Resumen: E-059

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E Comunicaciones Cientficas y Tecnolgicas 2005

Ketamina por HPLC

De Asmundis, Cecilia L. - Rinaldi, Diego S. - Delfino, Mario R. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura UNNE. Av Libertad 5450 (3400) Corrientes Argentina mdelfino@exa.unne.edu.ar Antecedentes La ketamina es un anestsico usado en la clnica veterinaria. Fue abandonado su uso como anestsico en la clnica mdica por sus efectos secundarios relacionados con alucinaciones, despersonalizaciones y delirio. Numerosos psiconautas que comenzaron a explorar los confines de sus mentes con sustancias alucingenas como el LSD continuaron con otras sustancias, entre ellas la ketamina. Actualmente, esta sustancia ha sobrepasado este mbito y est siendo utilizada como droga recreacional en las fiestas y discotecas. Qumicamente la ketamina es una ciclohexilamina. Su frmula es 2-(2-clorofenil)-(1-metilamino)-ciclohexanona clorhidrato, C13H16ClNO (peso molecular 237,72)

El clorhidrato de ketamina, su forma mas estable, es una sal cristalina blanca, soluble en agua hasta un 20 %. En su presentacin farmacolgica para uso veterinario es un lquido inyectable, incoloro, transparente y con adicin de cloruro de bencetonio al 0,1% que acta como antisptico y anticolinrgico. Sin embargo, en el mercado paralelo, la ketamina se presenta en cristales blancos reducidos, comprimidos y cpsulas y conforma un peligro mayor que otras drogas consumidas por los jvenes (cannabis, derivados anfetamnicos, etc.) dado que produce una rpida tolerancia y una alta dependencia psicolgica. Mezclada con alcohol o sedantes puede ser mortal; la incapacidad fsica que produce puede dar lugar a accidentes y presenta un riesgo importante por desencadenar patologas psiquitricas y muy probablemente pueda producir dao cerebral a largo plazo. La tcnica analtica mas comnmente usada para la deteccin de ketamina en fluidos corporales es la cromatografa gaseosa acoplada a plasma y ELISA. Sin embargo, dada la posibilidad de preconcentrar las muestras biolgicas en solventes apropiados, habilita la aplicacin de la cromatografa lquida con deteccin UV para su anlisis. Dado que en la regin del nordeste argentino no se realizan mediante ningn procedimiento analtico su determinacin, este trabajo implementa un camino operativo para tal fin, aprovechando las posibilidades que brinda la extraccin en fase slida a partir de muestras sricas y las de Extrelut para sangre entera, inclusive hemolizadas si provenieran de muestras forenses. Experimental Materiales y drogas (a) Ketamina recristalizada a partir de una solucin inyectable. (b) Soluciones de ketamina 1mg/mL en metanol a partir de (a) para diluir convenientemente en agua. (c) Columnas SPE marca Merck (Adsorbex RP-18 400 mg) (d) Columnas Extrelut NT 20 marca Merck. (e) Solventes grado HPLC (f) Muestras de suero y sangre entera hemolizada. (g) Cromatgrafo Lquido LKB con columna C-18 (12,5 cm x 4,6 mm) y detector UV. (h) Amonaco 0,025% (i) HCl 0,01 N. (j) Pool de sangre y de suero. Extraccin de ketamina a partir de sangre con columnas de Extrelut NT20 Se mezclan 4 mL de sangre entera y 16 mL de solucin de amonaco al 0,025% y se dejan 15 minutos para que se produzca la hemlisis. A este hemolizado se aaden un volumen adecuado de solucin estndar de ketamina para obtener una concentracin final de 5, 10 y 20 ppm. Otra muestra de sangre sin adicin se toma como blanco.

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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E Comunicaciones Cientficas y Tecnolgicas 2005 Se pasan las muestras y se espera 15 minutos para que se embeban suficientemente. Luego se eluyen con 40 mL de acetato de etilo y se recuperan. Se secan los eluatos bajo corriente de nitrgeno a 40C y se reconstituyen finalmente en 1 mL de fase mvil. Se inyectan en el cromatgrafo. Extraccin de ketamina a partir de suero con columnas SPE (RP-18 400 mg) Se acondiciona la columna con el pasaje de 1 mL de metanol seguido de 1 mL de agua. Se hace pasar luego 2 mL de suero seguido de 1 mL de agua hasta sequedad. Seguidamente, se aade a la columna 1 mL de metanol y se recupera el eluato en un tubo de ensayo. Se seca el eluato bajo corriente de nitrgeno y se reconstituye en 0,5 mL de fase mvil.

Condiciones Cromatograficas Fase Mvil: Metanol: Agua (50:50 v/v) Flujo: 1,00 mL/min Volumen de inyeccin: 20 microlitros Columna: C-18 (12,5 cm x 4,6 mm D.I.) Temperatura: ambiente Deteccin: UV - 210 nm Rango de absorbancia: 0,010 aufs Resultados En la Figura 1 se muestra un cromatograma tpico de la ketamina 10 ppm disuelta en la fase estacionaria. En rigor, dado el volumen molar de esta sustancia, la cintica de transferencia entre la fase mvil y estacionaria produce un ensanchamiento pronunciado en su pico cromatogrfico, lo cual deprime la altura de pico, restando sensibilidad. Por otro lado, esa misma dispersin cromatogrfica la diferencia de otroas sustancias que pueden eluir conjuntamente. Operando con sensibilidades superiores a 0,01 unidades de absorbancia a escala total se alcanza a determinar cuantitativamente concentraciones del orden de 1 ppm. La eficiencia de las extraccin por Extrelut a partir de sangre entera result 80-85% en base a la adicin realizada. La correspondiente a la extraccin en fase slida a partir de suero result 86-93 %. Considerando las preconcentraciones operadas a travs de estos dos caminos, la sensibilidad alcanzada por cromatografa lquida con deteccin UV es suficiente para detectar mnimas cantidades, tanto en suero como en orina, en relacin a las concentraciones respectivas en consumidores de esta sustancia (aprox. 1 a 20 ppm).

Fig. 1 : Cromatograma de ketamina disuelta en fase mvil

Conclusiones Los resultados encontrados, si bien deberan partirse de droga de calidad certificada, lo cual no ha sido factible hasta el momento, habilita a este procedimiento para la deteccin de ketamina tanto en sangre entera como en suero. Por su lado, no se ha ensayado con muestras de orina dado que no se ha conseguido hasta el momento norketamina y dehidronorketamina, los cuales conforman sus metabolitos mayoritarios y son los buscados cromatogrficamente en ese medio biolgico.

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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E Comunicaciones Cientficas y Tecnolgicas 2005 Bibliografa Rubinson, J. F. y Rubinson, K. A. Qumica Analtica Contempornea. Prentice Hall Hispanoamericana S.A. Mxico. (2000). Christian, G. D. Qumica Analtica. Editorial Limusa. Mxico. (1990). Skoog, D.; West, D. y Holler, F. Qumica Analtica. Editorial McGraw Hill. Mxico. (1995). Journal of Analytical Toxicology, ISSN 0146-4760, Volume 25, Number 7, October, pp. 583-593 J. Pawliszyn. Solid Phase Theory and Practice, Wiley. VCH. New York (1997)