UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per; DECANA DE AMERICA)

Facultad de Farmacia y Bioqumica

BIOTECNOLOGIA BSICA

INMOVILIZACION DE ENZIMAS
Mg. Elena Benavides Rivera
LIMA - PERU

Obtencin y Purificacin de Enzimas

Obtencin: Bacterias, hongos o levaduras seleccionados por screening cultivados por fermentacin
Purificacin: tcnicas cromatogrficas tcnicas de concentracin.

Caracterizacin estructural: Tcnicas electroforticas, Ultra centrifugacin analtica, Espectroscopia.

La caracterizacin funcional: Estabilidad y actividad frente al pH y la temperatura, Estudios de especificidad de sustrato Estabilidad en condiciones de trabajo.

INMOVILIZACIN DE ENZIMAS VENTAJAS

Aumento de la estabilidad de la enzima. Reutilizacin Posibilidad de disear un reactor

INMOVILIZACIN DE ENZIMAS INCONVENIENTES

Alteracin de la conformacin Heterogeneidad del sistema EnzimaSoporte Perdida de Actividad

Biocatalizador ms caro que la E

BIORREACTORES
Tanque Agitado Tanque Agitado y alimentacin continua. Lecho Fluidizado y alimentacin continua.

BIORREACTORES
Lecho Empacado y alimentacin continua. Lecho Empacado, en continuo y con reciclado Tanque Agitado, alimentacin continua y recuperacin por ultra centrifugacin.

* * ** * * * * * ** *

* * ** * * * * * * ** * * * **

**

********

* * ** * * * * * ** *

METODOS DE INMOVILIZACIN
RETENCIN FSICA Atrapamiento Inclusin en Membranas UNIN QUMICA Unin a Soportes Adsorcin Enlace Covalente Reticulado

SOPORTES
INORGNICOS
Naturales (arcilla, Slice, P. Pomez, Bentonita, etc.) Manufacturados (Ox. De Metales, vidrio, almina, silicagel, cermicas)

ORGNICOS:
Polmeros Naturales Polmeros Acrlicos Otros

POLMEROS NATURALES
Celulosa Almidn Dextranos Agar agar Agarosa Alginatos Quitina Quitosan

Polmeros Sintticos:
Poliolefinas (poliestireno) P. Acrlicos (Poliacrilatos, poliacrilamida, polimetacrilatos, etc.

Otros: Alcohol polivinilo Poliamidas

Produccin

Inmovilizacin covalente de enzimas a soportes activados

O C H

Grupos aldehdo (soporte activado)

NH2

Grupos amino (lis reactivas)

pH 10

CH

N
Reduccin

C N

Intermedio Base de Schiff

Derivado enzimtico

Produccin

Estabilizacin de la enzima por unin covalente multipuntual

A travs de: varios residuos de la enzima unidos por brazos cortos al soporte

Rigididizacin 3D

Reduce los cambios conformacionales inducidos por codisolventes, temperatura...

Produccin

CLEA
Cross Linked Enzyme Aggregates

A PEG
Glutaraldehyde

Enzima Soluble

Enzima Precipitada

CLEA B

PEG

Glutaraldehyde

Enzima Soluble+ PEI + DS

Enzima Precipitada

CLEA DP

MEDIO ACUOSO

fase homognea

fase heterognea

gaseoso

supercrtico
MEDIOS NO CONVENCIONALES slido

orgnico

Medio Acuoso
Alta reactividad

Adecuado para reacciones hidrolticas

Adecuado para S y P hidrosolubles Baja estabilidad trmica

Difcil recuperacin de enzima y productos

Medios no Convencionales gaseoso supercrtico slido orgnico

Biocatlisis en Medio Orgnico

reacciones termodinmicamente desfavorables en agua hidrolasas en reacciones de sntesis alteracin de estados de ionizacin de reactantes solubilizacin de sustratos insolubles en agua reduccin de inhibicin por S y P por particin estabilizacin trmica fcil recuperacin del biocatalizador fcil recuperacin del producto alteracin de especificidad del biocatalizador alteracin de afinidad por S del biocatalizador condiciones aspticas baja actividad mayor complejidad

S + H2 O
proteasas

P1 + P2
pptidos

lipasas
glicosidasas

steres
oligosacridos glicsidos

Sistemas Macroheterogneos
acuoso-orgnico acuoso-acuoso E

Sistemas Bifsicos

transesterificacin de lpidos produccin de alquilpoliglucsidos cidos aril y ariloxipropinicos produccin de aspartame produccin de malil-tirosina lpidos estructurados glicosteres de cidos grasos polister saborizantes peptdicos antibiticos -lactmicos antibiticos glicosilados

Evolucin de la Biocatlisis
Enzimas en solucin en reacciones hidrolticas Enzimas inmovilizadas en reacciones de hidrlisis e isomerizacin Reacciones degradativas (escaso valor agregado) Enzimas con requerimientos de CoE Enzimas sin requerimientos de CoE Reacciones de sntesis (elevado valor agregado)

S
1

P
E

E CoE

E-CoE

CoE 3 E CoE E ECoE

Biocatalizador Biocatalizador en solucin inmovilizado

Proceso discontinuo

Proceso continuo

Produccin

comb.
m. obra

enzima
comb. m. obra enzima materia prima. Biocatalizador Inmovilizado

materia prima.

Biocatalizador Soluble

AMINOACILASA