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ADN de X174
La cromatina
La cromatina
Bucles de ADN
40 veces compactado
CROMATINA - NUCLEOSOMAS
Suspension de nucleos a baja fuerza ionica: lisis y liberacin de fibras de cromatina de 30 nm
FIBRA DE 10 nm
collar de perlas
Nucleasa microcccica
Digestin suave con nucleasa microcccica: se obtienen mltiplos de una determinada unidad de longitud: Repeticin nucleosomal
PARTCULA NUCLEOSMICA CENTRAL - 146 pb de ADN enrollados alrededor de la PARTCULA NUCLEOSMICA CENTRAL o CORE de histonas (2 vueltas)
-Tetrmero de H3 y H4
-2 dmeros de H2A y H2B
OCTMERO
Fibra de 30 nm:
Una vez que se forman los nucleosomas, la fibra de 10 nm se condensa en el siguiente nivel de compactado
ADN ligador
ADN ligador
Ambos modelos seran correctos. Dependen de: Longitud del ADN entre nucleosomas. 197 pb favorecera la forma solenoide (H1 estabiliza estructura) (Cromatina inactiva). Menor longitud entre nucleosomas (sin H1, cromatina activa)
Histona H1 o ligadora
- Protena pequea; un poco ms grande que las del core - Secuencia menos conservada
- Estructura tpica
Modelos:
Compactado en la fibra de 30 nm, un cromosoma humano an medira 0.1 cm = 10 veces ms grande que el ncleo celular!!
Niveles de mayor compactado (?) que varan en el ciclo celular en respuesta a seales del ciclo celular
Cromatina saliendo de un ncleo lisado en interfase
Cromosoma mittico
MODIFICACIONES POST-TRADUCCIONALES DE LAS HISTONAS DEL CORE -Lisinas y Serinas de histonas del core sufren acetilacin, metilacin, fosforilacin, ubiquitinacin.... - Mutaciones causan alteraciones de la expresin:
Ej. H4: *dominio R (aa 17 a 29) : implicado en represin
Cdigo de histonas
Cdigo de histonas
No est claro si algo as existe An si existiera, no es universal Sin embargo, estudios de todo el genoma si detectan patrones Una modificacin no conduce inevitablemente a un resultado
Favorecen la for macin y mantenimiento de un dominio trans cripcionalmente activo Secuencias MAR (Regiones de unin a la matriz); SAR (Regiones asociadas a andamiaje). Ricas en AT.
LCR (Locus control region): Elemento de regulacin formado por un sitio o grupo de sitios de hipersensibilidad a la DNasa I
Dominio funcional: Regin de cromatina sensible a DNAsa I, alrededor de un gen o grupo de genes. Algunas MAR se encuentran en los lmites de un dominio funcional, aunque no siempre.
EN VIRUS: ADN o ARN condensado dentro de las partculas virales por interacciones inespecficas con protenas de la cpside
CROMOSOMA EN PROCARIOTAS
Cromosomas circulares (la mayora)
LISIS
E.coli
Lisis: fibras en forma de bucles unidas a la envoltura rota de la clula. El ADN se une a protenas bsicas.
A diferencia de lo que ocurre en las clulas procariotas, el ncleo permite un mecanismo de regulacin de la expresin gnica ms complejo
ARNm ARNt premiRNA preribosomas ARNsn Protenas ribosmicas snRNP
Protenas nucleares
El ncleo en interfase
La envoltura nuclear separa el contenido del ncleo del citoplasma y proporciona un armazn estructural al ncleo.
Envoltura nuclear
Es una membrana doble que rodea al ncleo. La membrana nuclear tiene poros por donde pasan algunas molculas desde el ncleo al citoplasma y viceversa. Los poros nucleares son estructuras complejas que contienen por lo menos ocho subunidades proteicas con un canal pequeo en el centro.
Lmina Nuclear
Red de protenas fibrosas Modelar y reforzar la Membrana Interna Reforzar los complejos de poro nuclear Fijar la cromatina a la Membrana Interna
thin ring
star ring
spoke ring
NPC basket
perinuclear space
inner nuclear membrane nucleoplasm
Bagley, S. et al
Las seales de localizacin nuclear son reconocidas por protenas que funcionan como receptores de transporte nuclear. La mayora son miembros de la familia de protenas de la carioferina y funcionan como: Importinas (transportan macromolculas al interior del ncleo) Kap/Kapb1 Esnurportina/Kapb1 Kapb1 Kapb2 Importina 7/dmero Kapb1
Exportinas (exportan citoplasma) Crm1 CAS Exportina-t Exportina-4 macromolculas desde el ncleo al
Las pequeas protenas Ran unen GTP, se necesita para la traslocacin a travs del complejo del poro nuclear y determina la direccin del transporte. Ran es una GTPasa (superfamilia Ras) 2 formas: unida a GTP (principalmente en el nucleoplasma) unida a GDP (predonima en el citoplasma) La transicin entre las dos formas est mediada por 2 protenas: En el nucleoplasma: RanGEF (Factor intercambiador de guanina de Ran) En el citoplasma: RanGAP (Protena activadora de la Ran-GTPasa) Existe una elevada concentracin de Ran/GTP en el ncleo y una elevada concentracin de Ran/GDP en el citoplasma. Se cree que este gradiente de Ran/GTP determina la direccionalidad del transporte nuclear.
Cytoplasm
Export NTF2
Nucleoplasm
Importe de Protenas
Pasos: 1- Unin ImportinaRan/GDP a Protena 2- Unin a filamentos citoplasmticos del poro 3- En el ncleo el GDP es cambiado a GTP y se libera la protena 4- Complejo Importina Ran/GTP se exporta 5- Regeneracin del Ran/GDP
Exportacin de Protenas
Transporte de ARN
pre-miRNA snRNA Exportin5 cap, CRM1 (Exportin1), PHAX
snRNP
ribosomal subunits
Importin
CRM1 (Exportin1)
Transporte de ARN
Proceso activo, depende de Energa Exportados como complejos ribonucleoprotenas (RNPs). Protenas del complejo poseen seales de exportacin nuclear reconocidas por receptores. ARNr se asocian a protenas ribosmicas y especficas. Las subunidades nacientes se exportan. Los ARNsn se exportan y luego se importan
Protenas de unin a cola 3 poliA splicing factors Factores generales de unin a RNA (protenas de unin a exones) Otros factores involucrados en el procesamiento de premRNA
3. mRNP disassembly
mature mRNP
dissociate Mex67
1. mRNP assembly
Dbp5
x
x Mex67p Mtr2 Mtr2 Mex67p x Mex67p Mtr2 CBC 55
Ensamblaje
Los organizadores nucleolares se encuentran en los satlites de los cromosomas acrocntricos humanos
El ADN para el ARNr 5S se encuentra en una secuencia repetida en el cromosoma 1 y se transcribe por separado
El ncleo eucariota contiene adems de nuclolo una variedad de estructuras subnucleares dinmicas Cuerpos de Cajal
-Protena coilina -Ensamblaje de snRNP -Modificacin de U snRNA -Procesamiento del extremo 3 de mRNA de histonas -Regulacin del ciclo celular -Ensamblaje de factores de transcripcin -Sealizacin en apoptosis
Cuerpos PML y Cuerpos de Cajal se asocian Coilina-GFP (fluorescencia verde en Cuerpos de Cajal) + Anticuerpo anti PML (Fluorescencia roja)
Anticuerpo anti Coilina (fluorescencia roja en Cuerpos de Cajal) + Anticuerpo anti PML (Fluorescencia azul) + sonda que hibrida con gen U2 (verde).