Vous êtes sur la page 1sur 157

Universit de Montral

valuation du risque cancrigne associ la contamination de leau potable de puits municipaux par les nitrates/nitrites dans certaines rgions rurales du Qubec

prsent par Sandrine Fleur Chbkou

Dpartement de sant environnementale et sant au travail Facult de Mdecine

Mmoire prsent la Facult des tudes suprieures en vue de lobtention du grade de Matrise s sciences en Sant environnementale et sant au travail

Dcembre, 2008 Sandrine Fleur Chbkou, 2008

ii Universit de Montral Facult des tudes suprieures

Ce mmoire intitul :

valuation du risque cancrigne associ la contamination de leau potable de puits municipaux par les nitrates/nitrites dans certaines rgions rurales du Qubec

prsent par : Sandrine Fleur Chbkou

a t valu par un jury compos des personnes suivantes : Docteur Ada Vyskocil, prsident-rapporteur Docteur Robert Tardif, directeur de recherche, Docteur Patrick Levallois, codirecteur de recherche Docteur Kannan Krishnan, membre du jury

Mmoire accept le : 23 Dcembre 2008

iii Rsum La spcialisation des techniques agricoles que nous connaissons ces dernires dcennies, particulirement dans les rgions rurales, est lorigine de labus de fertilisants. Ces derniers sont actuellement reconnus comme tant les causes principales de la contamination de leau souterraine par les nitrates. Suite leur ingestion via leau potable, les nitrates sont transforms en nitrites par la flore buccale. Une fois dans lestomac les nitrites ragissent avec certaines amines provenant de lalimentation pour gnrer des nitrosamines cancrognes. Lobjectif de notre tude tait destimer quantitativement lexcs de risque de cancer (ER) pour les populations de sept rgions rurales du Qubec qui consomme leau potable provenant de rseaux municipaux aliments en eau souterraine. Le territoire ltude tait caractris par une agriculture intensive dlevage. Les mdianes (et 95e centiles) rgionales des concentrations de nitrates mesures dans les rseaux de ces rgions taient de : 0,18 (2,74); 0,48 (10,35); 0,15 (1,28); 0,32 (11); 0,05 (0,76); 0,10 (4,69); 0,09 (2,13) mg N-NO3-/l. Nous avons envisag un scnario de transformation complte des nitrites et de certaines amines (dimthylamine, dithylamine, n-butylamine, mthylthylamine) en nitrosamines spcifiques : N-dimthylnitrosamine (NDMA), N-dithylnitrosamine (NDEA), N-ndibutylnitrosamine (NDBA) et N-mthylthylnitrosamine (NMEA). Pour estimer la concentration de nitrites forms dans lestomac, nous avons considr une consommation dfinie deau potable, le volume de lestomac et un taux de transformation des nitrates en nitrites. Supposant les quantits de nitrites et de chaque amine constantes pendant 1h, nous avons considr la constante de nitrosation spcifique chaque amine pour valuer la dose dexposition journalire chaque nitrosamine quivalente forme. Par la suite, la combinaison de cette dose un estimateur de potentiel cancrogne qhumain spcifique chaque nitrosamine, nous a permis dvaluer lER associ chacune delles. Globalement lanalyse a dmontr que les ER les plus levs, estims pour le NDBA, taient de lordre de 10-6, ne contribuant pas de faon significative une augmentation du risque de cancer pour ces populations. Mots cls : amines, cancer, composs N-nitross, eau potable, nitrates, nitrites, nitrosation endogne, nitrosamines.

iv Summary Specialization of agricultural practices in rural regions over the past few decades has led to overuse of fertilizers which are main causes of groundwater contamination by nitrates. After their ingestion through drinking water, nitrates are transformed into nitrites by the oral flora. Once in the stomach, nitrites react with some amines from food supply to form nitrosamines with some being probably carcinogenic to humans. The aim of this study was to quantitatively estimate the possible excess cancer risk (ER) for populations of seven rural regions in Quebec that consume water from public drinking water systems using groundwater. The studied regions practice extensive breeding agriculture. The regional medians (and 95th percentile) of nitrate levels in water from those seven regions were: 0.18 (2.74); 0.48 (10.35); 0.15 (1.28); 0.32 (11); 0.05 (0.76); 0.10 (4.69) and 0.09 (2.13) mg N-NO3-/l, respectively. Indeed, we first considered a scenario of complete transformation of nitrites and some amines (dimethylamine, diethylamine, n-butylamine and methylethylamine) into specific nitrosamines: Ndimethylnitrosamine butylamine (NDBA) (NDMA), and N-diethylnitrosamine (NDEA), N-nitrosodi-nN-nitrosomethylethylamine (NMEA). Gastric nitrite

concentrations were estimated on the basis of defined drinking water intake, stomach volume, and the transformation rate of nitrates into nitrites. Considering that levels of nitrites and each amine were kept constant for 1 hour, and taking in account the nitrosatability rate constant specific to each amine, we then estimated the daily doses of the corresponding endogenously formed nitrosamines. Furthermore combination of dose with the human cancer potency factor qhuman specific to each nitrosamine, allowed the estimation of excess cancer risk. The highest ER estimated for NDBA was in the order of 10-6, thus not contributing to a significant increase in the risk of cancer for that population. Keywords: amines, cancer, drinking water, endogenous nitrosation, nitrates, nitrites, Nnitroso compounds, nitrosamines.

v TABLE DES MATIRES PAGE TITRE.i IDENTIFICATION DU JURY.ii RSUMiii SUMMARYiv TABLE DES MATIRES.v LISTE DES FIGURES.viii LISTE DES TABLEAUX..ix LISTE DES SIGLES ET ABRVIATIONSx REMERCIEMENTS..xi AVANT-PROPOS..xii

1. 2.

CHAPITRE I: INTRODUCTION.1 CHAPITRE II: REVUE DE LITTRATURE.5 2.1 NITRATES ET NITRITES ............................................................................................................... 6 2.1.1 Identit et proprits physico-chimiques............................................................................... 6 2.1.2 2.1.3 Utilisations ............................................................................................................................ 7 Sources .................................................................................................................................. 8
Sources naturelles (cycle de lazote)...........................................................................................8 Sources anthropiques ..................................................................................................................9

2.1.3.1 2.1.3.2

2.1.4

Devenir environnemental .................................................................................................... 10

2.2 NITRATES (NO CAS 14797-55-8) .............................................................................................. 11 2.2.1 Exposition............................................................................................................................ 11


2.2.1.1 2.2.1.2 2.2.1.3 2.2.1.4 2.2.1.5 Alimentation .............................................................................................................................11 Eau ...........................................................................................................................................12 Air.............................................................................................................................................13 Estimation de lexposition exogne totale et contribution relative de leau potable lapport .14 Synthse endogne....................................................................................................................15

2.2.2

Pharmacocintique et biotransformation............................................................................ 16

2.3 NITRITES (NO CAS 14797-65-0) ............................................................................................... 18 2.3.1 Exposition............................................................................................................................ 18


2.3.1.1 2.3.1.2 2.3.1.3 2.3.1.4 Alimentation .............................................................................................................................18 Eau............................................................................................................................................19 Air.............................................................................................................................................19 Synthse endogne....................................................................................................................19

2.3.2 2.3.3

Pharmacocintique et biotransformation............................................................................ 20 Taux de transformation des nitrates en nitrites................................................................... 21

2.4 COMPOSS N-NITROSS ............................................................................................................ 21 2.4.1 Origine et proprits physico-chimiques............................................................................. 22

vi
2.4.2 2.4.3 2.4.4 2.4.5 Exposition humaine ............................................................................................................. 23 Toxicit et cancrognicit.................................................................................................. 24 Indice de potentiel cancrigne........................................................................................... 25 Cas particulier des nitrosamines......................................................................................... 33
Origine......................................................................................................................................33 Prcurseurs amins ...................................................................................................................34 Cintique de la N-nitrosation (constante de nitrosation)...........................................................35 NPRO test .................................................................................................................................39 Modulateurs de la N-nitrosation ...............................................................................................40 Biotransformation et toxicit ....................................................................................................44 Classification ............................................................................................................................48

2.4.5.1 2.4.5.2 2.4.5.3 2.4.5.4 2.4.5.5 2.4.5.6 2.4.5.7

2.5 TUDES ANIMALES DE TOXICIT DES NITRATES ET NITRITES ..................................................... 48 2.5.1 Toxicit aigue ...................................................................................................................... 48 2.5.2 2.5.3 2.5.4 2.5.5 2.5.6 Toxicit sub-chronique ........................................................................................................ 48 Toxicit chronique............................................................................................................... 49 Mutagnicit et gnotoxicit................................................................................................ 49 Cancrognicit .................................................................................................................. 49 Effets sur la reproduction et le dveloppement ................................................................... 50

2.6 EFFETS SUR LA SANT HUMAINE ............................................................................................... 51 2.6.1 Mthmoglobinmie ............................................................................................................ 51 2.6.2 2.6.3 2.6.4 Effets sur la reproduction et le dveloppement ................................................................... 54 Cancer ................................................................................................................................. 55 Autres effets ......................................................................................................................... 56

2.7 NORMES ET RECOMMANDATIONS.............................................................................................. 57 2.7.1 Doses journalires acceptables (DJA) ................................................................................ 58 2.7.2 2.7.3 2.7.4 2.7.5 2.8 3. Normes qubcoises ............................................................................................................ 58 Recommandations canadiennes........................................................................................... 59 Normes amricaines ............................................................................................................ 59 Critres de lOMS ............................................................................................................... 59 MTHODES DANALYSE ET TECHNIQUES DE TRAITEMENT ......................................................... 60

CHAPITRE III : PROBLMATIQUE, OBJECTIFS ET MTHODOLOGIE.61 3.1 PROBLMATIQUE ...................................................................................................................... 62 3.2 OBJECTIFS ................................................................................................................................. 66 3.3 MTHODOLOGIE ....................................................................................................................... 66 3.3.1 Territoire ltude .............................................................................................................. 67 3.3.2 3.3.3 3.3.4 3.3.5 valuation du potentiel dangereux...................................................................................... 69 Caractrisation de la toxicit .............................................................................................. 70 Estimation de lexposition de la population ........................................................................ 73 valuation du risque ........................................................................................................... 75
Estimation du risque .................................................................................................................75 Caractrisation du risque ..........................................................................................................76

3.3.5.1 3.3.5.2

4 5

CHAPITRE IV: ARTICLE SCIENTIFIQUE....77 CHAPITRE V: DISCUSSION ET CONCLUSION.115

vii
5.1 5.2 6 7 DISCUSSION ............................................................................................................................ 116 CONCLUSION .......................................................................................................................... 119

RFRENCES BIBLIOGRAPHIQUES..120 ANNEXES138

viii

LISTE DES FIGURES


3. CHAPITRE I : INTRODUCTION Figure 1. Rgions couvrant le territoire ltude ..4 4. CHAPITRE II : REVUE DE LITTERATURE Figure 2. Biotransformation de la N-dimthylnitrosamine...46 5. CHAPITRE IV : ARTICLE SCIENTIFIQUE Figure 1. Sensitivity analysis...114

ix

LISTE DES TABLEAUX


1. CHAPITRE II : REVUE DE LITTRATURE Tableau 1. Proprit physico-chimiques des nitrates et nitrites.6 Tableau 2. Indices de cancrognicit utiliss pour lanalyse de risque et leurs caractristiques...31 Tableau 3. Manifestations cliniques dues au taux de mthmoglobine dans le sang52 Tableau 4. Caractristiques des bassins versants des rivires drainant les diverses rgions tudies.68 Tableau 5. Nitrosamines et tudes animales de cancrognicit.71 2. CHAPITRE IV : ARTICLE SCIENTIFIQUE Table 1. Nitrate concentrations in drinking water systems of the four regions studied supplied with groundwater...108 Table 2. Classification of nitrate levels in the drinking water systems..109 Table 3. Total daily intakes of amines (mg/day)110 Table 4. Daily doses of nitrosamines (g/day) calculated from a randomly generated sample of 10 000..111 Table 5. Estimation of excesses cancer risk resulting from the endogenous exposure to specific nitrosamine..112

LISTE DES SIGLES ET ABRVIATIONS


AQT : apport quotidien total CalEPA : California Environmental Protection Agency CEAEQ : Centre dexpertise en analyse environnementale du Qubec CIRC : Centre International de Recherche sur le Cancer CMA : concentration maximale acceptable DJA : dose journalire acceptable ENOC : composs N-nitross endognes EPA : Environmental Protection Agency ER: Excs de risque de cancer NDBA: N-nitrosodi-n-butylamine NDEA: N-nitrosodithylamine NDMA: N-nitrosodimthylamine NMEA: N-nitrosomthylthylamine NOAEL (no observed adverse effect level): concentration sans effet nocif observ NOC : composs N-nitross NOEL (no observed effect level): concentration sans effet observ MDDEP : Ministre du dveloppement durable, de lenvironnement et des parcs du Qubec LMS : Linearized multistage LD50 : dose ltale 50 OEHHA : Office of Environmental Health Hazard Assessment (Gouvernement de Californie) OMS : Organisation Mondiale de la Sant RfD : dose de rfrence

xi REMERCIEMENTS La rdaction de ce mmoire sest faite avec la prcieuse collaboration de personnes dont je suis particulirement fire. Comme le dit si bien cet adage : Les paroles senvolent, seuls les crits restent Je suis donc tout fait heureuse davoir loccasion de tmoigner chacune de ces personnes uniques, et ce de faon permanente, ma reconnaissance et ma gratitude pour tout leur soutien. Je commencerai tout dabord par remercier mes directeurs de recherche Robert Tardif, Patrick Levallois ainsi que Manuel Rodriguez. Ma relation avec eux ft tout fait remarquable et je tiens une fois de plus leur souligner mon plus profond respect. Jai tellement appris deux le sens des priorits, la gestion de plusieurs dossiers et jen passe. Je tiens aussi mettre lemphase sur leur simplicit, disponibilit et respect qui mont donne beaucoup daisance dans laccomplissement de ma tche. De plus, leurs conseils judicieux mont permis de mener bien les nombreux projets (colloques, confrences,) que jai raliss tout au long de mes annes dtudes. Je tiens aussi remercier Mme Ginette Charest-Tardif pour son soutien autant technique que moral, particulirement dans les moments o jtais trs dsempare. Mes remerciements les plus sincres Monsieur Claude mond pour sa collaboration dans certains de mes travaux, sa patience incommensurable, et par-dessus tout, sa volont perptuelle pour aider. Je tiens aussi souligner lappui financier sous forme de bourse des Fonds qubcois de la recherche sur la nature et les technologies (FQRNT) et Fonds de la recherche en sant du Qubec (FRSQ). Une pense spciale mon amie Calline qui a toujours t disponible pour moi et ma t dun trs grand soutien moral. Je ne saurai terminer sans remercier de faon particulire, tous les membres de ma famille et ce sans exception pour leur attention spciale et leur rconfort perptuel malgr la distance. Je vous aime tant! Trs loin des yeux, mais prs du cur

xii AVANT-PROPOS Ce mmoire sinscrit dans le cadre dun vaste projet d action concerte entre le Fonds qubcois de la recherche sur la nature et les technologies (FQRNT) et le Fonds de la recherche en sant du Qubec (FRSQ) portant sur la protection des sources deau potable municipales en milieu agricole du Qubec. Plus prcisment, il fait partie de lun des cinq volets du projet dont le but tait dvaluer limpact sanitaire associ la prsence des nitrates/nitrites dans leau potable de certaines rgions agricoles du Qubec. Labus de fertilisants pour amender les sols serait lorigine de la contamination des eaux souterraines par les nitrates/nitrites dans les rgions vocation fortement agricole. Et lingestion subsquente deau contamine par ces substances pourrait induire des risques de cancer via la formation endogne de nitrosamines cancrignes. Cependant la preuve dun lien direct de causalit entre le cancer et la prsence de nitrates dans leau reste encore tre valide du fait de la difficult valuer lexposition endogne aux nitrosamines. Les rsultats dtudes pidmiologiques axes sur le sujet restent trs ambigus et controverss. Par ailleurs, du ct des exprimentations animales, la cancrognicit des nitrosamines ne fait pas de doute. Les rsultats soutiennent majoritairement laugmentation du risque de cancer de divers organes par lintermdiaire de la formation endogne de nitrosamines cancrignes. Malheureusement, la formation de ces dernires fait intervenir divers paramtres (acidit - pH, quantits damines alimentaires, taux de transformation des nitrates en nitrites) dont lvaluation est trs complexe. Par ailleurs, lenjeu thique que soulverait lexprimentation humaine complique davantage lvaluation du risque suite lexposition humaine. Seules les donnes dtudes animales restent donc porte de main pour valuer la toxicit de ces substances. Jusquici tout nest pas rsolu car les nitrosamines constituent une trs grande famille de composs aux caractristiques parfois variables. Face tout cet amalgame de difficults, des modles mathmatiques ont t dvelopps dans le but de prdire des probabilits dexcs de risque de cancer rsultant de lingestion de nitrates/nitrites. Nous dveloppons ici lun de ces modles qui a t successivement mis au point par nos prdcesseurs et qui, nous esprons, inspirera

xiii dautres aprs nous. En fait nous croyons quun pareil modle serait trs utile pour enfin estimer des risques hypothtiques de cancer malgr les nombreuses limites inhrentes lvaluation de lexposition endogne aux nitrosamines cancrognes. Jespre pardessus tout que ce projet puisse susciter lintrt dautres chercheurs pour cette problmatique, car la validation de ce modle pourrait enfin permettre de prendre en compte le risque de cancer dans ltablissement des normes de nitrates/nitrites dans leau potable. Puisquil faille bien commencer quelque part, jespre que ce mmoire inspirera et suscitera lintrt de plus dun pour ce qui est de la problmatique nitrates/nitrites et cancer, qui mon humble avis, na pas dit son dernier mot. Le prsent mmoire a t rdig sous forme darticle scientifique. Les sept rgions qui ont t tudies se retrouvent le long de la valle du fleuve St-Laurent dans la province du Qubec (Canada). Il sagit de zones rurales dont lagriculture constitue parfois lactivit conomique principale. Ces rgions sont les suivantes : Bas-St-Laurent, Capitale-Nationale, Centre-du-Qubec, Chaudire-Appalaches, Estrie, Lanaudire, Montrgie. Pour des besoins de clart et de lgret, seuls les rsultats de quatre de ces rgions ont t prsents dans larticle scientifique. Il sagit de celles dont les moyennes rgionales de concentrations de nitrates taient les plus leves. Les rsultats des trois autres rgions sont prsents en annexes, la fin du document.

1. CHAPITRE I: INTRODUCTION

2 La contamination de leau potable par les nitrates/nitrites constituerait un risque de cancer pour les populations exposes. En effet, une fois ingrs, les nitrates sont transforms par la flore buccale en nitrites. Dans lestomac ces derniers transformeraient les prcurseurs nitrosables (amines et amides) provenant largement de lalimentation, en composs N-nitross (NOC) cancrignes. La formation endogne de ces substances, encore appele nitrosation endogne , contribuerait jusqu 75% environ leur exposition totale (Jakszyn et Gonzalez 2006b; Tricker 1997). Cette forte contribution de la nitrosation endogne en lien indirect avec le couple nitrates/nitrites, suscite lintrt pour lvaluation du risque hypothtique de cancer qui pourrait tre associ lingestion de ces substances. Au Qubec, ladoption du rglement sur la qualit de leau potable en 2001 (Gouvernement du Qubec 2001) a eu quelques rpercussions dans les municipalits. En effet ce rglement impose des normes de qualit plus strictes, particulirement pour les rseaux aliments en eaux de surface qui doivent dornavant filtrer et dsinfecter leurs eaux. Cest ainsi que ces exigences du nouveau rglement saccompagnent de cots parfois trs levs pour les municipalits vises. Pire encore, ces dernires sont gnralement de petites municipalits rurales dont les activits conomiques principales sont agricoles et de surcrot les plus intenses de la province (Gravel 2006). On comprend aisment pourquoi leau souterraine est communment utilise comme principale source dapprovisionnement en eau potable par ce type de municipalits (Gravel 2006; Glinas et al. 2004). Par ailleurs, les activits agricoles et dlevage se sont beaucoup spcialises ces dernires annes. Cest ainsi que dans certaines rgions agricoles du Qubec, les nombres dunits animales (UA, reprsente la concentration danimaux dlevage par unit de surface) trs levs crent des pressions de plus en plus proccupantes sur lenvironnement. Cest aussi le cas des fertilisants (chimiques et fumier) dont les quantits utilises aux fins de lamendement des sols dpassent largement les besoins naturels des sols (Gravel 2006; Glinas et al. 2004).

3 Leau souterraine que lon exploite au Qubec circule dans les 100 premiers mtres de profondeur (MDDEP 2007). Daprs Madison et Brunett (1985), cette profondeur leau serait trs vulnrable la contamination par les nitrates issus de la fertilisation abusive des sols. Ainsi, compte tenu des pressions agricoles trs leves sur les sols dune part, et du fait que les municipalits rurales sapprovisionnent principalement en eau souterraine dautre part, il serait raisonnable de penser que les eaux de celles-ci soient possiblement contamines par les nitrates. Les rgions tudies dans le cadre de ce projet sont trs fortement agricoles (figure 1) et reprsentent environ 45% de la population qubcoise desservie par leau souterraine. Compte tenu de ce qui vient dtre mentionn, les populations de ces rgions seraient donc vraisemblablement exposes aux eaux contamines par les nitrates. La prsente valuation du risque de cancer pour les populations de ces rgions est donc pleinement justifie par lassociation possible entre les nitrates contaminant leau et le risque de cancer.

Bas-St-Laurent

Capitale-Nationale

Bassins versants
(tude du MENV)

Lanaudire

ChaudireCentreAppalaches duQubec Estrie

Montrgie

Boyer Etchemin Chaudire LAssomption Bayonne Nicolet Yamaska

Figure 1. Rgions couvrant le territoire ltude1

Daprs Gravel C. 2006. Impact des pressions agricoles sur la qualit de l'eau des rseaux d'aqueducs municipaux du Qubec aliments en eau souterraine. Qubec: Universit Laval.

2. CHAPITRE II: REVUE DE LITTRATURE

2.1 Nitrates et Nitrites 2.1.1 Identit et proprits physico-chimiques

Nitrate Formule chimique NoCAS Poids molculaire Proprits acido-basiques pH en solution aqueuse Solubilit dans leau NO314797-55-8 62 Base conjugue dacide fort : HNO3 (pKa = 1,3) 58 Sels trs solubles

Nitrite NO214797-65-0 46 Base conjugue dacide faible : HNO2 (pKa = 3,4) ~9 Sels trs solubles

Non volatile Non volatile Volatilit Tableau 1. Proprits physico-chimiques des nitrates et nitrites. Les donnes ont t extraite de : OMS (2007) Le nitrate et le nitrite sont des ions ubiquitaires naturellement prsents dans la biosphre. Le nitrate est un nutriment essentiel pour la vie de divers organismes (plantes, animaux, hommes). En effet, lazote qui est essentiel la synthse protique des plantes est principalement prlev par celles-ci sous la forme de nitrate. Ce dernier provient des fertilisants chimiques ou de la conversion des autres formes organiques de lazote (Chung et al. 2003). En plus dtre chimiquement inerte, le nitrate constitue la forme la plus stable de toutes les formes dazote combines loxygne (OMS 2007). Cest donc en raison de cette stabilit relative que la plupart des autres formes dazote de lenvironnement auront tendance se transformer en nitrates. Par consquent, toutes les sources dazote combin (organique ou minral NO2-, NH4+) devraient tre considres comme des sources potentielles de nitrates (OMS 2007; Sant Canada 1987).

7 Lion nitrite quant lui contient latome dazote dans un tat doxydation relativement instable. Les processus chimiques et biologiques pourront plus tard rduire cet ion en plusieurs autres composs ou loxyder en nitrate. 2.1.2 Utilisations Le nitrate est principalement utilis comme fertilisant inorganique. tant donn quil est essentiel la croissance des plantes, des quantits adquates de cet lment doivent parfois tre fournies sous forme de fertilisants, selon le type de culture et la priode dpandage. Il est aussi trs utilis comme agent oxydant (synthse de drivs nitrs, de loxyde nitreux, de ciments spciaux), pour la coagulation des latex, dans lindustrie nuclaire, dans la fabrication dexplosifs (pyrotechnique) et dans lindustrie du verre (OMS 2007). Dans lindustrie alimentaire, on lutilise comme colorant et agent de conservation, principalement sous formes nitrate de potassium ou de sodium. On lutilise aussi pour le contrle des corrosions dans les rseaux de distribution deau potable (IPCS 1999). Les nitrites quant eux sont essentiellement utiliss comme colorant et agent de conservation des aliments. Cest le cas des viandes et drivs dans lesquels le nitrite de sodium est ajout non seulement pour la salaison, mais aussi pour prserver le got et la couleur rouge de lhmoglobine qui autrement serait oxyde pour devenir brune (Dietrich et al. 2005). Cette utilisation du nitrite qui est trs rglemente dans la plupart des pays, se fait surtout dans le but de prvenir le botulisme. Celui-ci est caus par les toxines produites par des souches de Clostridium botulinum. Cette bactrie se retrouve parfois dans la viande crue et pourrait mme persister aprs la cuisson de celle-ci (Sant Canada 2004a; ACIA 2006). Les nitrites sont aussi utiliss dans la manufacture des teintures et du caoutchouc, dans lindustrie textile et photographique. Ils servent aussi dinhibiteur de corrosion et dantidote dans des cas dempoisonnement au cyanure (IPCS 1999). Dans lindustrie, ils sont utiliss pour transformer des amines en sels de diazonium qui sont des colorants organiques.

8 2.1.3 Sources En gnral, les sources de nitrates dans leau (en particulier les eaux souterraines) sont les suivantes : les organismes animaux et vgtaux en dcomposition, les rejets animaux et humains (fosses septiques et gouts dficients), les engrais inorganiques base dazote, lpandage de boue et de fumier, les eaux uses domestiques et les formations gologiques contenant des composs azots solubles (Sant Canada 1987). Cependant, ces sources peuvent tre classes selon leurs origines naturelle et anthropique.

2.1.3.1 Sources naturelles (cycle de lazote) Parmi les sources naturelles de nitrates, on peut citer les sources dazote organique, les bactries fixatrices de lazote (exemples : bactries symbiotiques du genre Rhizobia et bactries asymbiotiques des genres azobacter et Clostridium) et dans une moindre mesure lazote atmosphrique (N2). Toutes ces sources constituent des prcurseurs du cycle naturel de lazote dont le nitrate est un mtabolite important. Ce dernier est produit suite la nitrification des autres formes azotes contenues dans ces prcurseurs. Ainsi, dans le cycle de lazote, la fraction organique de lazote [-CNH3-] et lazote molculaire (N2) qui sont prsents au niveau du sol sont pralablement dgrads par laction des microorganismes (des plantes, du sol, de leau) en ammonium (NH4+). Pour ce qui est du N2, cette conversion peut aussi se faire dans une moindre mesure par les dcharges lectriques comme la foudre. Lammonium issu de cette conversion initiale sera son tour successivement oxyd en nitrites, puis nitrates toujours par action microbienne et dans les conditions arobiques qui rgnent la surface du sol (OMS 2004). Ces processus peuvent se rsumer comme suit : NH4+ + 1,5 O2 NO2- + H2O + 2H+ NO2- + 0,5 O2 NO3Par les bactries du genre nitrosomonas (1) Par les bactries du genre nitrobacter (2)

En somme, on peut dire que le nitrate naturel provient principalement de la minralisation de la matire organique prsente au niveau du sol. Tout ceci explique

9 quil soit un constituant et mtabolite normal de la biosphre, dont la vgtation et les mammifres qui la consomment. Pour ce qui est du nitrite, cest un intermdiaire la fois des processus de nitrification et de dnitrification du cycle de lazote. Cest aussi un mtabolite normal chez les mammifres (IPCS 1999). Il peut aussi tre form suite la rduction enzymatique du nitrate par les bactries possdant des nitrorductases. Chez lhumain, on retrouve normalement ces bactries dans la partie infrieure du tube digestif (petit intestin). Cependant, chez les individus souffrant dhypochlorhydrie ou chez les nourrissons (ayant une faible acidit gastrique), elles peuvent aussi envahir la partie suprieure du tube digestif. En outre, la conversion des nitrates en nitrites peut aussi subvenir lors de lentreposage des vgtaux tels que les pinards (Montesano et Bartsch 1976). 2.1.3.2 Sources anthropiques Les engrais pandus sur le sol lors dactivits agricoles et dlevage intenses constituent les sources majeures de nitrates dans lenvironnement (OMS 2004; Fields 2004). Actuellement, ils sont considrs comme tant les sources majeures de nitrates dans leau. Cependant, les niveaux de nitrates peuvent aussi tre augments dans les eaux de consommation lorsque la chloramination fait partie du processus de traitement (McGuire et al. 1999; Weyer et al. 2006). En outre, le nitrate form dans lair suite la photolyse des oxydes dazote (NOx) contenus dans les missions industrielles et dautomobiles constitue aussi une source anthropique de nitrates (Ward et al. 2007). tant donn que les nitrites sont utiliss comme agent de conservation des aliments dont les viandes, ces dernires peuvent en constituer des sources directes (IPCS 1999). Par ailleurs, les nitrites peuvent aussi provenir dun excs dammoniaque dans les rseaux de distribution deau potable. Cest le cas lorsquil sen forme in situ partir de chlore et dammoniaque, ou lorsque les chloramines sont utilises comme dsinfectant (OMS 2004; McGuire et al. 1999; Weyer et al. 2006), ou encore lors de la rduction bactrienne du nitrate contenu dans des eaux peu oxygnes.

10

2.1.4 Devenir environnemental Les nitrates sont des lments essentiels pour la croissance des plantes. Cest justement sous forme nitrates quelles prlvent du sol lazote utilis pour effectuer leur synthse protique (azote organique [-CNH3-]). Le surplus de nitrates au niveau du sol est par la suite mobilis vers la nappe phratique lors de linfiltration des eaux. Parce que la plupart des sources de nitrates se retrouvent la surface ou dans la colonne du sol, les aquifres peu profonds (<100 pieds de profondeur) sont gnralement considrs comme tant plus susceptibles la contamination que les aquifres plus profonds (Madison et Brunett 1985). Ainsi, les nitrates atteindront les aquifres peu profonds en grande quantits en conditions arobiques vu que le taux de dnitrification y est faible, faisant ainsi des eaux souterraines les sources deau potable gnralement les plus pollues. Ceci nest pas le cas dans les aquifres trs profonds qui sont des milieux rducteurs compte tenu des conditions anarobiques qui y rgnent. Ainsi, dans ce type daquifres, les nitrates pourront tre dnitrifis presque compltement en azote par action microbienne (exemple des bactries Pseudomonas) (Glinas et al. 2004). Malgr tout, ces nappes trs profondes peuvent tre souvent contamines. Cest le cas lorsquen plus de connections hydrauliques entre les deux niveaux daquifres, quil existe un gradient hydraulique descendant qui puisse permettre la migration en fonction du temps des nitrates contaminants vers les profondeurs (Madison et Brunett 1985). En somme, la profondeur de la nappe souterraine, le taux de prcipitations, la prsence dautres matires organiques, les types de sols et leur conductivit hydraulique, les proprits physico-chimiques du sol sont tous des dterminants du devenir des nitrates dans le sol (Madison et Brunett 1985; OMS 2004). Loccurrence de la nitrification et de la dnitrification dans les eaux de surface dpend de leurs tempratures et pH. Cependant, le prlvement par les plantes reste la cause principale de la baisse des niveaux de nitrates dans les eaux de surface. Pour ce qui est des nitrates de lair, ceux-ci sont rapidement convertis en acide nitrique (pluies acides) et en particules darosols inorganiques. Ces derniers sont efficacement purs par des dpts humide ou sec (NIPHEP 1989).

