde los frascos abiertos en el desecador si est disponible. 1) Preparacin de los medios de comunicacin-Preparar los medios de comunicacin en recipientes limpios, que son al menos el doble del volumen del medio de preparacin.

Prepare los medios de comunicacin utilizando el reactivo de calidad del agua. Medir los volmenes de agua y los medios de comunicacin con los egresados o pipetas conforme a los estndares del NIST y APHA, respectivamente. No utilizar pipetas de soplado. Use TD (para entregar) pipetas. Revuelva los medios de comunicacin, en especial agar, mientras se calienta. Evitar que se queme o hervir, mediante el uso de un bao de agua hirviendo para lotes pequeos de los medios de comunicacin y mediante la continua atencin a mayores volmenes se calienta en una placa caliente o quemador de gas. Utilizar preferentemente caliente de placas magnticas combinaciones agitador. Etiqueta y los medios de comunicacin la fecha de preparacin. Verificar y registrar el pH de una parte de cada medio despus de la esterilizacin. Este es el pH real necesaria para un crecimiento adecuado. Ajuste de pH rara vez ser necesario cuando los medios de comunicacin disponibles en el mercado se utilizan. Si es necesario, realizar ajustes menores en el pH se especifica en la formulacin con filtro esterilizado NaOH 1N o HCl 1JV soluciones. Si la diferencia de pH es mayor a 0,5 unidades, descarte el lote y revisar las instrucciones de preparacin y el pH del agua de grado reactivo para resolver el problema. Si el medio se conoce como requiere el ajuste del pH, ajustar el pH adecuado antes de la esterilizacin y el pH final de registro. Valores incorrectos de pH puede ser debido al agua de calidad reactivo, el deterioro del medio, o una preparacin inadecuada. Revise las instrucciones para la preparacin y comprobar el pH del agua. Si el pH del agua no es satisfactoria, preparar un nuevo lote de medio uso de agua de una fuente nueva (vase s 4d y e). Si el agua es medio satisfactorio, remake y comprobar el pH, si el pH es de nuevo incorrecto, preparar el medio con un lote diferente o fuente. Ciertos medios de aislamiento especfico elaborado con cidos orgnicos o grasos se muestran cambios marcados en la esterilizacin de pH siguientes. Actividades de preparacin de documentos, como el nombre del medio, el volumen producido, el formato, el pH final, la fecha de preparacin, y el nombre del preparador. Registro de los problemas de pH en el libro de registro de los medios de comunicacin e informar al fabricante si el medio est indicado como la fuente de error. Examinar los medios de comunicacin preparado para un color raro, oscuro, o la precipitacin, y las observaciones de registro. Considerar las variaciones del tiempo de esterilizacin y la temperatura como posibles causas de problemas. Si cualquiera de los anteriores se produce, se elimina el medio.

2) La esterilizacin a esterilizar los medios de comunicacin a 121 C como mximo para el tiempo mnimo indicado. Siga las instrucciones del fabricante para la esterilizacin de los medios de comunicacin especficos. El tiempo de exposicin requerido vara con la forma y tipo de material, tipo de medio, la presencia de hidratos de carbono, y el volumen. Mesa 9020: IV da las pautas para los elementos tpicos. No exponga los medios de comunicacin que contienen hidratos de carbono a las elevadas temperaturas de ms de 45 min. Tiempo de exposicin se define como el perodo comprendido entre la exposicin inicial al calor de su eliminacin del autoclave. El sobrecalentamiento de los medios de comunicacin puede resultar en la degradacin de nutrientes. Mantener registros de impresin. Retire el medio de autoclave esteriliza tan pronto como la cmara de presin llegue a cero o, si es un modelo totalmente automtico se utiliza, tan pronto como se abre la puerta. Tenga mucho cuidado para evitar una ebullicin ms debido a los lquidos sobrecalentados. No los medios de comunicacin reautoclave. Esterilizar soluciones sensibles al calor o los medios de comunicacin por filtracin a travs de un filtro de 0,2 JNM de poro de dimetro en una filtracin estril y aparatos de recepcin. Filtro y vierta medio en una campana de flujo laminar o flujo laminar del gabinete de seguridad si est disponible. Esterilizar material de vidrio (pi-mascotas, cajas de Petri, frascos de muestra) en un autoclave o en un horno de aire caliente de esterilizacin (170 10 C durante un mnimo de 2 h). Esterilizar el equipo, suministros y otros materiales slidos o secos que son sensibles al calor, al exponer al xido de etileno en un esterilizador de gas. Use tiras de esporas disponibles en el mercado o suspensiones para comprobar el calor seco y la esterilizacin por xido de etileno. 3) El uso de agares y caldos-Temper agar fundido en un bao de agua a <50 C, preferentemente de 44 a 46 C, hasta su uso, pero no por ms de 3 h. Para monitorear la temperatura del agar, exponer a una botella de agua u otro medio a la misma calefaccin y refrigeracin condiciones que el agar. Inserte el termmetro en la botella de control para determinar cuando la temperatura es adecuada para su uso en placas de colada. Aadir soluciones sensibles al calor, por ejemplo, los antibiticos, al agar templado. Preparacin de los medios de comunicacin por lo menos 2 das antes de las pruebas, se recomienda que haya tiempo suficiente para la esterilidad y las pruebas de control de la cultura positiva y negativa a realizar y leer. Si un medio de agar no se vierte, pero se deja solidificar a su uso posterior, refundir los medios de agar en agua hirviendo, el

