EL ESTUDIO DE LAS AGRESIONES SEXUALES EN EL LABORATORIO DE BIOLOGA

Victoria Prieto Ruiz-Canela

Instituto Nacional de Toxicologa y Ciencias Forenses Departamento de Sevilla

SUMARIO. 1. INTRODUCCIN.2. INDICIOS MS FRECUENTES EN LA INVESTIGACIN DE AGRESIONES SEXUALES. 2.1 Restos de semen. 2.1.1 Algunas caractersticas del semen. 2.1.2 Pruebas de orientacin y confirmacin en el diagnstico de restos de semen. 2.1.3 Tiempo de permanencia de los distintos constituyentes seminales y su relacin con la data de los hechos. 2.1.4 Extraccin de ADN. 2.2 Restos de saliva. 2.2.1 Algunas caractersticas de la saliva. 2.2.2 Pruebas de orientacin y confirmacin en el diagnstico de restos de saliva. 2.2.3 Extraccin de ADN. 2.3 Pelos. 2.3.1 Fases del crecimiento del pelo y su relacin con el rendimiento de ADN. 2.3.2 Cabellos. 2.3.3 Pelos pbicos. 2.4 Restos en uas.3. OTROS TIPOS DE INDICIOS MENOS FRECUENTES EN EL LABORATORIO.4. PERSPECTIVAS DE FUTURO EN EL ESTUDIO DE AGRESIONES SEXUALES.5. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. INTRODUCCIN Muchos aos han pasado desde que Francis Galton (1822-1911), erudito ingles dedicado al estudio de la transmisin de caracteres humanos, asentara las bases de la individualizacin descubrindonos que las huellas dactilares son caractersticas de cada individuo. En nuestros das, y adoptando el nombre de su herramienta precursora, la huella gentica (estudio de ADN) se nos presenta como una tcnica imprescindible para la identificacin de vestigios biolgicos de inters forense. El estado actual de aplicacin de estas tcnicas debe su auge al gran avance biotecnolgico que se ha producido en estas ltimas dos dcadas y que han hecho posible el estudio de indicios dejados en la escena de un crimen que antao hubiesen sido imposibles de analizar con las tcnicas convencionales. Desde la saliva dejada en una colilla hasta un pelo o los escasos restos epiteliales restantes en unas uas tras un araazo, 4119

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son hoy valiosas pruebas que pueden por si solas arrojar la informacin suficiente para identificar a un sospechoso. Entre todos los tipos de agresiones violentas, las sexuales son especialmente propensas al estudio de vestigios biolgicos ya que implican siempre un contacto fsico entre la vctima y su agresor y consecuentemente, un intercambio de materiales tales como pelos, fibras y fluidos biolgicos, siendo los ms frecuentes los restos de semen y de saliva. Otra importante peculiaridad de este tipo de delitos es que ocurren frecuentemente en ausencia de testigos. Incluso las declaraciones de la vctima que acta como testigo directo de los hechos deben ser interpretadas con cautela, ya que a menudo concurren circunstancias que tergiversan su visin del asalto tales como graves traumatismos, consumo de alcohol y drogas, minusvalas squicas, etc. Es por esto que todos los datos obtenidos en el historial del caso, la informacin obtenida por los mdicos en el examen de las vctimas y los datos derivados de la investigacin son los que deben marcar cmo el caso debe procesarse en el laboratorio y cuales sern los indicios ms relevantes cuyo anlisis contribuya al esclarecimiento de los hechos.