11 2.2 Nitrates (No CAS 14797-55-8) 2.2.1 Exposition Lexposition humaine aux nitrates est principalement due lexposition exogne (ingestion daliments et deau potable) et la synthse endogne. La contribution de chaque source est hautement variable, les aliments constituant la source la plus importante de lexposition exogne. 2.2.1.1 Alimentation Le nitrate est un constituant normal de la dite typique. Celle-ci constitue la source dexposition principale cette substance lorsque ses concentrations dans leau sont faibles. Les sources alimentaires de nitrates incluent entres autres les lgumes, les produits de viande (saumurs), les produits craliers (boulangerie), et dans une moindre mesure les poissons et les produits laitiers (fromages) (Grosse et al. 2006). De toutes ces sources, les lgumes constituent les plus importantes. Les niveaux sont trs varis en fonction des lgumes et lon compte parmi les plus concentrs : la laitue, la betterave, les pinards (environ 4259 mg/kg) et les lgumes racines (environ 5150 mg/kg) (Chung et al. 2003). Ces niveaux peuvent aussi tre affects par la faon de les apprter (le mode de cuisson entre autres), lutilisation de fertilisants, les conditions de culture dont particulirement la temprature du sol et lintensit de lensoleillement (Gangolli et al. 1994). Bien que les lgumes aient rarement t indexs dans les cas de toxicit aigu, leur contribution lapport de nitrates par une dite typique est estime varier de 85 90% (Chung et al. 2003; Sant Canada 1987; Gangolli et al. 1994; Vermeer et van Maanen 2001; Walker 1990). Le reste de lapport provient essentiellement des viandes et du fromage dans lesquels le nitrate de potassium (ou de sodium) est souvent utilis pour la salaison ou comme agent de conservation et colorant (ATSDR 2007). Au Canada, sa concentration dans les salaisons, de mme que celle des nitrites, a diminu du fait de la rglementation concernant ces additifs alimentaires. Pourtant aux tats-Unis, on estime la contribution des salaisons environ 10% de lapport alimentaire de nitrates et de nitrites (Sant Canada 1987). Soulignons que lapport en nitrates varie aussi en fonction du rgime alimentaire : vgtarien ou standard.

12 Au Canada, lapport quotidien total (AQT) en nitrates a t estim 44,3 mg/jour (soit 10 mg N-NO3-) (Sant Canada 1987). Cette valeur se situe dans la partie infrieure de ltendue estimative de lOrganisation mondiale de la sant (43 131 mg/jour) et de lEnvironmental Protection Agency des tats-Unis (40 100 mg/jour). En Europe, il est estim environ 50-140 mg/jour (OMS 2007; ATSDR 2007; OEHHA 1997). Cependant, cet AQT peut tre beaucoup plus lev chez les vgtariens ou dans le cadre dune alimentation riche en nitrates, cas dans lesquels des niveaux variant de 39 268 mg/jour ont t rapports dans les urines (OMS 2007). linverse, il peut aussi tre diminu lorsque les niveaux de nitrates dans leau augmentent. Cest justement pour cette raison quil a t estim 33 mg N-NO3- (soit 146 mg NO3-) pour les populations rurales qubcoises (INSPQ 2003; Levallois et al. 2000; Phaneuf et al. 2004). 2.2.1.2 Eau 2 Les niveaux de nitrates sont faibles dans les eaux de surface. Mme sils varient habituellement entre 0,1 et 5 mg N-NO3-/L, ils sont en gnral infrieurs 1 mg NNO3-/L (OMS 2007). Ces niveaux dpendent des saisons et varient habituellement de moins de 0,5 mg N-NO3-/L lt 5 mg N-NO3-/L et plus lhiver (NIPHEP 1989). Les niveaux pourraient cependant augmenter lorsque le cours deau est aliment par un aquifre riche en nitrates. Les concentrations sont gnralement plus leves dans les eaux souterraines de puits peu profonds do elles varient normalement de 0,1 10 mg N-NO3-/L (Sant Canada 1987). Toutefois, lorsque ces niveaux sont compris entre 3,1 et 10 mg N-NO3-/L, il y a lieu de souponner linfluence dactivits anthropiques sur la nappe phratique (Madison et Brunett 1985). Il a justement t dmontr que les puits peu profonds situs dans des rgions ayant un pool important dazote (et dont les sols sont bien drains et constitus de roches non consolids) taient plus susceptibles davoir des niveaux levs de nitrates (Nolan et al. 2002). En outre, les niveaux sont encore plus levs dans les puits individuels car ceux-ci ne sont pas rglements comme
Les concentrations de nitrates et de nitrites dans leau sont souvent exprimes dans la littrature en poids dazote de nitrate N-NO3- et poids dazote de nitrite N-NO2- . Les quivalents sont les suivants : 1 mg N-NO3-/L = 4,43 mg NO3-/L et 1 mg N-NO2-/L = 3,29 mg NO2-/L (Sant Canada 1987).
2

13 les puits publics. Dailleurs, la plupart des cas de toxicit universellement rapports sont le plus souvent associs lingestion deaux de puits privs dont les niveaux dpassent parfois 50 mg NO3-/L et plus (OMS 2007). Au Canada, les concentrations de nitrates dans les eaux municipales sont gnralement infrieures 5 mg N-NO3-/L (Sant Canada 1987). Les concentrations de nitrates et de nitrites dans les rseaux deau potable du Qubec sont, dans la trs grande majorit des cas, trs faible. Ainsi, des niveaux de ces substances suprieures 3 mg N/L ont t observs seulement dans 4,3 % des prlvements raliss entre 1995 et 2000 dans les rseaux surveills dans le cadre du Rglement sur la qualit de leau potable (INSPQ 2003). Aux tats-Unis (U) (Californie), les niveaux de cette substance dans leau souterraine sont en gnral infrieurs 2 mg N-NO3-/L. Les nitrites eux, sont gnralement ngligeables (Mueller et Helsel 1996). Des niveaux dpassant 20 mg N-NO3-/L ont t rapports pour environ 3% des eaux de surface et 6% des eaux souterraines (OMS 2007). Cependant, comme consquence des activits agricoles, les concentrations de nitrates peuvent facilement augmenter. Cest le cas dune rgion agricole de lInde o des niveaux atteignant 1500 mg NO3-/L ont t mesurs dans leau souterraine (OMS 2007).

2.2.1.3 Air tant donn que le nitrate nest pas volatil, ses niveaux compar aux apports alimentaires et hydriques. Ainsi, des dans lair sont concentrations ngligeables. Par consquent, son apport via lair est gnralement considr ngligeable atmosphriques variant de 0,1 0,4 g/m3 ont t rapportes, les plus faibles tant dans le Pacifique Sud. Des concentrations trs leves variant de 1 40 g/m3 ont aussi t rapportes avec des moyennes annuelles de 1 8 g/m3 (OMS 2007). Bien quon sache trs peu sur loccurrence du nitrate dans lair intrieur, un lien avec lutilisation domestique darosols a t dmontr. Pour ce qui est de lair extrieur, les moyennes de ses concentrations dans les arosols sont denviron 3,2 g/m3 et comme acide nitrique denviron 0,9 g/m3. En t les concentrations sont 1,5 fois environ plus leves que

14 celles mesures durant lhiver (NIPHEP 1989). En 1990 au Canada, la moyenne annuelle des concentrations de nitrates dans lair ambiant tait de 0,88 g/m3 dans 34 localits o avaient t installes 50 stations dchantillonnage (Sant Canada 1987). Lapport quotidien de nitrates par inhalation avait alors t estim environ 18 g/jour pour un adulte (volume respiratoire quotidien de 20 m3) et 1,8 g chez un nourrisson (volume respiratoire quotidien de 2 m3). Aux tats-Unis les apports sont plus levs et ont t estims varier de 25 70 g/jour pour un adulte (Sant Canada 1987).

2.2.1.4 Estimation de lexposition exogne totale et contribution relative de leau potable lapport La plus grande contribution lapport quotidien total (AQT) en nitrates provient des aliments, suivie de leau. Cette dernire contribue en gnral pour moins de 14% de lAQT. La contribution de lair est considre ngligeable (OMS 2004, 2007; Sant Canada 1987). Ainsi, au Canada, Sant Canada estime lAQT de nitrates pour un adulte 51 mg/jour, soit 44,3 mg provenant des aliments (87% de lapport) et 6,8 mg de leau potable (13% de lapport) lorsque celle-ci a une concentration moyenne de 4,5 mg NNO3-/L. Cependant, lorsque leau est fortement contamine, son apport peut considrablement augmenter, atteignant mme 50% aprs ingestion de 1,5 L dune eau 30 mg N-NO3-/L, lAQT tant alors pass de 51 99 mg/jour (Sant Canada 1987). Aux U, lapport de leau est encore plus faible (2 3% de lAQT). En effet, pour plus de 99% de la population, seulement 1 3% des nitrates proviennent de leau. La contribution de cette dernire lexposition totale de nitrates devient importante seulement dans les zones o la contamination de leau est notable (OEHHA 1997). Pour ce qui est des nourrissons, leau utilise pour la prparation des laits materniss est gnralement la principale source de nitrates. Ainsi pour des nourrissons de 3 5 kg, une consommation moyenne de 0,6 L/jour deau ayant une concentration moyenne de 4,5 mg NO3-/L (prparations et boissons comprises), les exposerait 0,7 mg/kg/jour en moyenne. Cependant, si leau contenait plutt 50 mg NO3-/L, cette

15 exposition pourrait atteindre 8 mg NO3-/kg/jour (OMS 2004; OMS 2007; Sant Canada 1987). Soulignons que cet apport varie en fonction du rgime alimentaire des nourrissons et pourrait tre trs lev chez ceux dont des lgumes sont introduits trs tt dans le rgime alimentaire. Pour ce qui est des enfants essentiellement nourris au sein, lapport en nitrates est considr ngligeable (OEHHA 1997); la quantit de nitrates mesure dans le lait humain ayant t estime environ 0,32 mg N-NO3-/L seulement (INSPQ 2003). 2.2.1.5 Synthse endogne Il existe une synthse endogne de nitrates, estime en moyenne environ 1 mmol/jour ou encore 62 mg NO3-/jour (=14 mg N-NO3-/jour), soit 1 mg/kg/jour pour un adulte en sant denviron 60 kg (OMS 2004, 2007; Sant Canada 1987; Tannenbaum et al. 1991). En effet, des tudes ont dmontr que lexcrtion urinaire de nitrates augmente considrablement lors dinflammations et dinfections gastro-intestinales dont particulirement la diarrhe (Gangolli et al. 1994; INSPQ 2003; OMS 2004). Ainsi, lors de leur hospitalisation pour cause de diarrhes svres, des concentrations anormalement leves de nitrates urinaires ont t mesures chez des enfants soumis une dite stricte en nitrates (0,5 1,6 mg N-NO3-/jour) (INSPQ 2003; Phaneuf et al. 2004). Paralllement, des tudes chez des animaux auxquels on a induit des infections et des ractions inflammatoires appuient lexistence de cette synthse endogne. En outre, elles soutiennent aussi le fait que cette synthse soit probablement induite par lactivation du systme rticuloendothlial mammalien : la voie L-arginine-NO-synthase (L-Arg-NOS). Bien que cette voie ait t difficilement mise en vidence chez lhumain contrairement lanimal, ladministration darginine radioactive ([15N]Arg) deux volontaires a rsult en lincorporation de lazote radioactif chez lhumain (OMS 2004, 2007). Actuellement, il est reconnu que la voie majeure de synthse endogne des nitrates chez les mammifres est la voie L-Arg-NOS (Tannenbaum et al. 1991; IARC 1998). Elle est constitutive dans la majorit des cellules du corps. Daprs cette voie, lacide amin LArginine est converti en NO et 1-citrulline par lenzyme NOS. Le NO est oxyd par la suite en anhydre nitreux (Vermeer et van Maanen 2001). La raction de ce dernier avec
15

N dans le nitrate urinaire

des deux individus, confirmant ainsi lhypothse de la synthse par la voie L-Arg-NOS

16 leau est lorigine de la formation du nitrite, lequel est rapidement oxyd en nitrate par lhmoglobine (OMS 2004, 2007). Le NO a pour principal rle de moduler les fonctions neuromusculaires (neurotransmetteur) et vasculaires (vasodilatateur) (Mirvish 1995). Ainsi, dans les conditions normales, le NO plasmatique provient essentiellement de cette voie constitutive qui assure le niveau basal de nitrate. Cependant, lors dinflammations ou autres infections, les cellules blanches du sang (macrophages) expriment une NOS inductible (iNOS) qui produit de grandes quantits de NO et par consquent augmente les concentrations de nitrates plasmatiques (Iijima et al. 2002; Lundberg et al. 2004). Ceci explique donc les niveaux urinaires levs observs lors dinfections. Par ailleurs, des concentrations trs leves, le NO peut ragir rapidement avec loxygne pour former lespce nitrosante N2O3. 2.2.2 Pharmacocintique et biotransformation Chez lHomme, nitrate et nitrite participent un change dynamique dans ce que lon peut appeler cycle interne de lazote . Ce dernier comprend lingestion, la synthse endogne et lexcrtion qui se fait principalement sous forme nitrates dans lurine. Suite leur ingestion, les nitrates sont rapidement absorbs au niveau de la partie proximale de lintestin grle (OMS 2004). Les aliments riches en pectine retarderaient cette absorption qui aurait alors lieu plus bas dans lintestin, avec la possibilit de transformation microbienne des nitrates en nitrites (IPCS 1999). Une fois dans le sang les nitrates absorbs se mlent au nitrate endogne. Aprs une distribution rapide dans les tissus, ils sont activement scrts dans la bouche. Ainsi, le nitrate plasmatique serait concentr dans la salive par les glandes salivaires via un systme de transport actif qui comptitionne avec ceux de liode et du thiocyanate (OMS 2004). Ce sont environ 25% des nitrates absorbs qui sont scrts et concentrs par un facteur de 10 (Duncan et al. 1995; Mirvish 1994) dans la salive grce une pompe active. Par la suite, la microflore buccale se chargerait de transformer environ 20% des nitrates scrts dans la bouche en nitrites qui se retrouvent alors dans la salive (OMS 2007). En dfinitive, seront rduits en nitrites environ 5% des nitrates absorbs (ATSDR 2007; Granli et al. 1989; IARC 1998; INSPQ 2003; Mirvish 1994). Cette rduction a t dmontre in vivo et in vitro

17 la fois dans les systmes mtaboliques bactriens et mammaliens, via les nitrates rductases ubiquitaires (OMS 2004). Bien que le site majeur de cette rduction soit la bouche, elle peut aussi survenir dans lestomac lorsque le pH de celui-ci devient anormalement lev pour quelques raisons que ce soit : utilisation dantiacide, pathologies (hypochlorhydrie, achlorhydrie, ) (ATSDR 2007; INSPQ 2003). La rduction peut aussi survenir au niveau des voies urinaires et vaginales lorsque celles-ci sont infectes (Gangolli et al. 1994; INSPQ 2003). Une fois les nitrites forms dans la bouche, le mlange nitrates/nitrites atteint le tronon gastro-intestinal par le moyen de la salive. ce niveau, ils sont absorbs au niveau de la partie proximale de lintestin et atteignent la circulation gnrale do les nitrites sont oxyds en nitrates par lhmoglobine et tous les nitrates entrent de nouveau dans la circulation pour un autre cycle. Chez lhumain, on observe des pics de concentrations plasmatiques de nitrates environ 60 minutes aprs leur ingestion. Les fluides corporels (srum, salive, urines, suc gastrique, sueur, fluide ilostomique) eux, atteignent des concentrations maximales 1 3 heures aprs lingestion (Phaneuf et al. 2004). La voie mtabolique majeure des nitrates est leur conversion en nitrites, puis en ammonium (ATSDR 2007). Ainsi, de manire gnrale, la majorit des nitrates ingrs sera ventuellement excrte dans les urines sous forme nitrates, ammonium ou ure; lexcrtion fcale est considre ngligeable (OMS 2007). Leur demi-vie dlimination est estime environ 5 heures (IPCS 1999; OMS 2004; Gangolli et al. 1994; INSPQ 2003; Walker 1990). Chez les nourrissons, 80 100% des nitrates absorbs sont excrts dans lurine dans les 24 h (INSPQ 2003; Turek et al. 1980). Chez ladulte, ce sont plutt 65 70% de ceux-ci qui sont excrts dans les urines en 24 heures (IPCS 1999; ATSDR 2007; INSPQ 2003; Bartholomew and Hill 1984). Le reste le serait dans la sueur (10%), les larmes, les scrtions vaginales et coliques. Aucune accumulation dans les glandes mammaires ou le lait na t rapporte aussi bien chez lanimal que lhumain (IPCS 1999; INSPQ 2003; Turek et al. 1980).

18 2.3 Nitrites (No CAS 14797-65-0) 2.3.1 Exposition 2.3.1.1 Alimentation Les contributeurs majeurs lexposition aux nitrites alimentaires sont les produits de viandes, les produits craliers (boulangerie), les lgumes (betteraves, mas, pinards, feuilles de navet) et les fruits (Jakszyn et al. 2006). Les niveaux sont en gnral trs faibles dans les aliments (de 2,0 4,0 mg/kg) (Vermeer et van Maanen 2001). Cest le cas particulier des vgtaux qui en gnral ont des teneurs < 1mg/kg. En plus de cela, les niveaux ne sont pas significativement diffrents entre la plupart des lgumes (Chung et al. 2003). Ces niveaux peuvent malgr tout, beaucoup augmenter lorsque les lgumes sont avaris ou mal conservs. Des niveaux atteignant 400 mg/kg ont justement t rapports dans de pareils cas (OMS 2007). Les sources majeures de nitrites sont les produits de viandes qui seraient responsables denviron 70% de lapport en nitrites alimentaires, dpendamment des quantits de viandes consommes, de leurs origines et types. Cependant, depuis la dcouverte de la formation possible des NOC dans les aliments, lajout des nitrites dans ceux-ci a beaucoup diminu (Dietrich et al. 2005). Au Canada par exemple, sa concentration dans les aliments a diminu du fait de la rglementation concernant les additifs alimentaires. En effet, compte tenu de cette possibilit de formation de nitrosamines cancrognes, la quantit maximale de nitrate ou de nitrite qui peut tre ajoute est limite 200 ppm (Sant Canada 2004a; ACIA 2006). Cest donc sur cette base que Sant Canada a valu lapport quotidien moyen en nitrites alimentaires au Canada 0,5 mg NO2-/jour (soit 0,15 mg N-NO2-) (Sant Canada 1987; Phaneuf et al. 2004). Aux U o les salaisons reprsentent environ 10% de lapport alimentaire de nitrate et de nitrite, on lestime plutt entre 0,3 et 2,6 mg/jour (OMS 2007; OEHHA 1997). En Europe, il varie de moins de 0,1 8,7 mg/jour compte tenu des dites europennes (OMS 2007). Jakszyn et al. (2006) ont dailleurs rapport des valeurs similaires dans leur tude ralise en Espagne : de 0,8 5,3 mg/jour avec une moyenne gomtrique de 0,994 mg/jour.

19

2.3.1.2 Eau Les nitrates tant la forme la plus stable des substances azotes, toutes les autres formes azotes y compris les nitrites, auront donc tendance se transformer en nitrates. Cest donc pour cette raison que les nitrites sont gnralement retrouvs sous forme de traces dans leau naturelle non contamine. Cependant, dans les cas de contaminations bactriennes ou de traitement de leau par chloramination, une nitrification peut tre favorise et entraner laugmentation des concentrations de nitrites dans leau tout au long du systme de distribution. Ainsi la nitrification qui a lieu dans les systmes de distribution deau chloramine est gnralement responsable dune augmentation des niveaux de nitrites de lordre de 0,2 1,5 mg NO2-/L et ce jusqu des maximums de plus de 3 mg NO2-/L (OMS 2007). 2.3.1.3 Air Pas de donnes rapportes, sans doute pour les mmes raisons voques dans le cas de leau. 2.3.1.4 Synthse endogne La formation endogne de nitrite, compare son apport alimentaire, contribue beaucoup plus son exposition totale (plus de 90%) (Gangolli et al. 1994; Mirvish 1994; Bos et al. 1988). Plus prcisment le nitrite salivaire, provenant de la rduction bactrienne des nitrates scrts dans la bouche, constitue la source majeure de lexposition totale aux nitrites chez lhumain (Iijima et al. 2002; Combet et al. 2007; Eisenbrand et al. 1980), mais surtout du nitrite gastrique (chez un individu en sant) qui est lun des prcurseurs des NOC. Les bactries qui colonisent la rgion dorsale de la langue convertissent en moyenne 5% des nitrates en nitrites (McColl 2007). On estime que cette transformation des nitrates serait responsable de 70 80% de lexposition totale aux nitrites (Bos et al. 1988). Il a t estim quapproximativement 3,5 mg de nitrites endognes seraient forms chaque jour chez un amricain moyen (IPCS 1999). Cette formation ne semble pas tre influence par la constitution de la dite (Spiegelhalder et al. 1976), mais cependant, dpendrait de plusieurs facteurs (ex. taux

20 dingestion de nitrates; variation interindividuelle) (IPCS 1999). Ainsi, la production de nitrites augmente avec lge (Turek et al. 1980) et est stimule par les infections bactriennes provoquant la diarrhe (Sant Canada 1987). Le nitrate peut aussi tre rduit en nitrite dans lestomac si le pH y est suffisamment lev (pH > 5) pour permettre la croissance bactrienne (IPCS 1999). Cest le cas chez les adultes atteints de pathologies gastriques telles que latrophie gastrique (achlorhydrie). Cest aussi le cas chez les nourrissons dont le pH gastrique est normalement lev. Cest dailleurs pour cette raison que les nourrissons de moins de 3 mois sont considrs comme tant le principal groupe cible du risque de mthmoglobinmie (U.S.EPA 2002a). 2.3.2 Pharmacocintique et biotransformation Dans lorganisme, nitrates et nitrites participent un inter-change dynamique : le cycle humain de lazote. Aprs que les nitrites soient forms par la transformation bactrienne des nitrates, le mlange nitrates/nitrites entre dans le tractus gastro-intestinal via la salive. Il nexiste malheureusement pas dinformations concernant labsorption des nitrites chez lhumain. Cependant, la formation de mthmoglobinmie chez les nourrissons laisse croire quils seraient absorbs. De plus, daprs des tudes faites chez des rongeurs (rat et souris), ceux-ci seraient absorbs au niveau gastrique et intestinal (OMS 2004; INSPQ 2003). Bien que leur distribution soit mal connue, une fois dans le sang, les nitrites sont oxyds par lhmoglobine en nitrates avec la formation de mthmoglobine (metHb) (IPCS 1999; OMS 2007; IARC 1998; McColl 2007). Les nitrites sont facilement transforms en espces nitrosantes en environnement acide (particulirement lestomac). Ces dernires peuvent ragir avec une panoplie de composs : soit lacide ascorbique, soit les amines et les amides pour former les composs N-nitross (OMS 2007; Vermeer et van Maanen 2001). Le nitrite est peu ou faiblement excrt sous forme inchange (OMS 2007, 2004). Tout comme les nitrates, les nitrites ne saccumulent pas dans les glandes mammaires ou le lait (Fan et al. 1987). Ils traversent toutefois la barrire placentaire et entranent la formation de metHb ftale chez le rat (OMS 2007; INSPQ 2003).

21

2.3.3 Taux de transformation des nitrates en nitrites Chez les rongeurs, la scrtion active et la rduction des nitrates en nitrites sont virtuellement absentes. Pour cette raison, on pense que la rduction totale des nitrates chez ces espces serait probablement infrieure celle des humains (OMS 2007, 2004). Ceci explique pourquoi ces espces ne sont pas utilises pour estimer le taux de transformation des nitrates en nitrites (NIPHEP 1989). La conversion des nitrates en nitrites est dans une grande mesure le fait des bactries qui logent le tractus buco-gastro-intestinal. Consquemment, le taux de transformation des nitrates suite leur ingestion ne dpendra pas seulement de la dose de nitrates ingrs, mais aussi de la quantit et du type de bactries qui y rsident. Environ 5 10% des nitrates absorbs sont convertis en nitrites dans la salive, lestomac et le petit intestin (ATSDR 2007). Les niveaux de nitrites varient beaucoup plus que ceux des nitrates. En plus des variations journalires (niveaux plus levs la nuit que le jour), Siddiqi et al. (1992) ont rapport que les niveaux de nitrites variaient aussi en fonction de lge : plus lev chez les personnes ges par rapport aux individus plus jeunes. Ainsi, ces mmes auteurs ont rapport des augmentations des taux de nitrites totaux variant de 30,7 40% en fonction de lge. Ces augmentations semblaient reflter laugmentation relative de la flore buccale. Des taux de transformation pouvant atteindre 30% ont aussi t rapports par dautres auteurs (McColl 2007). Les niveaux de nitrate/nitrite dpendent aussi des variations interindividuelles telles que le dbit de salive (Eisenbrand et al. 1980), le mtabolisme hydrique et lhygine buccale. Pour simple comparaison, les proportions calcules de nitrite par rapport au total nitrate/nitrite dans des populations gyptienne et allemande taient de 25,2 et 17,4% respectivement (Siddiqi et al. 1992). 2.4 Composs N-nitross Le nitrate en lui-mme nest pas une substance dangereuse et il nexiste pas de preuves scientifiques suggrant des effets toxiques associs aux nitrates. En fait, leur toxicit est due leur transformation en nitrites avant ou aprs leur ingestion, suivie soit

22 de la formation de mthmoglobine ou alors de la synthse endogne de composs Nnitross. Composs N-nitross (NOC). 2.4.1 Origine et proprits physico-chimiques Les composs N-nitross constituent une trs grande famille de substances dont lune des caractristiques est la prsence dun groupement nitro (-N=O) li un atome dazote contenu dans la substance. Ils proviennent essentiellement de lattaque nuclophile de latome dazote de certaines substances nitrosables (amines et amides) par les oxydes dazote (NOx). On parle alors de raction de nitrosation. Sur le plan structurel, il existe deux groupes principaux de NOC dont la structure gnrale est : (R1, R2)-N-N=O. Dans le premier groupe qui est celui des N-nitrosamines (= nitrosamines), les radicaux R1 et R2 peuvent tre soit des groupements alkyls, soit des groupements aryles, lesquels peuvent tre identiques (diakyl, diaryl), diffrents (alkaryl ou amines secondaires cycliques) ou alors, faire tous partie dun cycle. Dans le second groupe des N-nitrosamides (= nitrosamides) lun des radicaux R1 ou R2 est un groupement alkyl ou aryle et lautre un groupement acyle (N-alkylures, N-alkylcarbamates et des simples Nakylamides) (Foster et al. 1981; Mirvish 1975). Les proprits physiques des NOC varient beaucoup en fonction de leurs groupements. Typiquement les nitrosamines peuvent tre liquides, lipides ou volatiles. Ce sont des composs qui en gnral sont chimiquement stables (mme dans les conditions physiologiques) et se dcomposent lentement la lumire ou en solutions aqueuses acides (Brown 1999). Cest le cas contraire pour les nitrosamides qui sont trs instables dans les solvants aqueux, en milieu neutre et basique, et mme au pH physiologique. En milieu acide, elles se dcomposent pour donner des quantits importantes de nitrites (Mirvish 1975). Normalement formes en milieu acide, leur synthse est catalyse in vitro par les citrates et dautres acides organiques (Gangolli et al. 1994; Dietrich et al. 2005; Mirvish 1971). Ce sont des substances thermodynamiquement instables qui se dcomposent des tempratures de plus de 100o C, sous la lumire normale et la lumire UV (Dietrich et al. 2005). Elles se transforment en intermdiaires ractifs (alkylant) par dcomposition non

23 enzymatique. De par leur instabilit, les nitrosamides sont moins susceptibles dtre retrouves dans lalimentation gnrale, mme si leurs prcurseurs le sont (Dietrich et al. 2005; Mirvish 1971). Les nitrosamines montrent des pics dabsorption UV dans leau 230-240 nm et 330350 nm. Les nitrosamides quant elles ont des pics dabsorption dans leau aux longueurs donde 390-420 nm. On pourrait aussi catgoriser les NOC en NOC prforms (ou exognes) et NOC endognes. Ces derniers proviendraient principalement de la nitrosation de substances nitrosables dans lorganisme dont lestomac en est le site majeur. Ainsi, aprs que les nitrites issus de la transformation bactrienne des nitrates entrent dans lestomac via le mlange salivaire (nitrates + nitrites), deux issus possibles existent. Dune part, ils peuvent tre absorbs dans la circulation sanguine do ils induiront la formation de mthmoglobine. Dautre part, en prsence de substances nitrosables, ils pourront induire dans le milieu acide de lestomac la formation de NOC endognes (ENOC). Par ailleurs, la raction de nitrosation peut aussi avoir lieu hors de lorganisme et les NOC qui en sont issus sont dits prforms . Le nitrite et les NOx peuvent aussi ragir avec les amines et les amides dans les solvants inorganiques ou les lipides dans lesquels ils sont solubles pour former les NOC. Outre le fait quils soient trs solubles dans les lipides, les NOx se retrouvent aussi dans lair pollu et la fume de cigarette. Ce dernier cas explique pourquoi les NOC exognes sont majoritairement retrouvs dans les produits de tabac (Mirvish 1986). 2.4.2 Exposition humaine Lexposition humaine peut tre exogne (NOC prforms) ou endogne (NOC endognes). Lexposition aux NOC prforms se fait principalement via des sources dittiques ou non. Parmi les sources non dittiques, nous pouvons citer entre autres: le tabac et ses produits (la fume de tabac), les cosmtiques, les mdicaments, les produits chimiques pour lagriculture, leau (systmes de distribution utilisant le chlore ou les chloramines) et lexposition professionnelle (caoutchouc, cuir, industrie du mtal). De tous ceux-ci, le tabac contribue majoritairement lexposition. Il constitue en effet la

24 source principale des nitrosamines cancrognes NNN (N-nitrosonornicotine) et NNK (4-(mthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone), dont les concentrations en sont relativement leves. Ainsi, fumer 20 cigarettes/jour rsulterait en une exposition aux NOC de 3,4 g/jour (avec des maximums rapports de 48 g/jour chez les fumeurs lourds). Pire encore, laspiration directe par le nez sous forme de poudre engendrerait jusqu 27,5 g/jour (avec des maximums rapports de 700 g/jour) (Vermeer et van Maanen 2001). Dans la dite, les NOC sont retrouvs sous forme de traces (Vermeer et van Maanen 2001; Eisenbrand et al. 1980). Ils principalement prsents dans le malt (lors de la production de bire et de whisky), le fromage, les aliments sals ou saumurs (les viandes prserves et leurs drivs, les poissons en conserves, les aliments prservs par la fume). Soulignons que les concentrations de NOC dans les produits sals ou saumurs ont beaucoup diminu du fait de la diminution des concentrations de nitrates et de nitrites utiliss comme agents conservateurs et aussi de lajout de vitamine C comme antioxydant. Finalement, lexposition endogne qui se fait typiquement aprs lingestion de nitrates/nitrites contribuerait pour environ 45-75% de lexposition totale aux NOC (Jakszyn et Gonzalez 2006; Tricker 1997). 2.4.3 Toxicit et cancrognicit De nos jours, environ 300 NOC ont t tests chez les animaux exprimentaux pour valuer leur cancrognicit. De ceux-ci, environ 85% des 209 nitrosamines et 92% des 86 nitrosamides se sont rvls tre cancrognes pour une panoplie (environ 39) despces de poissons, de reptiles, damphibiens, doiseaux, de rats, de souris, de hamsters et de mammifres incluant 5 espces de primates (Gangolli et al. 1994; Vermeer et van Maanen 2001; Montesano et Bartsch 1976; Brown 1999). Les nitrosamides, cancrignes puissants, sont des agents alkylants directs qui agissent directement sur leur site de formation ou dapplication. Cest pourquoi elles sont capables de former des adduits avec lADN sur leur site de formation (Vermeer et van Maanen 2001)

25 Les nitrosamines quant elles, exercent leur pouvoir cancrigne suite une activation mtabolique prne par les Oxydases Fonction Mixte (MFO) microsomales (Gangolli et al. 1994; Mirvish 1995). Leur action se fait donc essentiellement via la formation dintermdiaires ractifs qui agissent avec les groupes nuclophiles des macromolcules cellulaires (DNA, RNA et protines) (Montesano et Bartsch 1976). De faon gnrale, leffet cancrigne des nitrosamines est organo- spcifique. En plus de cette spcificit, le site daction des nitrosamines est grandement influenc par la structure chimique de ses radicaux : la longueur de la chane alkyl par exemple (Vermeer et van Maanen 2001; Montesano et Bartsch 1976; Brown 1999). Bien que la cancrognicit des NOC soit tablie chez les animaux, aucune preuve directe de cet effet na t dmontre jusqu prsent chez lhumain. Les rsultats dtudes pidmiologiques sur ce sujet sont trs quivoques, bon nombre dentre elles tant suggestives. En gnral elles supportent majoritairement lexistence dune association positive entre lingestion de nitrates/nitrites ou de nitrosamines et le risque de cancer gastrique (Jakszyn et Gonzalez 2006). Malgr ce manque dvidence, les humains se sont tout de mme rvls ragir aux nitrosamines suivant un profil comparable celui observ chez les animaux exprimentaux en terme de toxicit aigue (ncrose hpatique et cirrhose), de disposition mtabolique et de formation dadduits lADN (Brown 1999). La 3-mthyladnine est justement un marqueur de la formation dadduits entre NOC et ADN. Outre cela, les tudes de dosimtrie chez lhumain dmontrent clairement lvidence dune nitrosation endogne (Gangolli et al. 1994). Finalement, parce que les NOC sont cancrignes chez les espces animales testes, on considre quils le sont aussi probablement, sinon possiblement chez lhumain. 2.4.4 Indice de potentiel cancrigne La rdaction de cette partie a t majoritairement inspire du guide technique dcrivant les indices de potentiel cancrigne de lOffice of Environmental Health Hazard Assessment (OEHHA) de lagence californienne de la protection de lenvironnement, CalEPA (OEHHA 2005).