vapor que fluye, o en el microondas de baja potencia, el uso, y luego descarte el resto. Agar se puede fundir una sola vez. El volumen dispensado va a cambiar en relacin con el tamao de la placa de Petri y su uso previsto. Invertir las placas tan pronto como medio de vertido se ha solidificado. Manejar tubos de medios de fermentacin estriles con cuidado para evitar la oclusin de aire en Durham (interior) de los tubos, lo que produce falsos resultados positivos. Examinar los tubos recin preparado para determinar que las burbujas de gas estn ausentes en los tubos de Durham. 4) El almacenamiento de los medios de comunicacin-Preparar los medios de comunicacin en las cantidades que se utilizarn en la celebracin de los plazos fijados en la tabla 9020: V. Un nuevo medio es necesario para asegurar el aislamiento adecuado de los microorganismos objetivo, especialmente para las bacterias estresadas o heridos a travs del proceso de desinfeccin. Para preparado y listo para usar los medios de comunicacin con fecha de vencimiento mayor que el observado en la tabla, tiene la evidencia de suministro del fabricante de la calidad de los medios de comunicacin para ese perodo de tiempo prolongado de un fabricante. Comprobar la facilidad de uso semanal de las pruebas de recuperacin con densidades conocidas de los controles de la cultura que tambin cumplen con los requisitos de control de calidad control. Control de contenido de humedad es importante porque la recuperacin y la selectividad puede ser modificada con un almacenamiento prolongado. Cuando los medios se utilizan con fines de investigacin, establecer los medios de comunicacin las fechas de vencimiento y documentar los resultados. Proteger preparado en el laboratorio y la compra de medios preparados que contienen los tintes de la luz, si se producen cambios de color, deseche los medios de comunicacin. Refrigere vertido placas de agar no se utiliza en el da de la preparacin. Para prevenir la deshidratacin, el sello placas de agar en bolsas de plstico u otro recipiente cerrado, si se llevar a cabo ms de 2 d. Placas tienda invertida con el fin de evitar la condensacin de caer en el medio. En los casos donde el condensado se ha formado, considere colocar placas brevemente en un 35-37 C incubadora. Para los medios de comunicacin en tubos de ensayo apretar las tapas antes de su almacenamiento. Pesar las placas o la marca de nivel de lquido en varios tubos (10% de cada lote) despus de la esterilizacin y el monitor de la prdida de lquido por peso o volumen almacenado por ms de 2 semanas. Si la prdida es del 10% o ms, desechar el lote. Deseche todos los platos de petri con medios slidos que

han sido almacenadas por ms de 2 semanas; desecharlos antes si se seca, por ejemplo, arrugada, agrietada, o picados. Si los medios de comunicacin son refrigerados, llevar a temperatura ambiente antes de su uso y rechazar el lote si el crecimiento o falsos positivos estn presentes. Preparados caldos y agares estriles disponibles en el mercado puede ofrecer ventajas cuando los anlisis se realizan de forma intermitente, cuando el personal no est disponible para el trabajo de preparacin, o cuando el coste se puede equilibrar con otros factores de operacin del laboratorio. Comprobar el funcionamiento de estos medios de comunicacin tal como se describe en el s 5) a 7) a continuacin. 5) El uso de pruebas Asunto tanto preparado en el laboratorio y la compra de medios para la prueba de uso. Para el procedimiento, vase f2) anterior. 6) El control de calidad del preparado en el laboratorio de medios-Mantener en un libro encuadernado un registro completo de cada lote de medio preparado en el laboratorio con la fecha y el nombre del preparador, el nombre y nmero de lote del medio, la cantidad de medio peso, el volumen de medio preparado, tiempo de esterilizacin y la temperatura, ajuste de pH es necesario, pH final, y los preparativos de los componentes lbiles. Comparar la recuperacin cuantitativa de los nuevos lotes con los anteriormente aceptables [ 5) anterior], con el microorganismo de inters. Incluir el control de esterilidad y control de medios de control positivo y negativo de cultivo para determinar la especificidad de todos los medios de comunicacin como se describe a continuacin. Los controles de la cultura puede ser utilizado para detectar la promocin del crecimiento y la selectividad media, y para controlar la tcnica de los analistas. Una buena prctica de laboratorio es desafiar a los medios de comunicacin peridicamente preparado con un nmero bajo de un microorganismo apropiado. El crecimiento se vera afectada por los medios de comunicacin de calidad y preparacin de los medios de comunicacin, la esterilizacin, el tiempo de almacenamiento, y las condiciones de almacenamiento. 7) El control de calidad de los medios de comunicacin comprados preparado a la expedicin de productos listos para usar los medios de comunicacin no debera invalidar cualquiera de los medios de comunicacin la celebracin de los tiempos o las condiciones descritas anteriormente. El fabricante debe proveer informacin de validacin si las condiciones de envo son de otra manera. Las fechas de registro de recepcin y de caducidad, nmero de lote, y luego medir y medianas registro. Almacenar las instrucciones del fabricante y de descarte por fecha de vencimiento.

Comparacin de la recuperacin cuantitativa, como se indica en el 5) anterior, se recomienda. Prueba cada nuevo lote de esterilidad y con cheques cultura control positivo y negativo. Para comprar preparados los medios de comunicacin que tienen una mayor vida til que las preparadas en el laboratorio, realizar estas pruebas con ms frecuencia. 6. Procedimientos Operativos Estndar (POE) 29 a 31 SOP genricos y especficos son la columna vertebral de funcionamiento de un laboratorio de anlisis y estn diseados para prevenir las desviaciones derivadas de una mala interpretacin de un proceso o un mtodo. Cada SOP especficos describe en una manera paso a paso los detalles de una tarea o procedimiento que se realiza en forma rutinaria, adaptada a los equipos propios del laboratorio, instrumentacin y tipos de muestras. Estas operaciones de laboratorio incluyen la preparacin de reactivos,

agua de grado reactivo, normas, medios de cultivo, el uso apropiado de los saldos, las prcticas de esterilizacin, procedimientos de lavado y eliminacin de material contaminado, as como los mtodos de muestreo, anlisis de muestras, la cadena de custodia, mantenimiento de registros, y procedimientos para el control de calidad. Simple cita de un mtodo publicado analtico no es un POE, a pesar de que la informacin se pueden consolidar en SOP propios del laboratorio. SOP son nicas en el laboratorio y son escritas por la persona que est haciendo el trabajo y firmado, aprobado por el supervisor, con la fecha de vigencia indicada. Siga el SOP como est escrito y mantenerlos actualizados a travs de revisiones de rutina y accesible a todo el personal necesario. Cuando los cambios son necesarios, los documentos y tienen el SOP fue recontratado. Mantener SOP obsoletos en los archivos de una posible referencia futura. El uso constante de los PNT ayuda a asegurar que las operaciones de uniforme. Tambin proporcionan una herramienta de formacin slida y un medio para determinar la competencia al realizar una evaluacin. 7. Muestreo El laboratorio en general, no est involucrado en la toma de muestras reales, pero el personal necesita estar bien informado sobre los diferentes aspectos de la recogida de muestras process.30 a. Planificacin: Los microbilogos deben participar en la planificacin de los programas de vigilancia que se incluir un anlisis microbiano. Ellos pueden proporcionar una valiosa experiencia en la seleccin de los sitios de muestreo, muestreo

