Dr.

Rene Crdenas Morales

Unidad de Hemoterapia y Banco de Sangre Instituto Nacional Cardiovascular-INCO

Composicion de la Membrana Plasmtica

Todas las MP son estructuras de lpidos y protenas unidos por enlaces no covalentes Adems contiene H de C La proporcin entre lpidos y protenas vara segn: * Tipo de membrana celular: Plasmtica, Complejo Golgi * Tipo de organismo: Procariote, vegetal, animal * Tipo de clula: Cartilaginosa, muscular, heptica, hematies. Las diferencias se correlacionan por la funcin que cumplen cada uno de los tejidos y organos.

PROTEINAS DE LA MEMBRANA PLASMATICA

INTEGRALES: Penetran en la Bic.

de Li.

PERIFERICAS: Se localizan por

completo en las superficies externa o interna de la MP ANCLADAS A LIPIDOS: Localizada fuera de la B de L, pero; unidos por enlaces covalentes a una mol. lipdica, situada dentro de la bicapa

Protenas Integrales

Protenas Perifricas

Protenas Ancladas a Lpidos

MEMBRANA DEL HEMATE

7% GLCIDOS 43% LPIDOS 50% PROTENAS

HIDRATOS DE CARBONO DE LA MEMBRANA DEL GLOBULO ROJO

MP del GR contiene 8% de HC Del 8% : 7% se une a lpidos (glucolpidos) 93% se une a protenas

(glucoprotenas)

Todos los HC se encuentran en el espacio extracelular Glucoprotenas: el HC es un oligosacrido, corto, ramificado (- de 15 azcares por cadena) El Ac.silico como azcar terminal de los oligosacridos :
-le confieren carga negativa -pueden unirse a diferentes aa.

Glc GLUCOSA

Fuc FUCOSA

GlcNAc N-ACETILGLUCOSAMINA NANA ACIDO N-ACETILNEURAMNICO

Gal GALACTOSA

Man MANOSA

GalNAc

N-ACETILGALACTOSAMINA

Bases Moleculares y Genticas de los Grupos Sanguneos

A

la fecha se conocen las bases mol. de 30 sistemas de grupos sanguneos. El estudio actual est orientado a: * Identificar los polimorfismos genticos * Su expresin en otros tejidos * La relacin entre la estructura y la funcin de de los grupos sanguineos.

El Sistema ABO
Es

uno de los mas importante en la medicina transfusional. Tiene tres antgenos. El antgeno H es convertido en el grupo A o B por accin de transferasas (N-Acetil-galactosa-miniltransferasa y galactosil-transferasa respectivamente) El fenotipo O resulta de una glicosil-transferasa inactiva, incapaz de glicosilar al antgeno H

Papel Biolgico de los Grupos Sanguneos

1.

2.

Antigenos determinados por carbohidratos: ABO- Hh- Lewis- P- Ii, son productos indirectos de los genes: Glucosiltransferasas Otros antgenos son polipptidos, productos directos de los genes: Rh, Duffy, Kell, etc.

Fluidos Biolgicos que Contienen Sustancias Solubles ABH

Saliva Orina Lgrimas Lquido Leche Lquidos

amnitico digestivos

ANTIGENOS ABH
Glbulos Rojos Plasma Leche Orina Secreciones Serosas y Mucosas

GLUCOLIPIDOS

GLUCOPROTEINAS O GLUCOLIPIDOS

GLUCOPROTEINAS

PRECURSOR DE TIPO I
Gal
1 1

GalNAc

Gal

UNIN 11 -

PRECURSOR DE TIPO II
Gal
11

GalNAc

Gal

UNIN 11 -

Formacin de la Sustancia H
H TIPO I
Gal
1 1 1

H TIPO II
Gal

GalN Ac

Gal

1 1 1

GalN Ac

Ga l

Fu c

Fu c

IMA NZ E
GEN H

GalNAc

1 1

Gal

GalNAc

Gal

Fuc

Gal

1 1

Gal

GalNAc

Gal

Fuc

GEN

ENZIMA

AZCAR AADIDO
GalNAc

A B H

Gal

Fuc

FENOTIPO
FRECUENCIA SUSTANCIA PRECURSORA

A1
1% 1 H1 H1 H1 H1

A1
1% 1 H1 H1

NMERO DE SITIOS ANTIGNICOS EN EL HEMATE ANTICUERPO PRESENTE EN EL SUERO

1 11 1 1 11 1 1 1 1 1
ANTI-B ANTI-B ANTI-A1 (1 %)