26 Les excs de risque de cancer (ER) hypothtiques associs aux substances cancrignes de lenvironnement sont valus grce des indices de potentiel cancrigne propre chaque substance. Ces derniers sont estims sur la base danalyses biologiques du cancer chez les animaux ou dtudes pidmiologiques; ces dernires tant de loin prfres aux premires. Mais compte tenu de la raret des tudes pidmiologiques bien construites et des limites de celles-ci lorsquelles existent, les valuations vont gnralement se faire avec les donnes dexprimentations animales. Ainsi, pour fins dvaluations, on ne retiendra que les tudes animales pour lesquelles on observe une augmentation statistiquement significative de lincidence de cancer (tumeurs) et une relation dose/rponse. Les donnes des taux dincidences des tumeurs des tudes retenues sont aussi classes en fonction des sites (organes cibles) et des types de tumeurs. Ainsi des courbes doses/rponses sont ajustes celles-ci en fonction de cette catgorisation, et pour chaque substance tudie. Soulignons que la rponse ici est lincidence de cancer chez les animaux. Si cependant il existe pour la mme substance des groupes de donnes comparables pour lespce, la souche, le sexe et le type de tumeurs, alors une dose quivalente est pralablement dtermine pour chaque tude ou chaque set de donnes. Cette dose peut-tre normalise pour la dure de lexposition, dans quel cas, lUS EPA recommande de la calculer comme suit:

d = Le

le m PC
2 3

(3)

O d (mg/surface de la peau/jour) : dose quivalente; le : dure dexposition; Le : dure de lexprience; m: dose moyenne (mg/jour); PC : poids moyen de lanimal. N.B : lUS EPA assume que la dose exprime par unit de surface de la peau est quivalente entre espces quelle ne lest par unit de poids corporel. Lagence considre donc que la surface est proportionnelle au poids corporel de lanimal la puissance 2/3. Or lors des exprimentations, les animaux sont gnralement exposs des doses beaucoup plus leves que les niveaux dexposition relle au sein de la population. Cest donc pour cette raison que la courbe dose/rponse sera par la suite extrapole partir des

27 niveaux dexposition de ltude jusqu une dose nulle, tout en supposant quil nexiste pas de seuil en dessous duquel le cancer est improbable. Habituellement, ces extrapolations aux faibles doses sont bases sur le site et lespce les plus sensibles des tudes de cancrognicit. Aussi, ces mmes extrapolations constituent la base des estimations des indices de potentiel cancrogne. Ces dernires sont calcules au moyen de modles mathmatiques appropris qui diffrent en fonction des agences de rglementation. Dans le cadre de ce projet, nous avons retenu trois mthodologies dveloppes par deux agences amricaines. Ce sont elles qui ont justement estim les indices de potentiel cancrigne des nitrosamines que nous avons tudies (Tableau 2). Il sagit : de lUS EPA et de la California EPA. Pour ce qui est de cette dernire, les mthodologies sont celles de ses dpartements : Office of Environmental Health Hazard Assessment (OEHHA) et Reproductive and Cancer Hazard Assessment Section (RCHAS). Ainsi, selon lIntegrated Risk Information System de lUS EPA (IRIS EPA), lextrapolation aux doses faibles se fait par lapplication de la procdure linarise par tapes multiples (LMS). Il sagit dun modle statistique pouvant dcrire la relation dose/rponse linaire sans seuil aux faibles doses. Il intgre aussi une procdure pour lestimation de la pente linaire la plus leve possible aux doses faibles. La fonction polynomiale de la procdure LMS est la suivante :
P (d ) = 1 exp (q0

q1 d

q2 d 2 + ... +

qk d k )

(4)

O P (d) est le risque (ou probabilit) de cancer rsultant dune exposition une dose d la vie durant; qi > 0, et i = 0, 1, 2, , k. De manire quivalente :
A (d ) = 1 exp (q1 d

q2 d 2 + ... + qk d k )

(5)

28

O A (d ) = contrles.

[ p (d ) p (0)] est lexcs de risque de cancer la dose d par rapport aux [1 p (0)]

Loptimisation de cette fonction permet de dterminer la pente sajustant le mieux lensemble des donnes : cest le paramtre q1 encore appel facteur de pente . Ce dernier est prsent comme tant le risque par (mg/kg)/jour). La limite suprieure de lintervalle de confiance 95% (IC95) sur q1, dnomme q1* est considre tre lindice de potentiel cancrigne. Ainsi, lorsque q1 0, aux faibles doses, lER est sensiblement de la forme : A (d) = q1 x d (6)

Cette relation correspond la limite suprieure de lIC95 sur lER et ER/q1 est une estimation de la limite infrieure de lIC95 sur la dose produisant un excs de risque R. q1* calcul trs faibles doses est toujours linaire la dose et est considr comme la limite suprieure du potentiel dune substance induire le cancer de faibles niveaux dexposition. On lutilise donc comme indice de potentiel cancrigne pour les estimations des ER hypothtiques. Les procdures utilises pour lextrapolation aux faibles doses chez lhumain des ER partir des donnes animales de cancrognicit assument gnralement que les agents qui causent le cancer causent aussi des dommages lADN, et que la rponse biologique quantale qui caractrise la mutagnse est associe une relation linaire dose/rponse sans seuil. Cest pourquoi lUS EPA qualifie de conservatrices les valuations de risque faites avec le modle LMS. Pour ce qui est de lOEHHA, il considre que la procdure LMS est approprie dans la majorit des cas, lexception de ceux o des donnes empiriques suffisantes sont disponibles pour indiquer une courbe dose-rponse de type quasi-seuil. Cest lexemple dune courbe qui serait aplatie pour deux ou trois niveaux de doses, puis se recourberait brusquement vers le haut. Dans ce cas, la procdure LMS pourrait sous-

29 estimer le nombre dtapes et surestimer les risques faibles doses. Le modle multihit gamma est alors suggr comme tant une alternative potentielle. Par ailleurs, le guide de lOEHHA assume quen absence de preuves contraires, une substance qui cause le cancer aprs ingestion peut le faire aussi lorsque lexposition a lieu par inhalation et vice versa. Dans ce cas, on utilisera la correction surface de la peau ~ PC 2/3 . La relation est la suivante :

UR =

CPF 20 m 3 70 kg CV

(7)

O UR (g/m3)-1 : risque unitaire; CPF (cancer potency factor) : indice de potentiel cancrigne; 70 kg : poids corporel (PC) de rfrence chez lhumain; 20 m3 : taux dinspiration de lair /jour; CV : facteur de conversion de mg en g (= 1000). Le risque unitaire dcrit lexcs de risque de cancer associ linhalation d 1 g/m3 dune substance donne. Lindice de potentiel cancrigne dcrit lexcs de risque de cancer associ lexposition de 1 mg dune substance donne par kg de poids corporel. Le guide recommande lutilisation de la limite suprieure de lIC95 sur le risque comme rfrence dans lvaluation de la relation dose/rponse. Le RCHAS pour sa part a driv des valeurs dindices de potentiel cancrigne rpertories dans une proposition de loi amricaine dite Proposition 65 . Il existe 2 versions de celle-ci : la standard (RCHAS-S) qui utilise la mme mthodologique que lOEHHA, et lexpress (RCHAS-E) qui diffre un peu de la premire. Ainsi, la procdure utilise par le RCHAS-E pour estimer les valeurs de potentiel cancrigne de la Proposition 65 express (dite expedited Proposition 65 cancer potency values ou RCHAS-E tout court) diffre de la mthodologie habituelle de lOEHHA en deux sens. Premirement, elle se base sur les donnes de relations doses/rponses de cancer values et extraites de la littrature originale. Deuximement,

30 le choix de la procdure LMS pour gnrer les valeurs de potentiel cancrogne est automatique, les ajustements pharmacocintiques ntant pas requis. Ainsi, le RCHAS E utilise la mme formule polynomiale que lOEHHA, cest--dire celle de lIRIS EPA. Dans ce cas, le q1* est aussi un estim de la borne suprieure de lIC95 sur le paramtre linaire q1. Cependant, les diffrences entre ses valeurs et celles de lIRIS sont gnralement dues de simples diffrences de mthodes de calculs.

31

32 Plus prcisment par exemple, le RCHAS-E assume que : le risque de cancer crot avec 3e puissance de lge . Ainsi, la dure dexposition (Te) pouvant varier dune tude lautre, elle assume la dure de vie des rats et souris environ 2 ans (104 semaines). Cest ainsi quelle estime le potentiel cancrogne chez lanimal comme suit :
104 semaines Te

qanimal = q1

(8)

Un indice de cancrognicit chez lhumain est estim par la suite de la manire suivante: qhumain = K x qanimal
PC O K ( facteur de conversion entre espces = PC

(9)

humain animal

(10)

Tout comme lOEHHA, elle considre que la surface corporelle est plus indique pour intgrer la susceptibilit inter-espces aux substances toxiques par rapport au poids corporel. Ainsi, SC = k x PC 2/3 (11)

O SC est la surface corporelle de la peau; k une constante; PC le poids corporel. Des tests rcents suggrent plutt dutiliser PC3/4 pour les comparaisons de doses inter-espces. Mais en fait, utiliser la puissance rsulterait seulement diminuer les facteurs de potentiel cancrogne de 2 fois lors de lextrapolation partir des rats. Il est pris pour acquis que lutilisation du facteur de pente surestime lincidence relle de cancers aux faibles doses associe aux substances cancrognes. Cest la raison pour laquelle les diffrentes agences rglementaires (US EPA, Sant Canada) qualifient cette approche de conservatrice (Sant Canada 2004b).

33

2.4.5 Cas particulier des nitrosamines Les nitrosamines testes se sont rvles tre cancrignes chez plus de 30 animaux de laboratoire, dont la plupart taient des rats, des souris et des hamsters. Leur synthse qui se fait normalement en milieu acide est catalyse par les thiocyanates. Les nitrosamines sont trs organotropiques (organe-spcifique), animal spcifique et induisent gnralement des tumeurs des sites spcifiques sans gard la voie dadministration (Vermeer et van Maanen 2001; Mirvish 1995; Dietrich et al. 2005). 2.4.5.1 Origine Comme il a t fait mention au paragraphe 2.6.1 sur les NOC, les nitrosamines sont des substances issues de lattaque nuclophile de latome dazote contenues dans des composs amins par des oxydes dazote. Elles peuvent avoir une origine exogne (nitrosamines prformes) ou tre plutt issues de la synthse endogne. Nous nous attarderons dans cette partie sur la synthse endogne des nitrosamines. Les nitrosamines endognes proviennent de la nitrosation de prcurseurs amins qui se retrouvent dans lorganisme : amines primaires aliphatiques, amines secondaires et tertiaires, peptides, acides amins primaires et secondaires. Cependant, lexposition endogne est majoritairement due la nitrosation des amines secondaires ayant des substituts diakyl, alkaryl ou diaryl. Le site majeur de leur formation est le tractus gastrointestinal, particulirement lestomac. Cependant, daprs les rsultats de rcentes tudes, celle-ci serait maximale au niveau de la rgion oesophago/cardiale. En effet, non seulement elle est bien distante de lantrum o est synthtise la vitamine C inhibitrice de la nitrosation, mais aussi, elle constitue la seule partie de lestomac capable de rester trs acide et contenir le maximum despces actives nitrosantes mme aprs un repas.(McColl 2007; Suzuki et al. 2005). tant donn que toutes les cellules de lorganisme contiennent des amines (constituant des protines cellulaires), la synthse endogne des nitrosamines peut aussi avoir lieu divers autres endroits de lorganisme (cavit orale, intestin, duodnum, poumons et certains organes infects) suite la formation endogne doxyde nitrique et de nitrites ou simplement par rduction bactrienne du nitrate en nitrite (Bartsch et al. 1989). En effet,

34 comme nous lavons mentionn plus tt en parlant de la synthse endogne des nitrates (paragraphe 2.1.4.5), lenzyme NO-synthase se retrouve dans toutes les cellules de lorganisme et par consquent loxyde nitrique lui aussi. Pour ce qui est de la rduction bactrienne, celle-ci a le plus souvent lieu lors dinfections : de la vessie urinaire (bilharziose), de lestomac par H. pylori. Les contributions relatives de ces voies lexposition totales aux nitrosamines restent malheureusement encore inconnues (IPCS 1999). La nitrosation peut aussi avoir lieu par catalyse bactrienne pH neutre par exemple dans lestomac achlorhydrique (Mirvish et al. 2000). 2.4.5.2 Prcurseurs amins Les prcurseurs amins des nitrosamines incluent: les amines primaires aliphatiques, les amines secondaires et tertiaires, les peptides, les acides amins primaires et secondaires (Montesano et Bartsch 1976; Kyrtopoulos 1989; Shephard et al. 1987). En tant que constituants des protines cellulaires, certains de ces prcurseurs amins se retrouvent dans lorganisme (Tannenbaum et al. 1991). Ils sont aussi trs largement rpandus dans lenvironnement : alimentation, produits manufacturs (tels les mdicaments, pesticides), milieu de travail. Dans lalimentation par exemple, on les retrouvera dans tous les types daliments, mais avec des teneurs variables. Cest le cas par exemple de la dimthylamine, une des amines secondaires les plus tudies, qui est trs rpandue dans les produits marins (Mirvish 1975; Shephard et al. 1987) dont certaines espces en sont particulirement concentres (ufs de Merlan, pieuvre, sardines, morue, maquereau, perche) (Phaneuf et al. 2004). Plusieurs amines secondaires et tertiaires sont aussi utilises dans la fabrication des mdicaments ou des pesticides (Mirvish 1975). Dans le cas de ceux-ci, vu quils sont surtout utiliss pour la culture des fruits et lgumes, leur ingestion se fera principalement via ces derniers. Parmi les pesticides on peut citer : les mthylcarbamates, les mthylthiocarbamates ou les drivs de triazine. Plusieurs auteurs ont dmontr la formation in vivo du NDMA partir des mthylthiocarbamates (composants des fongicides tecoram et Zireb). On a obtenu les mmes rsultats avec les drivs de la dimthylure : chloroxuron (3-(4-(4-

35 chlorophenoxy)-phenyl)-1, 1-dimethylurea) et cycluron (3-cyclo-octyl-1,1-

dimethylurea) qui sont utiliss comme herbicides (Egert et Greim 1976). Pendant que plusieurs de ces composs amins peuvent donner des nitrosamines cancrignes suite leur nitrosation, ceci nest pas toujours le cas pour bon nombre dentre eux. Cest par exemple le cas des amines tertiaires qui ne peuvent pas tre nitross ou celui des amines primaires dont la nitrosation gnrerait des nitrosamines instables (Andrzejewski et al. 2008). Cest dailleurs pourquoi les amines primaires sont considres comme des trappes nitrites et sont donc responsables de la perte majeure de ceux-ci dans lestomac (Kyrtopoulos 1989). Ainsi, la nitrosation in vivo des simples amines tertiaires ne serait vraisemblance pas importante sur le plan biologique. Lingestion chronique par les rats de trimthylamine + nitrite (0,5% chacun dans la dite) na justement pas induit de tumeurs aprs un an dexposition. Par ailleurs, la seule amine tertiaire dont la cintique de nitrosation a t tudie est lanalgsique aminopyrine (AP) qui est rapidement nitros pour former la NDMA et un autre compos chane cyclique ouverte (Mirvish 1975) Seules les amines secondaires constituent finalement les prcurseurs amins les plus importants dans la formation des nitrosamines (Andrzejewski et al. 2008). Entre autres amines secondaires, mous pouvons citer : la dimthylamine, la dithylamine, la ndibutylamine, la pyrrolidine, la mthylthylamine, la pipridine, la Nmthylbenzylamine, la morpholine (Shephard et al. 1987). En somme, le fait que la plupart des amines nitrosables soient soit synthtises dans lorganisme, soit largement rpandues dans lalimentation ou les deux, impliquent que ces substances se retrouvent gnralement ensemble dans des conditions de nitrosation endogne. Ceci explique alors lintrt considrable que suscitent les risques possibles de cancer manant de la formation endogne de nitrosamines. 2.4.5.3 Cintique de la N-nitrosation (constante de nitrosation) La raction de nitrosation dpend beaucoup des composs amins. Les acides amins par exemple sont moyennement nitross. Cest dailleurs une des raisons avances pour expliquer que leurs drivs nitroso- soient faiblement

36 cancrignes ou ne le soient carrment pas. Par ailleurs, pendant que la nitrosation des amines secondaires donne lieu aux nitrosamines stables, celle des amines aliphatiques primaires donne des alcools et olfines, via les monoalkylnitrosamines instables. Dans le mme ordre dides, soulignons que si la nitrosation des amines secondaires attire autant lattention, cest aussi parce que ces substances sont largement rpandues dans lalimentation. Parmi les drivs nitrosamines de ce groupe de composs, les diakylnitrosamines (par exemple le NDMA et le NDEA) sont les plus stables dans lacide; les alkyl-arylnitrosamines quant elles se rarrangent dans lacide pour former des composs C-nitross : cest lexemple de la N-nitroso-N-mthylaniline qui se rarrange en p-nitroso-N-mthylaniline.(Mirvish 1975a). La raction de nitrosation endogne la mieux connue et la plus tudie est celle ayant lieu dans lestomac. Celle-ci dpend de linteraction de plusieurs facteurs savoir : le pH de lestomac (acidit), la basicit de lamine et la concentration des substrats. Cette raction qui est trs sensible au pH exige pour avoir lieu que le milieu soit acide. Elle est justement catalyse par lacidit du suc gastrique. Ceci dit, dans lestomac, elle est habituellement initie par la conversion du nitrite en acide nitreux HNO2 dont le pKa = 3,37. Ce pKa acide indique dailleurs que la nitrosation soit catalyse par lacide. En effet, de par son instabilit, lHNO2 est par la suite converti en espces actives nitrosantes : le NO+, lanhydre nitreux (N2O3), le nitrosyl thiocyanate (ON-NCS), le nitrosyl halide (NOX), ou lion acidium nitreux (H2NO2+). Notons que ni les nitrites, ni lacide nitreux ne sont capables de nitrosation de leur propre chef, mais plutt leurs drivs nitrosant (Foster et al. 1981). En plus des nitrates/nitrites ingrs, les espces nitrosantes peuvent aussi tre formes partir des NO2 et NO provenant de la synthse endogne comme il a t fait mention dans la section portant sur la synthse endogne des nitrates (paragraphe 2.1.4.5). En effet, le NO est une espce labile qui est trs rapidement oxyde en NO2, lequel serait en quilibre avec les agents nitrosant N2O3 (Tannenbaum et al. 1991). De toutes les espces nitrosantes, le N2O3 est lagent le plus ractif (Mirvish 1995; McColl 2007). En plus dtre responsable de la formation de nitrosamines cancrignes, le N2O3 serait lui aussi mutagnique. En effet, il est capable de dsaminer certaines bases de lADN et dinactiver ses enzymes de rparation

37 (Combet et al. 2007). En prsence des N2O3, la nitrosation des amines secondaires serait maximale pH = 3,4 qui se trouve tre justement le pKa de lHNO2 (Mirvish 1995). La nitrosation de la majorit des amines secondaires par le N2O3 se fait suivant les quations suivantes : 3 2HNO2 N2O3 + H2O R2NH + N2O3 R2NNO + HNO2 Taux = K1 [R2NH] [HNO2]2 Taux = K2 [amine] [nitrite] 2 (12) (13) (14) (15)

Daprs lquation (13), lespce nitrosante N2O3 est produite partir de deux molcules de HNO2. De plus, le taux de nitrosation est proportionnel la concentration de lamine et au carr de celle des nitrites (quations (15) et (16)). Cependant lauteur (Mirvish 1975) recommande dutiliser lquation (16) car elle est la plus facile appliquer. En effet, dans cette quation, on utilise les concentrations totales de nitrites et damines sans gard aux espces rellement prsentes en solution. Nous insisterons sur le fait que les conditions acides sont trs importantes pour ce type de raction car si tel nest pas le cas, on a beau avoir de grandes quantits de nitrites, leur contribution ne sera que trs faible sur la nitrosation. Pourtant en conditions favorables, la rsultante de petites quantits pourrait savrer majeure aprs la nitrosation. Revenons aux quations prcdentes. Si K1 est une constante, alors K2 devient une fonction du pKa de lamine. En combinant les quations (15) et (16), on obtient alors : 4

K2 =

K1

[R 2 NH ] [HNO 2 ] 2 [a min e] [nitrite] 2

(16)

Soit K 2

2 , 5 10 4 = 1 + 10 pK pH

(17)

3 4

Ces quations portant sur la cintique de la nitrosation ont t tires de Mirvish (1975) Ces quations portant sur la cintique de la nitrosation ont t tires de Mirvish (1975)

38

Ainsi pH = 3,4 K2 = 7,8 pKa

(18)

Cette quation pourrait tre dune grande utilit pour prdire la constante de nitrosation K2 dune amine secondaire si son pKa est connu. Des rsultats obtenus soutiennent le fait que la nitrosation peut avoir lieu en dautres sites que lestomac. Il sagirait de sites qui seraient non accessible par lASC, et donc le mcanisme de nitrosation serait diffrent de celui en milieu acide (Tannenbaum et al. 1991). Pour ce qui est de la basicit de lamine, la nitrosation est inversement proportionnelle celle-ci, cest--dire son pKa (Kyrtopoulos 1989). Ainsi, plus la basicit de lamine diminuera (pKa diminue), plus sa nitrosation sera rapide (tel que indiqu par la constante K2 en (18)), cest--dire que son taux de nitrosation sera dautant plus lev. Cest pourquoi les bases faibles telles la pyrrolidine (K2 = 0,005) seront nitroses beaucoup plus rapidement que les bases fortes comme la dimthylamine (K2 = 0,002). Mirvish fait partie de ceux qui se sont investis dans les tudes portant sur la cintique de la nitrosation in vitro. Lune de ses tudes (Mirvish 1975) constitue dailleurs une bonne rfrence pour les constantes de nitrosation de bon nombre de composs. Par ailleurs, les travaux de cintique raliss jusqu lheure actuelle suggrent que les taux de nitrosation in vivo correspondent trs bien ceux dtudes in vitro. En effet, selon Shephard et al. (1987) : des tudes de nitrosation in vivo chez la souris ont conclu que les taux de nitrosation in vivo et in vitro corrlaient bien. Des tudes de la cintique de nitrosation in vivo chez les rats ont aussi pu dmontrer que lquation de la cintique in vitro tait applicable la nitrosation dans lestomac du rat et tait aussi compatible avec les donnes humainesEn outre, on a dcouvert que lin vivo nitrosation relative corrlait avec les donnes in vitro des taux de ractivit relative publis par Mirvish en 1975. Ces travaux suggrent quen absence de donnes in vivo, la connaissance des taux de nitrosation in vitro des diffrents prcurseurs constitueraient une base raisonnable pour prdire la nitrosation relative in vivo. Et

39 lestimation des constantes de nitrosation relatives de plusieurs classes de composs pourrait se faire aisment sur la base de donnes dtudes in vitro ralises par Mirvish en 1975. La nitrosation peut aussi tre catalyse par les bactries lorsque le pH est neutre, par exemple dans lestomac hypochlorhydrique dindividus ayant des gastrites chroniques. En effet, lhypochlorhydrie favorise la croissance bactrienne dans lestomac, dont celle des souches possdant une activit nitrorductrice (IPCS 1999; Mirvish 1995).
2.4.5.4 NPRO test

Pour des considrations dordre thique, les tudes cintiques de la nitrosation in vivo nont pu se faire quavec la proline en prsence de nitrites, car le driv nitrosoproline (NPRO) est quantitativement excrt dans lurine et est considr non cancrigne (Vermeer et van Maanen 2001; Mirvish 1995; Ohshima et Bartsch 1981). Ceci a donc t la base du principe du NPROtest. Il sagit dune mthode simple et sensible mise au point pour estimer quantitativement la nitrosation endogne chez lhumain (Tannenbaum et al. 1991; Bartsch et al. 1989). cause de son groupement alpha-carboxy, la nitrosation de la proline est maximale aux pH 1,5 2,7, au lieu de pH 3 3,3 comme cest le cas de la plupart des autres amines. Cependant, son taux de nitrosation est proportionnel au carr de la concentration des nitrites comme cest le cas avec les autres amines, et sa constante de nitrosation K est intermdiaire celles des autres. Cest donc pour ces raisons que la NPRO constituent raisonnablement un bon indicateur de la formation endogne de nitrosamines (Mirvish 1995). Ce test permet destimer la capacit nitrosante de lestomac, donc la formation endogne des nitrosamines et non pas destimer les quantits de prcurseurs amines ou nitrates/nitrites (Mirvish 1995). La mthode peut tre mise au point de diffrentes manires. Cependant, indpendamment de la manire dont est conduit le test, la L-proline est utilise comme sonde des amines nitrosables, et la N-nitrosoproline (NPRO) et lacide N-actique (NAA) excrts dans lurine reprsentent les marqueurs de la nitrosation endogne. Ce test se base sur le fait que la NPRO prforme et ingre via la dite nest pas mtabolise par lhomme (Gangolli et al. 1994). Ainsi suite son ingestion, elle est

40 rapidement et presque totalement limine dans les urines 24 heures (excrtion quantitative) aprs son ingestion. Ainsi, la diffrence entre les quantits de NPRO excrtes dans lurine et celles ingres via la dite est considre tre issue de la nitrosation endogne. Pour la ralisation du test, la L-proline peut-tre applique seule, avec du nitrate ou avec la vitamine C (Gangolli et al. 1994; Bartsch et al. 1989).
2.4.5.5 Modulateurs de la N-nitrosation

La nitrosation peut tre catalyse par les halides et les thiocyanates (NCS-) (Mirvish 1995). Ces derniers catalyseraient la nitrosation par lintermdiaire de la formation des espces nitrosantes ONNCS. Elles pourraient se rvler majeures sur la nitrosation intra-gastrique vu quelles sont formes dans la salive, particulirement celle des fumeurs (environ 6 mM NCS-) et dans le suc gastrique (environ 0,2 0,7 mM NCS). Le pH de la nitrosation concentrations leves de NCS- est de 2 lorsque les nitrites sont pratiquement tous protons. En de de pH = 2, le taux baisse car cest le NCS- qui devient proton (Mirvish 1995). Les bromures (Br-) et les chlorures (Cl-) ont un effet similaire celui du NCS-, suite la formation du NOBr et du NOCl, mais les taux ne diminuent pas pour un pH infrieur 2. Lordre de ractivit est le suivant : NCS->> Br> Cl- (Rowland et Grasso 1975). Les ractions ayant lieu lors de la catalyse par les thiocyanates sont les suivantes 5 : HNO2 + H+ NCS- ONNCS +H2O ONNCS + R2NH R2 NNO + H + NCS Taux = K5 [amine] [HNO2] [NCS ]
+

(19) (20) (21)

Lattaque nuclophile par les agents nitrosant anhydre nitreux [N2O3 (ONONO)], nitrosylthiocyanate (ONNCS) et halide nitreux (NOX) est similaire et par consquent lordre de ractivit des amines avec le N2O3 (quation (14)) serait le mme quen prsence de NONCS- et NOX. Au contraire du N2O3 qui lorsque seul agit maximalement pH = 3,4 les thiocyanates catalyseraient la nitrosation des valeurs de pH < 3,4 (Mirvish 1975).
5

Tirs de Mirvish (1975).