de profundidad, nmero de muestras y los anlisis necesarios, la carga de trabajo, y los suministros. De las aguas naturales, el conocimiento de las densidades microbianas probable, y el impacto de los patrones de la temporada, el clima, las mareas y el viento, las fuentes de contaminacin conocidas, y otras variables, son necesarios para formular el plan de muestreo ms eficaz. Adems, el microbilogo puede indicar cuando muestras idnticas sern necesarios, por ejemplo, cuando una nueva fuente de agua est poniendo a prueba o una muestra se est recogiendo de un rea diferente de la misma localidad. De vigilar el cumplimiento, el plan de muestreo debe ser aprobado por el Estado. b. Mtodos: Los planes de muestreo debe ser especfico para cada sitio de muestreo y sobre la base de diseos apropiados de muestreo estadstico. Orientacin de muestreo antes slo puede ser de carcter general, la direccin de ING los factores que deben ser considerados para cada sitio. SOP muestreo describir el equipo de muestreo, las tcnicas, la frecuencia y tiempos y condiciones, las reglas de seguridad, etc, que sern utilizados en diferentes condiciones para diferentes sitios para garantizar la integridad de la muestra y su representatividad. A partir de la informacin de estos planes de muestreo SOP puede ser elaborado. c. Aceptacin de la muestra: El laboratorio debe determinar si la integridad de la muestra, la celebracin de las condiciones y el tiempo, y la documentacin adjunta son aceptables para el uso previsto de los datos resultantes. 8. Mtodos Analticos a. Seleccin del mtodo: los medios de comunicacin, la temperatura, el tiempo a la temperatura de incubacin, y pequeas variaciones en las tcnicas son factores que deben aplicarse de manera coherente para la recuperacin microbiana apropiada para la determinacin cualitativa y cuantitativa. Para evitar cambios significativos en los resultados, los mtodos microbiolgicos deben ser normalizados, de manera que resultan de datos uniforme de varios laboratorios. Seleccionar los mtodos analticos adecuados para el tipo de muestra de los mtodos estndar u otras fuentes de estandarizado mtodos de

mtodos y asegurar que los mtodos han sido debidamente validada en un estudio de varios laboratorios con los tipos de muestras de inters. El laboratorio debe validar cualquier nuevo mtodo o el mtodo estndar para ser utilizado en el laboratorio y cualquier mtodo que se utiliza para una matriz no especifica este mtodo.

b. Los objetivos de los datos: Examinar los mtodos disponibles y determinar las mejores que producen los datos de satisfaccin de las necesidades del programa para la precisin, el sesgo, la especificidad, la selectividad, lmite de deteccin, y la eficiencia de recuperacin en las condiciones reales de ensayo. Los mtodos que son rpidos, baratos y menos mano de obra-son deseables, pero no si las medidas de verificacin estn mucho tiempo o si los datos obtenidos no se reunir con el programa o las necesidades del cliente. c. Control de calidad interno: por escrito los mtodos analticos de control de calidad necesario contener los controles para asegurar la calidad de los datos, tales como el uso de cultivos de control positivos y negativos, en blanco mtodo de esterilidad, se replican los anlisis (de precisin), y cultivos de bacterias que tienen un nivel de densidad conocida por los mtodos cuantitativos. d. SOP mtodo: Como parte de la serie de SOP, proporcionar a cada analista con una copia de los procedimientos analticos escritos en forma gradual tal y como se van a realizar y especfico para el tipo de muestra, el equipo y los instrumentos utilizados en el laboratorio. 9. Procedimientos analticos de control de calidad establecidos para Methods6-8, 18,32 a. Procedimientos generales de control de calidad: 1) Analista colonia contar la variabilidad de rutina para la evaluacin desempeo, repita cuenta con una o ms muestras positivas por lo menos los resultados mensuales, registrar y comparar los recuentos con las de otros analistas de pruebas de las mismas muestras. Cuenta para replicar el mismo analista, deben ponerse de acuerdo dentro del 5% (dentro de repetibilidad analista de contar) y las relaciones entre los analistas deben ponerse de acuerdo dentro del 10% (entre los analistas de la reproducibilidad de contar). Si no estn de acuerdo, iniciar investigaciones y cualquier accin correctiva necesaria. Ver 9020B.13b de un clculo estadstico de la precisin de los datos. 2) control positivo y negativo culturas-Use las culturas de referencia certificados. Para cada lote de medio de recibido, cada lote de laboratorio preparado de medio, y cada lote de medio preparado comprado, verificar la respuesta adecuada a las pruebas con conocidos cultivos de control positivos y negativos para el organismo (s) bajo prueba. Registrar los resultados. Obtener cultivos de referencia certificados de nivel nacional o internacional reconocido o fuentes de referencia de las culturas impregnadas en discos o cintas de establecer fuentes comerciales. De la cultura de referencia, la subcultura de