2. INDICIOS 2.1 2.1.1

MS FRECUENTES EN LA INVESTIGACIN DE AGRESIONES SEXUALES

Restos de semen Algunas caractersticas del semen

El semen es una mezcla viscosa de clulas, aminocidos, azcares, sales, iones y otros componentes orgnicos e inorgnicos en cuya elaboracin participan principalmente la vescula seminal, la glndula prosttica, la glndula de Cowper y los testculos. El principal componente celular del semen es el espermatozoide, clula especializada, flagelada y con una morfologa peculiar. Suele medir entre 50 y 55 m, y se distinguen bsicamente dos partes: cabeza y cola. La cabeza tiene forma oval y aplanada, con unas dimensiones de 4,5 m de largo x 2,5 m de ancho x 1,5 m de grosor. Su nmero puede variar entre 50 x 106 y 150 x 106 por mililitro de eyaculado, con una media de unos 100 x 106/ml en individuos normospermos. El volumen de eyaculado tambin vara entre unos 2 ml y 6 ml con un valor medio de unos 3,5 ml. 4120

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Existe una gran variabilidad en estos datos no slo entre individuos, sino tambin dentro del mismo individuo segn la edad o entre distintos eyaculados. Algunas enfermedades, condiciones genticas, el abuso de alcohol y drogas, la exposicin a determinados agentes qumicos y acciones quirrgicas pueden reducir drsticamente el nmero de espermatozoides en el eyaculado (oligozoospermia) e incluso provocar su ausencia (azoospermia). Aunque la vasectoma se considera un mtodo seguro para conseguir la azoospermia permanente, entre el 1 por 100 y el 2 por 100 de las intervenciones fallan en impedir totalmente el paso de espermatozoides desde los rganos reproductivos. Incluso en las intervenciones con xito se continan observando clulas inmviles durante los tres meses posteriores, llegando a verse estas incluso un ao despus, segn la frecuencia de los eyaculados postvasectoma. Adems de los espermatozoides, en el semen podemos encontrar otros elementos formes tales como leucocitos y clulas epiteliales del tracto urinario aunque en nmero mucho menor. As, si en un individuo normospermo podemos esperar unos 450 g de ADN/ml de eyaculado, en un individuo azoospermico esperaremos unos 30 g, esto es, slo un 6,3 por 100 del normal. Otros rasgos caractersticos del semen son su pH bsico (8,3) y su capacidad de fluorescer en la regin visible del espectro cuando es irradiado con luz ultravioleta. Esta capacidad de fluorescencia en las manchas se debe, segn algunos autores, a dos procesos; por un lado la conversin de sustancias no proteicas en otros componentes capaces de fluorescer y por otro al crecimiento de determinadas bacterias tales como Pseudomonas fluorescens. La presencia caracterstica de altas concentraciones de fosfatasa cida y de una protena especfica (protena P30 o PSA) sern rasgos que se utilicen en el diagnstico previo en la investigacin de restos de semen. 2.1.2 Pruebas de orientacin y confirmacin en el diagnstico de restos de semen

Aquellas muestras que llegan al laboratorio y que suponen tomas directas corporales sobre la vctima tienen un procesado muy sistematizado. Las pruebas de orientacin tienen mayor utilidad cuando se trata de localizar el vestigio entre las ropas de la victima, en superficies grandes tales como sbanas, mantas o entre manchas dubitadas recogidas del lugar de los hechos. 4121