41

Plusieurs varits de composs se sont rvls tre inhibiteurs de la nitrosation in vitro. Il sagit : des vitamines (acide ascorbique, alpha-tocophrol), des composs phnoliques (catchol, acides phnoliques, hydroquinones), de certains mlanges complexes (boissons alcoolises, produits laitiers, th), des composs sulphuriques (glutathione, mthionine) et des groupes de composs micellaires (ure, acides gras insaturs, cafine) (Vermeer et van Maanen 2001). Pour ce qui est de la nitrosation in vivo, celle-ci peut tre inhibe par divers facteurs dont les vitamines (acide ascorbique, alpha tocophrol), les composs phnoliques (polyphnols du th), lacide gallique (un des composants des acides tanniques), les sulfites (utiliss comme agents conservateurs des aliments), la cystine contenue dans le glutathion, les acides tanniques (retrouvs dans la bire et le th) (Mirvish 1975; Mirvish et al. 1975). Les proprits anti-nitrosantes de lacide ascorbique ont fait quil est depuis longtemps utilis comme antioxydant dans certains mdicaments comme loxyttracycline. La vitamine C peut se retrouver sous deux formes principales : la forme rduite acide ascorbique (ASC) et la forme oxyde anion ascorbate (ASC-). Ses principaux produits de transformation sont : lacide dhydroascorbique (dhydro-ASC) et lacide dictoglucorinique (produit instable de la dissociation de lacide dhydroascorbique). La vitamine C inhiberait la nitrosation, mais naurait aucune action sur les nitrosamines prformes. En effet, elle aurait induit la rduction de signes de toxicit aigu hpatique chez des rats ayant ingr un mlange de dimthylamine + nitrite, ce qui ne ft pas le cas lors de lingestion plutt de la NDMA prforme (Mirvish 1994). Il sagit dune substance trs hydrosoluble et trs peu emmagasine dans le corps. La majeure partie de la dose est rapidement excrte inchange dans lurine. Son inhibition de la nitrosation se ferait alors en solution aqueuse acide (Combet et al. 2007; Mirvish 1986). Cette inhibition dpendrait de la rduction en milieu acide du nitrite en NO par lASC qui lui, est en mme temps oxyd en dhydro-ASC (Combet et al. 2007; McColl 2007; Sobala et al. 1989). Au cours de ce processus, lASC serait en comptition avec les amines pour pouvoir ragir avec le nitrite. Dans cette comptition, lASC serait

42 beaucoup plus rapide que les amines (Combet et al. 2007; McColl 2007). En outre, la vitamine C serait plus efficace pH > 4,3 car lanion ascorbate (ASC-) qui est 230 fois plus efficace que lASC pour rduire le nitrite prdomine dans ces conditions. Compte tenu finalement du fait que son pH optimum soit aux environs de 4 (approximativement celui retrouv dans lestomac durant la priode postprandiale), la vitamine C serait alors le meilleur de tous les autres antioxydants (Sobala et al. 1989). Du fait de cette raction avec le nitrite, lASC est ajout aux viandes prserves par les nitrites dans le but daugmenter la formation de NO qui est responsable de la couleur rose de la nitrosomyoglobine (Mirvish et al. 1975). Par ailleurs, il a t report que le NO issu de laction de la vitamine C, pouvait rgnrer les espces nitrosantes en ragissant avec lO2 molculaire. En effet, le NO pourrait migrer vers les phases lipides et tre oxyd en NO2 puis en N2O3 capable de nitroser les amines en phase lipide. Cest donc pourquoi en prsence de lipides, la vitamine C pourrait plutt promouvoir la nitrosation (Combet et al. 2007; Mirvish 1986). Outre cela, la vitamine C serait activement scrte dans lestomac humain (Combet et al. 2007; Suzuki et al. 2005; Schorah et al. 1991). Le niveau mdian normal du mlange (ASC + dhydro-ASC) est de 50mg/L dans le suc gastrique (soit 0,42 mg/h dASC) et de 7 mg/L dans le plasma (Mirvish 1994). Cette scrtion aurait lieu au niveau de lantre de lestomac. Cest donc pour cette raison que lon pense que la nitrosation serait maximale au niveau de la rgion cardiale de lestomac. En effet, compte tenu du fait de la scrtion antrale de la vit C, du fait que le thiocyanate provienne de la bouche et de lacidit postprandiale du cardia, ce dernier serait donc la seule partie pouvant permettre une nitrosation maximale (McColl 2007; Suzuki et al. 2003). Bon nombre de tests ont t faits in vitro et in vivo et lors dexprimentations humaines pour tudier linhibition de la nitrosation par la vitamine C. Les rsultats des pourcentages dinhibition varient beaucoup dune tude lautre. Et cette inhibition dpend beaucoup de la dose dASC administre et du moment de ladministration (avec, avant ou aprs les amines). Pour ce qui est des exprimentations humaines, elles ont t en gnral conduites avec la proline (PRO). En effet, le driv N-nitrosoproline (NPRO)

43 est non cancrigne, non biotransform et est entirement scrt inchang dans lurine. Ainsi, daprs Mirvish (1994), lingestion de 1g dASC en mme temps que le nitrate et la proline a induit une rduction de 81% de la formation de NPRO chez lhumain. Cependant, lorsque la mme quantit dASC a plutt t administre 2h avant, avec, 1h et 2h aprs un repas enrichi en proline, lexcrtion de NPRO ft diminu de 94, 100, 87 et 25% respectivement. Des essais avec des jus de fruits ont laiss suggr que dautres composs en plus de la vitamine C seraient impliqus dans linhibition. En effet, le mme auteur a report des inhibitions de 41 63% de la formation de NPRO par les jus dananas, de fraises et de carottes. Cependant lorsque 46 mg dASC dans 100 ml deau ft administr, linhibition ne ft que de 24%. Les fruits comportent justement dautres constituant inhibiteurs comme les polyphnols (Mirvish 1994). Les vitamines C et E et les polyphnols sont des constituants normaux de la dite que lon retrouve normalement dans les fruits, lgumes et grains. Du fait de leur action combine, ces antioxydants seraient plus efficaces dans les fruits et lgumes frais. Leur efficacit serait cependant perdue lors de la cuisson des aliments car ils sont sensibles la chaleur, particulirement la vitamine C. On na justement observ aucune baisse de lincidence de cancer gastrique en fonction de la consommation de lgumes cuits (OMS 2004). En outre, le fer hmique de la viande rouge stimulerait la formation de nitrosamines. En effet, celui-ci agirait en catalysant la rduction du nitrate en nitrite par la microflore intestinale, avec pour consquence laugmentation de NOC fcaux (Ward et al. 2007). Plusieurs aliments tels que les viandes prserves et les poissons secs sals qui sont des sources de nitrites et /ou de nitrosamines, sont aussi des sources importantes de sels. Les sels peuvent causer linflammation qui, elle pourrait endommager la muqueuse protectrice de lestomac et par consquent augmenter le risque de cancer de lestomac. Laction de H Pylori pourrait aussi sadditionner celle des sels et NOC et potentialiser la cancrognse une fois lpithlium endommag. H Pylori diminue le taux de vitamine C dans lestomac et de plus, le fer contenu dans la viande rouge est connu comme tant un facteur de croissance essentiel pour H Pylori.

44 En somme, les effets nfastes sur la sant associs aux NOC rsultent probablement de linteraction complexe entre la quantit ingre de nitrates, lingestion concomitante des prcurseurs nitrosables, des inhibiteurs de la nitrosation (vit C et alpha tocophrol) et des autres cofacteurs de la nitrosation tels que le fer hmique de la viande, du statut mdical qui augmenteraient la nitrosation endogne (ex. maladies inflammatoires chroniques).
2.4.5.6 Biotransformation et toxicit

Dans cette partie, on sattardera au cas des nitrosamines secondaires dont particulirement celui des N-nitrosodiakylamines (= nitrosodiakylamines) car elles sont les plus stables et les plus tudies. Ceci dit, la biotransformation des nitrosamines serait la cause de leurs effets cancrignes. Lorgane de biotransformation principal de ces substances est le foie, mais celle-ci peut aussi avoir lieu dans dautres organes tels que les reins et les poumons (Montesano et Bartsch 1976). Ainsi, suite leur absorption, les nitrosamines (endognes et exognes) sont rapidement mtabolises en intermdiaires ractifs qui peuvent se lier de faon covalente aux macromolcules (ADN), initiant le processus de cancrognse. Lactivation mtabolique des nitrosamines en espces lectrophiles agissant sur lADN est trs similaire entre les tissus humains et animaux (rongeurs). cette activation mtabolique fait suite linduction de lsions mutagniques sur lADN qui sont elles aussi similaires entre animaux et humains (Mirvish 1995; Brown 1999). Les exprimentations animales ont justement mis en exergue la formation dadduits lADN similaires ceux observs dans les tudes exprimentales humaines. De plus, les rongeurs prsenteraient des signes de toxicit aigu (ncrose hpatique et cirrhose) similaires ceux observs chez lhumain (Brown 1999). En effet, lisoforme CYP2E1 du P-450 chez les rongeurs est le mme que lon retrouve dans le rticulum endoplasmique de la fraction microsomale chez lhumain et qui ragit avec les anticorps anti-souris prpars avec les enzymes de souris (Mirvish 1995).

45 Deux voies majeures sont impliques dans la biotransformation des nitrosamines: lalpha-hydroxylation (-hydroxylation) et la dnitrosation (figure 2); la premire tant de loin la voie majeure (OEHHA 2006). Dpendamment de la longueur de la chane des N-nitrosodiakylamines, il peut avoir lieu une -, une - ou une -1-oxydation en plus de la -C-hydroxylation (Montesano et Bartsch 1976). La biotransformation de la majorit des nitrosodiakylamines est initie par lhydroxylation de la substance sur latome de carbone immdiatement adjacent au groupe nitroso (carbone alpha). Cette oxydation rsulte en un produit instable (alphahydroxydiakylnitrosamine) qui est rapidement dcompos en un aldhyde et un diazohydroxyde. Ce dernier sera par la suite dissoci en un ion alkyldiazonium (exemples : CH3N2+ et CH3CH2N2+) et ultimement en un cation carbonium ractif (exemples : CH3+ et CH3CH2+) correspondant (Montesano et Bartsch 1976; Brown 1999). Ce procd serait mdi par une Oxydase Fonction Mixte (OFM), plus prcisment les congnres 2E1 de la famille du cytochrome P-450 (Gangolli et al. 1994; Mirvish 1995; Brown 1999). Vu que cette oxydase est prsente dans divers types de tissus, lactivation mtabolique des nitrosamines peut et en gnral a lieu au site de formation ou dapplication (Foster et al. 1981). Le diazohydroxyde et les intermdiaires subsquents sont non seulement trs lectrophiles, mais sont aussi des agents alkylants puissants (Gangolli et al. 1994). Leur raction majeure se fait dans leau avec formation dun alcool, mais ils peuvent aussi ragir avec lADN pour produire une varit de bases ADN alkyles. Ceci dit, cest le groupement alkyl de lion alkyldiazonium qui va se charger de mthyler les composants nuclophiles des macromolcules cellulaires (ADN, ARN et protines) par transfert dun groupe mthyle et avec la gnration de N2. La dtoxification par nitrosation comptitionne avec le processus dactivation mtabolique. La dnitrosation est aussi catalyse par le P-450. Dans ce cas, la dialkylnitrosamine est tout dabord mtabolise en intermdiaire imine instable et en oxyde nitrique (NO). Lion imine sera par la suite dcompos en formaldhyde et en une alkylamine (amine primaire) pendant que le NO lui, se combinera loxygne pour gnrer le nitrite. Le formaldhyde quant lui sera oxyd en formate avec dgagement de CO2.

46 En gnral, on considre que lion carbonium est lespce cancrigne qui ragit avec les acides nucliques pour former des adduits (Brown 1999) (figure 2).

Voie de lAlpha-hydroxylation

Voie de dnitrosation

N-dimthylnitrosamine N-mthylformaldimine

Nitrite Alpha-hydroxymthylnitrosamine

Monomthylnitrosamine

Formaldhyde

Formaldhyde

Mthylamine

Mthyldiazohydroxyde

Ion mthyldiazonium X (macromolcule)

Macromolcule mthyle

Figure 2. Biotransformation de la N-dimthylnitrosamine. Adapt de OEHHA 2006.

Tous les intermdiaires de l-hydroxylation sont hautement instables. Le plus stable dentre eux, l-hydroxylation, a une demi-vie denviron 1 10 secondes, suggrant que les nitrosamines soient sans doute actives majoritairement dans lorgane o elles induisent les tumeurs (Mirvish 1995). Bien que les deux voies soient impliques dans le mtabolisme, l-hydroxylation est celle qui forme les intermdiaires ractifs responsables de la cancrognicit. De plus, non seulement les deux voies font intervenir lOFM dpendante du CYP450, mais aussi le mme isoforme de cette enzyme savoir le CYP2E1. Ce dernier est cependant impliqu dans le mtabolisme lorsque les concentrations des nitrosamines sont faibles. concentrations leves, dautres isoformes seraient impliques (Gangolli et al. 1994; Mirvish 1995; Brown 1999).

47 Le mtabolisme est amplifi par les inducteurs du CYP2E1 tels que : isopropanol, lthanol. En effet, lingestion de pyrazole ou deau prtraite par de lthanol (10%), augmente le taux de mtabolisation de plusieurs ordres de grandeurs du NDMA dans le foie et les poumons (Gangolli et al. 1994). Il existe aussi certains inhibiteurs comptitifs des deux voies tels que : lthanol, lactone, le dioxane, lisopropanol et le pyrazole. En effet, la quantit de NDMA dans lurine augmente aprs ingestion dalcool car ce dernier est un inhibiteur du mtabolisme de la NDMA (Gangolli et al. 1994; OEHHA 2006). La position principale de mthylation sur les acides nucliques par bon nombre dagents alkylant est la position N7-alkylguanine. Cependant, lattaque peut avoir lieu sur dautres sites tels que : N1, N3, N7 de ladnine; la N3, -7 et O6 de la guanine; la N3 des cytosine, thymine et uracile; O4 de la thymine. De celles-ci, les positions majeures sont la N7 et lO6 de la guanine, la O4 de la thymine. La position N7 de la guanine nest cependant pas implique dans les effets mutagniques et cancrignes. Cest plutt la O6 car cest celle-ci qui est implique dans la formation des paires de bases. En effet, les O6-alkylguanines forment prfrentiellement des paires de bases avec la thymine plutt que la cytosine, donnant lieu des mutations (transition) G : C A : T, connues comme initiateur de la cancrognse (Mirvish 1995). Lenzyme O6-mthyl guanine-DNA transfrase (MGMT) est responsable de rparer et dtruire les adduits O6-mthyl guanine et autres O6-alkyl guanine/ADN. Lenzyme procde en transfrant le groupement mthyle de la guanine de lADN sur un rsidu cystine quelle contient, rsultant ainsi en linactivation permanente de lenzyme. Lactivit de la MGMT varie en fonction des espces et des tissus. On a aussi report une forte homologie dans la squence dacides amins de cette enzyme hpatique entre la souris et lHomme (OEHHA 2006). Bien quil ny ait pas dvidence suffisante de la cancrognicit de ces substances chez lhumain, la panoplie de preuves des tudes animales poussent croire que ces substances devraient tre considres comme des cancrognes chez lhumain en accord avec les lignes directrices de le CIRC. Ainsi, lorsquon nourrit les animaux avec des

48 prcurseurs nitrosables tel que la morpholine et les nitrites, on obtient le mme type de tumeurs que lorsquils sont exposs la N-nitromorpholine (Gangolli et al. 1994).
2.4.5.7 Classification

Le Centre de Recherche sur le Cancer (CIRC) a class le NDMA et le NDEA comme tant probablement cancrognes pour lhumain , groupe 2A. La NDBA, la NPPA, la NPIP, la NPYR sont classes possiblement cancrognes pour lhumain , groupe 2B. Le National Toxicology Program a class toutes ces substances comme raisonnablement anticipes cancrignes chez lhumain (Brown 1999).
2.5 tudes animales de toxicit des nitrates et nitrites 2.5.1 Toxicit aigue

Ce type de toxicit est fonction de la capacit rduire le nitrate en nitrite et varie selon les espces : gastrite svre chez les monogastres et mthmoglobinmie chez les ruminants. Ces derniers sont les plus sensibles du fait de leur grande capacit rduire le nitrate (LD50 = 450 mg/kg de nitrate de sodium chez la vache). Des LD50 de lordre de 1600 9000 mg/Kg de nitrate de sodium (NaNO3) ont t reports chez le rat, la souris et le lapin. Cependant, le nitrite tant plus toxique, des LD50 plus faibles de nitrite de sodium (NaNO2) ont t reportes pour ces mmes espces : 214, 186 et 180 mg/kg chez la souris, le lapin et le rat respectivement (OMS 2004).
2.5.2 Toxicit sub-chronique

Aprs exposition de rats au nitrite de potassium (KNO2) dans leau potable pendant 13 semaines, lhypertrophie de la zona glomerulosa du rein a t observe. Lintensit de celle-ci augmentait avec laugmentation de la concentration (100, 1000, 3000 mg/L). Une NOEL = 5,4 mg KNO2 /kg.jour a t dduite de cette tude (OMS 2004). Une tude similaire a confirm linduction de lhypertrophie de la zona glomerulosa du rein avec aussi une NOEL semblable de 5 mg KNO2/ kg.jour. En outre, le nitrate est goitrognique chez plusieurs espces dont les mammifres (btail : mouton, porcs, chvre, ) et le rat (OMS 2004; Vermeer et van Maanen 2001).

49
2.5.3 Toxicit chronique

Linhibition de la croissance a t observe chez des rats aprs 2 ans dexposition une dite contenant 5% et plus de NaNO3. Une NOEL correspondant 1% de la dose (soit 370 mg/kg.jour) a t dduite de cette tude. Les effets les plus reports suite lexposition de rats au nitrite pendant 2 ans taient laugmentation des niveaux de mthmoglobinmie et des changements histopathologiques dans les poumons et le cur. Une NOEL = 10 mg NaNO2 /kg.jour a t dduite. Lexposition au nitrite a aussi provoqu une dficience en vitamine A chez plusieurs espces animales (OMS 2004).
2.5.4 Mutagnicit et gnotoxicit

Le nitrate nest pas mutagnique pour les bactries et les cellules de mammifres in vitro (Sant Canada 1987). Il ny a pas dassociation entre nitrate dans leau et la frquence dchange de chromatides surs dans les lymphocytes priphriques chez lhumain qui ait t observe (Kleinjans et al. 1991). En effet, dans une tude portant sur des enfants exposs leau potable dont les concentrations de nitrates excdaient 70 mg N/L, on na pas observ dchanges de chromatides surs dans les lymphocytes (IARC 1998). Par contre le nitrite lui, est mutagnique dans les systmes in vitro et in vivo. Il a provoqu des lsions cytogntiques in vivo chez le rat, la souris et le lapin, et in vitro dans les cellules BSC-1 et Hela (Luca et al. 1987). Il est aussi mutagnique sur les cellules dembryons de hamsters dors de Syrie et les souches TA1537 de Salmonella typhimurium (Sant Canada 1987).
2.5.5 Cancrognicit

Le nitrate nest pas cancrigne chez les animaux tests. Plus prcisment, nitrate et nitrite administrs seuls ne se sont pas rvls cancrignes chez les animaux tests (OMS 2004; Lijinsky et al. 1983; Mirvish et al. 1980). Cependant le nitrite ltait si administr en mme temps que des composs nitrosables, suggrant que leffet soit du la formation endogne de NOC cancrignes. Cest alors que plusieurs tudes ralises chez les rongeurs ont test leffet du nitrite en combinaison avec des amines secondaires, tertiaires ou des amides spcifiques, dans la dite, dans leau potable ou par gavage.

50 Plusieurs de ces combinaisons ont entran une augmentation de lincidence de tumeurs par rapport ladministration individuelle damine, damide ou de nitrite. Parmi les amines et amides ayant caus des rsultats positifs on peut citer: la n-dibutylamine, la nmethylaniline, la piperazine, la morpholine, la butylure, lthylure, lthylthioure, la mthylure, laminopyrine, la bis (2-hydroxypropyl) amine, la diphnhylamine, le disulfiram, Les tumeurs taient entre autres: gastrique, hpatiques, pulmonaires, des lymphomes malins, des tumeurs du pr-estomac, des papillomes de la vessie urinaire, des adnocarcinomes utrins,... Suite aux rsultats dtudes animales, une association entre le couple (nitrate/nitrite) et le cancer via la formation de NOC est suspecte depuis lors (IPCS 1999; Grosse et al. 2006; Fan et Steinberg 1996). Ceci dit, au moins 75% des 120 NOC tests chez les animaux se sont rvls tre cancrignes chez ceux-ci (OMS 2004). Cest donc compte tenu de la possibilit quil forme des NOC que le couple nitrates/nitrites a t class comme tant probablement cancrogne dans les conditions de nitrosation endogne (2A) (Grosse et al. 2006).
2.5.6 Effets sur la reproduction et le dveloppement

Aucun effet na t report chez le lapin et le btail concernant le nitrate. Cependant, des troubles de la reproduction ont t reports chez le cobaye aux concentrations trs leves de nitrate de potassium (30 000 mg KNO3/L) avec une NOEL = 10 000 mg KNO3/L (OMS 2004). Pour ce qui est du nitrite, il est capable de traverser la barrire placentaire et de causer la mthmoglobinmie chez les rats femelles (OMS 2004). Les donnes exprimentales ont dmontr une reprotoxicit et des effets sur le dveloppement qui sont majoritairement associs lexposition aux concentrations trs leves capables dinduire la mthmoglobinmie maternelle (OEHHA 1997). Ainsi ni la foetotoxicit, ni laugmentation du taux de mthmoglobinmie maternelle, ni dembryotoxicit nont t observs chez le rat expos des doses de lordre de 200 et 300 mg NaNO2/Kg.jour administres dans leau. Les effets comportementaux et sur la fonction surrnalienne observs ont t attribus lhypoxie ftale cause par une mthmoglobinmie svre chez les rats femelles enceintes (IPCS 1999; OEHHA 1997). Chez les bbs de rats

51 femelles ayant consomm 2000 ppm de NaNO2 dans leau potable, des effets sur le dveloppement ont t observs (OEHHA 1997; Nyakas et al. 1994). Aucun effet tratogne des nitrates et nitrites na t report chez le rat, la souris, le hamster et le lapin (IPCS 1999; Sant Canada 1987; OMS 2004; ATSDR 2007; OEHHA 1997; IARC 1998).
2.6 Effets sur la sant humaine 2.6.1 Mthmoglobinmie

Le principal effet toxique aigu associ un empoisonnement de nitrates et de nitrites chez lhumain est la mthmoglobinmie. Lorgane cible principal est le sang. Ceci dit, le fer de lhmoglobine (Hb) du sang peut se retrouver sous deux formes principales : la forme ferreuse ou rduite Fe2+ et la forme ferrique ou oxyde Fe3+. Loxyhmoglobine (oxyHb) dans laquelle le fer de lHb se retrouve sous sa forme rduite Fe2+ est capable de transporter loxygne (O2) ou le dioxyde de carbone (CO2). Ce qui nest pas le cas de la mthmoglobine (metHb), qui elle, est une forme dHb dans laquelle le fer est prsent sous sa forme oxyde Fe3+. Ainsi, une fois dans la circulation sanguine, les nitrites issus de la transformation des nitrates oxyderaient le fer ferreux (fe2+) de loxyhmoglobine des globules rouges en fer ferrique (Fe3+) de la mthmoglobine selon la raction suivante 6: NO2- + oxyHb (Fe2+) metHb (Fe3+) + NO3(22)

Cest la metHb qui est lorigine de la mthmoglobinmie. Plus prcisment, elle exerce sa toxicit de deux faons. Premirement, elle rduit les capacits du sang transporter lO2 quelle lie fortement, lempchant de se dissocier. De cette faon, elle empche que lO2 soit livr aux tissus. Deuximement, en interfrant avec la dissociation de lO2, elle dplace la courbe de dissociation de loxyhmoglobine vers la gauche (IPCS 1999; IARC 1998; Swissa et al. 2007). Dans les conditions physiologiques normales, il existe constitutionnellement de faibles niveaux de mthmoglobine (0,5 2,0%) (OEHHA 1997). Dun autre ct, il
6

Tir de : OMS (2004).

52 existe plusieurs systmes endognes chargs de maintenir lhmoglobine dans son tat rduit. Cest pourquoi chez un individu normal, environ 1% de lhmoglobine totale se retrouve sous forme mthmoglobine tout moment. Cette dernire peut tre rduite en hmoglobine par les deux mthmoglobine rductases : NADH-dpendant (majoritairement) et NADPH-dpendant ( un moindre degr) (ATSDR 2007). Dpendamment du pourcentage de la mthmoglobine totale, le tableau clinique se prsentera comme suit :

Taux de mthmoglobinmie (%)

Manifestations cliniques

Du fait de la grande capacit du sang


10

transporter loxygne, en gnral, pas de signes cliniques associs Cyanose : bleuissement des lvres, de la

10 20

peau

des

membres

et

du

tronc,

habituellement asymptomatique Dpression du systme nerveux central 20 45 (cphales, tourdissements, fatigue, lthargie, syncope), troubles circulatoires (dyspne/tachypne, arythmies cardiaques) 45 55 55 70
> 70

Aggravation du niveau dinconscience Coma, convulsions, choc, arythmie Risque de dcs

Tableau 3. Manifestations cliniques dues au taux de mthmoglobinmie dans le sang7

La population cible principale de ce risque est constitue par les nourrissons de moins de 3 mois (OEHHA 1997). En effet, plusieurs cas de mthmoglobinmie ont t reports dans cette population lorsque les concentrations de nitrates dans leau utilise pour la prparation des biberons excdaient 10 mg N-NO3-/L (IPCS 1999).

Le tableau a t conu partir des donnes de : OMS (2007); US EPA (2002a); Phaneuf et al. (2004) et ATSDR (2007).

53 En outre, le risque est particulirement lev chez les enfants exposs une eau qui connat une contamination microbiologique susceptible daugmenter les concentrations gastro-intestinales de nitrites. Les enfants sont aussi particulirement susceptibles car : 1) leur pH gastrique plus lev permet une prolifration plus importante de leur flore bactrienne intestinale, et donc des niveaux de nitrites plus levs; 2) ils possdent une faible capacit enzymatique rduire la mthmoglobinmie en hmoglobine, 3) et finalement, ils possdent lhmoglobine ftale (hmoglobine F) qui est plus facilement oxyde que celle de ladulte (OEHHA 1997). Chez les femmes enceintes, les concentrations de mthmoglobine (0,5 2,5% de lhmoglobine totale se trouve normalement sous forme de mthmoglobinmie) peuvent augmenter jusqu des maximums de 10% dans la 30e semaine de grossesse. Ces niveaux rentrent cependant la normalit aussitt aprs laccouchement. Compte tenu de cela, les femmes enceintes constituent alors une autre population cible de la mthmoglobinmie et devraient sassurer de la qualit de leur eau durant la grossesse (IPCS 1999). En plus des enfants et des femmes enceintes, les autres populations les plus susceptibles la mthmoglobinmie sont les personnes dficientes en glucose-6-phosphate dshydrognase (Swissa et al. 2007) ou en mthmoglobinmie rductase, les adultes avec une acidit gastrique rduite (par exemple par lachlorhydrie ou latrophie gastrique) (OMS 2004; OEHHA 1997). Des cas cliniques de mthmoglobinmie chez des adultes ayant consomm de leau contamine par les nitrates nont pas t reports. Cependant il y a eu des cas dintoxication aprs ingestion accidentelle de doses leves de nitrates ou lors de traitements. Les doses toxiques variaient de 33 150 mg NO3-/kg et les doses ltales de 67 833 mg NO3-/kg. Pour ce qui est des nitrites, des cas dintoxications accidentelles suite lingestion daliments contamins par les nitrites ont t reports. Les doses ltales variaient de 33 250 mg NO2-/kg, les doses faibles sappliquant aux personnes ges et aux jeunes enfants. Pour ce qui est des doses toxiques, elles variaient de 0,4 200 mgNO2-/kg. Le

54 nitrite de sodium utilis comme vasodilatateur ou antidote de lempoisonnement au cyanure a aussi t impliqu dans des cas dintoxication au nitrite (OMS 2004). Par ailleurs, outre les nitrates, plusieurs mdicaments peuvent induire la mthmoglobine : benzocane, sulfamid, dapsone, (Phaneuf et al. 2004). Soulignons que les rongeurs ne constituent pas de bons modles pour tudier ce risque. En effet, la mthmoglobinmie est due aux nitrites et en prsence de nitrates, une rduction pralable de ceux-ci en nitrites est ncessaire pour induire leffet toxique. Or plusieurs espces ne possdent malheureusement pas de bactries rductrices de nitrates.
2.6.2 Effets sur la reproduction et le dveloppement

Lexposition de la mre aux nitrates et nitrites environnementaux pourrait augmenter les risques de complications lors de la grossesse tel que : avortements spontans, restrictions de la croissance intra-utrine, dformations varies la naissance, travail difficile, pr-enclampsie, dfauts du tube neural (Brender et al. 2004), naissance prmature, faible poids la naissance, anencphalie, dfaut du systme nerveux central, malformations congnitales pouvant causer la mort (OMS 2007; Ward et al. 2007) et effets comportementaux (IARC 1998). Pour ce qui est des effets sur le dveloppement de la progniture (aussi embryon et/ou ftus), les tudes pidmiologiques rcentes suggrent la possibilit dune association entre ceux-ci et lingestion deau teneur leve de nitrates par la mre; toutefois, aucune conclusion claire sur la relation de cause effet na pu tre tablie (OEHHA 1997; INSPQ 2003). Cest alors quune association entre lingestion de nitrates dans leau et des malformations congnitales (particulirement celles du tube neural) a t suggre (van Grinsven et al. 2006). En outre, selon lOEHHA (1997), un seul rapport datant de 1997 et portant sur les cas davortements spontans et les nitrates dans leau a t identifi depuis ltablissement des standards de nitrate dans leau potable (dbut 1990). Dans ce rapport, les cas taient des femmes rsidant en Inde et les niveaux de nitrates dans les puits taient de lordre de 19 29 mg N-NO3-/L. Cette tude na malheureusement pas pu elle aussi tablir une relation causale entre nitrates dans leau et avortements spontans.