desarrollar una o ms de trabajo principal stocks.33 minimizar las transferencias posteriores, es decir, la transferencia a un nuevo medio para promover el crecimiento, para asegurar que los cultivos de mantener la identidad fenotpica y genotpica y para reducir la contaminacin potencial. Comprobar peridicamente para asegurar la viabilidad y el rendimiento. Para cada lote de medio, comprobar los procedimientos de anlisis de las pruebas con conocidos cultivos de control positivos y negativos para el organismo (s) bajo prueba. Registrar los resultados. Ver Tabla 9020: VI ejemplos de cultivos de ensayo. De un laboratorio de tratamiento de aguas residuales sin las instalaciones para mantener un cultivo puro, el uso de un solo uso las tiras de la cultura o someterse a otro laboratorio para su anlisis. 3) Duplicar analyses34 ,35-cuantitativa de precisin de los resultados analticos cuando se cuentan las colonias de la placa se evala a travs de anlisis repetidos. Realizar anlisis duplicado por lo menos una vez al mes o ms frecuencia como sea necesario, por ejemplo, el 10% de las muestras cuando sea requerido por el mtodo de anlisis o los reglamentos, una muestra por cada ejecucin de prueba, o una muestra por semana por un laboratorio que lleva a cabo a menos de 10 pruebas / semana. Una prueba de funcionamiento se define como una serie ininterrumpida de anlisis. Evaluar y registrar los resultados. Un volumen de muestra adecuado es esencial. Balance de la frecuencia de anlisis repetidos contra el tiempo, esfuerzo y los gastos necesarios. Cuando el laboratorio o el analista es el primer inicio de un mtodo o de un mtodo o una matriz en la que una considerable variabilidad en los resultados que se espera, un mayor esfuerzo tendr que ser invertido en la realizacin de anlisis repetidos. Anlisis repetidos de muestras ambientales puede resultar en cargos muy diversos y pueden ser considerados slo estimados. 4) La esterilidad comprueba los ensayos de esterilidad los medios de comunicacin antes del primer uso. Incubar un mnimo por lote o por un porcentaje fijo, por ejemplo, de 1 a 4%, de laboratorio preparados y listos para su uso medio, el caldo o agar, a una temperatura adecuada para la cantidad de tiempo que la prueba se llevara a cabo, por ejemplo, , 48 h para los coliformes, y observar para el crecimiento. Para las pruebas de la enzima sustrato de tolerancia, de la esterilidad mediante la adicin de los medios de comunicacin de paquetes de 100 ml de agua desionizada estril e incubando a 35 C durante 18 a 24 h. Ciertos granulado listo para usar enzima-sustrato medios de comunicacin no pueden ser estriles, pero slo es libre de coliformes, el uso de caldo

no selectivo puede resultar en el crecimiento y la turbiedad, pero no debe producir una reaccin positiva. Compruebe cada nuevo lote (o lotes, si comercialmente preparados) de agua tamponada de esterilidad antes de usarlo por primera vez por la adicin de 50 ml de agua a 50 ml de un caldo de doble potencia (por ejemplo, de soja trptico, de tripticasa de soja o caldo de triptosa). Por otra parte, pasar aspticamente 100 ml o ms de agua de dilucin a travs de un filtro de membrana y el filtro de lugar en medio no selectivo. Incubar a 35 0,5 C durante 24 horas y observar para el crecimiento. Registrar los resultados. Si la contaminacin se indica, deseche medio, anular todos los datos asociados con ese lote, y compruebe que la fuente de contaminacin. Solicitud de nuevo muestreo inmediato. Para las pruebas de filtro de membrana, controlar la esterilidad de todo el proceso mediante el uso de reactivos estriles o como agua de dilucin de la muestra al inicio y al final de cada serie de filtracin de muestras y de pruebas para el crecimiento. Con una interrupcin de la tramitacin de ms de 30 minutos utiliza nuevos embudos esterilizados y repetir la prueba de esterilidad. Registrar los resultados. Si la contaminacin se indica, la nulidad de los datos asociados a ese lote y buscar la fuente. Solicitud de nuevo muestreo inmediato y volver a analizar. Para mltiples tubos y los procedimientos de presencia-ausencia, comprobar la esterilidad de los medios preparados y agua de dilucin como se describe anteriormente. Si la contaminacin se indica, determinar la causa y rechazar los datos analticos de las muestras analizadas con estos materiales. Solicitud de nuevo muestreo inmediato y volver a analizar. Para verter los procedimientos de la placa de comprobar la esterilidad mediante el vertido de al menos una placa inoculado por lote o terreno de los medios de comunicacin y registrar los resultados. Si la contaminacin se indica, determinar la causa. Documento tanto del problema y las acciones correctivas y remuestreo solicitud. Los laboratorios interesados en la identificacin de contaminantes puede utilizar cualquiera de los sistemas estandarizados de pruebas fenotpicas o genotpicas procedimientos. 5) La precisin de methods33 cuantitativa, de 34 Calcular la precisin de los anlisis repetidos para cada tipo de muestra examinada, por ejemplo, agua potable, agua a temperatura ambiente, o aguas residuales, de acuerdo con el siguiente procedimiento y registrar los resultados:

Realizar anlisis duplicado en los primeros 15 muestras positivas de cada tipo de matriz, con cada juego de duplicados analizados por un solo analista. Si hay ms de un analista, incluyen todos los analistas regularmente se ejecutan las pruebas, con cada analista realiza un nmero aproximadamente igual de pruebas. Registro duplicado anlisis como Z) 1 y D2. Calcular el logaritmo de cada resultado. Si cualquiera de un conjunto de resultados duplicados es <1, aadir un tanto a los valores antes de calcular los logaritmos. Calcular el rango (R) para cada par de duplicados transformado como la media (R) de estos rangos. Ver clculo de la muestra en la Tabla 9020: VII. A partir de entonces, analizar el 10% de las muestras de rutina en ejecutar un duplicado o por prueba. Transformar los duplicados y calcular su rea de distribucin que el anterior. Si el rango es mayor que 3.27R, no es superior al 99% de probabilidad de que la variabilidad de laboratorio es excesivo, en cuyo caso, deseche todos los resultados analticos desde la ltima verificacin de precisin (vase la Tabla 9020: VIII). Identificar y resolver el problema de anlisis antes de realizar nuevos anlisis. Actualizar peridicamente repetir los procedimientos con los conjuntos ms reciente de 15 resultados duplicados. 10. Verificacin La verificacin es un proceso general que se utiliza para determinar si el mtodo de anlisis microbiolgicos funciona como se esperaba para proporcionar datos fiables. Si el laboratorio encuentra un bajo porcentaje de verificacin con un suministro de agua determinada o de la matriz, otro mtodo de prueba debe ser elegido. En su mayor parte, los procedimientos de confirmacin / verificacin para el agua potable difieren de los de otras aguas debido a los requisitos reglamentarios. El siguiente es un breve resumen, ms informacin se puede encontrar en los debates pertinentes de microorganismos especficos o de un grupo de microbios. a. De tubos mltiples de fermentacin (MTF) mtodos: 1) de coliformes totales procedimiento (9221B) a) Llevar agua potable a travs de pruebas de la fase confirmado solamente. El ensayo se realiza no es necesario. Para efectos de control de calidad, si normalmente no hay resultados positivos dentro de un trimestre, analizar por lo menos una muestra positiva fuente de agua para confirmar que los medios y procedimientos de laboratorio y equipo de produccin de respuestas apropiadas. Para las muestras con una historia de fuerte crecimiento sin gas en la