Subgrupos de A: A1 y A2

A1 y A2 muestran polimorfismo (2 genes diferentes) Genes productores de la transferasa (NAcetil-galactosa-minil-transferasa, cuali y cuantitativamente son diferentes Estos dos fenotipos pueden ser diferenciados con el Lectin anti-A1 Individuos A2 y A2B pueden producir anti-A1 inmune Anticuerpos naturales: A2 3% a 4% A2B 20% a 25%

OTROS SUBGRUPOS

A1
AX Am Aend Ael AFinn B1 BX Bm B el

FRECUENCIA por 1 1111 LOS HEMATES PRESENTAN UNA IMAGEN DE DOBLE POBLACIN EN SU REACCIN CON EL ANTI-A

MENOS FRECUENTES QUE LOS SUBGRUPOS DE A

Numero de Sitios Antignicos de los Subgrupos de A

Fenotipo
A1 A2 A3 A end Ax Am, Ay Ael

Aglutinabilidad
100 96 2 63 10 10 5 33 10 0 0

N de sitios Ag
1200,000 mol 221,000 mol 35,000 mol 3,500 mol 4,800 mol 1,200 mol 700 mol

Sustitucin de AA en las Transferasas A y B

Fenotipo Nmero de Aminocido 176 A B Arg Gly 235 Gly Ser 266 Leu Met 268 Gly Ala

Fuente: Human Blood Groups - Geoff Daniels, Oxford UK, BlackWell Science

Fuente: Human Blood Groups - Geoff Daniels, Oxford UK, BlackWell Science

Fuente: Human Blood Groups - Geoff Daniels, Oxford UK, BlackWell Science

DETERMINACION DE LOS FENOTIPOS A 1 A 1 y

Fenotipo Anti - A1 Anti - H A1 1a 1+ Neg. a(+/-) A1 Neg 1a 1+ A int* 1 + 1+ (*) : El fenotipo denominado A intermedio posee propiedades serologicas de A 1 A 1al ser probados y , con sueros o lectinas Anti A 1 Anti H y

FENOTIPOS ABO FRECUENTES

Antige nos Ge notipos Anticue rpos Fe notipos Globula re s Posible s Na tura le s A1 A1 A1 A1 1 A1 1 Anti - B O, A , A A1 A1 A1 A1 1 O, A Anti - B B B BB, BO Anti - A O Ause nte s OO Anti - A,B A1 B A1y B A1 B Ause nte s A1 B A1y B A1 B Ause nte s

ANTICUERPOS NATURALES E INMUNES ANTI-A , ANTI-B y ANTI-AB

Inmunizacin por Antgenos de Grupo Sanguneo ABO ANTICUERPOS NATURALES

Los RN no poseen alo-anticuerpos. Meses despus elaboran anticuerpos anti-A y anti-B No existe estmulo antignico bien definido La E. Coli posee Ags. Parecidos al grupo sanguneo B Otros Anticuerpos Naturales : Por estimulacin con determinantes antignicos comunes con las sustancias:

Anti-I , anti-Lewis, anti-P1 Anti-M , anti-N

Son de tipo IgM Reaccionan a T ambiente por debajo de 37C.