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En estos casos, el papel de un test presuntivo o de orientacin recae ms en su habilidad para descartar la presencia de semen en una mancha cuestionada que en la de indicar la presencia de semen. Es necesario un examen visual exhaustivo y minucioso de las distintas prendas, asistido si es posible con el uso de una fuente de luz forense, con distintas longitudes de onda y distintos filtros. Como se ha mencionado anteriormente, los test presuntivos ms utilizados en el laboratorio forense se basan en tcnicas bioqumicas que revelan la presencia de actividad fosfatasa cida y tcnicas inmunolgicas que revelan la presencia del antgeno especfico de prstata (PSA protena P30). Las tcnicas de confirmacin implican la observacin de espermatozoides en preparaciones microscpicas realizadas a partir de las muestras a analizar. Fosfatasa cida (AcP): Es una enzima que cataliza la hidrlisis de ciertos fosfatos orgnicos. Su localizacin es muy ubicua no slo en otros tejidos humanos sino tambin en animales y plantas. Sin embargo, las altas concentraciones en que se encuentra en el plasma seminal suponen un rasgo caracterstico. Es secretada por las clulas epiteliales de la glndula prosttica en grandes cantidades desde la pubertad hasta aproximadamente los 40 aos, edad a partir de la cual decrece gradualmente la cantidad secretada. No se ha encontrado ninguna relacin entre los niveles de AcP y el nmero de espermatozoides ni se han encontrado variaciones en los niveles de AcP entre individuos normospermos e individuos clnicamente infrtiles o vasectomizados. En un estudio realizado con la intencin de valorar la capacidad del test de actividad AcP como test presuntivo de semen en extractos de manchas, su valor predictivo en la respuesta negativa se fij en un 99,4 por 100, esto es, de 1000 extractos cuestionados que no presentaron actividad AcP, slo 6 fueron falsos negativos. En contraste, el valor predictivo del resultado positivo fue del 69 por 100, lo que significa que de cada 100 extractos que mostraron actividad AcP, 31 fueron falsos positivos. Estamos pues ante un test ms sensible que especfico, caracterstica deseable para cualquier tcnica de screening. Los falsos positivos derivan de su amplia presencia en otros tejidos y otras especies. Las diferentes isoenzimas de AcP localizadas en tejidos humanos no son inmunolgicamente distinguibles, aunque s lo son en su grado de sializacin, propiedad que permita caracterizarlas por tcnicas de isoelectroenfoque en funcin de su punto isoelctrico. Esta laboriosa tcnica usada hasta no hace mucho en el laboratorio forense para confirmar la presencia de AcP de origen prosttico, se ha sustituido actualmente por otras en beneficio de la especificidad tales como la deteccin del antgeno especfico de prstata. 4122

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Antgeno especfico de prstata (PSA) o protena P30: fue identificada por Sensabaugh en 1978, y se bautiz en un principio en funcin de su peso molecular (30 000 daltons). Es una glicoprotena sializada que se origina en la prstata, por lo que la vasectoma no afecta su presencia en el lquido seminal. Su principal funcin es licuar el lquido seminal. Su rango de concentracin vara entre 300 y 4000 g/ml de semen. No se ha detectado la presencia de PSA en ningn tejido ni fluido femenino. Tampoco se ha identificado su presencia en el semen de otras especies animales domsticas (carnero, toro, cerdo, gato), aunque si se encuentra en primates tales como el orangutn y macaco en rangos de concentracin semejantes al humano, si bien en estas especies la actividad fosfatasa cida es extremadamente baja comparada con la humana. En los hombres, la orina, el suero y el sudor contienen niveles de PSA usualmente muy por debajo del lmite de deteccin forense. La deteccin de altos niveles de PSA en suero es un marcador utilizado en el seguimiento y diagnstico del carcinoma de prstata. El suero sanguneo de hombres contiene por debajo de 4 ng/ml de PSA, por lo que niveles por encima de este valor deben considerarse sospechosos. No se trata de un marcador especfico de cncer, ya que algunas hiperplasias de prstata benignas tienen valores en el rango de 4 a 10 ng/ml y algunos cnceres de prstata pueden encontrarse con un rango normal de PSA en suero (0 a 4 ng/ml). Observacin de espermatozoides: Clsicamente se ha considerado la prueba de confirmacin de presencia de semen en una muestra cuestionada. Sin embargo, hoy en da, un hallazgo positivo en el test de PSA en una muestra en la que se ha detectado actividad AcP puede confirmar la presencia de semen incluso en ausencia de espermatozoides, indicando la presencia de semen azoosprmico. 2.1.3 Tiempo de permanencia de los distintos constituyentes seminales y su relacin con la data de los hechos

La literatura cientfica a este respecto muestra una gran variabilidad de datos sobre el tiempo de supervivencia de los espermatozoides y otros componentes seminales en cavidades naturales, a menudo debidos a que estn basados en declaraciones de las vctimas, que por sus niveles de trauma o por alegaciones falsas no se ajustan a la realidad. De otro lado, los estudios realizados sobre voluntarios dejan lagunas pues no siempre estn dispuestos a contar todos los detalles de su vida sexual y su comportamiento postcoital dista bastante del de una vctima de asalto sexual. 4123