presuncin de la fase tubos, llevar los tubos a travs de la fase confirmado para comprobar si hay falsos

las respuestas negativas de bacterias coliformes. Verifique todos los aspectos positivos de coliformes (fecales) coliformes o E. coli. b) Otros tipos de agua-La verificacin puede lograrse mediante la realizacin de la fase termin con una frecuencia establecida por el laboratorio, como el 10% de muestras positivas, o una muestra por cada ejecucin de prueba, o un porcentaje determinado dependiendo de la carga normal de trabajo de laboratorio. Para los grandes laboratorios el anlisis de un nmero significativo de muestras diarias, el 10% de muestras positivas puede resultar en una carga innecesaria y un porcentaje menor puede ser utilizado. 2) estreptococos fecales procedimiento-La verificacin puede ser realizado como se indica en 9230C.5 a una frecuencia establecida por el laboratorio. El crecimiento de la catalasa-negativos, cocos gram-positivos que aparecen como colonias de color marrnnegro con halos de color marrn en agar bilis esculina a 35 C y en el cerebro-corazn caldo de infusin a 45 C verifica los organismos como estreptococos fecales. El crecimiento tambin en el 6,5% y el caldo de NaCl en el cerebro-corazn caldo de infusin a 10 C indica que los estreptococos son miembros del grupo de Enterococcus. b. Filtro de membrana mtodos: 1) de coliformes totales procedimientos a) agua potable-Swab toda la membrana o recoger cinco tpicos y atpicos cinco (nonsheen) colonias de muestras positivas en M-Endo LES-o un medio de agar Endo y verificar que en 9222B.5f. Tambin verifique los aspectos positivos de coliformes fecales. Si no hay muestras positivas, prueba de por lo menos un conocido de agua positiva fuente trimestrales de la muestra. b) Otros tipos de agua-Verify positivos mensuales por recoger por lo menos 10 colonias tpicas y atpicas de una muestra de agua positiva como en 9222B.5f. Ajustar cuentas basada en la verificacin por ciento. c) Para determinar los falsos negativos, elegir representante colonias atpicas de diferentes tipos morfolgicos y verificar que en 9222B.5f. 2) termotolerantes (fecales) coliformes procedimiento-Verify positivos mensuales por recoger por lo menos 10 colonias de color azul a partir de una muestra positiva con lauril triptosa caldo y el caldo de la CE como en 9221E.1b. Ajustar cuentas basada en la verificacin por ciento. Para determinar los falsos negativos, elegir representante

colonias atpicas de diferentes tipos morfolgicos y comprobar como en la fase presuntiva, 9221B. 3) Escherichia coli procedimiento

a) Agua potable-La verificacin no es requerida. b) Otros tipos de agua-Verify una muestra positiva mensual por recoleccin de colonias bien aisladas, teniendo cuidado de no recoger medio, que puede causar una respuesta positiva falsa. Realice la prueba de citrato y la prueba de indol como se describe en el 9225D, u otros procedimientos de identificacin equivalente o sistemas. Incubar indol prueba a 44,5 C. E. coli es indol-positivas y no dan el crecimiento en citrato. Ajustar cuentas de acuerdo al porcentaje de la verificacin. c) Para determinar los falsos negativos, elegir representante colonias atpicas de diferentes tipos morfolgicos y comprobar como en b) anterior.

4) estreptococos fecales procedimiento-Pick para verificar mensualmente por lo menos 10 colonias aisladas rojo de m-Enterococcus agar infusin cerebro-corazn (BHI) los medios de comunicacin y proceder como se describe en 9230C. Ajustar cuentas de acuerdo al porcentaje de la verificacin. 5) los procedimientos de enterococos-Pick para verificar mensualmente al menos 10 bien aisladas de color rosa a las colonias rojas con precipitado de color negro o marrn rojizo de agar EIA. Transferencia a los medios de comunicacin BHI como se describe en 9230C. Ajustar cuentas de acuerdo al porcentaje de la verificacin. c. Enzima define las pruebas de sustrato: 1) de coliformes totales mtodo de ensayo 9223 a) Agua potable-La verificacin no es requerida. b) No Otros tipos-el agua de confirmacin / verificacin paso es necesario. Pruebas enzima-sustrato utilizar un sustrato definido en el que se inhibe el crecimiento bacteriano noncoliform. La siguiente es una breve descripcin para aquellos que deseen llevar a cabo pruebas de verificacin. Para el total de los anlisis de coliformes asptica de transferencia de material a partir de un determinado porcentaje (por ejemplo, 5%) del ONPG o CPRG positivo pozos y ONPG o CPRG negativo pozos a mendo o EMB Levine u otros medios adecuados. Racha de aislamiento. Prueba para la fermentacin de la lactosa (un nmero de coliformes puede ser lento o fermentadores de la lactosa no pueden fermentar la lactosa a todos) o de / 3-D Galac topyranosidase por o-nitrophenyl-/3-D galactopiransido (ONPG) y la prueba de la citocromo oxidasa indofenol (CO) o prueba de la identificacin del organismo. Ver 9225D para la descripcin de probar o utilizar otros procedimientos de identificacin equivalente o sistemas.