ALO ANTI-H
Y I
SIGNIFICATIVO CLNICAMENTE RANGO TRMICO

S
1 C 1 1 C

CLASE DE ANTICUERPO

REACCIONES TRANSFUSIONALES H. EXTRAVASCULAR H. INTRAVASCULAR

YI Y I

Y I

Y I

EHRN

Y I

AUTO ANTI-H
Y I
SIGNIFICATIVO CLNICAMENTE

NO
1 C 1 1 C

CLASE DE ANTICUERPO

RANGO TRMICO

NO

REACCIONES TRANSFUSIONALES H. EXTRAVASCULAR H. INTRAVASCULAR

NO

NO

YI Y I

Y I

EHRN

Y I

ANTI-A1
Y I
SIGNIFICATIVO CLNICAMENTE RANGO TRMICO RARO COMN REACCIONES TRANSFUSIONALES H. EXTRAVASCULAR H. INTRAVASCULAR

A VECES
1 C 1 1 C 1 1 C

CLASE DE ANTICUERPO

NO

NO

RARO

YI Y I

Y I

EHRN

Y I

ANTI-A ANTI-B ANTI-AB

Y I
SIGNIFICATIVO CLNICAMENTE RANGO TRMICO

S
1 C 1 1 C

CLASE DE ANTICUERPO

REACCIONES TRANSFUSIONALES H. EXTRAVASCULAR H. INTRAVASCULAR

YI Y I

Y I

Y I

EHRN

Y I

BIOLOGIA MOLECULAR DEL EL SISTEMa RH

RESEA HISTORICA

1939: Levine y Stetson: atribuyen causa de EHRN a Acs. contra los GR 1940: Landsteiner y Wiener : producen por inmunizacion de conejos con GR de M.R., Acs. que aglutinan 85% de GR humanos 1941-1943: se observan otros Acs. en politransfundidos 1943: Race: descubre dos Acs. C y c (Fisher-Race) 1945: Mourant descubre un Ac. que reacciona con el anti-rh. Los alelos fueron denominados E y e 1960: Levine y Col. descubren la Ig anti-D

EL SISTEMA RH
El

sistema Rh es el mas complejo de los grupos sanguneos, debido a la inmunogenicidad y al polimorfismo de sus antigenos Es el mas importante despus del sistema ABO

CARACTERISTICAS
Sistema

muy polimorfico : D,C,E,c,e,f,Ce,G,hrs, Cc, CE, c-like,cE,hrB Antigenos de baja prevalencia : Cw,Cx,V,Ew,Dw,hrW,Goa, Rh32, Rh33,Rh35, Tar, Rh42 etc. Antigenos de alta prevalencia Hro, Hr, Rh29, HrB, Nou, Sec, Dav, MAR

EL SISTEMA RH ALGUNAS CARACTERISTICAS

Estructura

qumica : proteica N en la clasificacin de la ISBT : 004 Nombre del sistema: Rh Smbolo del sistema RH: (RH D y RH CcEe) Nombre de los genes:
-RHD (CD 240D) : localizado en 1p34-36.2 -RHCE (CD 240CE): localizado en 1p34-36.2

Antigenos : 56 (O7 obsoletos)

( Vancouver report. Vox Sang 2003; 84: 244-247)

FUNCIONES DE LAS PROTEINAS DEL SISTEMA RH

Funcin

en la membrana : desconocida Deficiencia de fenotipo Rh : GR morfolgica y funcionalmente anormales Incremento de permeabilidad de cationes Anormal organizacin de fosfolipidos, movl. Asociacin GP, cambios

TEORIAS GENETICAS

FISHER-RACE WIENER Tres pares de genes Alelos mltiples alelos cuyos loci estan situados en un solo relacionados Locus Cada persona hereda 02 Los 2 primeros haplotipos.Identicos(ho genes: Rh y rh (el 1 mocigoto).Diferentes. capaz de producir el ( heterocigoto) Ag. Rh0 ) La combinacion en pares Gen:r,r, R1, R 2, R produce 36 genotipos 0 Muy aplicable para las reacciones serologicas Un Aglutingeno: Ags: D, Cc, Ee factores

TEORIA DE FISHER RACE

TEORIA DE FISHER RACE

TEORIA DE WIENER

H a p l o ti p o s y A n ti g e n o s d e F i sh e r -R a H a p l o ti p o s y A n ti g e n o s A n t is u e ro s D c e D c E d c e D c e d c E d C eD C Ed C E A nti - D + + - + - + A nti - C + - + + + A nti - E - + - + - + + A nti - c - + + + + A nti - e + - + + - + F re c u e n c ia F re c u e n t e s R a ro s