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El componente seminal que puede detectarse a ms largo plazo son los espermatozoides. Se puede aceptar, en personas vivas y de forma general un perodo mximo de 7 das para detectar cabezas de espermatozoides en vagina, dos o tres das en ano o recto y 24 horas en boca. Es normal observar espermatozoides intactos (con cola) en vagina dentro de las 24 horas siguientes al acto sexual, pero rara vez se encuentran en boca, ano o recto tras las 5 horas de los hechos. En cuanto a la actividad AcP, puede detectarse en vagina hasta las 72 horas postcoito, mientras que la PSA decae drsticamente a partir de las 24 horas. Todos estos datos estn afectados de una cantidad tal de variables sin controlar, que es imposible utilizarlos para estimar un intervalo desde la agresin hasta la toma de muestras, quedando la cuestin de la data sin resolver hasta el momento. 2.1.4 Extraccin de ADN

Frecuentemente encontraremos los restos de semen mezclados con otros fluidos. Para lograr extraer el ADN contenido en la cabeza del espermatozoide debemos romperlas, mediante incubacin en un tampn de digestin adecuado, y despus extraerlo y purificarlo. Aprovechando una particularidad de los espermatozoides, su resistencia a la digestin con proteasas, es posible separar una fraccin enriquecida en ADN de espermatozoides del ADN de otras clulas presentes en la muestra. Este tipo particular de extraccin se conoce como lisis diferencial. El tampn de digestin suele contener una proteasa, siendo la de uso ms extendido la proteinasa K, as llamada por su actividad hidrolizante de keratinas, y SDS, un detergente que desnaturaliza las protenas dejando las cadenas polipeptdicas accesibles a la proteinasa K. Las protenas de la cabeza del espermatozoide son especialmente ricas en aminocidos azufrados, los cuales forman puentes disulfuro que las hacen resistentes a la accin de la proteinasa K. En presencia de un agente reductor fuerte, normalmente el ditiotreitol (DTT) estos puentes se desorganizan permitiendo actuar a la proteinasa. La lisis diferencial consta de dos fases. En una primera fase se realiza una digestin en ausencia del agente reductor en la que se obtendr preferencialmente el ADN de clulas epiteliales (fraccin epitelial). La muestra se centrifuga y los espermatozoides se recuperan en el sedimento. En una segunda fase, en la que se aade el DTT al tampn 4124

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de digestin, se consigue el ADN de los espermatozoides (fraccin espermtica). Estas fracciones sern extradas con fenol-cloroformo-alcohol isoamlico y posteriormente purificadas y concentradas por ultrafiltracin. La lisis diferencial es el procedimiento estndar en las muestras de semen con mezcla de otros fluidos. Sin embargo no siempre es eficaz y a veces no es aconsejable. Este es el caso de las muestras con escaso contenido en espermatozoides frente a un nmero elevado de clulas epiteliales, en las que el riesgo de prdida o rotura del material espermtico debe ser valorado. Hasta hace no mucho tiempo este tipo de muestras supona un grave problema a la hora de obtener los perfiles de ADN de los contribuyentes a la mezcla, ya que con las tcnicas de amplificacin de STRs autosmicos, el perfil predominante puede eclipsar al minoritario y hacer imposible su interpretacin. Hoy en da, el desarrollo de toda una batera de marcadores especficos del cromosoma Y puede paliar este problema en la mayora de los casos. Aunque los STRs del Y tienen una sensibilidad similar a la de los STRs autosmicos, su especificidad es mucho mayor, lo que permite amplificar pequeas cantidades de ADN masculino en presencia de grandes cantidades de ADN femenino sin que esta circunstancia inhiba la reaccin de amplificacin (se puede detectar el componente masculino en mezclas hombre-mujer en una razn 1:2000, esto es, 0,4 ng de ADN masculino en 800 ng de ADN femenino). Gracias a esta propiedad, es posible obtener un perfil del varn limpio en una mezcla de espermatozoides con otros fluidos femeninos sin realizar la lisis diferencial, preservando as los espermatozoides en los casos de muestras mnimas y permite adems una determinacin menos ambigua del nmero de contribuyentes en el semen al no obtener mezcla de perfiles. 2.2