2) Para E. coli, E. coli anlisis de verificacin, si as se desea, se puede lograr mediante la transferencia de material de forma asptica a partir de un determinado porcentaje (por ejemplo, 5%) MUG-positivos y MUG negativo pozos de MacConkey o EMB Levine u otros medios adecuados . Racha de aislamiento. Verificar la confirmacin de la reaccin MUG con EC + MUG o NA + MUG los medios de comunicacin o E. coli identificacin bioqumica como se describe en el procedimiento de identificacin 9225D u otros equivalentes o sistema. Ajustar cuentas de acuerdo al porcentaje de la verificacin. 3) Los enterococos-Verify colonias mediante la seleccin de 10 colonias tpicas (positivos) y 10 colonias atpicas (negativo) una vez al mes o una tpica y atpica una colonia de 10% de muestras positivas, lo que sea greater.36 11. Validacin de nuevas o no estndar Methods37-43 Todos los mtodos estndar, desarrollados por el laboratorio mtodos, y los mtodos estndar que se utiliza en condiciones de prueba diferentes, por ejemplo, la matriz, debe ser validado por el laboratorio antes de la recoleccin de datos con estos mtodos. Validacin consiste en establecer y demostrar que los criterios de desempeo de un mtodo o proceso de datos precisos y fiables para su uso previsto. El trmino "validacin" se ha aplicado histricamente en el campo de la qumica. La validacin se aplica ahora a la microbiologa, utilizando los mismos trminos utilizados en qumica. La principal diferencia es que, cuando las variables discretas se utilizan, por ejemplo, recuentos de placas, las estadsticas diferentes que se aplican son diferentes y las distribuciones de probabilidad se utilizan. Para el microbilogo basado en la cultura, la validacin se centra en la idoneidad del mtodo de prueba o proceso para detectar y / o cuantificar un microorganismo especfico o grupo de microorganismos que tienen las caractersticas establecidas en la matriz de inters. Para los mtodos de cultivo-independientes, como los inmunoensayos y tcnicas de gentica molecular, la misma necesidad que existe para demostrar el control del proceso y la confianza en la fiabilidad de la informacin. Se trata esencialmente de una prueba de concepto. Para los mtodos estndar de cumplimiento de obtener la validacin de datos del fabricante y / o el organismo regulador. Antes de que un mtodo que se adopte por el laboratorio, realizar pruebas en paralelo con la norma o procedimiento de referencia para determinar la comparabilidad de los criterios de desempeo establecidos para la norma y su idoneidad para el uso. Obtener al menos 30 puntos de datos positivos

durante el ao para permitir una determinacin estadstica de equivalencia con el mtodo establecido o estndar antes de la sustitucin con el nuevo mtodo de uso rutinario. Esto puede ser llamado una validacin secundaria o cruz. Para los mtodos de desarrollo, tales como los mtodos de investigacin, establecer la confianza en el mtodo de anlisis o proceso mediante la realizacin de estudios de validacin intralaboratorio completa en un nmero estadsticamente significativo de muestras para asegurar la fiabilidad antes de la determinacin final de la usabilidad. Llevar a cabo estudios entre laboratorios (tambin llamados estudios de colaboracin) para validar el mtodo de mayor uso. La siguiente es una breve discusin sobre la validacin del mtodo microbiana y los criterios de desempeo deseado de calidad para ser comprobada. Revisin de las referencias citadas para obtener ms informacin y para los programas relacionados con la validacin del mtodo microbiana. Para determinar el efecto de la matriz en la recuperacin de aadir una concentracin conocida de una cuanta prevista ambiente a una muestra de campo recogidos en el mismo sitio que la original. Uso comercial o preparado en el laboratorio las suspensiones de los microorganismos objetivo. a. Los mtodos cualitativos de prueba: La validacin de los mtodos de la presencia o ausencia (en comparacin con el crecimiento sin crecimiento) implican el establecimiento de las caractersticas de funcionamiento del mtodo en la matriz de eleccin tales como: 1) La precisin y la precisin (repetibilidad y reproducibilidad) - Para las pruebas cualitativas, el nmero de repeticiones tendra que ser muy grande para llegar a una evaluacin estadstica de la comparacin. Por lo tanto, estos indicadores de calidad de datos en general, no estn determinadas. 2) La especificidad / selectividad de la capacidad del mtodo de prueba o proceso de seleccin de preferencia o de distinguir el objetivo de organis-mos de las especies noobjetivo en la matriz de eleccin en condiciones normales de laboratorio de anlisis de muestras, es decir, la aptitud para su uso. Mtodos cualitativos para el crecimiento del organismo de que es el indicador. Se determina mediante la verificacin de todas las respuestas, por ejemplo, pruebas de identificacin microbiana. 3) Lmite de deteccin, la menor densidad de microorganismos que pueden determinarse con arreglo a las condiciones establecidas. Determinar mediante el uso de las diluciones de cultivos de referencia y la medicin de la recuperacin entre repeticiones de cada dilucin.

4) La robustez, la medida de qu tan bien un mtodo de prueba se puede realizar en condiciones cambiantes. Esta prueba se lleva a cabo por el promotor inicial del mtodo y se determina por cambio de variables como el tiempo de la celebracin de la muestra o las condiciones, la temperatura de incubacin, el pH del medio, y el tiempo de incubacin. 5) la repeticin-el grado de acuerdo entre anlisis repetidos o mediciones realizadas en las mismas condiciones, por ejemplo, laboratorio, tcnico, y el equipo. Use un microorganismo objetivo o la densidad microbiana del grupo de tal manera que al menos el 75% es decir, ser positivo, de crecimiento, de modo que un nmero suficiente de respuestas pueden ser detected44, ya sea para una prueba cuantitativa o cualitativa. Esto puede servir como una medida de la incertidumbre. b. Los mtodos cuantitativos de prueba: Validacin de un mtodo o proceso relacionado con la determinacin numrica, por ejemplo, nmero de ejemplares por unidad de volumen, consiste en determinar las caractersticas del mtodo de rendimiento como se seal anteriormente, adems de lo siguiente: 1) La precisin, el grado de acuerdo, o la falta de incertidumbre, entre lo observado y el valor real. Se calcula mediante el uso de las culturas conocidas de referencia en el rango previsto de las densidades del medio ambiente y la comparacin de los resultados del mtodo de prueba para la de la referencia o el mtodo estndar. Generalmente se expresa como el porcentaje de recuperacin. 2) La precisin / repeticin-el grado de acuerdo entre anlisis repetidos o mediciones realizadas en las mismas condiciones, por ejemplo, laboratorio, tcnico, y el equipo. Use un microorganismo objetivo o la densidad microbiana del grupo de tal manera que al menos el 75% ser positivo, de modo que un nmero suficiente de respuestas pueden ser detected44, ya sea para una prueba cuantitativa o cualitativa. Esto puede servir como una medida de la incertidumbre. 3) Precisin / reproducibilidad-el grado de variabilidad en el mismo mtodo o proceso se lleva a cabo en otras condiciones, por ejemplo, ms de un analista segn el mtodo o procedimiento en otra rea o habitacin en el laboratorio y / o el uso de diferentes equipos. Esto sirve como otra medida de la incertidumbre. 4) Recuperacin / sensibilidad, la capacidad de un mtodo de prueba para reconocer o detectar el microorganismo objeto o componente del mismo en la matriz de eleccin. Determinar mediante el anlisis de un nmero suficiente de muestras utilizando al menos dos niveles aade la suspensin del microorganismo objetivo, o bien