55 Compte tenu des limites des donnes disponibles, il apparat donc vident que plus dtudes soient ncessaires pour valuer les effets de ces substances sur le dveloppement et la reproduction humains.
2.6.3 Cancer

Le rle des nitrates et nitrites dans ltiologie du cancer chez lhumain, particulirement celui de lestomac, a t rvis et discut dans plusieurs tudes (Grosse et al. 2006; Walker 1990; Forman 1989). La conclusion tire notamment sur la base dtudes animales est que le couple nitrates/nitrites est probablement cancrogne pour lhumain dans les conditions de nitrosation endogne (groupe 2A) (Grosse et al. 2006). Ainsi, plusieurs tudes pidmiologiques ont investigu la relation entre les frquences de cancer et lingestion de nitrates (via leau ou les aliments). Les rsultats de celles-ci sont dans lensemble trs quivoques. Certaines tudes pidmiologiques ont observ une augmentation du risque de cancer chez des individus qui, mme si les niveaux actuels de nitrates dans leur eau taient infrieurs la norme, ils avaient utilis leau de rseaux publics avec des concentrations leves de nitrates pendant plusieurs dcennies. Dans une tude cas/tmoin ralise au Nbraska, on a observ des associations entre des niveaux levs de nitrates (> 50 ppm) dans leau potable de rseaux publics et des risques levs de lymphomes non-Hodgkinien, mais aucune relation cause/effet na pu tre dmontre (Ward et al. 1996). Une association a aussi t plausible entre le cancer du colon et lingestion de nitrates via leau potable particulirement chez les individus qui consomment peu de fruits et lgumes (De Roos et al. 2003). Des associations ont aussi t notes pour les cancers de la vessie urinaire et des ovaires (Weyer et al. 2001). Deux tudes de (Morales Suarez-Varela et al. 1993,1995) ont valu limpact des concentrations leves de nitrates dans leau (plus de 50 mg N/L) sur lincidence de cancer et la mortalit Valence, Espagne. Les auteurs ont suggr une association possible entre les concentrations leves de nitrates dans leau potable et les cancers de la vessie et de lestomac. Cependant encore, aucune relation cause/effet claire na pu tre dmontre. Par ailleurs, dautres tudes ont report une relation inverse entre les nitrates dans leau et les cancers utrin et rectal (Weyer et al. 2001). Cest aussi le cas dune tude

56 cas/tmoins mene en Allemagne qui a conclu en labsence dune association entre les niveaux faibles de nitrates dans leau potable (quartile suprieur > 5,7mg N-NO3-/L) et le risque de cancer du cerveau (Steindorf et al. 1994). De mme, il ny a pas eu dvidence dune association entre cancer du pancras et nitrates dans leau potable des niveaux infrieurs ou gaux la CMA (plus prcisment 7,5 ou 10 mg N/L) dans une tude mene en Iowa (Coss et al. 2004). Pas dassociation non plus entre nitrates dans leau et risque de carcinomes des cellules rnales dans une population de femmes ges de lIowa (Ward et al. 2007). De faon gnrale, il nexiste pas dvidence pidmiologique dune relation causale entre cancer et nitrates dans leau des concentrations atteignant 45 mg NO3-/L (soit 10 mg N-NO3-/L) et souvent mme plus. Cependant, cause du fait que les donnes disponibles ne soient pas toujours adquates, lexistence dune association ne saurait tre exclue.
2.6.4 Autres effets

Lexposition chronique aux nitrates pourrait causer une diurse, lhmorragie de la rate (U.S.EPA 2006). Des tudes pidmiologiques suggrent aussi une association possible entre les nitrates dans leau potable et le diabte mellitus insulino-dpendant de type 1 chez lenfant (ATSDR 2007; Vermeer et van Maanen 2001), les problmes thyrodiens, lhypertension et les maladies chroniques chez les enfants (infections des voies respiratoires, diarrhe, gastrite) (U.S.EPA 2006). Ainsi, laugmentation de lincidence du goitre (hypertrophie de la thyrode) a t observ chez des individus ayant consomm de leau avec des concentrations de nitrates dpassant 50 mg NO3-/L (OMS 2004; van Maanen et al. 1994;Vermeer et van Maanen 2001). De mme, des effets sur la scrtion des hormones strodiennes par les glandes surrnales ont t rapports (OMS 2004). De par les proprits vasodilatatrices du nitrite, ses composs inorganiques et organiques peuvent produire lhypotension chez lhomme par action directe sur les muscles lisses (IPCS 1999; OEHHA 1997; van Grinsven et al. 2006). cet effet, des doses thrapeutiques de 30 60 mg de nitrite de sodium sont typiquement utilises pour traiter langine de poitrine. Lhypotension peut aussi tre cause par le nitrate organique,

57 bien que ce soit par un mcanisme daction indirecte; ce qui nest pas le cas du nitrate inorganique qui lui ne produit aucun effet (IPCS 1999; OEHHA 1997). Tous ces effets semblent particulirement marqus pour le nitrate dans leau compar celui dans la dite, et ce surtout dans les cas de dficience simultane en iode (OMS 2004). Enfin, des effets indirects sur la sant pourraient survenir comme consquence de la contamination de leau par les nitrates. En effet, dans leau, les nitrates pourraient mobiliser des lments toxiques sy retrouvant sous forme de traces (ex. Nickel, cobalt, arsenic) en oxydant les mtaux qui les contiennent. Soulignons que les individus ayant des maladies cardiaques ou pulmonaires seraient plus susceptibles aux effets toxiques du nitrate du fait de leur acidit gastrique rduite. Ceci a t appuy par des tudes animales dans lesquelles des changements hmatologiques et pathologiques du cur et des poumons ont t dmontrs (OMS 2007).
2.7 Normes et recommandations8

Du fait de lambigut des rsultats dtudes pidmiologiques sur le cancer, toutes les normes et recommandations actuelles nont t tablies que sur la base des rsultats des tudes pidmiologiques sur le risque de mthmoglobinmie. Ces standards sont censs protger adquatement les populations les plus sensibles que sont les nourrissons de moins de 3 mois, de lapparition de mthmoglobinmie. Ainsi, deux tudes principales ont largement document les cas de mthmoglobinmie chez lenfant: celles du groupe de Bosch en 1950 et celle de Walton en 1951 (OEHHA 1997; U.S.EPA 2002a). Cependant, du fait quelle prsente des donnes plus compltes de concentrations de nitrates dans leau, cest celle de Walton qui a t retenue. Elle constitue donc la base de ltablissement des normes actuelles de nitrates/nitrites dans leau. Il sagit dune vaste tude pidmiologique descriptive portant sur lincidence de mthmoglobinmie chez des enfants ayant rgulirement consomm des prparations faites base deau contamine par des nitrates. Tous les cas de mthmoglobinmie rpertoris dans 37 tats amricains ont t analyss dans cette
8

Les concentrations de nitrates et nitrites dans leau peuvent tre exprimes sous forme nitrates (NO3-), nitrites (NO2-), nitrates + nitrites (NO3- + NO2-) ou sous forme poids dazote de ces ions respectifs. Ainsi, 1 mg NO3-/L = 0,226 mg N-NO3-/L et 1 mg NO2-/L = 0,304 mg N-NO2-/L.

58 tude et ce, sans gards la source deau ou la dure dutilisation. Les concentrations variaient de 10 100 mg N-NO3-/L. Aucun cas navait t observ pour des niveaux infrieurs ou gaux 10 mg N-NO3-/L. Ainsi, de cette tude une concentration sans effet nocif observ (NOAEL) de 10 mg N-NO3-/L a t drive. Plusieurs autres tudes ont appuy par la suite cette NOAEL pour la mthmoglobinmie infantile (OEHHA 1997; U.S.EPA 2002a).
2.7.1 Doses journalires acceptables (DJA)

Le comit amricain dexperts pour les additifs alimentaires (Joint Expert Committee on Food Additives JECFA) de lOrganisation des Nations Unies pour lAlimentation et lAgriculture (FAO) a statu sur une dose journalire acceptable (DJA) de nitrates de 0 3,7 mg NO3-/kg.jour. Cette dernire a t tablie sur la base dune NOAEL de 370 mg NO3-/kg.jour (soit 83,5 mg N-NO3-/kg.jour) drive dune tude chronique chez le rat et laquelle on a affect un facteur de scurit de 100 (OMS 2007; ATSDR 2007; Vermeer et van Maanen 2001). Cette dose serait scuritaire la fois pour les enfants et les adultes. Cest la mme chose pour la dose de rfrence (RfD) des nitrates de lEPA qui est de 7 mg NO3-/kg.jour (soit 1,6 mg N-NO3-/kg.jour). Une DJA de 0 - 0,07 mg NO2/kg.jour a t tablie pour les nitrites (Vermeer et van Maanen 2001). LEPA a statu sur une RfD de nitrites de 0,33 mg NO2-/kg.jour (soit 0,1 mg N-NO2-/kg.jour) (ATSDR 2007). Rappelons que ces doses seraient scuritaires la fois pour les enfants et les adultes et ne sappliquent pas aux nourrissons de moins de 3 mois, qui constitue la sous population la plus sensible au risque de mthmoglobinmie (OMS 2004).
2.7.2 Normes qubcoises

Le rglement sur la qualit de leau potable du Qubec prvoit une norme de 10 mg N- (NO3- + NO2-)/L lorsque les nitrates et les nitrites sont doss simultanment. Cependant, lorsque les nitrites sont mesurs sparment des nitrates, leurs concentrations ne doivent pas excder 1 mg N-NO2-/L (Gouvernement du Qubec 2001; INSPQ 2003).

59
2.7.3 Recommandations canadiennes

Sant Canada a tabli une concentration maximale acceptable (CMA) de 10 mg N-NO3-/L (soient 45 mg NO3-/L) pour les nitrates et de 1 mg N-NO2-/L (soient 3,2 mg NO2-/L) pour les nitrites lorsquils sont doss sparment (Sant Canada 1987). Pour ce qui est des nitrites, un facteur dincertitude de 10 a t appliqu la NOAEL considrant que les nitrites ont un potentiel dix fois plus lev que les nitrates dans linduction de la mthmoglobinmie. Ces CMA dcoulent elles aussi de la revue des cas de mthmoglobinmie de Walton et correspondent sans dautres modifications la concentration laquelle aucune incidence de mthmoglobinmie na t observe chez les nourrissons. Ces recommandations sappliquent autant aux enfants quaux adultes car Sant Canada a prfr tre prudent en minimisant lexposition aux nitrates de la population en gnral, tant donn le lien possible entre cancer et concentrations modres de nitrates dans leau potable.
2.7.4 Normes amricaines

En plus de ltude de Walton de 1951, les normes amricaines reposent aussi sur celle de (Fan et al. 1987). Ces deux tudes soutiennent que 10 mg N/L protge adquatement les jeunes enfants de la mthmoglobinmie mais galement des effets toxiques potentiels pr et post-nataux des nitrates (INSPQ 2003). Sur la base de cellesci, lEPA a fix la norme des nitrates dans leau 10 mg N-NO3-/L. Malgr les donnes limites sur la toxicit des nitrites, on a estim que ceux-ci taient 10 fois plus toxiques que les nitrates et un facteur dincertitude gal 10 a t retenu. En utilisant la NOAEL de 10 mg N-NO3-/L de ltude de Walton et ce facteur dincertitude de 10, la norme de 1 mg N-NO3-/L a t fixe pour les nitrites. Finalement, une norme combine 10 mg N(NO3- + NO2-)/L a t retenue afin de prendre en compte la possibilit dune toxicit additive de ces deux substances (INSPQ 2003).
2.7.5 Critres de lOMS

Les valeurs guides fixes par lOMS reposent sur les mmes considrations que celles retenues par lUS EPA. Ainsi, pour ce qui est des nitrates, la valeur guide a t fixe 11,3 mg N-NO3-/L (soient 50 mg NO3-/L). Estimant gal 10 le potentiel relatif des nitrites induire la mthmoglobine par rapport aux nitrates (sur une base molaire),

60 une valeur guide provisoire de 0,9 mg N-NO2-/L (soient 3 mg NO2-/L) a t statue pour les nitrites dans leau. Par ailleurs, compte tenu de leffet additif des nitrates et des nitrites dans leau, lOMS considre que la somme des ratios de concentrations mesures de chaque substance par rapport sa valeur guide ne doit pas excder lunit (OMS 2004; INSPQ 2003; Vermeer et van Maanen 2001).
2.8 Mthodes danalyse et techniques de traitement

Au Canada, Sant Canada reconnat trois mthodes de dosage des nitrates et des nitrites dans les chantillons deau. Ces ions peuvent donc tre doss par chromatographie ionique qui consiste sparer les ions selon leur charge ionique. Leur conversion subsquente en formes acides hautement conductrices permettra de mesurer leur conductivit. La limite de dtection (LD) de cette mthode est de 0,1 mg N/L. Il existe aussi la mthode de rduction du nitrate en nitrite par le cadmium ou lhydrazine pour des concentrations nexcdant pas 45 mg NO3-/L. Dans ce cas la LD est de 0,04 mg NO3-/L. Enfin, le dosage peut aussi se faire par une lectrode slective du nitrate dans ltendue des concentrations allant de 0,5 plusieurs milliers de mg NO3-/L (Sant Canada 1987). Aux U, lEPA recommande des mmes mthodes comparables celles du Canada. Ainsi, pour ce qui est des nitrates, lagence approuve la rduction manuelle par le cadmium (LD = 0,01), la rduction automatise par lhydrazine (LD = 0,01), la rduction automatise au cadmium (LD = 0,05), la chromatographie ionique (LD = 0,01) et lutilisation de llectrode slective dion (LD = 1). Pour les nitrites, la spectrophotomtrie (LD = 0,01), la rduction automatise au cadmium (LD = 0,05), la rduction manuelle par le cadmium (LD = 0,01) et la chromatographie ionique (LD = 0,004) sont recommandes (U.S.EPA 2002b, 2008). Au Qubec, le Centre dexpertise en analyse environnementale du Qubec (CEAEQ) ralise le dosage simultan des nitrates et des nitrites par la mthode colorimtrique automatise avec le sulfate dhydrazine et le NED (N-(1-naphtyl) thylnediamine dihydrochloride). La limite de dtection de cette mthode est de 0,02 mg N/L et le seuil de quantification est de 0,07 mg N/L (INSPQ 2003; CEAEQ 2007).

61

3. CHAPITRE III : PROBLMATIQUE, OBJECTIFS ET MTHODOLOGIE

62
3.1 Problmatique

La prsence des nitrates/nitrites dans leau potable prsenterait plusieurs risques pour les populations exposes : mthmoglobinmie, diabte, effets sur le dveloppement et cancer. Cependant, les normes actuelles ne sont bases que sur le risque de mthmoglobinmie chez lenfant qui est le plus document. Par ailleurs, plusieurs chercheurs considrent ces normes comme tant trop conservatrices (Avery 1999; L'hirondel et L'hirondel 2002). Mais cest quils nont pas considr les autres effets chroniques incluant les effets sur la reproduction ou le diabte et le risque de cancer. En effet, plusieurs tudes pidmiologiques ont t ralises pour tudier la relation entre nitrates dans leau et risque de cancer. Compte tenu des limites des tudes cologiques, nous ne nous attarderons ici quaux tudes pidmiologiques avec donnes individuelles (cas/tmoins ou cohorte) qui essaient destimer lexposition sur le plan individuel. Cest le cas dune tude de cohorte prospective mene chez des femmes de lIowa (USA) ayant consomm leau du mme rseau municipal pendant plus de 10 ans. Dans cette tude, la moyenne (calcule sur une priode de 33 ans) des concentrations de nitrates dans leau de chaque municipalit a t utilise comme indicateur dexposition. Les auteurs ont rapport des augmentations statistiquement significatives des risques de cancer de la vessie (RR = 2,83; IC95 = 1,11 7,19) et des ovaires (RR = 1,84; IC95 = 0,88 3,84) en lien avec le quartile suprieur sur la moyenne des concentrations de nitrates (> 2,46 mg N-NO3-/L). Ils ont aussi observ des associations inverses avec les cancers utrins et rectaux, de mme quaucune association avec les cancers du LNH, du colon, du pancras, du rein, des poumons, de la peau, mais aussi de la leucmie (Weyer et al. 2001). Soulignons que dans cette tude la quantit deau et lhistorique de la source deau consomme nont pas t pris en considration. Dans leur tude mene au Pays-Bas, aussi de type cohorte prospective, van Loon et al (1998) nont observ aucune association entre laugmentation par quintiles des concentrations de nitrates dans leau et le risque de cancer gastrique (quintile suprieur = 3,7 mg/jour; RR = 0,88). Dans cette tude, plusieurs variables dont la vitamine C ont t prises en compte.

63 Pour ce qui est des tudes cas/tmoins, plusieurs ont essay dtudier lassociation entre les cancers du LNH (Freeman 2000; Ward et al. 1996; Weyer et al. 2001), du colon et du rectum (De Roos et al. 2003), du pancras (Coss et al. 2004), de lestomac (van Loon et al. 1998; Yang et al. 1998), de la vessie (Ward et al. 2003), du cerveau (Steindorf et al. 1994; Ward et al. 2004) et la prsence de nitrates dans leau de rseaux municipaux. Ainsi, dans leur tude mene auprs de rsidents de lest du Nbraska (USA), Ward et al. (1996) ont rapport une augmentation statistiquement significative entre laugmentation par quartiles des niveaux de nitrates (sur une priode denviron 40 ans) et les risques de LNH. Dans le quartile suprieur de nitrate (4 mg N-NO3-/L), le RR = 2,0 (IC95 = 1,1 3,6). Cependant pour le mme effet, Freeman et al. (2000) nont pas not daugmentation du risque avec laugmentation de lexposition. Soulignons que dans cette tude les concentrations des 3 catgories taient apparemment beaucoup plus faibles que dans ltude de Ward et al. (1996). Dans la catgorie la plus leve (> 1,5 mg/L), le RR = 0,3 (IC95 = 0,1 0,9). De plus, contrairement ltude prcdente (Ward et al. 1996), les auteurs nont pas considr la consommation deau individuelle. Soulignons que les rsultats de Ward et al. (1996), tout comme ceux de Weyer et al. (2001) sur les cancers ovariens et de la vessie, restent intriguant car les augmentations de risque ont t rapportes pour des niveaux infrieurs aux normes actuelles. Dans une autre tude mene en Iowa, De Roos et al. (2003) nont pas not dassociation significative entre lingestion long terme de nitrates de leau de rseaux municipaux et les cancers du colon et du rectum. Pour une consommation pendant plus de 10 ans deau avec des niveaux de nitrates de plus de 5 mg/L, le RR = 1,2 (IC95 = 0,9 1,6) pour le cancer du colon et RR = 1,1 (IC95 = 0,7 1,5) pour celui du rectum. Cependant, ces associations devenaient significatives seulement pour le cancer du colon dans le sousgroupe dindividus ayant des apports faibles en vitamine C (RR = 2,0; IC95 = 1,2 3,3) et levs en viande (RR = 2,2; IC95 = 1,4 3,6). Dans leur tude cas/tmoins toujours mene en Iowa, Coss et al. (2004) nont pas rapport dassociation entre le risque de cancer pancratique et laugmentation par quartiles (quartiles suprieur : > 2,8 mg/L) des concentrations de nitrates (RR = 0,99; IC95 = 0,64 1,5). De plus laugmentation observe pour la consommation deau avec

64 des concentrations 7,5 mg/L pendant plus de 4 ans ntaient pas statistiquement significative (RR = 1,2; IC95 = 0,79 1,9). Lon a aussi tudi le cancer gastrique. Ainsi, pour des niveaux dexposition plus faibles que ceux dans ltude de cohorte de van Loon et al. (1998), lquipe de Yang et al. (1998) a rapport une association statistiquement significative avec lexposition aux nitrates de leau, mais les concentrations mesures dans cette tude taient trs faibles (pour C 0,45 mg/L, RR = 1,14; IC95 : 1,04 1,25). Notons que la quantit deau consomme na pas t considre dans cette tude. Pour ce qui est du cancer de la vessie, aucune association na t observe chez les femmes. Lassociation t inverse dans le cas des hommes (Ward et al. 2003). En outre, certaines tudes menes au Nbraska (Ward et al. 2004) et en Allemagne (Steindorf et al. 1994) nont trouv aucune association entre la consommation long terme deau de rseaux publics des niveaux moyens et le cancer du cerveau chez ladulte. Bien que les donnes dtudes pidmiologiques soient limites et quivoques, on a tout de mme observ laugmentation de lincidence de tumeurs chez les animaux suite ladministration de nitrosamines, de nitrite et de prcurseurs amins, mais pas lorsque soit le nitrate, soit le nitrite ou les amines taient administrs seuls (Lijinsky et al. 1983; Mirvish et al. 1980). Linduction des tumeurs a t observe chez toutes les espces animales testes : rats (Lijinsky 1984; Lijinsky et Reuber 1980; Yamamoto et al. 1989), souris (Mirvish et al. 1975; Greenblatt et al. 1971), hamsters (Ernst et al. 1987; Shank et Newberne 1976). Les tumeurs de divers types ont t induites dans divers organes : foie, poumons, tissu lymphatique, pr-estomac, utrus, oropharynx, sophage, etc. Aussi, environ 85% des 209 nitrosamines tests chez les animaux se sont rvls tre cancrignes chez ceux-ci (Gangolli et al. 1994; Vermeer et van Maanen 2001; Montesano et Bartsch 1976; Brown 1999). Cest le cas par exemple du NDMA ou du NDEA qui sont classs probablement cancrignes pour lhumain (groupe 2A) par le Centre international de Recherche sur le Cancer (CIRC) (Brown 1999). Les rsultats dtudes animales suggrent une association entre le couple (nitrate/nitrite) et le cancer via la formation de composs N-nitross dont les nitrosamines (OMS 2007, 2004; Fan et Steinberg 1996). Ceci a dailleurs amen le CIRC a classer le couple (nitrate/nitrite)

65 comme tant probablement cancrigne dans les conditions de nitrosation endogne (groupe 2A) (Grosse et al. 2006). Ainsi suite son ingestion via leau potable, 5% de la dose totale de nitrates absorbs seraient transforms en nitrites par la flore buccale (ATSDR 2007; INSPQ 2003; Mirvish 1994; Granli et al. 1989). Une fois dans lestomac quils atteignent au moyen de la salive, lacidit gastrique catalyserait la conversion des nitrites en agents nitrosant. Ces derniers nitroseraient les amines pour former les nitrosamines cancrignes dorigine endogne : on parle alors de nitrosation endogne . En effet, celle-ci serait responsable de la majeure partie de lexposition aux NOC : environ 4575% de lexposition totale (Jakszyn et Gonzalez 2006; Tricker 1997). De plus, du fait de la rglementation sur les additifs alimentaires et de lajout de lascorbate aux aliments transforms, les nitrosamines se retrouvent en gnral sous forme de traces, sinon pas dans les aliments. Ceci explique davantage limportance de la nitrosation endogne dans lexposition aux NOC cancrignes. Elle reste malgr tout difficile circonscrire car, elle intgre plusieurs paramtres qui sont eux-mmes difficiles valuer. Parmi ceux-ci on peut citer : le taux de transformation des nitrates en nitrites, les apports alimentaires en amines, le taux dinhibition par la vitamine C, Pour ce qui est des apports en amines et en vitamine C, le fait que ces paramtres soient largement rpandus dans lalimentation complique davantage leur estimation. Bien que les rsultats des tudes pidmiologiques soient ambigus, ceux dexprimentations animales dmontrent bien leffet cancrigne des nitrates/nitrites via la formation endogne de nitrosamines. Parce que les nitrosamines sont cancrignes chez les animaux, on anticipe quelles le soient aussi chez lhumain. Justement, les mcanismes de biotransformation initiateurs de la cancrognse de ces substances (P450 2 E1) se sont rvls similaires entre animaux et humains (Mirvish 1995; Brown 1999). Mais on ne saurait malheureusement tester ces effets cancrignes directement dans des exprimentations humaines du fait des dbats thiques quelles susciteraient. Compte tenu de ces faits donc, il apparat judicieux de dvelopper des modles qui permettent dvaluer la formation endogne des nitrosamines. Une telle approche

66 permettrait indirectement destimer les excs de risque de cancer hypothtiques associs la prsence de nitrates dans leau. tant donn que les normes actuelles ne sont bases que sur la mthmoglobinmie chez lenfant, elles ne seraient peut-tre pas adquates pour prvenir ou rduire les risques dus aux autres effets. Ainsi, une telle approche pourrait permettre de prendre en compte le risque de cancer dans llaboration des normes qui ne sont malheureusement bases que sur le risque de mthmoglobinmie.
3.2 Objectifs

Le prsent projet visait valuer le risque cancrigne associ la prsence des nitrates/nitrites dans leau potable. De faon plus spcifique, il avait pour but : I) destimer les concentrations de nitrates dans les divers rseaux de distribution deau potable et leur distribution au sein de chacune des rgions tudies, II) puis destimer les concentrations de nitrites dans lestomac suite la transformation par la flore buccale des nitrates ingrs via leau potable, III) destimer lapport quotidien total de chacune des amines spcifiques tudies, qui sont des prcurseurs dterminant dans la formation endogne des nitrosamines, IV) dvaluer lexposition aux nitrosamines formes dans lestomac par lestimation quantitative des doses journalires de chacune delles, V) et enfin destimer quantitativement les excs de risque de cancer hypothtiques pour la population tudie.
3.3 Mthodologie

La prsente valuation du risque sest faite suivant la dmarche classique de lanalyse du risque qui comprend quatre tapes. Le dtail de la dmarche se retrouve

67 dans larticle scientifique compris dans ce document. Ici, aprs avoir donn un aperu de la rgion sur laquelle nous avons bas notre analyse, nous prsentons les grandes lignes propres chaque tape, que nous avons suivies pour raliser cette valuation.
3.3.1 Territoire ltude

Le territoire tudi dans cette analyse de risque est drain par des rivires qui font partie dune liste prioritaire du ministre du dveloppement durable, de lenvironnement et des parcs du Qubec (MDDEP). Cette liste rpertorie les diffrents cours deau de surface dont la qualit est dtriore, en particulier par les concentrations excessives de phosphore. Leurs bassins versants occupent une partie importante du territoire agricole de la province du Qubec et regroupent la majorit des producteurs agricoles de la province. La prsente valuation de risque est base sur sept rgions administratives du Qubec (figure 1) activits agricoles dlevage intenses, et qui couvrent quelques uns de ces bassins versants. Ces rgions sont les suivantes : Bas-Saint-Laurent (bassins de la rivire Kamouraska) Capitale-Nationale Centre-du-Qubec (bassin de la rivire Nicolet) Chaudire-Appalaches (bassins des rivires Boyer, Chaudire et Etchemin) Estrie (bassin de la rivire Saint-Franois) Lanaudire (bassins des rivires LAssomption et Bayonne) Montrgie (bassin de la rivire Yamaska) Le tableau 4 prsente certaines caractristiques des bassins versants choisis.

68

69
3.3.2 valuation du potentiel dangereux

Le potentiel dangereux des nitrosamines pour lhumain rsulte soit de leur ingestion directe sous forme prforme, soit plutt de lingestion simultane de nitrates (nitrites) et de prcurseurs nitrosables (principalement les amines secondaires) qui peuvent tre transforms en nitrosamines dans lestomac. En effet, pour induire le cancer, nitrates et nitrites ncessitent dtre dans des conditions dites de nitrosation endogne (pH acide de lestomac, prsence damines, niveaux faibles de vitamine C) (Grosse et al. 2006). Une revue dtaille de littrature nous a permis dexaminer la capacit de ces substances induire le cancer. Ainsi, plus de 85% des nitrosamines testes jusqu' alors se sont rvles tre cancrignes chez plusieurs espces animales (rats, souris, hamsters, cobaye). Plus prcisment, laugmentation de lincidence de tumeurs associe lexposition aux nitrosamines a t observe chez une varit despces animales des deux sexes, soit par exposition orale ou par inhalation, chez les animaux matures et immatures, et suivant diffrents protocoles exprimentaux. De mme plusieurs tudes animales portant sur lexposition aux nitrates/nitrites dans leau potable en prsence de prcurseurs nitrosables ont not laugmentation de risque de cancer via la formation de nitrosamines. Les tumeurs sont en gnral de plusieurs types et varies (Tableau 5). priori, tous les organes peuvent tre touchs (estomac, sophage, vessie, cerveau), mais les plus susceptibles sont ceux du tube digestif dont principalement lestomac et le foie (Mirvish 1995). Le tableau 5 prsente quelques tudes animales de cancrognicit des nitrosamines. Du fait de la possibilit dinduction de cancers et implicitement de considrations thiques, les tudes dexprimentation humaine nont en gnral pas pu tre menes. Celles qui lont t se sont faites gnralement dans le but dvaluer la nitrosation endogne : types de nitrosamines formes et quantits totales. Et pour ce qui est des expositions, celles-ci se faisaient la plupart du temps avec les prcurseurs de nitrosamines non cancrignes dont principalement la N-nitrosoproline. Pour ce qui est des tudes pidmiologiques, les rsultats de celles-ci sont ambigus et quivoques. Bon

70 nombre dentre elles sont suggestives et aucune conclusion dfinitive na encore pu tre prise quant la relation dose/effet. Des efforts ont t faits pour comprendre le processus de cancrognicit associ aux nitrosamines, particulirement chez les rats et les souris. Bon nombre dtudes soutiennent que la biotransformation des nitrosamines suivie de la mthylation de lADN par leurs mtabolites et de la formation dadduits (particulirement la position O6 de la guanine), sont tous des processus qui interviennent dans le mcanisme de cancrognicit. Par exemple, la formation dadduits lADN aprs exposition au NDMA a t dtecte in vitro. Ce type dadduits a aussi t dtect dans les cultures tissulaires hpatiques humaines (Herron et Shank 1980). Les tudes ont aussi dmontr que la rparation des adduits O6-mthylguanine ou une faille de cette rparation par les O6-mthylguanine DNA mthyltransfrases (MGMT) interviendrait dans le processus de cancrognicit. Bien que trs peu dtudes exprimentales humaines des nitrosamines existent, la biotransformation de ces substances semble tre trs similaire celle des animaux (rongeurs). Ainsi, le mme isoforme CYP2E1 du cytochrome P450 intervenant dans le processus mtabolique chez les rongeurs a t aussi dtect dans les cellules hpatiques humaines, et il ragit aux anticorps anti-enzyme du rat. Les MGMT, enzymes responsables de la rparation des adduits O6-mthylguanine lADN, ont t dtectes dans le foie humain. Ainsi donc, il est fort probable que les rsultats dexprimentations animales associs lexposition au NDMA soient reprsentatifs de lexposition humaine.
3.3.3 Caractrisation de la toxicit

Les relations dose/rponse relatives aux diffrentes nitrosamines tudies dans cette analyse de risque ont t ralises grce un grand nombre dtudes animales (tableau 5). Ceci dit, les tudes juges comme tant les meilleures ont t employes pour dcrire une relation dose/rponse spcifique chacune des sept nitrosamines tudies. Dans toutes ces tudes, lexposition sest faite via leau potable.