Restos de saliva

La identificacin de restos de saliva es muy importante en agresiones sexuales, ya que puede conducirnos desde a corroborar una alegacin de cunnilingus o fellatio hasta la identificacin del agresor si se ha obtenido un perfil de ADN. A menudo estos restos se hallan en cantidades mnimas, por lo que es comprometido decidir entre la identificacin del tipo de vestigio o la obtencin del perfil de ADN. 4125

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2.2.1

Algunas caractersticas de la saliva

La saliva es una secrecin ligeramente alcalina, compuesta por agua, moco, protenas, sales y enzimas. Los humanos producimos entre 1 y 1,5 litros de saliva al da. Acompaando a la saliva, se encuentran las clulas descamadas del epitelio bucal que sern el sustrato para la extraccin de ADN en estos restos. 2.2.2 Pruebas de orientacin y confirmacin en el diagnstico de restos de saliva Las pruebas de orientacin se basan en la deteccin de actividad alfaamilasa. Esta enzima no es especfica de la saliva, se encuentra tambin en el pncreas, en el sudor, en la leche materna, en el semen y en los fluidos vaginales. Puede considerarse un buen marcador para la presencia de saliva ya que sus niveles son 50 veces ms altos en saliva que en el resto de fluidos orgnicos. Las amilasas se encuentran tambin en animales (tipo alfa-amilasas) y en plantas (tipo beta-amilasas). Su deteccin en el laboratorio se basa en la utilizacin del sustrato propio de la enzima, el almidn, marcado con una molcula coloreada formando un complejo insoluble. La accin hidrolizante del enzima liberar la molcula coloreada, que se vuelve soluble, apareciendo un producto coloreado que puede apreciarse a simple vista y cuantificarse en un espectrofotmetro. El test puede realizarse en un tubo que contenga una porcin de la mancha cuestionada, o bien utilizarse para rastrear la presencia de restos de saliva en una prenda determinada (test de contacto). En este caso se utilizar un papel de filtro impregnado en la solucin reactiva que se pondr en contacto con la prenda cuestionada. All donde se encuentre alfa-amilasa, aparecern manchas de color en el papel de filtro mapeando la situacin de los posibles restos de saliva. Para la confirmacin de presencia de restos de saliva debern observarse clulas del epitelio bucal en los extractos de las muestras. 2.2.3 Extraccin de ADN

Es muy frecuente que los indicios en los que se sospecha la presencia de saliva sean muestras mnimas, por lo que a menudo el laboratorio se halla en el compromiso de decidir entre la identificacin del vestigio o preservar lo ms posible los restos para destinarlos al estudio de ADN. 4126

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En muchos casos ser de mayor utilidad conocer la fuente del vestigio (su posible donante) que su naturaleza, ya que sta puede inferirse en algunos casos como en sellos, sobres, chicles, colillas En ocasiones, la metodologa para una correcta recogida de la muestra la invalida para el diagnstico previo, por ejemplo, en la recogida de marcas de mordeduras o de zonas besadas, los hisopos se humedecen primero para asegurar la mayor recuperacin de clulas, diluyendo los componentes solubles de la saliva. Tambin es posible que la pregunta importante a responder sea precisamente la naturaleza del vestigio. Por ejemplo, imaginemos el caso en el que se encuentra un perfil de ADN femenino en una botella, pero la cuestin que interesa al investigador es si ese perfil femenino se encontraba en la botella porque la vctima bebi de ella o porque fue introducida en la vagina en un caso de abusos sexuales.