Fenotipos y Genotipos de Fisher-Race Fenotipos D+ C+ E- c+ e+ D+ C+ E- c- e+ D+ C- E+ c+ e+ D+ C- E+ c+ eGenotipos probables Tipo Frecuencia Dce/dce Dce/DCe DcE/dce DcE/DcE 34.39% 19.94% 12.24% 0.95% Genotipos Posibles Dce/Dce dce/Dce DCe/dCe DcE/Dce dcE/Dce DcE/dcE Dce/dcE dCe/DcE DCE/dce DCE/Dce Dce/dCE --Dce/Dce ---

D+ C+ E+ c+ e+

Dce/DcE

12.87%

D- C- E- c+ e+ D+ C- E- c+ e+ D- C+ E- c+ e+

dce/dce Dce/dce dCe/dce

15.40% 2.32% 0.95%

Ge ne s de W iene r y sus Productos Ge n Antgeno Factore s sa nguine os r rh hr' , hr'' r' rh' rh' , hr'' r'' rh'' rh'' , hr' ry rhy rh' , rh'' R0 Rh0 Rh0 , hr' , hr'' R1 Rh1 Rh0 , rh' , hr'' R2 Rh2 Rh0 , hr' , rh'' Rz Rhz Rh0 , rh' , rh''

Los Antige nos DCE y los Fa ctore s sa nguine os de W ie ne r D Rho C rh' E rh'' c hr' e hr''

Los Haplotipos DCE y los Genes de Wiener Dce R1 DcE R2 Dce R0 DCE Rz dce r dCe dcE dCE r' r'' ry

TEORIAS GENETICAS
CLASIFICACION NUMERICA DE ROSENFIELD

Nomenclatura numerica: Rh1, Rh2,Rh3,Rh4 Ideal para el sistema de informatica No tiene ninguna implicacion genetica Unico objetivo: clasificar antigenos, anticuerpos y genes Rh El fenotipo se expresa colocando el signo (--) antes del numero correspondiente al antigeno ausente. (ejm.: Rh-1,Rh-2 etc.

TEORIAS GENETICAS
1986:

Tippet: 2 Genes estructurales Gen RH D y Gen CcEe: expresan 6 Protenas Anlisis molecular: demuestran 2 genes Rh altamente homlogos Variantes RH, surgen procesos de mutacin, desigual crossing

TEORIAS DE LA HERENCIA
SISTEMA RH
FISHER 3 Gen Ag WIENER 1 Gen Ag Factores Rh1,Rh2,Rho TIPPET 2 gen RHD, RHCcEe

D,C,E,c,e

Prot.D, Prot CcEe

GENETICA MOLECULAR DEL SISTEMA RH

Se

identifico y secuencio 417 aa del Gen Rh Le Van Kim clono el gen RHD y RHCE 36 aa difieren por substituciones Se inicia N-terminal methionina : RNAm Polipptido Rh: 12 veces atraviesan la bicapa lipidica de la MP. Hay 6 dominios extracelulares

Modelo de las Proteinas RhD y RhCE en la Membrana de los Hematies

6 bucles extracelulares 12 segmentos o dominios transmembrana 7 segmentos intracelulares

GENES y PROTEINAS RH D
RH D
Trysin Lys 42, 43 Gly

Serina 103
152 121 169 170 172

Alanina
226
223

Bromel / Papaina Gly 353, 354 Ala

C-285 233 238 350

D
353 354

RH
SC. RD Palmitato
16 C-12 60 68

127 128

245 267 201 198 263

306

C-195 183

311 314 C-115

331

330 329 327 325

396

NH2 (1)

Tripsina

C-116

323

COOH (417)

FY

CROM KN

GENES y PROTEINAS RHCE

RH CE
RH
SC. RD
Tripsina Lys 42, 43 Gly

C/c (Ser/Pro)
103

E/e (Pro/Ala) 226

CE

Palmitate

.
Triysin ? NH2 (1)

