Ral Quilaguy Jeisson Mayorga

El cultivo de tejidos se desarroll a partir de los ltimos aos del siglo XIX como una continuacin de las tcnicas de la embriologa. Wilhem Roux mantuvo en el ao 1885 clulas de embrin de pollo en solucin salina durante unos das. El zologo americano R.G. Harrison es considerado el iniciador de los cultivos de tejidos animales, en 1907

En 1913 Carrel demostr la posibilidad de mantener en cultivo clulas extradas de un animal, embrin de pollo, durante un periodo de tiempo superior al de la vida de ste. Mantuvo en cultivo clulas de pollo durante 34 aos (Sharp, 1977). Gran parte del xito en el mantenimiento de los cultivos se debi al desarrollo del denominado frasco de Carrel. Entre los aos 1920 y 1940 se desarrollaron diferentes estrategias de obtencin de cultivos y de mantenimiento de las condiciones estriles, pero sin grandes avances. A partir de los aos 40, con el aislamiento de los primeros antibiticos, se desarrollaron numerosas aplicaciones de entre las que podemos destacar : 1948 Earle y col. (Sanford, Earle y Likely, 1948) aislaron clulas de la lnea celular L y mostraron que eran capaces de formar clones en el cultivo de tejidos. Demostraron que para que una clula llegue a dividirse necesita ser alimentada con los nutrientes correctos. 1952. Gry y col. (Grey, Coffman y Kubicek, 1952) establecen la primera lnea celular continua, las actualmente bien conocidas clulas HeLa. El medio empleado era extremadamente complejo y poco definido: plasma de pollo, extracto de embrin bovino y suero de cordn umbilical humano. 1954 Rita Levi-montalcini y col. establecen que el factor de crecimiento nervioso estimula el crecimiento de los axones en tejidos en cultivo (Levi-Montalcini y Calissano, 1979). Este trabajo supuso el Premio Nbel para Levi-Montalcini en 1986.

1955 Eagle (Eagle, 1955) realiza la primera investigacin sistemtica de los requerimientos nutritivos de las clulas en cultivo. Describe que las necesidades del cultivo de soluciones corporales complejas (sueros,... ) pueden ser satisfechas por tan poco como el 1% de suero de caballo dializado en un medio definido de pequeas molculas (aminocidos, azcares, ...) 1961 Hayflick y Moorhead usaron por primera vez antibiticos para prevenir la contaminacin de los cultivos de fibroblastos. Pudieron mantener estos cultivos durante unos 12 pases, pero no consiguieron establecer lneas estables. 1965 Ham introduce el primer medio definido libre de suero capaz de mantener algunas clulas de mamfero en cultivo indefinidamente (Ham, 1965). 1969 Augusti-Tocco y Sato establecen la primera lnea celular estable de neuroblastoma aislando clones que establecan procesos nerviosos y que eran elctricamente excitables (Augusti-Tocco y Sato, 1969). Se empiezan a establecer las primeras lneas celulares diferenciadas. 1975 Kohler y Milstein establecen la primera lnea celular productora de anticuerpos monoclonales (Koehler y Milstein, 1975). El establecimiento de la tecnologa de obtencin de anticuerpos monoclonales les vali el Premio Nbel. 1976 Sato y col. publicaron sus trabajos en los que demuestran que las diferentes lneas celulares requieren mezclas distintas de hormonas y factores de crecimiento para crecer en medios libres de suero. (Sato y col., 1982).

En los ltimos aos la aplicacin de la tecnologa del cultivo celular ha permitido grandes avances en la comprensin de los mecanismos implicados en los procesos intracelulares e intercelulares con el establecimiento de co-cultivos,...

A pesar de que el primer animal del que se establecieron cultivos celulares era un anfibio, poiquilotermo, rpidamente el inters se centr en el cultivo de clulas de animales, especialmente humanas, por su gran inters mdico. Sin embargo en los ltimos aos, y especialmente debido a la problemtica del control de plagas e infecciones en agricultura y piscicultura, se ha desarrollado notablemente el establecimiento de lneas celulares de poiquilotermos e invertebrados.

En principio se defina como un mtodo para el estudio del comportamiento de las clulas animales libres de las variaciones sistmicas ocurridas dentro del organismo durante su normal homeostasis y bajo el estrs de un experimento. Actualmente se entiende por cultivo celular al conjunto de tcnicas que permiten el mantenimiento de las clulas 'in vitro', manteniendo al mximo sus propiedades fisiolgicas, bioqumicas y genticas. Dependiendo del grado de preservacin de la estructura del tejido o del rgano de origen y de su duracin hablaremos de diferentes tipos de cultivos: de rganos, explantes, primarios o secundarios, en mono capa, en suspensin, lneas celulares, tridimensionales

CULTIVOS EN MONOCAPA

Las clulas exhiben una variedad de "comportamientos sociales", permitiendo la formacin de una monocapa que cubrir la correspondiente superficie de crecimiento (confluencia), lo que hace que su multiplicacin sea inhibida cuando establecen contacto entre s (quiescencia). Las clulas provenientes de cultivos primarios son las que mejor crecen en sta condicin, dada su estabilidad gentica y su naturaleza diploide normal.