2.3 2.3.1

Pelos Fases del crecimiento del pelo y su relacin con el rendimiento de ADN

En los mamferos, el pelo atraviesa tres fases en su ciclo de crecimiento, angena, catgena y telgena: Fase angena: Es la fase de crecimiento activo del pelo, en ella las clulas del folculo se multiplican por mitosis y forman el pelo al queratinizarse completamente. Un cabello humano crece a un ritmo aproximado de 0.35 mm por da. Fase catgena: Es una fase de transicin entre el estado de crecimiento activo y el estado de no crecimiento. Fase telgena: En ella ha cesado la actividad del folculo.

Los pelos en fase angena sern un buen sustrato para la extraccin de ADN. Los catgenos, al ser una etapa transitoria variaran en su rendimiento pero normalmente no ofrecern problemas para su estudio por tcnicas de PCR. En un pelo telgeno no es posible el estudio de ADN nuclear, aunque si es posible el anlisis de ADN mitocondrial, estudio que por su laboriosidad y costo, slo se realizar en aquellos casos en los que sea realmente necesario. 4127

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2.3.2

Cabellos

Los cabellos humanos pasan entre dos y ocho aos en fase angena, seguidos de un perodo intermedio de dos a cuatro semanas en fase catgena y finalmente entre dos y cuatro meses en fase telgena hasta que caen naturalmente o son arrancados traumticamente. En la mayora de otros mamferos, la fase angena es corta y la telgena larga, factor que condiciona la longitud mxima del pelo. Una cabeza humana tiene aproximadamente entre 100.000 y 150.000 folculos pilosos, de los cuales entre el 80 y el 90 por 100 estarn en fase angena y entre el 10 y el 20 por 100 en fase catgena o telgena. En nuestra actividad diaria, los humanos perdemos entre 50 y 100 pelos. A menudo un perito es consultado sobre la cuestin de s un determinado pelo hallado en la escena de un crimen puede haber sido arrancado o simplemente cay all. Si el pelo fue arrancado por la fuerza muy probablemente quedar tejido folicular adherido a la base del pelo, sin embargo es posible arrancar pelos que estuviesen en fase telgena o que no cuenten con ningn tejido adherido a la base. Por tanto, la ausencia de tejido folicular no prueba necesariamente que el pelo fuese cado y no arrancado. 2.3.3 Pelos pbicos

A diferencia de los cabellos, los pelos pbicos pasan ms tiempo en fase telgena que en angena. La mayora de los pelos que encontraremos en casos de agresin sexual sern telgenos. La obtencin de muestras de vello por cepillado pbico se ha convertido en una prctica habitual en los casos de asalto sexual, aunque no suele venir acompaada de la necesaria muestra indubitada. La literatura al respecto muestra que la transferencia de vellos ocurre con una frecuencia menor de la que esperaramos. Algunos de estos trabajos estn basados en recopilaciones de casustica que adolecen de falta de informacin respecto a las circunstancias en que se han producido los hechos, pero reflejaremos los datos de un curioso estudio, realizado bajo condiciones controladas con parejas heterosexuales voluntarias. En este trabajo se analizaron un total de 110 peinados pbicos (55 procedentes de hombre y 55 de mujer). Al menos un pelo exgeno se encontr en el 17,3 por 100 de los casos (en 19 de los 110 peinados pbicos analizados). Las transferencias de pelos desde mujer a hombre fueron ms frecuentes que las de hombre a mujer (un 23,6 por 100 frente a un 10,9 por 4128

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100 respectivamente). Slo en una ocasin se observ una transferencia simultnea entre hombre y mujer. Los 110 peinados pbicos supusieron un total de 344 pelos, de los cuales 42 fueron pelos no pubianos (4). 2.4 Restos en uas

