Relatrio de Trabalho Prtico da Disciplina de Fisiologia Vegetal 2011/20112 Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Efeito do Etileno na Abciso Foliar

Ana Raquel Ferreira Martins, Gabriel Antnio Monteiro Pinto, Sara Moniz Rosas

Introduo A abciso foliar o processo que leva queda de folhas, semelhante ao que acontece tambm com frutos e flores. Ao nvel celular, h clulas especficas no pecolo que se diferenciam morfolgica e bioquimicamente e formam uma camada de abciso, separando o rgo senescente da planta. Este processo depende da ao de enzimas que hidrolisam a parede celular, como a celulase e a poligalacturonase. Os protoplastos libertados expandem, afastando as clulas xilmicas e facilitando a separao do rgo (neste caso, folha) da planta. O etileno, por sua vez, uma hormona gasosa que regula a abciso foliar, e o seu efeito reprimido pela hormona auxina. No entanto, concentraes mais elevadas de auxina revelaram experimentalmente que promovem a queda das folhas porque estimulam a produo de etileno. Isto acontece porque a auxina estimula a atividade da ACC sintetase, enzima com um papel predominante na sntese do etileno. A auxina, por sua vez, inibida pela luminosidade. O controlo hormonal da abciso divide-se em trs fases: durante a fase de manuteno, antes de ser recebido qualquer sinal que promova a abciso, a auxina tem um gradiente de concentrao em toda a rea foliar, prevenindo o seu degradamento; na fase indutiva, os nveis de auxina na folha diminuem, e o etileno torna-se significativo na zona de abciso, agora sensvel ao seu efeito; por fim, as clulas da zona de abciso comeam a produzir as enzimas hidrolticas, levando queda da folha. Pode-se concluir que a auxina o principal inibidor do efeito do etileno durante a abciso. No entanto existem outros fatores que inibem ou promovem esse

efeito, desde condies ambientais, stresses fsicos e qumicos a outras hormonas. Existem ainda inibidores especficos da sntese do etileno, como aminoetoxivinilglicina e cido aminoxiactico e ies cobalto, como tambm inibidiores da ao do etileno, como o catio prata e o dixido de carbono atmosfrico em determinadas concentraes. O objetivo principal deste trabalho experimental verificar o efeito da auxina e do etileno na abciso foliar em folhas de Jacaranda sp. Para tal recorremos uma soluo de Ethrel, ou cido 2-cloroetil-fosfnico, um composto libertador de etileno, j que difcil manusear o ltimo na sua forma gasosa por se difundir rapidamente. Usamos ainda cido naftaleno actico (NAA) que uma hormona sinttica (no ocorre naturalmente) da famlia das auxinas. O tiossulfato de prata ser o dador do catio prata, um inibidor da ao do etileno. Por ltimo, este trabalho experimental tem tambm como objetivo permitir a apreciao do papel da sntese proteica no processo da abciso foliar. Recorremos assim cicloheximida, que inibe a sntese proteca em ribossomas de eucariontes, mas no em procariontes, mitocndrias ou cloroplastos.

Material e Mtodos
Material utilizado para a realizao da experincia: - folhas de Jacaranda sp. - NAA (cido naflalenoactico) 1% em lanolina - Cicloheximida - Soluo Tampo Fosfato 0,005 M pH 7,5 - Ethrel (cido 2-cloroetil-fosfnico) - Tiossulfato de prata

Mtodos
1Remover da placa de Petri uma poro de agar (um rectngulo) para que se possam colocar as pores de pnulas. 2Da folha de Jacaranda sp. devem-se retirar vrias pores de pnulas, sendo que estas devem ser agrupadas em quatro pnulas por poro. Aps esta seleo estar feita, deve-se cortar 1/3 do limbo das pnulas. 3Coloca-se 6 pores de pnulas em cada placa de Petri com Agar, com uma pina esterilizada. necessrio ter cuidado ao colocar as pnulas na placa de Petri, estas no devem ficar em contacto com as paredes da placa, devem ficar suspensas. Este procedimento utiliza-se para todos os tratamentos, excepto para o tratamento C e E; nestes aps a retirada do agar deve colocar-se papel de filtro. 4Uma vez colocados as pores de Jacaranda sp., as placas de Petri so vedadas com parafilme, e colocadas em condies de obscuridade temperatura ambiente. 5Todos os dias, deve ser feito o registo do nmero do pnulas que ca, durante uma semana. Se necessrio, bater levemente na placa de Petri de modo a que as folhas que esto soltas, caiam.

Tratamentos que devem ser realizados em cada Placa de Petri A B C D E F Sem tratamento (controlo) Aplicar NAA 1% em lanolina, directamente sobre a zona da abciso foliar. Deitar 1 mL da soluo de Ethrel sobre o papel de filtro, adicionar 1 mL da soluo tampo Colocar cicloheximida em lanolina sobre a zona de abciso Aplicar cicloheximida em lanolina sobre a zona de abciso e Ethrel mais soluo tampo no papel de filtro Estes explantes a usar dever ter sido previamente mergulhados na soluo de tiossulfato de prata (30-60 min, em condies de obscuridade)

Resultados
A 0% 0% 14% 28% 84% 100% 100% B 0% 0% 0% 5% 14% 28% 42% C 0% 50% 75% 83% 100% 100% 100% D 0% 0% 5% 17% 28% 50% 50% E 0% 0% 42% 50% 56% 75% 100% F 0% 0% 17% 19% 22% 25% 50%

1 Dia 2 Dia 3 Dia 4 Dia 5 Dia 6 Dia 7 Dia

Tabela 1: Tabela Representativa do nmero de pnulas cadas ao longo de 7 dias.

