Aspectos generales de la regulación génica

• Gen • Elementos reguladores • Proteínas de unión al ADN • Niveles de regulación génica

Regulación de la expresión en Procariotas
• Transcripción (etapas y aspectos generales) • Operón: estructura y tipos • Operón Lac y Trp

Conceptos
Gen: Secuencia completa de ácidos nucleicos necesaria para la síntesis de un producto génico (polipéptido o ARN) . Unidad de trascripción. Genoma: Información genética total transportada por una célula u organismo.

Expresión génica: Proceso de trascripción génica y traducción.

Genes
• Genes estructurales
– Codifican poteínas implicadas en procesos generales (metabolismo, catabolismo) o componentes estructurales de la célula

• Genes reguladores
– Codifican para ARN/proteínas que afectan la transcripción/traducción de otras secuencias
• Usualmente se unen al ADN

• Elementos reguladores
– Secuencias de ADN que no se transcriben – Sitio de unión de proteínas reguladoras

El “dogma” central del flujo de la información genética

Estructura del gen y el mensajero procariota

RNA Polimerasa
• Enzima responsable de la síntesis de RNA: RNA polimerasa DNA dependiente

– La RNA polimerasa procariota es una proteína con múltiples subunidades de ~480kD.
– En los sistemas eucariotas existen tres tipos de RNA polimerasas, cada una de las cuales es una proteína con múltiples unidades y responsable de la trascripción de diferentes RNAs.

ARN polimerasa procariota
Ensamblaje de la enzima; reconoce el promotor; enlaza algunos activadores Formación del enlace fosfodiéster; centro catalítico de la enzima

Unión al DNA molde; centro catalítico de la enzima. Confiere especificidad al sitio promotor

ARN polimerasa procariota

RNA polimerasa
Ciclo de la RNA pol bacteriana

El promotor bacteriano

Los promotores fuertes tienen además elementos UP corriente arriba

La RNA polimerasa (holoenzima) se une a secuencias del promotor mediante la interacción del factor sigma . El dominio CTD de la subunidad alfa se utiliza para incrementar la velocidad a la que se transcribe un gen mediante la interacción de éste con un elemento UP.

Terminación
 Independiente del factor Rho

Terminación
 Dependiente de Rho

Estructura del operón procariota
• En procariotas, genes con funciones similares se encuentran agrupados bajo el control del mismo promotor. – Se transcriben en un solo mRNA • El operón está conformado por el promotor, operador, y genes estructurales. – Promotor – sitio de unión de la ARN polimerasa – Operador – “on/off” switch; determina si la transcripción ocurre o no. • Regulador – No es parte del operón – Codifica para proteína regulatorias que se unen al operador.

Control génico
• Clasificación en base a la función de la proteína reguladora. – Control negativo • Función del represor – inhibe la transcripción – Control positivo • Función del activador – activa la trascripción • Clasificación en base al estado del operón – Inducible • Transcripción usualmente “off”; necesita ser activada. – Reprimible • Transcripción usualmente “on”; necesita ser silenciada.

Operón Lac
• Cuando la lactosa no está presente, hay muy bajo nivel de transcripción de los genes. • Cuando la lactosa está presente, la tasa de transcripción incrementa 1,000x (en minutos) • Operón inducible negativo – Negativo– el gen regulador inhibe la transcripción. – Inducible – normalmente en la posición “off” .

MUTACIONES DE LAC

Cis

Operón

Trans Independiente

Operador Lac
• Superposición del extremo 3′ del promotor y el extremo 5′ del primer gen estructural (lacZ)

IPTG

Región controladora del operón lac

Si se muta esta región, hay transcripción basal del operón lac, pero no hay estimulación de la transcripción por la proteina activadora del catabolismo (CAP) con AMPc .

Región controladora del operón lac

La unión del complejo CAP-AMPc al ADN produce una curvatura pronunciada en el ADN que activa la transcripción

Experimento que demuestra que la unión de CAP produce una curvatura en el mismo. (Wu y Crothers 1984)

Operón Triptófano

Codifica a enzimas participantes en la síntesis de Trp Al igual que el operón lac es un operón inducible negativo El sitio operador está en el mismo promotor, no adyacente como en el operón lac

Control del operón Triptófano mediante atenuación

Dos estructuras secuendarias distintas puede adoptar el ARN que se encuentra corriente arriba al gen trpE

Estructura más estable con dos horquillas Nivel de Triptófano alto

Estructura menos estable con una horquilla (antiterminador) Nivel de Triptófano bajo

Dos estructuras secuendarias distintas puede adoptar el ARN que se encuentra corriente arriba al gen trpE

Interruptores ribosómicos
(riboswitches) Que actúan como inhibidores de la traducción

Interruptores ribosómicos
(riboswitches) Que actúan como ribozimas

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