Los casos de agresin sexual son especialmente dados a la investigacin de restos en uas, ya que es frecuente el forcejeo entre victima y agresor. Una excoriacin leve en la piel, cuyas seales desaparezcan a las 24 horas, puede dejar restos epidrmicos en las uas suficientes para obtener un perfil de ADN por PCR. Un sencillo estudio realizado por Snchez-Hanke et al. (21) nos arroja datos interesantes para reflexionar sobre la presencia de restos epidrmicos en uas. El estudio se realiz en dos fases, una primera entre voluntarios que se produjeron excoriaciones leves y superficiales que desaparecieron dentro de las 24 horas posteriores al experimento, y una segunda fase en la que se dise un artilugio mecnico capaz de medir la fuerza incidente en el araazo sobre un cadver (6-8 horas postmortem). Entre las conclusiones obtenidas resaltamos las siguientes; los dedos ndice y medio produjeron los araazos ms largos y profundos; a igual fuerza aplicada, en los araazos sobre regiones de piel ms suave tales como el cuello o zona superior del brazo se recuperaron restos epidrmicos pero no as en zonas de piel muy curtidas como el antebrazo; se encontr una correlacin entre la fuerza aplicada y la cantidad de ADN recuperado. En el lado negativo del estudio de restos en uas est el trabajo de Oz y Zamir (17), que analizan tambin los restos de uas en voluntarios y en todos los casos encuentran siempre el perfil propio del voluntario donante de las uas y no del voluntario araado, por lo que sugieren que las uas no sean enviadas rutinariamente al laboratorio sino slo en aquellos casos en los que sea realmente relevante su estudio.

3. OTROS

TIPOS DE INDICIOS MENOS FRECUENTES EN EL LABORATORIO

A veces se solicita al laboratorio el anlisis de restos que, aunque no son habituales en los casos de agresiones, pueden aportar datos importantes a la investigacin de un caso determinado, indicar la consumacin de prcticas sexuales poco comunes o corroborar las declaraciones de los implicados. Entre estos restos podemos citar: 4129

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Restos de orina: La identificacin de la orina se basa en la deteccin de iones o compuestos orgnicos que se hallan ms concentrados en orina que en otros fluidos fisiolgicos, tales como la urea o creatinina, tambin presentes en sudor, sangre, saliva, semen pero en menor concentracin. Contiene clulas epiteliales del tracto urinario, as como leucocitos y eritrocitos. Estas se hallan muy diluidas en la orina, por lo que la esperanza de recuperar ADN a partir de manchas de orina es muy baja. Adems, la flora bacteriana propia de la orina acelera los procesos de degradacin en la muestra. Cuando la orina es de mujer, es esperable encontrar un mayor nmero de clulas nucleadas procedentes del epitelio vaginal adems de las del tracto urinario. Heces: La identificacin de restos fecales se basa en la presencia de pigmentos biliares que le dan su color caracterstico y presencia de restos alimenticios no digeridos. Son un psimo sustrato para la extraccin de ADN. No es posible el estudio de ADN nuclear en estos restos debido a la extrema degradacin y a su contaminacin natural (aproximadamente la tercera parte del peso seco de las heces son bacterias). Sin embargo, si se han conseguido resultados en ADN mitocondrial, en concreto la regin HV1, partiendo de 10 mg de heces frescas. Fluidos vaginales: Las clulas del epitelio vaginal sintetizan glucgeno bajo la accin de los estrgenos. La identificacin de estos restos se basa en esta particularidad (Reaccin de PAS (+) Periodic Acid-Schiff) as como en la presencia de flora bacteriana caracterstica (bacilos de Dderlein). Sin embargo, este carcter glucogenognico est ausente en mujeres amenrquicas (aunque las terapias con estrgenos pueden afectar esto) y sufre variaciones durante el ciclo menstrual, alcanzndose los niveles ms altos de glucgeno durante la ovulacin. Estas clulas no son exclusivas del epitelio vaginal ya que se encuentran tambin en menor cantidad en la boca y en el tracto uretral de hombres (en concreto en la fosa navicular). Por tanto, el hallazgo de unas pocas clulas puede ser comprometido, hecho que se da a veces cuando se solicita la localizacin de clulas procedentes del epitelio vaginal en un hisopo penil.