CULTIVOS EN SUSPENSION Las Lneas celulares que provienen de cultivos primarios con requerimiento de anclaje a superficies, tienen la propiedad de crecer de manera estacionaria o en suspensin despus de un perodo de adaptacin Existe evidencia experimental que los sistemas en suspensin tambin requieren de matrices que son macromolculas, que sirven de protectores a la superficie celular; stas macromolculas se encuentran en el suero, el cual contribuye igualmente con el medio de cultivo, proporcionando un sistema balanceado de nutrientes. Dentro de stas matrices est el Methocel, esencial para el crecimiento de cultivos en suspensin. Aunque el cultivo estacionario es ideal cuando se busca la elaboracin de productos extracelulares, el cultivo en suspensin es deseable cuando los productos son intracelulares o cuando se presentan problemas con la capacidad de anclaje de un determinado tipo de clula.

Cultivos primarios Los cultivos primarios tienen caractersticas especiales que los diferencian de las lneas celulares: conservan la morfologa de las clulas del rgano del que fueron aisladas, sus cromosomas tienen un nmero diploide (2n), su crecimiento in vitro es limitado y hay inhibicin por contacto. Al estar ms cercanas a las clulas que las originaron, se ve reflejado en una mejor actividad y funcionalidad similar a su ambiente natural, por lo que en aislamientos primarios de cepas virales stas tienen mayor sensibilidad que una Lnea Celular ya establecida. Igualmente para la produccin de vacunas los cultivos primarios son recomendables por tener una baja probabilidad de que se transformen en malignos. Dentro de las desventajas est la de una mayor probabilidad de presentar virus adventicios o latentes, lo que implica el desarrollo de la adecuada tecnologa para el control de calidad

LINEAS CELULARES

Las Lneas Celulares continuas estn formadas por clulas que se diferencian gentica y morfolgicamente de las clulas de las cuales se originaron. Pueden provenir de clulas que se derivan de tumores o de un proceso de transformacin de un cultivo primario mediante transfeccin con oncogenes o con tratamiento con carcinogenticos, lo que les confiere un nuevo fenotipo. Este tipo de cultivo tiene la caracterstica de no tener inhibicin por contacto y de crecer de manera indefinida. El paso de un cultivo primario a lnea se denomina transformacin. Una transformacin puede inducirse fisiolgicamente (interaccin celular, polaridad) a travs de hormonas como la hidrocortizona o utilizando inductores no fisiolgicos como el DMS

CULTIVOS TRIDIMENSIONALES

Son aquellos que buscan mantener la caracterstica o arquitectura del tejido in vivo. Los sistemas tridimensionales permiten estudiar la proliferacin y morfologa epitelial y su interaccin con otras clulas como son las del tejido conectivo; igualmente con ellos se puede evaluar el efecto de sustancias que pueden influenciar en tales interacciones intercelulares. Actualmente se producen Kits drmicos comerciales con base en cultivos, que permiten evaluar la citotoxicidad de componentes qumicos presentes en lociones, preservativos, detergentes, perfumes, shampoos y solventes entre otros. Los intentos de produccin de ste tipo de cultivo van desde el uso de telaraa (Harrison, 1914), pasando por el crecimiento de explantes en esponja de celulosa, (Leighton, 1951), as como la utilizacin de fibras de slica (Curtis y Varde, 1964) o de mallas de colgeno hidratado (Elsdale y Bard, 1972).

Como ejemplo de reas de investigacin fuertemente dependientes de las tcnicas de cultivo celular son: Virologa: establecimiento de condiciones de cultivo de virus animales y de plantas, produccin de vacunas antivirales,... Investigacin del Cncer Inmunologa. Gracias especialmente a la introduccin de las tcnicas de fusin celular en la produccin de anticuerpos monoclonales, as como en el anlisis de la gentica de la clula somtica. Ingeniera de protenas. Por la produccin de protenas en lneas celulares: interfern, insulina, hormona de crecimiento,... Estudios de interaccin y sealizacin celular, en la diferenciacin y en el desarrollo. Comprende el estudio de los receptores y de las vas de translocacin de la seal. Aplicaciones diagnsticas. Por ejemplo en medicina y farmacologa destacan el anlisis cromosmico de clulas crecidas a partir de muestras de amniocentesis, deteccin de infecciones virales, ensayos de toxicidad,... Aplicaciones mdicas: mantenimiento y produccin de tejidos para transplante. Aplicaciones industriales y agronmicas: produccin por reproduccin "in vitro" de clones de plantas de inters comercial,...

http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/chatain g/Cursos/Biologia_General/cultivos_celulares .pdf http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Cie ncias/neurobioquimica/libros/celular/cultivo s.htm http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/172 72/1/Cultivos_celulares_ACC_2010_11.pdf http://www.edicionesmedicas.com.ar/Actuali dad/Ultimas_noticias/Gripe_A_H1N1_la_vac una_aparecera_pronto