71

72 Rappelons que la rponse dans ce contexte prcis est laugmentation du nombre de tumeurs par rapport aux tmoins. Ainsi partir des tudes slectionnes, une relation dose/rponse spcifique chacune des sept nitrosamines tudies a pu tre ajuste. Ces relations sont typiques de tumeurs spcifiques des sites individuels et chez les espces les plus sensibles. Compte tenu du fait que les tudes animales sont normalement conduites avec des doses trs leves et suprieures celles de lexposition humaine, des procdures dextrapolation aux doses faibles ont t utilises. La procdure de linarisation en tapes multiples (LMS) de lEPA (adopte par le CalEPA) a donc t utilise pour la majorit des nitrosamines (NDBA, NDMA, NDEA, NPYR). Sinon ce ft plutt dautres modles comme le modle one-hit (NMEA, NPPA) qui furent employs. Aprs lextrapolation, un facteur de pente q1 a t ajust chacune des sept relations doses/rponse retenues. LIC95 de cette pente, appel q1* est considre comme tant la limite suprieure du potentiel de chaque nitrosamine induire le cancer. Considrant la variabilit inter-espces chez les animaux, un ajustement a t fait pour estimer le potentiel cancrigne de chaque nitrosamine chez les animaux : qanimal. Mme si les tudes animales utilises sont bien conduites, il y a toujours de lincertitude associe lutilisation de rsultats dexprimentations animales. Dans la mesure du possible et si on le juge appropri, les renseignements concernant la pharmacocintique, le mtabolisme et les mcanismes de la cancrognicit et de la mutagnicit sont intgrs aux estimations quantitatives du potentiel cancrogne, surtout lorsquelles sont obtenues partir dtudes animales. Ceci permet une estimation pertinente du potentiel cancrigne pour les populations humaines. Ceci dit, mme si les nitrosamines sont gnralement mtabolises de faon similaire entre les animaux (rats) et les humains (CYP2E1), il subsiste quand mme quelques diffrences dans le mtabolisme entre ces deux espces. En effet, les humains semblent avoir un niveau basal de lenzyme MGMT plus lev que chez le rat, suggrant des diffrences de susceptibilit. Ainsi, dautres ajustements ont permis par la suite destimer le potentiel de chaque nitrosamine induire le cancer chez les populations humaines : qhumain. Le tableau 2 donne un aperu des tudes ayant permis le calcul des qhumain utiliss dans cette analyse de risque.

73
3.3.4 Estimation de lexposition de la population

En gnral, en plus de ltat de sant des individus, le fait que beaucoup de facteurs pouvant avoir une influence sur lexposition soient largement rpandus dans la dite complique sont valuation. Cependant dans le prsent contexte, elle ft dautant plus ardue compte tenu de la confusion ayant lieu la base. En effet, nous avons affaire ici une exposition directe aux nitrates (pas les nitrites, vu quils sont prsents en faible quantit dans leau potable), sources incontournables de nitrites qui sont dterminants dans la formation des nitrosamines; et une exposition indirecte aux nitrosamines, substances responsables du cancer. Ainsi, lvaluation de lexposition aux substances cancrignes que sont les nitrosamines sest faite en deux tapes. La premire tape ft lvaluation de lexposition aux nitrates de leau dans les rgions tudies. Ainsi, celle-ci sest faite partir des mesures de concentrations de nitrates dans les rseaux municipaux des 7 rgions tudies qui sont aliments en eau souterraine. Ces donnes de concentrations nous ont t fournies par le ministre du dveloppement durable, de lenvironnement et des parcs du Qubec (MDDEP). Grce au tableur Excel 2004, des statistiques descriptives (distributions) ont donc t drives de ces donnes pour chacune des sept rgions. Pour ce qui est de lexposition aux nitrosamines, nous lavons valu indirectement en considrant un scnario de transformation complte des nitrites (issus de la transformation dune fraction des nitrates de leau) et de diverses amines de lalimentation (NMEA), en nitrosamines spcifiques : (NPPA), dimthylnitrosamine N-nitrosopipridine (NDMA), Ndithylnitrosamine (NDEA), N-n-dibutylnitrosamine (NDBA), N-mthylthylamine N-nitroso-n-propylamine (NPIP), nitrosopyrrolidine (NPYR). Lexposition ft donc estime grce un modle mathmatique intgrant les paramtres : concentrations de nitrates, volume deau, taux de transformation, quantits totales damines consommes. Une approche probabiliste a t utilise afin de prendre en compte la variabilit interindividuelle de chacun de ces paramtres (hors mis les concentrations de nitrates) au sein de la population de la zone tudie. Ainsi, des simulations Monte Carlo effectues grce au logiciel Crystal Ball (Crystal Ball ,

74 Decisioneering Inc., Colorado), ont permis destimer des distributions de chacun des paramtres au sein de la population tudie, et ce partir de leurs composantes paramtriques (moyenne, dviation standard, 95e centile,) recenses dans la littrature. Cette tape ntait pas requise pour le paramtre concentrations de nitrates dans leau puisque nous les avions dj, comme mentionn plus haut. Par la suite la combinaison de ces paramtres dans un modle nous a permis destimer la distribution au sein de la population de lexposition chacune des nitrosamines tudies comme suit : 9

DEJ nitros =

[NO ]
2 3

AQTam

K 3600 PM nitros PC

Avec: NO 2 et:

] = [NO ]

TR VS

TI e

AQTam

( [a min e]alt

TI alt )i + ( [a min e]alt TI alt ) j + L + ( [a min e]alt TI alt )n PM am

Do DEJnitros (mg/jour): dose dexposition endogne journalire chacune des nitrosamines individuelles; ([NO2-] (mol/L): concentration des nitrites dans lestomac aprs transformation des nitrates;
2

: car la formation d1 molcule de N2O3 nitrosant requiert 2 molcules de NO2-

AQTam (mg/jour): apport quotidien total en chacune des amines individuelle; K ((mol/L)-2.s-1): constante de nitrosation spcifique chaque amine; 3600: quivalent 1 heure, correspond au temps estim durant lequel les prcurseurs restent en concentrations constantes; PMnitros: poids molculaire de chaque nitrosamine individuelle; PC : poids corporel estim 70 kg pour un adulte moyen; [NO3-] (mol/L): concentration de nitrates dans leau; TR (%): taux de transformation estim varier de 5 30%; TIe (L/jour): taux dingestion daliment spcifique; Vs (L): volume de lestomac estim tre gal 05 L
9

Modle initialement mis au point par Shephard (1987), puis adapt par Phaneuf et al. (2004).

75 AQTam (mg/jour) : apport quotidien total en lamine spcifique, prcurseur de la nitrosamine dintrt [Amine]
alt

(mg/kg daliment spcifique): concentration damine spcifique dans un

aliment spcifique; TIalt (mg/jour): taux dingestion daliment spcifique PMam (g/mol): poids molculaire de lamine spcifique; i, j, , n : spcifie chaque aliment consomm
3.3.5 valuation du risque

Lvaluation de risque prsente sest base sur lingestion deau potable la vie durant. Lors de lvaluation des risques rsultant de lexposition aux substances cancrignes, les organismes rglementaires tels que Sant Canada et lUS EPA supposent que tout niveau dexposition non nul est associ un certain risque hypothtique quelconque de cancer appel excs de risque de cancer (ER) . Lvaluation du risque de cancer sest donc ralise en deux parties: dabord une estimation quantitative des ER, suivie de la caractrisation de ces risques.
3.3.5.1 Estimation du risque

Daprs Sant Canada (1994) : il nexiste pas de valeur unique exacte caractrisant adquatement le risque de minimis associ une concentration ou une dose en de de laquelle les risques sont acceptables et au-dessus de laquelle ils ne le sont pas. Pour cela, le risque associ de faibles doses est plutt considr comme tant un continuum : une rduction de lexposition entrane une rduction par incrment du risque et une augmentation de lexposition entrane une augmentation par incrment du risque Nous avons donc adopt lapproche recommande par Sant Canada et lUS EPA savoir que multiplier la dose dexposition estime par lindice de potentiel cancrigne qhumain permet une estimation conservatrice de lexcs de risque de cancer associ lexposition considre.

76 Ainsi, lER a t estim comme suit : ER = DEJnitros x qhuman Avec : ER : excs de risque de cancer (sans unit) DEJnitros (mg/kg.jour) : dose dexposition endogne journalire chacune des nitrosamines individuelles; qhumain (mg/kg.jour)-1 : indice de potentiel cancrigne
3.3.5.2 Caractrisation du risque

Afin didentifier les paramtres ayant le plus dimpact sur la variabilit du modle et par consquent du risque (car linaire la dose), une analyse de sensibilit a t ralise grce au logiciel utilis (Crystal Ball). Celle-ci nous a permis de mesurer la contribution de chaque paramtre du modle sur la variabilit du modle et didentifier les facteurs dincertitudes. Toujours, grce au logiciel utilis (Crystal Ball) nous avons pu calculer les coefficients de corrlation r2. Les facteurs dincertitude identifis ont t discuts dans la section discussion de larticle scientifique.

77

4. CHAPITRE IV: ARTICLE SCIENTIFIQUE

78 MODELING THE CANCER RISK ASSOCIATED WITH NITRATES IN PUBLIC DRINKING WATER SYSTEMS FROM FOUR RURAL REGIONS OF QUEBEC (CANADA)

Sandrine Chbkou1, Patrick Levallois2, 3, Denise Phaneuf3, Manuel Rodriguez4, Robert Tardif 1*
1 2 3 4

Dpartement de sant environnementale et sant au travail, Universit de Montral Dpartement de mdecine sociale et prventive, Universit Laval Institut national de sant publique du Qubec (INSPQ) cole suprieure damnagement du territoire et dveloppement rgional, Universit

Laval

* Authors correspondence: Dr. Robert Tardif Dpartement de sant environnementale et sant au travail Universit de Montral C.P. 6128 Succ. Centre-ville Montral Qc, Canada H3C 3J7 Tel: 514-343-6111, ext. 1515 Fax: 514-343-2200 E-mail: robert.tardif@umontreal.ca

79
Running title

Cancer risk associated with water nitrate


Keywords

Nitrates, nitrites, nitrosatable compounds, nitrosamines, carcinogenic risk


Acknowledgments

This work was supported by a joint grant from: Fonds de la Recherche en Sant du Qubec (FRSQ) / Fonds Qubcois de la Recherche sur la Nature et les Technologies (FQRNT) and the University of Montral.
List of abbreviations

DD: daily dose DWS: drinking water systems ENOC: endogenous N-nitroso compounds ER: excess cancer risk MAC: maximum acceptable concentration NDBA: N-nitrosodi-n-butylamine NDEA: N-nitrosodiethylamine NDMA: N-nitrosodimethylamine NMEA: N-nitroso-N-methylethylamine NOC: N-nitroso compounds

80
SECTION HEADERS Abstract Introduction Study area Methods Input parameters Results Discussion Conclusion References Tables Figure

81
ABSTRACT

Overused fertilizers and manure may lead to nitrate contamination of groundwater. Ingestion of such contaminated water might increase the cancer risk for consumers. Indeed, following drinking water ingestion, nitrates are transformed into nitrites which participate in the formation of nitrosamines with some being probably carcinogenic to humans. The aim of this study was to quantitatively estimate the possible excess cancer risk (ER) for the populations of four rural regions in Canada that drink water from public drinking water systems using groundwater. These regions practice extensive breeding agriculture. The median (95th percentile) nitrate concentrations in the water of these four studied regions were: 0.18 (2.74), 0.48 (10.35), 0.32 (11) and 0.10 (4.69) mg N-NO3-/l respectively. To estimate the ER, we considered a scenario of complete transformation of nitrite and some dietary amines precursors into their specific nitrosamines (Nnitrosodimethylamine, N-nitrosodiethylamine, N-nitrosodi-n-butylamine and N-nitrosoN-methylethylamine). Gastric nitrite concentrations were estimated on the basis of defined drinking water intake, stomach volume, and the transformation rate of nitrate into nitrite. Considering that levels of nitrites and each amine were kept constant for 1 hour, and taking into account the nitrosatability rate constants specific to each amine, we then estimated the daily doses of the corresponding endogenously formed nitrosamines. Furthermore, combination of each dose the human cancer potency factor qhuman specific to each nitrosamine, allowed estimations of the ER. The highest ER estimated for Nnitrosodi-n-butylamine was in the order of 10-6, thus not contributing to a significant increase in the risk of cancer for those populations.

82
INTRODUCTION

Currently, fertilizers and manure used for extensive agriculture are known to be the principal sources of groundwater nitrate contamination, particularly in rural regions (Fields 2004; WHO 2007). Nitrates are the most stable form of nitrogen compounds that should be considered as potential nitrate sources (WHO 2007). Even nitrites are converted into nitrates. Moreover, due to their extreme solubility in water, nitrates are easily mobilized through soil leaching. This is why they are more predominant in water than nitrites (WHO 2007). Natural levels of nitrates are typically low, less than 1 mg NNO3-/L, (expressed as nitrate-nitrogen). However, when levels exceed the threshold of 3 mg N-NO3-/L, the influence of anthropogenic activities (such as agriculture when intensively practiced) on groundwater is unmistakable (Glinas et al. 2004; Madison and Brunett 1985). High levels of nitrates in drinking water have long been linked to methemoglobinemia in infants under three months of age (Fan and Steinberg 1996; Fan et al. 1987; Knobeloch et al. 2000). Some epidemiological studies have reported the association between cancer and nitrate intake from drinking water at levels below the current standard (De Roos et al. 2003; Ward et al. 1996; Weyer et al. 2001). Indeed, nitrites deriving from nitrates can react in vivo with nitrosatable compounds to form carcinogenic N-nitroso compounds (NOC) (Gangolli et al. 1994; Levallois et al. 2004; Mirvish 1995). Endogenous synthesis of NOC has been estimated to as 4575% of the total exposure (Jakszyn et al. 2006; Tricker 1997). In adults, about 5% on average of ingested nitrates are reduced to nitrites in saliva by the oral microflora (Gangolli et al. 1994; Walker 1990). After being swallowed, nitrites quickly disappear by absorption or chemical reaction with stomach contents. In healthy people, the reaction would mostly occur at the esophageal/cardia junction where the saliva first encounters the gastric

83 juices. In addition, this site remains acid even after a meal, enhancing acid-catalyzed nitrosamine formation (McColl 2007; Suzuki et al. 2005). Consequently, nitrites are usually first converted by gastric acidity to nitrous acid (HNO2, pKa 3.37). Because of its instability, HNO2 is then converted to active nitrosating species, with nitrous anhydride (N2O3) being the most important (Licht and Deen 1988; Mirvish 1975). These species react with nitrosatable compounds to give NOC: nitrosamides and nitrosamines. Nitrosamines are involved in some specific cancers: stomach, esophagus, nasopharynx, urinary bladder and colon (Mirvish 1995). Because a direct causal role for nitrate in cancer is not conclusive, all the current regulations concerning nitrate in drinking water are based only on methemoglobinemia. In Canada the maximum acceptable concentration (MAC) is 45 mg NO3-/L (= 10 mg N-NO3-/L) (Health Canada 1987; INSPQ 2003), in the USA the maximum contaminant level (MCL) is 45 mg NO3-/L (U.S.EPA 2006) and the World Health Organization guideline is 50 mg NO3-/L (WHO 2007). Because some nitrosamines are probably carcinogenic to humans (NDEA, NDMA) there is a need to develop models that could allow the integration of cancer into the establishment of drinking water regulations. Ingestion of nitrates from food (mainly from vegetables) is usually accompanied by antioxidants, inhibitors of endogenous nitrosation. Tap water does not contain antioxidants, so the ingestion of the nitrates contaminating drinking water may increase the risk of cancers for the exposed populations (Grosse et al. 2006). Especially in Canada where adult consumption of drinking water with nitrate concentrations less than 20 mg N/L is not forbidden, explaining the relevance of this study. In this paper, we use a probabilistic approach to estimate the endogenous exposure from four selected nitrosamines (N-nitrosodimethylamine (NDMA), N-nitrosodiethylamine

84 (NDEA), N-nitrosodi-n-butylamine (NDBA), and N-nitroso-N-methylethylamine

(NMEA)) by considering exposure to nitrates levels in public drinking water systems from regions with extensive breeding agriculture activities. According to the classical risk assessment approach, we then estimated the excess cancer risk (ER) resulting from that exposure.

STUDY AREA

The study area represents four rural regions of Quebec province (Canada) and covers the watersheds of the following rivers: Boyer, Chaudire, Etchemin, Richelieu, Rimouski, Saint-Charles and Yamaska. These watersheds whose fertilizer loads exceeded the soils natural needs, cover a large part of the agricultural territory and contain the majority of the farm producers in Quebec (Glinas et al. 2004; Phaneuf et al. 2004). Data on nitrate concentrations were from 244 drinking water systems (DWS) fed with groundwater, and were supplied by the Quebec Ministry of the Environment.

METHODS:

Because the excess cancer risks estimated here were due to nitrosamines, we first estimated the exposure daily dose (DD) for the four chosen nitrosamines endogenously formed in the stomach. Nitrosamines constitute a family of components whose the human toxicity is still unclear. That is why for this study, we chose those having the most information (amine concentrations, frequency in food and qhuman) allowing the ER estimations. The DD depends on two main precursors: concentrations of nitrites in the stomach after transformation of nitrates ingested through contaminated drinking water and the daily intake of pertinent dietary amines. Therefore, we first estimated these

85 precursors. Furthermore, the combined effect of those risk variables was assessed using a simple mathematical model proposed by Shephard et al. (1987) and used recently by Phaneuf et al. (2004).

Exposure assessment: estimation of the daily exposure dose of nitrosamines

Probabilistic models were chosen because they allow a robust examination of input parameters. For instance, we use a model (equation 4) that integrates nitrate concentrations and parametric distributions of the input parameters: drinking water intake, transformation rate of nitrate into nitrite, stomach volume and daily dose of amines under the assumption of independence of parameters. Probability distributions of those parameters were used in order to take into account their variability within the studied population. Monte Carlo simulations led to an approximation of their sampling distributions. Finally, the model that was used allowed the DDnitros to be computed from outputs of Monte Carlo simulations consisting of 10,000 iterations, using Crystal Ball (CB) software (Crystal Ball , Decisioneering Inc., Colorado).

a) Nitrate concentrations in drinking water Outliers were not eliminated from the data sets in order to better represent local variability between nitrate levels in DWS from the same region. A khi-2 test was used to fit a distribution to nitrate concentrations in each region. Both measured and simulated data were used to estimate the levels of nitrates in the public DWS of all the studied regions. Raw data of nitrate concentrations were expressed as mg N-NO3-/L (nitrate nitrogen), so we expressed them in molar form as follows:

86

[NO ](mol / L) =
3

[NO ] (mg N NO
3

L) 4.429

MWnitrate

(1)

Where: [NO3-] (mg N-NO3-/L): nitrate concentrations expressed as nitrate nitrogen (raw data) 4.429: derived from the fact that 0.226 mg N-NO3-/L is equivalent to 1 mg NO3-/L; MWnitrate: molecular weight of NO3- (= 62 g/mol = 62 000 mg/mol)

b) Estimation of nitrite concentrations in the stomach The total daily amount of water was assumed to be all ingested at one meal. Indeed, we considered the stomach nitrite concentrations computed here as corresponding to the total quantity swallowed daily after the oral bacterial transformation of the nitrates contained in water ingested.

[NO
Where:

] = [NO ]
3

TR IRW VS

(2)

[NO2-]: stomach nitrite concentration (mol/L); [NO3-]: nitrate concentration (mol/L); TR: transformation rate of nitrate into nitrite (%); IRw: drinking water ingestion rate (L); Vs: stomach volume (L)

87 c) Estimation of daily doses of amines The daily dose of each dietary amine was computed by multiplying the ingestion rate of each food item by its amine concentration (Shephard et al. 1987) and summing across all foods.

DDam

( [am]

IR f

) + ( [am]
i

IR f MWam

+ L + ( [am] IR f

(3)

Where: DDam: daily dose of a specific amine (mol/day) [am] f: concentration of a specific amine in a specific food item (mg/kg) IRf: specific food ingestion rate (kg/day); MWam: amines molecular weight (g/mol) i, j, , n: specific food item

d) Exposure model

DDnitros =

[NO ]
2

TDI am K 3600 MWnitros BW

(4)

Where: DDnitros: daily dose of each nitrosamine (mg/kg.day); [NO2-]: stomach nitrite concentrations (mol/L);
2

: because 2NO2- are required to form the nitrosating species N2O3.

88 DDam: daily dose of a specific amine (mol/day) K: nitrosatability rate constant ((mol/L)-2.s-1). It reflects the speed at which each amine is nitrosated. 3600 (seconds): = 1 hour, the estimated time for the levels of amines and nitrites precursors to remain constant through the esophageal/cardia region. BW: average human body weight (Kg); here we considered a default BW = 70 kg.

Risk assessment model:

ER = DDnitros q human

(5)

Where: ER: excess cancer risk associated with the exposure of a DD of a specific nitrosamine formed after ingestion of a nitrate dose through drinking water (no units) qhuman (mg/kg.day)-1: cancer potency factor describing the ER associated with exposure to 1 mg of a given nitrosamine/kilogram of BW. Because animal studies are performed with large doses of chemicals, the dose/response (here the cancer) relationship is extrapolated to low doses using models such as the linearized multistage (LMS). Using this model, the relationship is linearized at low doses so that a slope q1 can be derived, as well as its 95% upper confidence limit q1*. The latter is then taken as an upper bound of the potency of the chemical in inducing cancer at low doses. After scaling, a qanimal, and then a qhuman, are estimated as the potency of the chemical in humans. The q1* used for this analysis were drained from CalEPA database (OEHHA 2006) rather than the IRIS

89 database from the US EPA because the former was more recent. The procedure used was globally the same, that is why US EPA stated that values listed in IRIS will not be revisited solely just to incorporate changes in cancer potency values due to calculation methods contained in the CalEPA (OEHHA 2005).

Sensitivity analysis:

To measure the contribution of the input parameters to the ER estimates variability, a sensitivity analysis was performed using CB. This procedure allowed the identification of parameters having the greatest impact on the variability of the ER estimates. With the same software, rank correlation coefficients () were calculated too for the ER model. , a nonparametric measure of association is based on the ranks of the data values and it is sensitive to the strength of linear relationships and ranges of variation of a model relative to its inputs (Fristachi and Rice 2007).

Assumptions 1) (Nitrates + nitrites) levels were assumed to be nitrates levels because nitrites were found in trace levels in water 2) Amine concentrations in food are representative of levels encountered today 3) Water intake (Roseberry and Burmaster 1992), nitrate concentrations and daily intake of amine (Singh et al. 1997) follow a lognormal distribution whereas the transformation rate follows a normal distribution 4) DDam and water were assumed to be all ingested at one meal

90 5) Gastroesophageal junction and cardia are the only regions where there is the necessary acidic pH, high nitrite level, and low ascorbic acid to allow maximal luminal nitrosation (McColl 2007) 6) The precursor concentrations were assumed to remain constant for 3600 seconds 7) We assumed that all adults weigh 70 kg and the stomach volume equal to 0,5 L 8) We consider the complete transformation of precursors (nitrites and amines) to the corresponding nitrosamines

INPUTS PARAMETERS

1) Nitrate concentrations in public drinking water systems Nitrate concentrations in the public DWS of the four studied regions were pooled from January 2002 to June 2004. At the beginning, we obtained (samples (DWS)): 265 (49), 424 (71), 400 (81) and 191 (43) for regions A, B, C and D respectively. In Quebec, nitrate in drinking water is monitored two to four times per year. Therefore, only municipalities having a minimum of three measurements for at least two years from the three-year study period were retained for analysis. Also, we retained only samples from distribution systems rather than those of raw water because they reflect the water quality at the tap. Finally, only (samples (DWS)) 262 (47), 416 (64), 393 (78) and 185 (38) left from regions A, B, C, and D respectively. We then calculated mean concentrations on a regional basis from all those samples pooled in the same region.

2) Daily drinking water ingestion rate The distribution of daily drinking water intake was developed using values for adults reported in Caron et al. (2004): mean = 1.2 L and standard deviation = 0.9 L. In their

91 study, the authors estimated quantities of tap water daily consumed using telephone interviews. These consumptions also included the quantities of water used for the preparation of various types of drinks, both cold and warm.

3) Transformation rate of nitrates to nitrites This rate of transformation was estimated from the literature. According to the documents consulted (WHO 2007; Gangolli et al. 1994; Walker 1990; Eisenbrand et al. 1980b), in adults 5% on average of the ingested nitrates would be transformed into nitrites. In healthy people, this rate increases with an increase in age (Siddiqi et al. 1992; Eisenbrand et al. 1980b; Forman 1989). In addition, there are large inter-individual variations that are opposed to much less intra-individual variations (Bos et al. 1988; Doel et al. 2005). Maximum rates reaching approximately 30% were reported (Suzuki et al. 2005). A distribution was developed using those data as mean = 5% and 95th percentile = 30%.

4) Stomach volume The esophago/cardia region is where the nitrites in saliva first encounter acidic gastric juice. In addition, this region is known to escape the buffering effect of food and remains highly acidic even after meals. Besides, an active secretion of the inhibitor ascorbic acid occurs downstream in the antral region. Consequently, the esophago/cardia region is the main site allowing maximal luminal nitrosation (McColl 2007). Therefore, according to this information, we consider the stomach volume as the esophago/cardia region estimated here as equal to 0.5 L.

92 5) Daily dose of amines This parameter depends on two main factors: concentration of each studied amine (dimethylamine, diethylamine, methylethylamine, n-butylamine) in a specific food and the daily consumption of that specific food. Amine concentrations in food were taken from the risk assessment of Shephard et al. (1987). To better represent Canadian population, we combined those data with Canadian food consumption rather than US consumption as it was the case for Phaneuf et al. (2004). Because we didnt find data on actual food consumption for the Canadian population, we used an estimation of the daily food consumption of Canadians from Statistique Canada (2004). Distributions of the DD of each amine were performed using mean and standard deviation values calculated from available data.

RESULTS

Nitrate levels in the regions In the studys rural regions, the mean nitrate concentrations were all below the Quebec standard of 10 mg N-NO3-/L (Table 1). There was great variability in the nitrate levels between DWS of the same region. Indeed, although mean concentrations were below the threshold of 3 mg N-NO3-/L, maximum levels greater than a mean concentration of 5 mg N-NO3-/L were observed everywhere: 8.7; 20.1; 18 and 6 mg N-NO3-/L for regions A, B, C and D, respectively. Moreover, some single cases were observed in regions B and C, where not only the P95 exceeded the standard, but some of their municipalities reached maximum levels of 20.1 and 18 mg N-NO3-/L respectively. Differences between P95 and maximums were particularly high in regions A, B and C.

93 Classification of nitrates levels in the drinking water systems In all the regions, most of the DWS ( 85%) presented concentrations below 3 mg NNO3-/L (Table 2). However, several DWS (4 in regions A and D; 8 and 5 in regions B and C, respectively) had concentrations between 3.1 and 10 mg N-NO3-/L. Note that out of the 8 DWS in region B, 2 represented about 8% of the total samples. Similarly in region C, 1 of the 5 DWS represented about 15% of the samples (data not shown). Frequencies of measurements exceeding the MAC were very low. In this instance, there were two DWS in region B (8% of samples) and only one (5% of samples) in region C.

Daily dose for amines DDam were mostly below 10 mg/day (Table 3), with the exception of n-butylamine, which had the highest DD ( = 11.34 and P95 = 65 mg/day). Variability in DDam was high according to foodstuff, especially for n-butylamine (11.34 26.92 mg/day) and diethylamine (0.85 2.26 mg/day).

Daily dose of nitrosamines Of all the nitrosamines studied, NDBA had the most significant endogenous formation ( = 5.4 x 10-3 g/day), followed by NDEA ( = 2.5 x 10-4 g/day), and then NDMA ( = 1.5 x 10-4 g/day) and NMEA ( = 4.8 x 10-5 g/day) (Table 4). All the nitrosamine doses were well correlated successively with DDam ( = 0.51), drinking water IR ( = 0.44), and finally the transformation rate ( = 0.26).

94 Risk assessment The ERs resulting from endogenous exposure to nitrosamines following the ingestion of water nitrate were low (Table 5). The highest ERs estimated for NDBA were associated with exposure to the nitrate levels in regions B (2.7 x 10-6) and C (2.2 x 10-6). Generally, NDBA presented the highest risks, followed by NDEA and NDMA, respectively. ERs were proportional to the nitrosamine doses and human cancer potency factor.

Sensitivity analysis For NDBA, NDEA and NDMA, DDam contributed 46 51% on the ER variability; IRw contributed 36 40% and TR about 13 %. For those nitrosamines, the results were well correlated with DDam ( = 0.51), IRw ( = 0.44) and TR ( =0.26). The results were different for NMEA for which DDam contributed 31 % ( = 0.38), IRw 51 % ( =0.49) and TR 18 % ( =0.29) (Figure 1).