Grfico Representativo da percentagem de pnulas cadas ao longo de 7 dias, de acordo com o seu tratamento 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% 1 Dia 2 Dia 3 Dia 4 Dia 5 Dia 6 Dia 7 Dia A B C D E F

Discusso de Resultados No tratamento A, o padro dos resultados, onde no foi aplicado nenhum composto, o corte da folha leva a um relativamente rpido desaparecimento do gradiente de auxina, levando a uma senescncia progressiva quase linear, quando enquadrada sobre o tempo. Acaba no 6 dia onde todas as pnulas esto cadas. Denota-se ento dois aspetos importantes neste padro, teis para comparao futura: 1. S se verificaram as primeiras folhas cadas no 3 dia; 2. Ao sexto dia as folhas esto sem pnulas restantes.

O tratamento B exibe um mais que evidente atraso da abcisso foliar. Nos sete dias de observao, o nmero de pnulas cadas muito inferior ao nmero do controlo; uma razo que se pode aproximar como . Tem a peculiaridade de ser o nico tratamento que consegue manter ao quarto dia todas as pnulas intactas. Este efeito deve-se aplicao do NAA (cido 1-naftalenoactico), visto que este uma auxina sinttica e portanto, interferir no gradiente de auxinas, mantendo-o por mais tempo e tornando as clulas da camada de abciso insensveis ao etileno, fazendo com que a abciso foliar seja retardada. J na caixa de Petri C as pores de folhas tratadas com a soluo de Ethrel evidenciam uma abciso muito mais rpida que em A, estando j no 5 dia 100% das folhas cadas. Quebra-se aqui novamente a caracterstica 1. do padro, obtendo-se abciso (e em pores muito significativas - 50%) em imediato no 2 dia. Novamente, este resultado vai de encontro ao esperado pois o Ethrel um libertador de etileno. Este torna a folha mais sensvel ao etileno, iniciando a sntese das enzimas hidrolticas muito mais rapidamente, levando abciso foliar. O uso de cicloheximida, correspondente ao processo D, nas plantas inibe a sntese proteica, o que leva a uma menor produo das enzimas que degradam a parede celular, e consequentemente uma menor taxa de abciso. Os resultados vo de encontro ao esperado, mostrando um abrandamento da senescncia, este no to eficaz quanto o NAA, mas notvel na mesma, acabando no 7 dia com apenas 50% das pnulas cadas, precisamente metade do controlo. No processo E o uso conjunto do Ethrel e da cicloheximida, dois reguladores de crescimento: um que garante uma maior produo de etileno e outro que facilita o movimento das auxinas, usados conjuntamente garante uma guerra de vontades. O vencedor ser, aps verificao experimental, o Ethrel que mantm a queda de folhas constante ao longo da experincia, garantindo que todas as pnulas fossem separadas no fim desta. Uma explicao so as diferentes velocidades de ao dos compostos: o etileno um gs, logo de rpida ao (como visto em C) mas a cicloheximida demora mais tempo para penetrar ao longo da camada de abciso.

Como tal h uma produo suficiente de enzimas para negar o efeito posterior da cicloheximida na experincia. Na execuo F, onde se aplicou uma soluo de tiossulfato de prata, verifica-se uma diminuio do nmero de pnulas cadas. Est ento concordante com a teoria que aponta para a prata, sob a forma de STS (tiossulfato de prata), como um bom inibidor da ao do etileno, moderando a produo de enzimas hidrolticas. Termina ao 7 dia com apenas abciso em 50%. Bibliografia http://www.rsc.org/pdf/general/17etheph.pdf (Maio 2012) Bin G. Kang et. all, Mechanism of Auxin-induced Ethylene Production, Plant Physiology, 1971, Vol.47, pp. 504-509 Yi Li & Daniel C. Walton, Effects of Cycloheximide on Abscisic Acid Biosynthesis and Stomatal Aperture in Bean Leaves, Plant Physiology, 1990, Vol. 93, pp.128-130 HARTMANN, H. T. et. all, Journal of the American Society of Horticultural Science, 1970, Vol. 95 pp. 635-40 Page W. Morgan, Stimulation of Ethylene Evolution and Abscission in Cotton by 2Cloroethanephosponic Acid, 1968, Plant Physiology, Vol. 44 pp. 337-341 Elmo M. Bayer, Abscission : The Initial Effect of Ethylene Is in the Leaf Blade, 1975, Plant Physiology, Vol. 55, pp. 322-327 Page W. Morgan & James I. Durham, Leaf Age and Ethylene-induced Abscission, 1973, Plant Physiology, Vol.52, pp. 667-670 B. Rubinstein & A.C. Leopold, Effect of Amino Acids on Bean Leaf Abscission, 1962, Plant Physiology, Vol. 37, pp. 398-401 ALBERTS, Bruce; et al. Molecular Biology of The Cell. 5th ed. . New York : Garland Science, 2008. pp. 354, 902-903, 1254 TAIZ, Lincoln; ZEIGER, Eduardo. Plant Physiology. 5th ed. Sinauer Associates 2010