aumentando o disminuyendo el volumen de la muestra o la dilucin analizados, seguido por la determinacin de confianza estadstica. 5) el lmite de deteccin menor densidad microbiana que se puede determinar. Determinar mediante el uso de las diluciones de cultivos de referencia y la medicin de la recuperacin entre repeticiones de cada dilucin. 6) contar Lmite superior: el nivel en el que las mediciones cuantitativas a ser poco fiables, por ejemplo, debido al hacinamiento en una placa de agar. Determinar que el anterior. 7) Range-el intervalo entre los lmites de deteccin superior e inferior determinado que el anterior. 12. Documentacin y Registros a. Plan de control de calidad: Plan de control de calidad del laboratorio o el compromiso de manual de calidad de gestin de documentos con una poltica de control de calidad y establece los requisitos necesarios para apoyar los objetivos del programa. El plan describe las polticas generales, organizacin, objetivos y las responsabilidades funcionales para la consecucin de los objetivos de calidad y especifica las actividades de control de calidad necesario para lograr la representatividad de los datos, la integridad, la comparabilidad y compatibilidad. Adems, el plan de control de calidad incluye el plan del laboratorio de implementacin para asegurar la mxima coordinacin y la integracin de las actividades de control de calidad dentro del programa general (muestreo, anlisis y procesamiento de datos) y cumple con las regulaciones federales, estatales y locales y los requisitos de acreditacin en su caso. b. Los registros de muestreo: Un SOP escrito para los registros de los procedimientos de manipulacin de las muestras al laboratorio para la toma de muestras, la aceptacin, el traslado, almacenamiento, anlisis y eliminacin. El registro de la muestra es ms fcil mantenerse en un archivo de computadora o en una serie de formularios impresos que se pide al usuario para proporcionar toda la informacin necesaria. Es especialmente importante que este registro sea exacta y completa si hay alguna posibilidad de que el litigio puede ocurrir. Estos sistemas de registro se denomina "cadena de custodia" y puede ser requerido por algunos programas federales o estatales para garantizar la integridad de las muestras. Debido a que los laboratorios no siempre sabemos si los resultados analticos se utilizarn en futuros litigios, algunos mantienen la cadena de custodia en todas las muestras. Los detalles sobre la cadena de custodia se encuentran disponibles en la Seccin 1060B y otra parte.1 un sistema de laboratorio que identifica

las muestras en el laboratorio y que est ligado al nmero de muestras de campo se asegurar de que las muestras no se pueden confundir. c. Registros: Un sistema de registro aceptable proporciona la informacin necesaria en la toma de muestras y conservacin, mtodos analticos, los datos en bruto, los clculos a travs de los resultados reportados, y un registro de personas responsables de la toma de muestras, la aceptacin de muestras y anlisis. Elija un formato aceptable para el laboratorio y el cliente (el usuario de datos). Utilice formularios preimpresos si est disponible. Asegrese de que todas las hojas de datos estn firmados y fechados por el analista y el supervisor. El formulario de registro es preferible un cuaderno y pginas numeradas, con las entradas en tinta y una sola lnea trazada a travs de cualquier cambio con la correccin, as como las iniciales del grabador de correccin entr junto a l, o en un archivo de computadora, por ejemplo, , un e-notebook. Mantener registros de los anlisis microbiolgicos durante al menos 5 aos en un lugar seguro. Fuera de las instalaciones de almacenamiento se recomienda como copia de seguridad de todos los registros. Datos que se espera para formar parte de una accin legal se debe mantener por un perodo de tiempo ms largo. Informes actuales de laboratorio pueden mantenerse, o los datos pueden ser transferidos a los resmenes de tabla, siempre que la informacin se incluye lo siguiente: fecha, lugar y hora del muestreo, nombre del recolector de muestras, identificacin de la muestra, fecha y hora de recepcin de la muestra, la condicin y la temperatura de la muestra recibi, fechas de inicio y finalizacin de anlisis de muestras; persona (s) responsable de la realizacin de anlisis, mtodos de anlisis utilizados, los datos en bruto, y los resultados calculados de anlisis. Compruebe que cada resultado se ha introducido correctamente en la hoja de banco y rubricado por el analista. Cuando un sistema de gestin de informacin de laboratorio (LIMS) es usado, verifique que el software de entrada y salida y clculos aritmticos. Una copia de seguridad todos los datos de laboratorio en el disco o el sistema en papel para satisfacer las necesidades del cliente y de laboratorio para la gestin de datos y presentacin de informes. Verificar los datos en las hojas impresas. Siempre copias de seguridad de datos electrnicos por cinta o disco protegido o duro copy.44 Si el sistema (hardware o software) se cambia, la transferencia de datos antiguos al nuevo sistema para que siga siendo recuperable dentro del perodo especificado de tiempo. Datos que se espera para convertirse en parte de una accin legal debe ser mantenido durante un largo periodo de tiempo, consulte con el asesor legal del laboratorio. Otras orientaciones available.45-47