DISCUSSION

The International Agency for Research on Cancer (IARC) recently concluded that ingested nitrate or nitrite under conditions that result in endogenous nitrosation is probably carcinogenic to humans (group 2A) (Grosse et al. 2006). Indeed, health effects due to nitrates in food are assumed to be counterbalanced by the antioxidants they contain. Plain drinking water does not contain antioxidants, so ingestion of nitrates contaminated water outside of meals may increase the cancer risks for exposed people. The aim of our study was to quantitatively estimate the excess cancer risk associated with the presence of nitrates in drinking water. Drinking water looks like it is well monitored in Quebec. Indeed, nitrate concentrations in the studied regions were low,

95 regardless of the strong agricultural activities (Table 1). Indeed, most of the measurements were below the MAC of 10 mg N-NO3-/L, and even the threshold of 3 mg N-NO3-/L (Table 2). Computing means from available nitrate concentrations per region would hypothesize that all the DWS have the same size. More, this would likely lead to an underestimation of the real exposure from some DWS. Indeed, in all the regions, a minimum of four DWS had nitrate levels exceeding 3 mg N-NO3-/L (Table 2). This could mean that in the same region, some municipalities would be more exposed than others. Moreover, distributions of samples taken at different taps three times per year (or as required) may not adequately reflect exposure, considering the spatial variation. All this may explain the variations observed in Table1. The estimated excess cancer risks (ER) associated with nitrate levels in all the studied regions were non significant, 1 x 10-6 (Table 5). Even after combining the effects of the four studied nitrosamines, the ERs were still in the order of 10-6, level of risk generally considered as acceptable. The highest ERs were due to NDBA, likely because the highest exposure was related to it. Indeed, according to the model used (equation 4), the ER is a linear function of exposure dose and cancer potency factor. The ERs estimated for isolated nitrate concentrations of 3.5 and 10 mg N-NO3-/L revealed ER (NDBA) = 7.8 x 10-6; 2.2 x 10-5 and 8.6 x 10-5 respectively (data not shown). Therefore, for increasing concentrations below the standard, the risks tended to be considerable. These results are closer to those from some epidemiological studies in which increases in cancer incidences were observed at nitrate levels below the MAC (De Roos et al. 2003; Ward et al. 1996; Weyer et al. 2001). The strength of this study is that it allows a direct estimation of the endogenous exposure to nitrosamines in the population by taking into account the probability distribution of parameters and kinetics occurring between

96 precursors (Phaneuf et al. 2004; Shephard et al. 1987; Huber and Lutz 1984). Our ER estimates correlate well with the risk assessment done by Shephard and Phaneuf. Although the chemistry and kinetics of in vivo nitrosamine formation are understood, there are inadequate data on nitrosamine formation and metabolism to accurately estimate quantitative levels in humans, except in a few cases involving the gastrointestinal tract. (Jakszyn et al. 2006b) estimated the latter to be about 93 g /day. Kyrtopoulos (1989) reported concentrations of 20 M for endogenous NOC (ENOC) after ingestion of 200 mg of nitrate by three individuals with normal gastric acidity. Vermeer et al. (1998) estimated endogenous NDMA exposure as 174 g/day after ingestion of about 220 mg of nitrate. Thus a comparison of our results to the latter was difficult either because the number of participants was low (= 3 in Kirtopoulos study) or because the nitrates doses were at least fifteen times higher than those found in the distribution systems we studied (Jakszyn et al. 2006b; Vermeer et al. 1998). Moreover, in those studies, estimates were made on the basis of feces (Jakszyn et al. 2006b) or urine (Vermeer et al. 1998). In such a case, exposure may be due to whole-body analysis, as opposed to isolation of biosynthesized ENOC only from the stomach. Endogenous nitrosamine formation is a function of several factors (TR, IRw and DD) that control the main precursors, nitrites and amines. In this study, lack of data on the Canadian food ingestion rate, as well as limited data on amine concentrations in food and on estimates of the transformation rate may have decreased the precision and increased the uncertainty of our endogenously formed nitrosamine estimates. Therefore, in our literature review on the transformation rate (estimated here as 5 to 30%), the number of individuals was too low (Eisenbrand et al. 1980b; Bos et al. 1988; Doel et al. 2005; Spiegelhalder et al. 1976) or not specified (Tannenbaum et al. 1976). A sensitivity

97 analysis conducted by our team revealed that it contributed for about 97% of the variability in nitrite formation (data not shown). Moreover, according to equation 4, nitrosamine formation is proportional to the square of the nitrite concentrations. Therefore, doubling the nitrite concentrations means quadrupling the nitrosamine quantities, thus demonstrating the major impact of this factor. Another limitation of our study was the lack of data for estimating the DDam that contributes to 31 to 51 % of the model variability according to our sensitivity analysis (Figure 1). Indeed, several foods were not listed in the Canadian data bases (StatistiqueCanada 2004). Moreover, in the major cases, concentrations of nitrosatable compounds were listed only for certain foods and those data dated from 1987 (Shephard et al. 1987). For instance, amide precursors are largely consumed in the form of proteins known to be greatly concentrated in meat, poultry and fish. Unfortunately, we couldnt find data for the concentrations of these substances in food. It is also the example of Nnitroso-N-methylurea (qhuman = 120 (mg/kg/day)-1) for which the precursor methylurea is reputed to be abundant in seafoods (Shephard et al. 1987). For creatine and creatinine which could reach levels up to 5000 - 7000 mg in fish (Shephard et al. 1987), there were no data on their corresponding NOC. While arylamines derivatives are known to be potent carcinogens (Mirvish 1995; Shephard et al. 1987; Mirvish et al. 1972), no carcinogenenic potency factors are listed for the specific derivatives of the major widespread precursors aniline and N-methylaniline. In addition, we noted that it could be helpful to establish indicators for amine categories because most of them can generate the same nitrosamine (Mirvish 1975a) at different rates, according to their basicity (different Ks).

98 Although it is preferable to integrate the inhibitory effect of vitamin C, we unfortunately could not do so. Indeed, despite the fact that many data exist on its in vivo inhibition rates, they are all related to the conditions of administration, particularly the time (before, at the same time or after amine) (Mirvish 1995). Therefore, because of this inhibition rate/time relationship and the conditions of administration indicating the importance of the kinetic mechanisms, integration of this parameter will fit better with a physiologically based pharmacokinetic (PBPK) modeling rather than our probabilistic approach. In addition, there is an endogenous synthesis of vitamin C (Suzuki et al. 2005; Schorah et al. 1991) estimated to be 0.4 mg/h in the stomach (Mirvish 1995) which can complicate the estimations.

CONCLUSION

Our analysis revealed that nitrate levels in municipal drinking water systems in the studied regions did not contribute to an increase in the cancer risk of people who drink this water. However, a lack of data on food consumption, on amine concentrations in food and on the transformation of nitrate to nitrite may have introduced uncertainties in our risk estimates. We noted that the sources and levels of amines in the diet should be studied comprehensively, for example, by developing methods for identifying classes of compounds (because NOC are a large family of compounds) at least in foods that are most consumed. Also, studies investigating the real rates by which nitrates are transformed to nitrites in the entire population, and carried out under standard conditions, would be worthwhile for improving the quantitative relationship between nitrate intake and exposure to ENOC. Overall, a combination of our probabilistic approach with a model that integrates real doses of precursors and antioxidants

99 according to physiological parameters would allow a more realistic estimate of the total risks contributed by nitrosamines. This will finally help in taking cancer into account when establishing standards that are unfortunately only based on infant

methemoglobinemia.

100
REFERENCES

Bos PMJ, Van den Brandt PA, Wedel M, Ockhuizen T. 1988. The reproducibility of the conversion of nitrate to nitrite in human saliva after a nitrate load. Food Chem Toxicol 26(2): 93-97.

Caron M, Levallois P, Gingras S, Phaneuf D. 2004. tude de la consommation d'eau dans la population adulte. In: tude sur la qualit de l'eau potable dans sept bassins versants en surplus de fumier et impacts potentiels sur la sant. Qubec: Ministre du Dveloppement durable, de l'environnement et des parcs du Qubec (MDDEP). Institut national de sant publique du Qubec (INSPQ), 74 p. + annexes.

De Roos AJ, Ward MH, Lynch CF, Cantor KP. 2003. Nitrate in public water supplies and the risk of colon and rectum cancers. Epidemiology 14(6): 640-649.

Doel J, Benjamin N, Hector MP, Rogers M, Allaker RP. 2005. Evaluation of bacterial nitrate reduction in the human oral cavity. Eur J Oral Sci 113(1): 14-19.

Eisenbrand G, Habs M, Schmhl D, Preussmann R. 1980a. Carcinogenicity of NNitroso-3-hydroxypyrrolidine and dose-response study with N-Nitrosopiperidine in rats. In: N-Nitroso-Compounds: Ananysis, Formation and Occurrence IARC Scientific Publications No 31 (Walker E, Griciute, L, Castegnaro, M, and Borzsonyi, M,, ed): World Health Organization, International Agency for Research on Cancer, Lyon, France, pp. 657-663.

101 Eisenbrand G, Spiegelhalder B, Preussmann R. 1980b. Nitrate and nitrite in saliva. Oncology 37(4): 227-231.

Fan AM, Steinberg VE. 1996. Health implications of nitrate and nitrite in drinking water: an update on methemoglobinemia occurence and reproductive and developmental toxicity. Regul Toxicol Pharmacol 23: 35-43.

Fan AM, Willhite CC, Book SA. 1987. Evaluation of the nitrate drinking water standard with reference to infant methemoglobinemia and potential reproductive toxicity. Regul Toxicol Pharmacol 7(2): 135-148.

Fields S. 2004. Global nitrogen: cycling out of control. Environ Health Perspect 112(10): A556-A563.

Forman D. 1989. Are nitrates a significant risk factor in human cancer? Cancer Surv 8(2): 443-458.

Fristachi A, Rice G. 2007. Estimation of the total daily oral intake of NDMA attributable to drinking water. Journal of Water & Health 5(3): 341-355.

Gangolli SD, Van den Brandt PA, Feron VJ, Janzowsky C, Koeman JH, Speijers GJA, et al. 1994. Nitrate, nitrite and N-nitroso compounds. European Journal of pharma cology (Environmental Toxicology and Pharmacology Section) 292: 1-38.

102 Glinas P, Rousseau N, Cantin P, Cardinal P, Roy N. 2004. Caractrisation de l'eau souterraine dans les sept bassins versants. In: tude sur la qualit de l'eau potable dans sept bassins versants en surplus de fumier et impacts potentiels sur la sant. Qubec: Ministre du Dveloppement durable, de l'environnement et des parcs du Qubec(MDDEP). Institut national de sant publique du Qubec (INSPQ).

Grosse Y, Baan R, Straif K, Secretan B, El Ghissassi F, Cogliano V. 2006. Carcinogenicity of nitrate, nitrite, and cyanobacterial peptide toxins. The Lancet Oncology 7(8): 628-629.

Health Canada. 1987. Nitrate/Nitrite. Available: http://www.hc-sc.gc.ca/ewhsemt/pubs/water-eau/nitrate_nitrite/index-eng.php [accessed 10 June 2008].

Huber KW, Lutz WK. 1984. Methylation of DNA in stomach and small intestine of rats after oral administration of methylamine and nitrite. Carcinogenesis 5(12): 17291732.

INSPQ. 2003. Fiche NItrates/Nitrites. Groupe Scientifique sur l'eau. Institut National de Sant Publique du Qubec (INSPQ) 1-12.

Jakszyn P, Agudo A, Berenguer A, Ibanez R, Amiano P, Pera G, et al. 2006a. Intake and food sources of nitrite and N-nitrosodimethylamine in Spain. Public Health Nutrition 9(6): 785-791.

103 Jakszyn P, Bingham S, Pera G, Agudo A, Luben R, Welch A, et al. 2006b. Endogenous versus exogenous exposure to N-nitroso compounds and gastric cancer risk in the European prospective investigation into cancer and nutrition (EPIC-EURGAST) study. Carcinogenesis 27(7): 1497-1501.

Knobeloch L, Salna B, Hogan A, Postle J, Anderson H. 2000. Blue babies and nitrate-contaminated well water. Environ Health Perspect 108(7): 675-678.

Kyrtopoulos SA. 1989. N-nitroso compound formation in human gastric juice. Cancer Surv 8(2): 423-438.

Levallois P, Bustinza R, Gingras S. 2004. Drinking water intrates and cancer: review of epidemiologic studies. Epidemiology 15(4): S110-S111.

Licht WR, Deen WM. 1988. Theoritical model for predicting rates of nitrosamine and nitrosamide formation in the human stomach. Carcinogenesis 9(12): 2227-2237.

Madison RJ, Brunett JO. 1985. Overview of the occurence of nitrate in ground water of the United States. In: National water summary 1984-Hydrologic events, selected water-quality trends, and ground-water resources (U.S.GeologicalSurvey, ed), 93-105.

104 McColl KEL. 2007. Hostile environment of the gastroesophageal junction J Clin Gastroenterol 41(Supplement 2): S102-S107.

Mirvish SS. 1995. Role of N-nitroso compounds (NOC) and N-nitrosation in etiology of gastric, esophageal, nasopharyngeal and bladder cancer and contribution to cancer of known exposures to NOC. Cancer Lett 93: 17-48.

Mirvish SS. 1975. Formation of N-nitroso compounds: chemistry, kinetics, and in vivo occurence. Toxicol Appl Pharmacol 31: 325-351.

Mirvish SS, Greenblatt M, Choudari Kommineni VR. 1972. Nitrosamide formation in vivo: induction of lung adenomas in Swiss mice by concurrent feeding of nitrite and methylurea or ethylurea. J Natl Cancer Inst 48: 1311-1315.

OEHHA. 2005. Air toxics hot spots program risk assessment guidelines. Part II: Technical support document for describing available cancer potency factors. Office of Environmental Health Hazard Assessment. California Environmental Protection Agency. Available: http://www.oehha.ca.gov/air/hot_spots/pdf/May2005Hotspots.pdf [accessed 10 October 2007].

Phaneuf D, Chauss K, Pantako O, Levallois P. 2004. tude sur la qualit de l'eau potable dans sept bassins versants en surplus de fumier et impacts potentiels sur la sant In: valuation du risque la sant pour la population expose aux nitrates prsents dans l'eau potable. Qubec: Ministre du Dveloppement durable, de l'environnement et

105 des parcs du Qubec (MDDEP). Institut national de sant publique du Qubec (INSPQ), 49p. + annexes.

Roseberry AM, Burmaster DE. 1992. Lognormal distributions for water intake by children and adults. Risk Anal 12(1): 99-104.

Schorah CJ, Sobala GM, Sanderson M. 1991. Gastric juice ascorbic acid: effects of disease and implications for gastric carcinogenesis. Am J Clin Nutr 53: 287S-293.

Shephard SE, Schlatter C, Lutz WK. 1987. Assessment of the risk of formation of carcinogenic N-nitroso compounds from dietary precursors in the stomach. Food Chem Toxicol 25(1): 91-108.

Siddiqi M, Kumar R, Kaul D, Spiegelhalder B, Preussmann R. 1992. Salivary nitrate and nitrite concentrations from a sample population of children and aldults in high risk area for esophageal and gastric cancers in Kashmir, India. Cancer Lett 64: 133136.

Singh AK, Singh A, Engelhardt M. 1997. The lognormal distribution in environmental applications. EPA 600R-94006. Washington, DC: US EPA, Office of Research and Development, Office of Solid Waste and Emergency Response.

106 Spiegelhalder B, Eisenbrand G, Preussmann R. 1976. Influence of dietary nitrite on nitrite content of human saliva: possible relevance to in vivo formation of N-nitroso compounds. Food Cosmet Toxicol 14: 545-548.

StatistiqueCanada. 2004. Statistiques sur les aliments au Canada. Available: http://ivt.crepuq.qc.ca/aliments/aliments2004.html [accessed 10 October 2007].

Suzuki H, Iijima K, Scobie G, Fyfe V, McColl KEL. 2005. Nitrate and nitrosative chemistry within Barrett's oesophagus during acid reflux. Gut 54(11): 15271535.

Tannenbaum SR, Weisman M, Fett D. 1976. The effect of nitrate intake on nitrite formation in human saliva. Food Cosmet Toxicol 14: 549-552.

Tricker AR. 1997. N-nitroso compounds and man: sources of exposure, endogenous formation and occurence in body fluids. Eur J Cancer Prev 6: 226-268.

U.S.EPA. 2006. Consumer Factsheet on: Nitrates/Nitrites. National Primary Drinking Water Regulations. U.S. Environmental Protection Agency. Available: http://www.epa.gov/safewater/dwh/c-ioc/nitrates.html [accessed 1 January 2008].

Vermeer ITM, Pachen DMFA, Dallinga JW, Kleinjans JCS, van Maanen JMS. 1998. Volatile N-nitrosamine formation after intake ofr nitrate at the ADI level in combination with an amine-rich diet. Environ Health Perspect 106: 459-463.

107

Walker R. 1990. Nitrates, nitrites and N-nitrosocompounds: a review of the occurrence in food and diet and the toxicological implications. Food Addit Contam 7(6): 717-768.

Ward MH, Mark SD, Cantor KP, Weisenburger DD, Correa-Villasenor A, Zahm SH. 1996. Drinking water nitrate and the risk of non-Hodgkin's lymphoma. Epidemiology 7: 465-471.

Weyer PJ, Cerhan JR, Kross BC, Hallberg GR, Katamneni J, Breuer G, et al. 2001. Municipal drinking water nitrate level and cancer risk in older women: the Iowa women's health study. Epidemiology 11: 327-338.

WHO. 2007. Nitrate and nitrite in drinking-water. Background document for development of WHO Guidelines for Drinking-water Quality. Available:

www.who.int/entity/water_sanitation_health/dwq/chemicals/nitratenitrite2ndadd.pdf [accessed 15 November 2007].

108
Table 1 Nitrate concentrations in drinking water systems of the four Quebec regions

supplied with groundwater.

Nitrate concentrations (mg-N/L) Regions Mean SD Min Max P50 P95

A B C D

0.61* 2.12** 2.07** 0.56*

1.11 3.35 3.58 1.28

0.02 0.02 0.01 0.01

8.70 20.1 18 6

0.18 0.48 0.32 0.10

2.74 10.35 11.00 4.69

*: no statistical difference between region A and D (p < 0.001) **: no statistical difference between region B and C (p < 0.001) SD: standard deviation; Min: minimum; Max: maximum; P50: 50th percentile; P95: 95th percentile

109
Table 2 Classification of nitrate levels in the drinking water systems.

NDWS
Regions NDSW N samples 3 mg-N/L 3.1 to 10 mg-N/L 10 mg-N/L

A B C D

47 64 78 38

262 416 393 184

43 (92%) 54 (85%) 72 (92%) 34 (90%)

4 8 5 4

0 2 1 0

NDWS: number of drinking water systems In brackets, are the proportions (expressed as percentage) of drinking water systems to the total from the same region having nitrates levels 3 mg-N/L.

110
Table 3 Total daily intakes of amines (mg/day)

Total daily intake Amines Mean SD P95

Dimethylamine (0.002*) Diethylamine (0.01) n-butylamine (0.01) Methylethylamine (0.01)

2.03

7.2

0.85

2.26

4.3

11.34

26.92

65

0.15

0.20

0.43

SD: standard deviation; P95: 95th percentile. In brackets are the specific nitrosatability rate constant K (M-2 s-1) of each amine. According to database from Shephard (1987), n-butylamine was more concentrated in meat (8-1200 mg/kg). Dimethylamine is widespread in food with sea foods being the most concentrated (6-370 mg/kg). Diethylamine is not that much concentrated in food, except in rapeseed cake in which it reaches levels up to 120 mg/kg. Methylethylamine is not widespread and when found, its concentrations are not high (7.6 mg/kg). * Rate constant K at optimal pH for amines, from Shephard (1987) Rate constant from Phaneuf (2004) Arbitrary rate constant assigned

111
Table 4 Daily doses of nitrosamines (g/day) calculated from a randomly generated

sample of 10 000.

Daily dose of nitrosamines endogenously formed (g/day) Nitrosamines Mean SD P50 P95

NDMA (16*) NDEA (36*) NDBA (11*) NMEA (22*)

1.5 x 10-4

1.9 x 10-3

7.4 x 10-6

4.5 x 10-4

2.5 x 10-4

3.1 x 10-3

1.4 x 10-5

7.7 x 10-4

5.4 x 10-3

5.9 x 10-2

3.5 x 10-4

1.7 x 10-2

4.8 x 10-5

3.7 x 10-4

4.9 x 10-6

1.7 x 10-4

SD: standard deviation; P50: 50th percentile; P95: 95th percentile NDMA: N-nitrosodimethylamine; NDEA: N-nitrosodiethylamine; NDBA: N-nitrosodin-butylamine; NMEA: N-nitroso-N-methylethylamine. *: qhuman ((mg/kg.day)-1): human cancer potency factor specific to each nitrosamine, from California Environmental Protection agency (CalEPA) and Integrated Risk Information System (IRIS/U.S.EPA) databases.

112

113
Figure 1 Legend

Sensitivity analysis performed for risk characterisation. The impact of each input parameter on the variability of the model results is expressed in percentage (%). NMEA impact (hatching) is shown separately from that of NDBA, NDMA, and NDEA (solid). TR: transformation rate of nitrate to nitrite; IRw: water ingestion rate; TDIamine: total daily intake of a specific amine; [NO3-]: nitrate concentrations; NMEA: N-nitroso-Nmethylethylamine; NDBA: N-nitrosodi-n-butylamine; NDEA: N-nitrosodiethylamine; NDMA: N-nitrosodimethylamine

114
Figure 1 Sensitivity analysis

TR (%) Assumption's parameters

IRw (L/day)

TDIamine (mol/day) 0 10 20 30 40 50 60

Contribution to model's variance (% ) NMEA NDBA and NDEA and NDMA

115

5. CHAPITRE V: DISCUSSION ET CONCLUSION

116
5.1 Discussion

Limpact sur le cancer de la prsence des nitrates dans leau potable est trs difficile valuer. Cest dailleurs pourquoi le Centre International de Recherche sur le Cancer (CIRC) a tenu spcifier que ces substances sont probablement cancrognes pour lhumain (groupe 2A) seulement dans les conditions de nitrosation endogne (Grosse et al. 2006). Notre analyse de risque avait pour but destimer des excs de risque de cancer associs la prsence de nitrates dans leau potable en rgion agricole. Les niveaux de nitrates dans la zone tudie taient de faon gnrale tous infrieurs la concentration maximale acceptable (CMA = 10 mg N-NO3-/L) de nitrates dans leau, et aussi 3 mg N-NO3-/L, seuil partir duquel linfluence dactivits anthropiques (donc agricoles dans notre contexte) sur leau souterraine est indniable (Glinas et al. 2004; Madison and Brunett 1985). Malgr tout, il est apparu quelques points de rseaux des rgions B et C des cas isols de dpassement de la norme. Ceci est illustr par les valeurs comprises entre les 95e centiles et les maxima calculs pour ces rgions. En effet, il peut arriver que les concentrations de nitrates dans leau soient diffrentes divers points dun mme rseau. Cest le cas lorsque plusieurs puits, qui nont pas la mme teneur en nitrates alimentent un mme rseau de distribution (INSPQ 2003). Ceci laisse supposer que dans les rgions concernes, il existerait certains points qui soient plus influencs par les activits agricoles que le reste de la rgion. Par ailleurs, on pourrait expliquer ces faibles niveaux de nitrates dans les rseaux par le fait que les rseaux publics soient trs rglements. Et la question serait de savoir si la situation est la mme pour les puits privs qui, on le sait ne sont pas rglements. Daprs notre analyse, les concentrations de nitrates mesures dans les divers rseaux de ces rgions ne sauraient augmenter les risques de cancer de leurs populations. En dautres termes, les excs de risque de cancer seraient ngligeables (10-5 < ER <10-6) pour des concentrations de nitrates infrieurs la CMA. Ce qui rejoint les conclusions de certaines tudes pidmiologiques sur le sujet (De Roos et al. 2003; Weyer et al. 2001; Gulis et al. 2002). Notons cependant que nos estimations prsentent certaines limites essentiellement lies aux paramtres intgrs au modle utilis : taux de

117 transformation et apport quotidien total en amines alimentaires (AQTamine). Plus prcisment, la caractrisation des risques que nous avons estims nous a permis didentifier plusieurs limites associes aux facteurs dincertitude inhrents aux paramtres sus-cits. Ces limites sont discutes de faon plus dtaille dans larticle scientifique inclus dans ce document. Dans cette partie, nous nous attarderons dautres aspects qui limitent lestimation de lexposition aux nitrosamines, et par consquent celle des risques qui leur sont associs. Pour commencer, nous avons estim des excs de risque de cancer hypothtiques associs chaque nitrosamine individuelle. Pourtant, la plupart de leurs prcurseurs amins sinon tous se retrouvent dans les aliments couramment consomms des taux variables. Ceci voudrait dire quaprs un repas typique, plusieurs nitrosamines seraient susceptibles dtre formes dans lestomac des concentrations variables et ce en fonction de la dynamique de la cintique ayant lieu entre tous les prcurseurs en prsence. Compte tenu de ce fait, il serait donc plus appropri destimer des ER correspondant la toxicit quivalente de ces substances, ne serait-ce que pour les plus stables que sont les dialkylnitrosamines (NDMA, NDEA, NMEA). Ceci exige donc une bonne connaissance de la dynamique cintique qui a lieu lorsque plusieurs amines sont prsentes au mme moment et des mcanismes de toxicit relatifs aux mlanges de nitrosamines. Soulignons que dans cette analyse nous navons retenu que les nitrosamines pour lesquelles un minimum dinformation existait pour estimer leurs doses endognes (AQTamine, K) et les ER associs (qhumain). Nous navons donc pas pu adopter une approche de toxicit quivalente car les donnes de nitrosamines retenues proviennent dtudes animales dans lesquelles elles ont t tudies individuellement. Des exprimentations animales impliquant des mlanges de plusieurs nitrosamines sont donc vivement requises. Des chantillons de produits de tabac (fume, poudre aspirer par le nez) constitueraient justement de bons chantillons. Ceci permettrait une estimation dexcs de risque de cancer rsultant de la contribution spcifique de chaque nitrosamine.

118 Par ailleurs, la nitrosation peut tre inhibe. Lintgration de cette inhibition lanalyse de risque permettrait une meilleure estimation des doses relles de nitrosamines responsables du cancer. Gangolli (1981) a voqu leffet inhibiteur des amines biognes qui sont des composs le plus souvent retrouvs en quantit substantielle dans les aliments que nous consommons, en plus dtre synthtises de faon endogne. Mais linhibiteur le plus connu et le plus tudi reste la vitamine C. Cette dernire, en plus dtre prsente dans lalimentation dont les fruits et lgumes, serait aussi scrte dans lestomac (Mirvish 1995; Suzuki et al. 2005; Schorah et al. 1991). Nous navons malheureusement pu lintgrer notre analyse de risque car cette inhibition apparat parfois complexe. Par exemple, daprs Vermeer et al. (1999) lingestion de 4 tasses de th vert inhiberait la formation de nitrosamines, alors quelle serait active suite lingestion de 8 tasses. Linhibition de la nitrosation a t beaucoup plus tudie avec la N-nitrosoproline (NPRO) qui nest pas cancrogne. Combet et al. (2007) ont malgr tout report une rduction de 5 fois (20%) la dose tmoin de NDMA et une inhibition totale de la formation de NDEA et de NPYR en absence de lipides in vitro. Ainsi, les pourcentages dinhibition retrouvs dans la littrature varient beaucoup en fonction des tudes et dpendent normment des conditions dadministration (aucune efficacit sur les nitrosamines prformes): avant, au mme moment ou aprs ladministration des amines. En fait, ces dernires comptitionnent avec la vitamine C pour se lier aux agents nitrosant. En outre, ces taux dinhibition sont fonction de la dure de la raction. Ainsi, Mirvish (1995) a report des inhibitions moyennes de 87% et 25% de la N-nitrosoproline lorsque lacide ascorbique (ASC) tait donne 1 et 2h respectivement aprs un repas enrichi en proline (PRO). Or cette dernire est nitrose 20 fois plus rapidement que la dimthylamine (DMA) par exemple. La question est de savoir si les taux dinhibition seraient similaires entre lacide amin (PRO) et la dialkylamine (DMA). Ce qui semble ne pas tre sr. De plus, mme si lauteur ne mentionne pas comment les taux de NPRO ont t mesurs, prenons pour acquis que cela a t fait comme dhabitude dans lurine car la NPRO est la seule nitrosamine connue qui nest pas mtabolise (NPRO test). Pourtant pour tre

119 lgitimement applicable, ces taux devraient tre mesurs directement dans lestomac ou avant que les nitrosamines ne soient absorbes et biotransformes. Dautre part, cette inhibition est fonction de la dite. En effet, en prsence des lipides, la vitamine C serait transforme en promoteur de la nitrosation endogne (Combet et al. 2007; Mirvish 1986). Dautres tudes dinhibition, prenant en compte ce fait, seraient donc utiles car les lipides reprsentent en gnral une grande proportion de notre apport calorique. Cette situation est encore plus indique en Amrique du Nord o les jus de fruits et les boissons gazeuses sont prfrs au vin au cours des repas.

5.2 Conclusion

Daprs les rsultats de notre analyse de risque, aucune conclusion finale ne saurait tre mise quant la relation entre lexposition aux nitrates dans leau potable et un risque possible de cancer pour lhumain. Celle-ci dpend fortement de la nitrosation endogne qui malheureusement est trs difficile valuer. En effet, trop de facteurs difficiles contrler y sont impliqus. Pourtant les rsultats obtenus jusqualors, autant du ct des tudes pidmiologiques que des exprimentations animales, laissent penser que celle-ci devrait tre prise en compte dans ltablissement des normes des nitrates / nitrites dans leau potable qui ne sont malheureusement bases que sur le risque de mthmoglobinmie. Les normes actuelles ne seraient peut-tre pas adquates pour prvenir tous les risques potentiels la sant dus lexposition aux nitrates. Dautres tudes cintiques seraient utiles pour mieux dfinir la relation quantitative entre lingestion de nitrates et lexposition endogne aux NOC, de mme que pour valider des biomarqueurs de pareilles expositions dans le but de les utiliser dans de futures tudes pidmiologiques qui prennent en compte les sous-populations sensibles.

120

6. RFRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

121 ACIA. 2006. Aliments - Produits de viande et de volaille - Manuel des Mthodes - Chap. 5 - chantillonnage et analyses. Agence Canadienne d'Inspection des Aliments. Disponible : http://www.inspection.gc.ca/francais/anima/meavia/mmopmmhv/chap5/54f.shtml#5.6 [consult le 13 Juillet 2008]. Andrzejewski P, Kasprzyk-Hordern B, Nawrocki J, Andrzejewski P, KasprzykHordern B, Nawrocki J. 2008. N-nitrosodimethylamine (NDMA) formation during ozonation of dimethylamine-containing waters. Water Res 42(4-5): 863-870. ATSDR. 2007. Nitrate/Nitrite Toxicity. Case Studies in Environmental Medecine (CSEM). Agency for Toxic Substances and Disease Registry; 37 p. Disponible : http://www.atsdr.cdc.gov/csem/nitrate/docs/nitrate_nitrite.pdf [consult le 26 Juin 2008]. Avery AA. 1999. Infantile methemoglobinemia: reexamining the role of drinking water nitrates. Environ Health Perspect 107: 583-586. Bartholomew B, Hill MJ. 1984. The pharmacology of dietary nitrate and the origin of urinary nitrate. Food Chem Toxicol 22(10): 789-795. Bartsch H, Ohshima H, Pignatelli B, Calmels S. 1989. Human exposure to endogenous N-nitroso compounds: quantitative estimates in subjects at high risk for cancer of the oral cavity, oesophagus, stomach and urinary bladder. Cancer Surv 8(2): 336-356. Bertram JS et Craig AW. 1970. Induction of bladder tumors in mice with dibutylnitrosamine. British Journal of Cancer 24: 352-359. Bos PMJ, Van den Brandt PA, Wedel M, Ockhuizen T. 1988. The reproducibility of the conversion of nitrate to nitrite in human saliva after a nitrate load. Food Chem Toxicol 26(2): 93-97.

122 Bosch HM, Rosenfield AB, Huston R, Shipman HR et Woodward FL. 1950. Methemoglobinemia and Minnesota well supplies. J Am Water Works Assoc. 42: 161170. Brender JD, Olive JM, Felkner M, Suarez L, Marckwardt W, Hendricks KA. 2004. Dietary Nitrites and Nitrates, Nitrosatable Drugs, and Neural Tube Defects. Epidemiology 15(3): 330-336. Brown JL. 1999. N-nitrosamines. Occup Med 14(4): 839-848. Mirvish SS. 1971. Kinetics of nitrosamide formation from akylureas, N-alkylurethans, and alkylguanidines: possible implications for the etiology of human gastric cancer. J Natl Cancer Inst 46: 1183-1193. CEAEQ. 2007. Dtermination des nitrates et des nitrites dans l'eau; mthode colorimtrique automatise avec le sulfate d'hydrazine et le N.E.D., MA. 303 - NO3 1.0, Rv. 3. Centre expertise analyse environnementale Qubec. Ministre Dveloppement Durable Environnement Parcs Qubec (MDDEP). Gouvernement du Qubec, 12p. Chung SY, Kim JS, Kim M, Hong MK, Lee JO, Kim CM, et al. 2003. Survey of nitrate and nitrite contents of vegetables grown in Korea. Food Addit Contam 20(7): 621-628. COGEBY. (2001). Profil du bassin versant de la rivire Yamaska. Conseil de Gestion du Bassin versant de la Yamaska. Disponible : http://www.cogeby.qc.ca/document.htm. [Consult le 19 Juin 2008]. Combet E, Paterson S, Lijima K, Winter J, Mullen W, Crozier A, et al. 2007. Fat transforms ascorbic acid from inhibiting to promoting acid-catalysed N-nitrosation. Gut: 1-7.

