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Microbiologa practica: 4Iv1 Aguilar Garca Karina

introduccion
tincin de Gram, denominada as por el bacterilogodans Hans Christian Gram, quien la desarrollo. Sobre la base de su reaccin a la tincin de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, gram positivas y gram negativas.

Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas

la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada,y se encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (decomposicin distinta a la interna) por medio de lipoprotenas. Tiene una capadelgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoprotenas. Lamembrana exterior est hecha de protena, fosfolpido y lipopolisacrido.

bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, adems de dos clases de cidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmtica, se encuentra el cido lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglucano .

La clave es el peptidoglicano, ya que esel material que confiere su

rigidez a la pared celular bacteriana, y las Grampositivas lo poseen en mucha mayor proporcin que las Gram negativas.La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a quela membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgnicos,como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano queposee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristalvioleta/yodo que se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa,perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las Grampositivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcinde peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sinoque este acta deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que puedaescaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violcea

DESARROLLO EXPERIMENTAL Tincin Gram


Hacer frotis de cada bacteria
Cristal violeta
Lavar con chorro suave de agua . Cubrir frotis con safranina ,dejar actuar durante 1min.

Colocar el frotis en forma vertical y usando fondo blanco decolorando aadiendo gota a gota alcohol-acetona (5-15 seg.)

Dejar actuar por 1min.


Dejar actuar por un minuto

Escurrir colorante y lavar con un chorro suave de agua .

Escurrir reactivo y lavar con chorro suave de agua

Observar al microscopio con el objetivo de inmersion.

Influencia de la edad de los cultivos bacterianos sobre la tincin de gram

Tcnica de gram por pasos


Hacer cuatro frotis con la mezcla de E.coliy B megaterium.

De cada uno de los cultivos viejos (96hrs.)hacer frotis

Teir los frotis con la tcnica de gram

Iniciar tincin Gram y separar un frotis despus despues de cada uno de los pasos de la tecnica

Observar al microscopio con el objetivo de inmersion

Observar al microscopio con el objetivo de inmersion

Influencia del tiempo de decoloracin en la tcnica gram

Resultados:

Morfologa Microscpica
Hacer dos frotis con una mezcla de E.coli y B.subtillis.

Microrganismo Escherichia coli. Staphylococcus aureus.

Forma Bacilos cortos Bacilos largos Cocos

Agrupacin Aislados Aislados Racimos

Gram

+ +

Teir los frotis con la tcnica de gram, dejando actuar el alcohol-acetona 3seg.en uno y 3min.en el otro

Bacillus subtillus.

Observar al microscopio de inmersion

Conclusiones
La tincin Gram funciona debido a que ambos tipos de

bacterias Gram (+) y Gram (-)se tien diferencialmente debido a las diferencias constitutivas de su pared.