4. PERSPECTIVAS

DE FUTURO EN EL ESTUDIO DE AGRESIONES SEXUALES

La tendencia actual en todos los estudios basados en individualizacin por ADN es trabajar cada vez con menor cantidad de muestra y obtener ms informacin de ellas. En este sentido, la literatura actual refleja nuevos mtodos especialmente indicados para aquellos casos en 4130

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los que el contenido en ADN de una muestra sea lmite (designado como LCN, iniciales de Low Copy Number), que a su vez viene de la mano de nuevas tecnologas tales como la PCR a tiempo real. Recientemente, y gracias a que las tcnicas utilizadas han conseguido rebajar mucho la cantidad de muestra necesaria para un anlisis, han empezado a acumularse datos en la bibliografa sobre obtencin de perfiles a partir de objetos tocados por un individuo determinado (16) y de transferencias secundarias de ADN (14). Este supone un campo vertiginoso ya que entramos mucho ms de lleno que nunca en el escabroso terreno de las contaminaciones y las interpretaciones errneas del hallazgo de un perfil concreto dentro del escenario de un delito. Algunos datos que aparecen publicados sobre cantidades de ADN recuperables de objetos habitualmente tocados por un individuo son: en carteras de piel, unos 75 ng, en bolgrafos 1,6 ng, en el tirador de una taquilla, 3,7 ng, en telfonos unos 10,3 ng, en llaves de coches, 1,1 ng, etc. En la palma de la mano hubo resultados muy variables, entre 2 y 150 ng, correspondiendo los valores menores a manos lavadas y secas (16). En cuanto a la informacin que podemos obtener de un sospechoso a partir de una evidencia determinada destacan dos aspectos. Por un lado la cantidad de informacin, que hoy da vemos multiplicarse con la llegada de los SNPs y la posibilidad de estudiarlos con las tecnologas de microchips. Toda esta tecnologa existe hoy da, si bien aun est pendiente de que se consigan abaratar los costes de su aplicacin para hacerlas asequibles a un buen nmero de usuarios. La aplicacin de avances tecnolgicos en otros campos de la ciencia tambin est dejando su huella en el estudio de agresiones sexuales. As, se ha publicado recientemente un trabajo sobre recuperacin precisa de espermatozoides sobre portaobjetos utilizando modernos equipos de microdiseccin con captura lser (3). Anteriormente se haba intentado algo parecido, recuperando los espermatozoides con una micropipeta pero sin resultados tan espectaculares (2, 27). Por otro lado est la cuestin del tipo de informacin que podemos obtener. Una de las caractersticas de los marcadores utilizados en aplicaciones forenses es que se localizan en ADN no codificante, es decir, que no revelarn ninguna caracterstica fenotpica o externa del individuo del que proceden (con excepcin del marcador de sexo). Hoy en da, y en parte gracias a los conocimientos aportados por proyecto genoma humano, esto puede cambiar. Como ejemplo citaremos el de la publicacin de una secuencia del gen del receptor de la melanocortina 1 (MC1R) (5). Las variaciones de 4131

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color en la piel y el pelo de los humanos estn causadas por diferencias en la distribucin, niveles y tipo del pigmento melanina que se produce en clulas especializadas (melanocitos). La melanina puede existir como eumelanina (de un color marrn-negro) o como phaeomelanina (color rojo-amarillo). Aunque la pigmentacin humana muestra una gran variedad de fenotipos, y estos se deben al control de varios loci, se sabe que en muchos casos el fenotipo pelirrojo esta asociado a la variante de un solo gen. Esto quiere decir que encontrar dicha variante en una muestra cuestionada sera una evidencia muy fuerte a favor de que el donante de la muestra fuese pelirrojo. Igual ocurre con la determinacin de un carcter gentico de herencia simple como es el de tener el lbulo de la oreja unido. Si la lista sigue incrementndose, pronto ser posible obtener un retrato robot gentico del implicado en un hecho delictivo que dej su huella gentica en la escena del crimen.

5. REFERENCIAS

BIBLIOGRFICAS

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