123 Coss A, Cantor KP, Reif JS, Lynch CF, Ward MH. 2004. Pancreatic Cancer and Drinking Water and Dietary Sources of Nitrate and Nitrite. Am J Epidemiol 159(7): 693-701. De Roos AJ, Ward MH, Lynch CF, Cantor KP. 2003. Nitrate in public water supplies and the risk of colon and rectum cancers. Epidemiology 14(6): 640-649. Dietrich M, Block G, Pogoda JM, Buffler P, Hecht S, Preston-Martin S, et al. 2005. A review: dietary and endogenously formed N-nitroso compounds and risk of childhood brain tumors. Cancer Causes Control 16(6): 619-635. Doel JJ, Benjamin N, Hector MP, Rogers M, Allaker RP. 2005. Evaluation of bacterial nitrate reduction in the human oral cavity. Eur J Oral Sci 113(1): 14-19. Duncan C, Dougall H, Johnston P, Green P, Brogan S, Liefert R, et al. 1995. Chemical generation of nitric oxide in the mouth from the enterosalivary circulation of dietary nitrate. Nat Med 1: 546-551. Druckrey H, Preussmann R et al. 1967. Organotropic carcinogenic effects of 65 different N-nitroso-compounds on BD-rats (Ger.). Z Krebsforsch 69: 103-201. Egert G, Greim H. 1976. Formation of dimethylnitrosamine from pesticides carrying methylated tertiary aminogroups in the presence of nitrite at pH 3. Food Cosmet Toxicol 14(3): 193-195. Eisenbrand G, Spiegelhalder B, Preussmann R. 1980. Nitrate and nitrite in saliva. Oncology 37(4): 227-231. Ernst H, Ohshima H, Bartsch H, Mohr U, Reichart P. 1987. Tumorigenicity study in Syrian hamsters fed areca nut together with nitrite Carcinogenesis 8(12): 18431845.

124

Fan AM, Steinberg VE. 1996. Health implications of nitrate and nitrite in drinking water: an update on methemoglobinemia occurence and reproductive and developmental toxicity. Regul Toxicol Pharmacol 23: 35-43. Fan AM, Willhite CC, Book SA. 1987. Evaluation of the nitrate drinking water standard with reference to infant methemoglobinemia and potential reproductive toxicity. Regul Toxicol Pharmacol 7(2): 135-148. Fields S. 2004. Global nitrogen: cycling out of control. Environ Health Perspect 112(10): A556-A563. Forman D. 1989. Are nitrates a significant risk factor in human cancer? Cancer Surv 8(2): 443-458. Foster AB, Jarman M, Manson D. 1981. Synthesis and reactivity in vivo of nitrosamines and nitrosamides. In: Safety evaluation of nitrosatable drugs and chemicals (Ioannides C, Gibson GG, eds). London: Taylor & Francis, p. 69. Gangolli SD, Van den Brandt PA, Feron VJ, Janzowsky C, Koeman JH, Speijers GJA, et al. 1994. Nitrate, nitrite and N-nitroso compounds. European Journal of pharmacology (Environmental Toxicology and Pharmacology Section) 292: 1-38. Gangolli SD. 1981. Metabolic activation and detoxication of nitroso compounds. In: Safety evaluation of nitrosatable drugs and chemicals (Ioannides C, Gibson GG, eds). London: Taylor & Francis, 157-171. Ghazal C, Dumoulin S et al. 2006. Portrait de l'environnement du bassin versant de la rivire Nicolet. Qubec, Corporation de gestion des rivires des Bois-Francs. 173 p. et 9 annexes.

125

Glinas P, Rousseau N, Cantin P, Cardinal P, Roy N. 2004. Caractrisation de l'eau souterraine dans les sept bassins versants. In: tude sur la qualit de l'eau potable dans sept bassins versants en surplus de fumier et impacts potentiels sur la sant. Qubec: Ministre du Dveloppement durable, de l'environnement et des parcs du Qubec(MDDEP). Institut national de sant publique du Qubec (INSPQ). Giroux I. 2007. tat de l'cosystme aquatique du bassin versant de la rivire Bayonne: faits saillants 2001-2005. D. d. s. d. l. . d. l'environnement. Qubec, Ministre du Dveloppement durable, de l'Environnement et des Parcs: 16p. GouvernementduQubec. 2001. Rglement sur la qualit de l'eau potable L.R.Q., c. Q-2, r.18.1.1. Qubec: diteur officiel du Qubec. Granli T, Dahl R, Brodin P, Bockman OC. 1989. Nitrate and nitrite concentrations in human saliva: variations with salivary flow-rate. Food Chem Toxicol 27(10): 675-680. Gravel C. 2006. Impact des pressions agricoles sur la qualit de l'eau des rseaux d'aqueducs municipaux du Qubec aliments en eau souterraine. Qubec: Universit Laval. Greenblatt M, Mirvish SS, So BT. 1971. Nitrosamine studies: induction of lung adenomas by concurrent administration of sodium nitrite and secondary amines in Swiss mice. J Natl Cancer Inst 46(5): 1029-1034. Grosse Y, Baan R, Straif K, Secretan B, El Ghissassi F, Cogliano V. 2006. Carcinogenicity of nitrate, nitrite, and cyanobacterial peptide toxins. The Lancet Oncology 7(8): 628-629.

126 Gulis G, Czompolyova M, Cerhan JR. 2002. An ecological study of nitrate in municipal drinking water and cancer incidence in Trnava District, Slovakia. Environ Res 88: 182-187. Herron DC, Shank RC. 1980. Methylated purines in human liver DNA after probable dimethylnitrosamine poisoning. Cancer Res 40(9): 3116-3117. IARC. 1998. Some N-nitroso Compounds. World Health Organisation. International Agency for Research on Cancer. IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans. Iijima K, Henry E, Moriya A, Wirz A, Kelman W, McColl KEL. 2002. Dietary nitrate generates potentially mutagenic concentrations of nitric oxide at the gastroesophageal junction. Gastroenterology 122: 1248-1257. INSPQ. 2003. Fiche NItrates/Nitrites. Groupe Scientifique sur l'eau. Institut National de Sant Publique du Qubec (INSPQ) 1-12. IPCS. 1999. Nitrates and nitrites. International Programme on Chemical Safety. Poisons Information Monograph (Group Monograph) G016 Chemical. Disponible : http://www.inchem.org/documents/pims/chemical/pimg016.htm [Consult le 30 Janvier 2008]. Jakszyn P, Agudo A, Berenguer A, Ibanez R, Amiano P, Pera G, et al. 2006. Intake and food sources of nitrite and N-nitrosodimethylamine in Spain. Public Health Nutrition 9(6): 785-791. Jakszyn P et Gonzalez CA. 2006. Nitrosamine and related food intake and gastric and oesophageal cancer risk: a systematic review of the epidemiological evidence. World journal of Gastroenterology 12(27): 4296-4303.

127 Kleinjans JCS, Albering HJ, Marx A, van Maanen JMS, van Agen B, ten Hoor F, et al. 1991. Nitrate contamination of drinking water: evaluation of genotoxic risk in human populations. Environ Health Perspect 94: 198-194. Kyrtopoulos SA. 1989. N-nitroso compound formation in human gastric juice. Cancer Surv 8(2): 423-438. Levallois P, Ayotte P, Louchini R, Desrosiers T, Baribeau H, Phaneuf D, et al. 2000. Sources of nitrate exposure in residents of rural areas in Quebec, Canada. J Exposure Anal Environ Epidemiol 10: 188-195. L'hirondel J, L'hirondel J-L. 2002. Nitrate and man: toxic, harmless, or beneficial? Wallingford, Oxfordshire, UK: CABI Publishing. Lijinsky W. 1984. Induction of tumours in rats by feeding nitrosatable amines together with sodium nitrite. Food Chem Toxicol 22(9): 715-720. Lijinsky W, Kovatch R, Riggs CW. 1983. Altered incidences of hepatic and hemopoietic neoplasms in F344 rats fed sodium nitrite. Carcinogenesis 4(9): 1189-1191. Lijinsky W, Reuber MD. 1980. Tumours induced in Fischer 344 rats by the feeding of disulfiram together with sodium nitrite. Food Cosmet Toxicol 18: 85-87. Luca D, Luca V, Cotor F, Raileanu L. 1987. In vivo and in vitro cytogenetic damage induced by sodium nitrite. Mutat Res 189(3): 333-339. Lundberg JO, Weitzberg E, Cole JA, Benjamin N. 2004. Nitrate, bacteria and human health. Nature reviews Microbiology 2: 593-602. Madison RJ, Brunett JO. 1985. Overview of the occurence of nitrate in ground water of the United States. In: National water summary 1984-Hydrologic events,

128 selected water-quality trends, and ground-water resources (U.S.GeologicalSurvey, ed), 93-105. McColl KEL. 2007. Hostile environment of the gastroesophageal junction J Clin Gastroenterol 41(Supplement 2): S102-S107. McGuire MJ, Lieu NI, Pearthree MS. 1999. Using chlorite ion to control nitrification. J Am Water Works Assoc 91: 52-61. MDDEP. 2002. La gestion intgre de l'eau par bassin versant. Ministre du Dveloppement Durable, de l'Environnement et des Parc du Qubec. Disponible : http://www.mddep.gouv.qc.ca/eau/bassinversant/index.htm. [Consult le 16 Juin 2008] MDDEP. 2007. Guide technique. Captage d'eau souterraine pour des rsidences isoles. Ministre du Dveloppement Durable, de l'Environnement et des Parc du Qubec. Disponible : http://www.mddep.gouv.qc.ca/eau/souterraines/guide.pdf [Consult le 4 Fvrier 2008]. Mirvish SS. 1971. Kinetics of nitrosamide formation from akylureas, Nalkylurethans, and alkylguanidines: possible implications for the etiology of human gastric cancer. Journal of the National Cancer Institute 46: 1183-1193. Mirvish SS. 1975. Formation of N-nitroso compounds: chemistry, kinetics, and in vivo occurence. Toxicol Appl Pharmacol 31: 325-351. Mirvish SS, Cardesa A, Wallcave L, Shubik P. 1975. Induction of mouse Lung adenomas by amines or ureas plus nitrite and by N-nitroso compounds: effect of ascorbate, gallic acid, thiocyanate, and caffeine. J Natl Cancer Inst 55(3): 633-636.

129 Mirvish SS, Bulay O, Runge RG, Patil K. 1980. Study of the carcinogenicity of large doses of dimethylamine, N-nitroso-L-proline and sodium nitrite administred in drinking water to rats. Journal of National Cancer Institute 64: 1435-1442. Mirvish SS. 1986. Effects of vitamins C and E on N-nitroso compound formation, carcinogenesis, and cancer. Cancer 58(8 Suppl): 1842-1850. Mirvish SS. 1994. Experimental evidence for inhibition of N-nitroso compound formation as a factor in the negative correlation between vitamin C consumption and the incidence of certain cancers. Cancer Res 54(Suppl): 1948S-1951S. Mirvish SS. 1995. Role of N-nitroso compounds (NOC) and N-nitrosation in etiology of gastric, esophageal, nasopharyngeal and bladder cancer and contribution to cancer of known exposures to NOC. Cancer Lett 93: 17-48. Mirvish SS, Reimers KJ, Kutler B, Chen SC, Haorah J, Morris CR, et al. 2000. Nitrate and nitrite concentrations in human saliva for men and women at different ages and times of the day and their consistency over time. Eur J Cancer Prev 9(5): 335-342. Montesano R, Bartsch H. 1976. Mutagenic and carcinogenic N-nitroso compounds: possible environmental hazards. Mutat Res 32: 179-228. Morales Suarez-Varela MM, Llopis Gonzalez A, Tejerizo Perez ML, Ferrandiz Ferragud J. 1993. Concentration of nitrates in drinking water and its relationship with bladder cancer. J Environ Pathol Toxicol Oncol 12(4): 229-236. Morales-Suarez-Valera MM, Llopis-Gonzalez A, Tejerizo-Perez ML. 1995. Impact of nitrates in drinking water on cancer mortality in Valencia, Spain. Eur J Epidemiol 11(1): 15-21.

130 Mueller DK, Helsel DR. 1996. Nutrients in the Nation's waters -Too much of a good thing? U.S. Geological Survey Circular 1136, 24 p. NIPHEP. 1989. Integrated criteria document nitrate. National Institute for Public Health and Environmental Protection (RIVM). The Netherlands. Vol. 758473012. 196p. [Abstract] Disponible par la base de donnes TOXNET : http://toxnet.nlm.nih.gov/cgibin/sis/search/f?./temp/~YW3N89:1 [Consult le 29 Dcembre 2008] Nolan BT, Hitt KJ, Ruddy BC. 2002. Probability of nitrate contamination of recently recharged groundwaters in the conterminous United States. Environ Sci Technol 36: 2138-2145. Nyakas C, Buwalda B, Markel , Korte MS, Luiten P, G.M. 1994. Life-spanning behavioural and adrenal dysfunction induced by prenatal hypoxia in the rat is prevented by the calcium antagonist nimodipine. Eur J Neurosci 6(5): 746-753. OEHHA. 1997. Public Health Goals for nitrate and nitrite in drinking water. Office of Environmental Health Hazard Assessment (OEHHA), California Environmental Protection Agency (CalEPA). CA, 14p. OEHHA. 2005. Air toxics hot spots program risk assessment guidelines. Part II: Technical support document for describing available cancer potency factors. Office of Environmental Health Hazard Assessment. California Environmental Protection Agency. Disponible : http://www.oehha.ca.gov/air/hot_spots/pdf/May2005Hotspots.pdf [Consult le 10 Octobre 2007]. OEHHA. 2006. Public Health Goal for N-nitrosodimethylamine in drinking water. Office of Environmental Health Hazard Assessment (OEHHA), California Environmental Protection Agency (CalEPA) CA, 60p.

131 Ohshima H, Bartsch H. 1981. Quantitative estimation of endogenous nitrosation in humans by monitoring N-nitrosoproline excreted in the urine. Cancer Res 41: 36583662. OMS. 2004. Nitrates and Nitrites in drinking-water. WHO/SDE/WSH/04.08/56. Rolling revision of the WHO guidelines for drinking-water quality. Draft for review and comments. Geneva: world Health Organisation. Disponible : http://www.who.int/water_sanitation_health/dwq/chemicals/en/nitratesfull.pdf [Consult le 10 Juin 2008]. OMS. 2007. Nitrate and nitrite in drinking-water. Background document for development of WHO Guidelines for Drinking-water Quality. Disponible : www.who.int/entity/water_sanitation_health/dwq/chemicals/nitratenitrite2ndadd.pdf [Consult le 15 Novembre 2007]. Painchaud J. 2007. tat de l'cosystme aquatique du bassin versant de la rivire Saint-Franois: faits saillants 2001-2003. D. d. s. d. l. . d. l'environnement. Qubec, Ministre du Dveloppement durable, de l'Environnement et des Parcs: 19p. Pelletier L. 2005. tat de l'cosystme aquatique du bassin versant de la rivire Etchemin: faits saillants 2001-2003. D. d. s. d. l. . d. l'environnement. Qubec, Ministre du Dveloppement durable, de l'Environnement et des Parcs: 10p. Pelletier D. 2008. tat de l'cosystme aquatique du bassin versant de la rivire Kamouraska: faits saillants 2004-2006. D. d. s. d. l. . d. l'environnment. Qubec, Ministre du Dveloppement durable, de l'Environnement et des Parcs: 12p. Peto R, Gray R et al. 1982. Effects on two tonnes of inbred rats of chronic ingestion of diethyl- or dimethylnitrosoamine: an unusually detailed dose-response study. Imperial Cancer Res Fund, Cancer Studies Unit, Nuffield Department of Clinical Medicine, Radcliffe Infirmary, Oxford.

132

Peto R et Gray R. 1984. Nitrosamine carcinogenesis in 5120 rodents: chronic administration of sixteen different concentrations of NDEA, NDMA, NPYR and NPIP in the water of 4440 inbred rats, with parallel studies on NDEA alone of the effect of age of starting (3,6 or 20 weeks) and of species (rats, mice or hamsters). N-Nitroso Compounds: Occurrence, Biological Effects and Relevance to Human Cancer, IARC Scientific Publications, No. 57. I. K. ONeill, R. C. Von Borstel, C. T. Miller, J. Long and H. Bartsch, International Agency for Research on Cancer, Lyon, pp.501-512. Phaneuf D, Chauss K, Pantako O, Levallois P. 2004. tude sur la qualit de l'eau potable dans sept bassins versants en surplus de fumier et impacts potentiels sur la sant In: valuation du risque la sant pour la population expose aux nitrates prsents dans l'eau potable. Qubec: Ministre du Dveloppement durable, de l'environnement et des parcs du Qubec (MDDEP). Institut national de sant publique du Qubec (INSPQ), 49p. + annexes. Preussmann R, Schmhl D et al. 1977. Carcinogenicity of N-nitrosopyrrolidine: dose-response study in rats. Z Krebsforsch 90: 161-166. Rowland IR, Grasso P. 1975. Degradation of N-nitrosamines by intestinal bacteria. Appl Microbiol 29(1): 7-12. Sant Canada. 1987. Le nitrate et le nitrite. Disponible : http://www.hcsc.gc.ca/ewh-semt/pubs/water-eau/nitrate_nitrite/index-fra.php [Consult le 2 Fvrier 2008]. Sant Canada. 1994. L'valuation du risque la sant humaine des substances d'intrt prioritaire. Disponible : http://www.hc-sc.gc.ca/ewh-semt/pubs/contaminants/approach/index-fra.php [Consult le 2 Aot 2008].

133 Sant Canada. 2004a. Codification ministrielle de la Loi sur les aliments et drogues et du Rglement sur les aliments et drogues. Titre 16, Tableau XI. Disponible : http://www.hc-sc.gc.ca/fn-an/legislation/acts-lois/fda-lad/index-fra.php [Consult le 13 Juillet 2008]. Sant Canada. 2004b. L'valuation du risque pour les lieux contamins fdraux au Canada - Partie I : L'valuation quantitative prliminaire des risques (QPR) pour la sant humaine. Disponible : http://www.hc-sc.gc.ca/ewh-semt/pubs/contamsite/partpartie_i/index-fra.php [Consult le 20 Juillet 2008]. Schorah CJ, Sobala GM, Sanderson M. 1991. Gastric juice ascorbic acid: effects of disease and implications for gastric carcinogenesis. Am J Clin Nutr 53: 287S-293. Shank RC, Newberne PM. 1976. Dose-reponse study of the carcinogenicity of dietary sodium nitrite and morpholine in rats and hamsters. Food Cosmet Toxicol 14: 18. Shephard SE, Schlatter C, Lutz WK. 1987. Assessment of the risk of formation of carcinogenic N-nitroso compounds from dietary precursors in the stomach. Food Chem Toxicol 25(1): 91-108. Siddiqi M, Kumar R, Kaul D, Spiegelhalder B, Preussmann R. 1992. Salivary nitrate and nitrite concentrations from a sample population of children and aldults in high risk area for esophageal and gastric cancers in Kashmir, India. Cancer Lett 64: 133136. Simoneau M. 2005. tat de l'cosystme aquatique du bassin versant de la rivire l'Assomption: faits saillants 2001-2003. D. d. s. d. l. . d. l'environnement. Qubec, Ministre du Dveloppement durable, de l'Environnement et des Parcs: 14p.

134 Sobala GM, Schorah CJ, Sanderson M, Dixon MF, Tompkins DS, Godwin P, et al. 1989. Ascorbic acid in the human stomach. Gastroenterology 97(2): 357-363. Spiegelhalder B, Eisenbrand G, Preussmann R. 1976. Influence of dietary nitrite on nitrite content of human saliva: possible relevance to in vivo formation of N-nitroso compounds. Food Cosmet Toxicol 14: 545-548. Steindorf K, Schlehofer B, Becher H, Hornig G, Wahrendorf J. 1994. Nitrate in drinking water. A case-control study on primary brain tumors with an embedded drinking water survey in Germany. Int J Epidemiol 23(3): 451-457. Suzuki H, Iijima K, Scobie G, Fyfe V, McColl KEL. 2005. Nitrate and nitrosative chemistry within Barrett's oesophagus during acid reflux. Gut 54(11): 15271535. Suzuki H, Lijima L, Moriya A, McElroy K, Scobie G, Fyte V, et al. 2003. Conditions for acid catalysed luminal nitrosation are maximal at the gastric cardia. Gut 52: 1095-1101. Swissa M, Shaked Y, Garty M. 2007. Severe methemoglobinemia and syncope in a patient with glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency. The Israel Medical Association Journal 9: 684-685. Tannenbaum SR, Wishnok JS, Leaf CD. 1991. Inhibition of nitrosamine formation by ascorbic acid. Am J Clin Nutr 53(Suppl): 247S-250S. Tricker AR. 1997. N-nitroso compounds and man: sources of exposure, endogenous formation and occurence in body fluids. Eur J Cancer Prev 6: 226-268. Turek B, Hlavsova D, Tucek J, Waldman J, Cerna J. 1980. The fate of nitrates and nitrites in the organism. IARC Sci Publ 31: 625-632.

135

U.S.EPA. 2002a. Integrated Risk Information System (IRIS): Nitrate (CASRN 14797-55-8). Washington, DC: U.S. Environmental Protection Agency Disponible : http://www.epa.gov/ncea/iris/subst/0076.htm [Consult le 25 Aot 2008]. U.S.EPA. 2002b. National primary drinking water regulations. Part 141.23. U.S Environmental Protection Agency. Disponible : http://edocket.access.gpo.gov/cfr_2002/julqtr/pdf/40cfr141.23.pdf [Consult le 30 Juin 2008]. U.S.EPA. 2006. Consumer Factsheet on: Nitrates/Nitrites. National Primary Drinking Water Regulations. U.S. Environmental Protection Agency. Disponible : http://www.epa.gov/safewater/dwh/c-ioc/nitrates.html [Consult le 1 Janvier 2008]. U.S.EPA. 2008. Consumer Factsheet on: Nitrates/Nitrites. U.S. Environmental Protection Agency. Disponible : http://www.epa.gov/safewater/dwh/c-ioc/nitrates.html [Consult le 13 Aot 2008]. van Grinsven HJM, Ward MH, Benjamin N, de Kok TM. 2006. Does the evidence about health risks associated with nitrate ingestion warrant an increase of the nitrate standard for drinking water? Environmental Health: A Global Access Science Source 5: 26. van Loon AJ, Botterweck AA, Goldbohm RA, Brants HA, van Klaveren JD, van den Brandt PA. 1998. Intake of nitrate and nitrite and the risk of gastric cancer: a prospective cohort study. Br J Cancer 78:129135. van Maanen JMS, van Dijk A, Mulder K, de Baets MH, Menheere PCA, van der Heide D, et al. 1994. Consumption of drinking water with high nitrate levels causes hypertrophy of the thyroid. Toxicol Lett 72: 365-374.

136 Vermeer ITM, van Maanen JMS. 2001. Nitrate exposure and the endogenous formation of carcinogenic nitrosamines in humans. Rev Environ Health 16(2): 105-113. vermeer ITM, Moonen E, J. C., Dallinga JW, Kleinjans JCS, van Maanen JMS. 1999. Effect of ascorbic acid and green tea on endogenous formation of Nnitrosodimethylamine and N-nitrosopiperidine in humans. Mutat Res 428: 353-361. Walker R. 1990. Nitrates, nitrites and N-nitrosocompounds: a review of the occurrence in food and diet and the toxicological implications. Food Addit Contam 7(6): 717-768. Walton G. 1951. Survey of literature relating to infant methemoglobinemia due to nitrate contaminated water. Am J Publ Health. 41: 986-996 Ward MH, Mark SD, Cantor KP, Weisenburger DD, Correa- Villasenor A, Zahm SH. 1996. Drinking water nitrate and the risk of non-Hodgkins lymphoma. Epidemiology 7:465471. Ward MH, Cantor KP, Riley D, Merkle S, Lynch CF. 2003. Nitrate in public water supplies and risk of bladder cancer. Epidemiology 14:183190.

Ward MH, Cantor KP, Cerhan J, Lynch CF, Hartge P. 2004. Drinking water nitrate and cancer: results from recent studies in the Midwestern United States [Abstract]. Epidemiology 15:S214.

Ward MH, Rusiecki JA, Lynch CF, Cantor KP. 2007. Nitrate in public water supplies and the risk of renal cell carcinoma. Cancer Causes Control 18(10): 1141-1151.

137 Weyer PJ, Smith BJ, Feng ZF, Kantamneni JR, Riley DG, Weyer PJ, et al. 2006. Comparison of nitrate levels in raw water and finished water from historical monitoring data on Iowa municipal drinking water supplies. Environ Monit Assess 116(1-3): 81-90. Weyer PJ, Cerhan JR, Kross BC, Hallberg GR, Katamneni J, Breuer G, et al. 2001. Municipal drinking water nitrate level and cancer risk in older women: the Iowa women's health study. Epidemiology 11: 327-338. Yamamoto K, Nakajima A, Eimoto H, Tsutsumi M, Maruyama H, Denda A, et al. 1989. Carcinogenic activity of endogenously synthesized N-nitrosobis(2hydroxypropyl)amine in rats administered bis(2-hydroxypropyl)amine and sodium nitrite. Carcinogenesis 10(9): 1607-1611. Yang CY, Cheng MF, Tsai SS et Hsieh YL. 1998. Calcium, magnesium, and nitrate in drinking water and gastric cancer mortality. Jpn J Cancer Res. 89 (2): 124-130.

138

7. ANNEXES

139
ANNEXE 1 Article scientifique: Modeling cancer risk associated with nitrates in public drinking

water systems from four rural regions of Quebec (Canada)

Auteurs : Sandrine Chbkou, Patrick Levallois, Manuel Rodriguez, Robert Tardif

Rle de chacun des auteurs :

- Sandrine Chbkou : tudiante - Robert Tardif : directeur de recherche principal - Patrick Levallois : co-directeur principal - Manuel Rodriguez : co-directeur associ au projet

140
ANNEXE 2 Tableau 1 Concentrations de nitrates dans les divers rseaux des rgions tudies, qui sont aliments en eau souterraine

Concentrations de nitrates (mg-N/L) Rgions E F G Moyenne 0,37 0,26 0,47 DS 0,05 0,58 0,98 Min 0,02 0,02 0,01 Max 4,3 5,7 6,9 p50 0,15 0,05 0,09 p95 1,28 0,76 2,13

DS : dviation standard; p50 : 50e centile; p95 : 95e centile.

141
ANNEXE 3 Tableau 2 Apport quotidien total en amines (mg/jour)

Apport quotidien total Amines n-propylamine (0.01) thanolamine (0.01) Pipridine (0.00045*) Pyrrolidine (0.005*) Moyenne DS p95

0,11

0,14

0,36

0,36

0,26

0,62

0,08

0,17

0,36

0,23

0,68

1,15

DS : dviation standard; p95 : 95e centile : Constante de nitrosation K au pH optimal des amines, arbitrairement octroy comme tant gal au K du dithylamine *: K tirs de Mirvish 1975

142
ANNEXE 4 Table 3 Estimation des excs de risque de cancer.

Nitrosamines NDELA (2,8) Rgions A B C D E F G Moyenne 4,7 x 10-10 6,7 x 10-9 2,3 x 10-11 5,6 x 10-9 7,9 x 10-11 4,1 x 10-10 2,8 x 10-10 P50 6,7 x 10-11 9,5 x 10-10 3,3 x 10-12 7,9 x 10-10 1,1 x 10-11 5,8 x 10-11 4,0 x 10-11 p95 1,9 x 10-9 2,6 x 10-8 9,2 x 10-11 2,2 x 10-8 3,1 x 10-10 1,6 x 10-9 1,1 x 10-9 Moyenne 3,6 x 10-10 5,2 x 10-10 1,4 x 10-10 4,3 x 10-9 6,1 x 10-11 3,2 x 10-10 2,2 x 10-10 N-n-PPA (7) p50 3,5 x 10-11 5,0 x 10-10 1,4 x 10-11 4,2 x 10-10 5,9 x 10-12 3,1 x 10-11 2,1 x 10-11 p95 1,4 x 10-9 2,0 x 10-6 5,4 x 10-10 1,6 x 10-8 2,3 x 10-10 1,2 x 10-9 8,2 x 10-10

Entre parenthse sont les indices de potentiel cancrogne qhumain; NDELA : Nnitrosodithanolamine; N-n-PPA : N-nitroso-n-propylamine; p50 : 50e centile; p95 : 95e centile.

143
Table 3 (suite)

Nitrosamines NPIP (9,4) Rgions A B C D E F G Moyenne 1,0 x 10-11 1,4 x 10-10 3,9 x 10-12 1,2 x 10-10 1,7 x 10-12 8,8 x 10-12 6,0 x 10-12 P50 7,1 x 10-13 1,0 x 10-11 2,8 x 10-13 8,4 x 10-12 1,2 x 10-13 6,2 x 10-13 4,2 x 10-13 p95 3,6 x 10-11 5,1 x 10-10 1,4 x 10-11 4,3 x 10-10 6,1 x 10-12 3,2 x 10-11 2,1 x 10-11 Moyenne 7,4 x 10-11 1,0 x 10-9 2,9 x 10-9 8,7 x 10-10 1,2 x 10-11 6,4 x 10-11 4,4 x 10-11 NPYR (2,1) p50 3,8 x 10-12 5,4 x 10-11 1,5 x 10-12 4,5 x 10-11 6,4 x 10-13 3,3 x 10-12 2,3 x 10-12 p95 2,2 x 10-10 3,2 x 10-9 8,7 x 10-11 2,7 x 10-9 3,8 x 10-11 2,0 x 10-10 1,3 x 10-10

NPIP : N-nitrosopipridine; NPYR : N-nitrosopyrrolidine.

144
ANNEXE 5 : analyse de sensibilit Tableau 4 Analyse de sensibilit

Contribution la variance du modle Paramtres du modle AQTam TIe TR NPPA 31 51 18 NPIP 42 43 15 NPYR 51 36 13

Coefficients Corrlation NPPA 0,39 0,50 0,29 NPIP 0,47 0,47 0,28 NPYR 0,52 0,44 0,26

AQTam : apport quotidien en amines, TIe : Taux dingestion deau, TR : taux de transformation, NPPA : N-nitroso-n-propylamine, NPIP :N-nitrosopipridine, NPYR :Nnitrosopyrrolidine.