13. Manejo de Datos a. Distribucin de las poblaciones bacterianas: En la mayora de qumicos analmetanlisis la distribucin de los resultados de los anlisis sigue una distribucin normal (gaussiana) la curva, que tiene una distribucin simtrica de los valores de la media (vase la Seccin 1010B). Distribucin microbiana no son necesariamente simtricas y raramente se adaptan a una curva de distribucin normal. Los recuentos bacterianos a menudo se caracterizan por tener una distribucin sesgada a causa de muchos de los valores bajos y unos pocos de alta. Estos ticas carcter conducir a una media aritmtica que es considerablemente ms alta que la media. La curva de frecuencia de esta distribucin tiene una cola larga derecha, tal como se muestra en la Figura 9020:1, y se dice que muestra asimetra positiva. La variacin natural al azar en la distribucin de los microorganismos dentro de una muestra puede ser nica en la muestra y la matriz, y no una funcin de laboratorio performance.48 Adems, los recuentos microbianos obtenidos representan unidades formadoras de colonias (UFC), que puede ser el resultado de una clula o mltiplos de all, de 49 aos como resultado de la variacin en el nmero de recuento de colonias en placas replicar o diluciones mltiples. Aplicacin de las tcnicas estadsticas ms comunes requiere el supuesto de simetra tales como la distribucin normal. Por lo tanto, generalmente es necesario convertir los datos sesgados de manera que una distribucin simtrica parecido a los resultados de la distribucin normal. Aproximadamente una distribucin normal se puede obtener a partir de los datos de un sesgo positivo por convertir nmeros a sus logaritmos, como se muestra en la Tabla 9.020: IX. La comparacin de las tablas de frecuencias para los datos originales (Tabla 9020: X) y sus logaritmos (Tabla 9020: XI) muestra que los logaritmos aproximada la distribucin simtrica.

b. Medidas de tendencia central de la distribucin asimtrica: La mejor estimacin de la tendencia central de los datos log-normal es la media geomtrica. El trmino "media" en la media geomtrica es engaosa. Lo que se est determinando es la estimacin de mxima verosimilitud, que se basa en el modo o la frecuencia mxima de la curva de distribucin. Probabilidad de observar los resultados de mltiples diluciones se expresa por un mltiplo de Poisson distribution.50, de 51 aos la curva generada aparece sesgada hacia la derecha, la caracterstica es similar a la de un log-normal curva de distribucin. Esto resulta del hecho de que el recuento de colonias de la dotacin de la

log-normal resultado de la curva de mltiples curvas de distribucin de Poisson para numerosos organismos que no son de inters y hacer que la curva de distribucin para ser ms sesgada. Cuando la mxima verosimilitud approach52, de 53 aos se utiliza la maxima de estos organismos estn distribuidos bajo la curva debido a los diferentes organismos responden de manera diferente a los nutrientes y los medios de comunicacin. Este proceso se ve afectado por la temperatura, el pH y el tiempo de incubacin. El proceso de anlisis de los datos de la frecuencia mxima se asegura de que el organismo correcto es seleccionado para el recuento de colonias. Cuando las curvas de la MPN para 1, 2, 3 y 4 tubos positivos de 5 tubos totales incubadas se examinan, la log-normal grfico de probabilidad est cerca de ser lineal (lo que indica normalidad aproximada), pero se inclina hacia arriba y podra indicar posibles curtosis , una nitidez, provocada por la medicin de la probabilidad acumulada en los extremos inferior y superior de la curva de distribucin. El error est en los valores extremos de las colas de la distribucin porque la medicin es difcil en los valores extremos de la curva log-normal de distribucin. El log-normal suposicin de probabilidad se confirma cuando el registro de valores se representa en funcin de recuento de colonias NMP (nmero probable mximo) en lognormal - de papel acumulado grfico de probabilidad. El uso de la media geomtrica, de 54 aos calcula como la raz ensima del producto de todos los valores de los datos, se basa en la probabilidad de una distribucin de probabilidad. La estimacin de probabilidad se basa tanto en frecuencia de observaciones de n y el recuento de una muestra aleatoria de n observaciones. Cuando la razn de verosimilitud se observa antes y despus de la transformacin logartmica de la variable, x, se puede demostrar que las razones son las same.55 Por medio de la relacin de verosimilitud, las propiedades del producto se convierten en propiedades de la suma, que son fciles para entender y manejar. El enfoque difiere de la probabilidad de las medias aritmticas ordinarias en que se consideran tanto la frecuencia como variable de recuento de colonias, y no slo la media aritmtica de los recuentos de colonias. La media geomtrica es el logaritmo de la inversa del registro promedio de las probabilidades de un parmetro que se mide. Esto es muy diferente de la media del MPN y por lo general le dar un nmero ms bajo posible de una operacin aritmtica average.56 La media geomtrica de las estimaciones de mxima verosimilitud es una mejor estimacin de la media aritmtica de los organismos vivos.

En la derivacin de la Likelihood56 mximo de una distribucin de probabilidad de Poisson, el registro de los productos de la MPN puede ser demostrado ser una funcin del registro de la frecuencia. Por lo tanto, los promedios geomtricos se justifican como el mtodo para obtener una estimacin de mxima verosimilitud de determinaciones mltiples MPN. c. "Menor que" (<) valores: Siempre ha habido incertidumbre en cuanto a la forma correcta de incluir "menor que" los valores de clculo y evaluacin de los datos microbiolgicos, porque esos valores no pueden ser tratadas estadsticamente sin modificaciones. Modificaciones propuestas implican cambios en tales nmeros a cero, la eleccin de los valores a medio camino entre el cero y el "menor que" el valor, o la asignacin de los "menos" valor en s mismo, es decir, el cambio de <1 los valores a 1, 1 / 2, o 0.57,58 Hay razones vlidas para no incluir "menor que" los valores, modificados o no. Si la base de datos es bastante grande, con slo un pocos de esos valores, la influencia de estos valores inciertos sern mnimos y no ofrece ningn beneficio. Si la base de datos es pequeo o tiene un nmero relativamente grande de "menor que" los valores, la inclusin de formas modificadas de esos valores puede ejercer una influencia indebida sobre los resultados finales y podra resultar en un sesgo artificial negativo o positivo. Incluyendo "menor que" los valores es particularmente inapropiado si los valores son <100, <1000, o superior, porque los valores reales desconocidos podran estar en cualquier lugar de 0 a 99,0 y 999, etc Cuando estos valores se observ en primer lugar, ajustar o ampliar volmenes de ensayo. La nica excepcin a esta advertencia sera pruebas reglamentarias con el cumplimiento de los lmites definidos, como los valores mL <1 / 100 reportados para sistemas de agua potable, cuando el volumen de 100 ml se requiere.