COOH (417

FY

CROM KN

Posicion 103 representa variacin constante entre C/c Posicion 226 representa variacin constante entre E/e Posiciones no constantes: -16: C (cisteina) c (triptofano)
-60: C (isoleucina) c (leucina) -68: C (serina) c (aspartato)

EL ANTIGENO D
El

antgeno RHD es especial desde una perspectiva clnica por lo siguiente: 1.- Alta inmunogenicidad de los GR RH+ en
individuos RH 2.- Frecuencia y severidad de la EHRN causado por anti-D 3.- Problemas tcnicos asociados con las dificultades para la tipificacin RH D

El ANTIGENO D
Es el mas inmunogeno e importante 80% de Rh (-) si reciben Rh (+) : forman Anti-D Expresin del Ag D: variable de acuerdo a etnias

CLASIFICACION SEROLOGICA DEL ANTIGENO D

D Fuerte D Normal D Dbil
Aglutina en SSF con anti-D IgG 75,000 200,000 sitios antigenicos Epitopes completas: 36 10,000 33,000 sitios antigenicos Menor numero de antigenos Calidad normal : Du

D Parcial D Dbil-Parcial

Epitopes incompletos Cualitativa- Cuantitativa

VARIACION CUANTITATIVA DEL ANTIGENO D

R1r R2R2 DcE/dce DcE/DcE
10,000 30,000

D Debil
200 - 10,000

D VI
I :500 II :2,400 III : 12,000

DV
13,000 17,000

ANTIGENO D DEBIL
Denominado D dbil: Du (Stratton ) Menor N de sitios antignicos Reaccin: variable con los antisueros anti-D No es detectado por tcnicas de aglutinacin Detectado por tcnicas enzimticas o por TCI Los GR D dbiles deben ser consideradas como Rh POSITIVOS Bases moleculares del fenotipo D dbil han mostrado su gran heterogeneidad Producen aloinmunizacion

EPITOPES DEL ANTIGENO D NORMAL Y DEBIL

ANTIGENO D DEBIL (Du)

ANTIGENO D DEBIL HEREDITARIO

Tipos de los Fenotipos D Dbil

Fenotipo D Haplotipo Debil Asociado No Sitios Antigenicos

Tipo 1 Tipo2 Tipo 3 Tipo 4 Tipo 5 Tipo 6 Tipo 7 Tipo 8

Ce cE Ce ce cE Ce Ce Ce

1,285 489 1,932 2,288 296 1,053 2,407 972

Tipos de los Fenotipos D Dbil

Fenotipo D Haplotipo Debil Asociado No Sitios Antigenicos

Tipo 9 Tipo 10 Tipo 11 Tipo 12 Tipo 13 Tipo 14 Tipo 16 Tipo 21

cE cE ce Ce Ce cE cE Ce

248 1,186 183 96 956 --235 5,200

Mosaico de 9 epitopes Personas D+ con anti-D Forman alo anti-D:contra epitopes faltantes Presentes en GR RH+, ausentes en RH Caracterstica : falta de 1 o mas ep D Ep D 6/7 son mas inmunogenos Ep D presentes en todas excepto en Categora D VI

ANTIGENOS D PARCIALES

CONVENCIONALMENTE D PARCIAL SIGNIFICA UN CAMBIO CUALITATIVO, LA FALTA DE UNO O MAS EPITOPES.

SIN EMBARGO MUCHAS D PARCIALES TIENEN EXPRESION SIN EMBARGO MUCHAS D PARCIALES TIENEN EXPRESION DEBIL DEL ANTIGENO DEBIL DEL ANTIGENO

ANTIGENOS D PARCIALES
Tippet y Sanger: dividieron en VI Categorias (1,970) Interacciones con Anti-D

Adiciono Cat VII y I obsoleto En 198O potentes Anti-D monoclonal contra 9 epitopos (29 Acs) 18 Acs contra ep6/7

Actual. Variantes de D parcial 30 epitopes ( por estudios serologicos y biol mol.)

Ca te g oria s de Antige no s D P a rcia le s Epito p e s P re se nte s Ca te g oria e p D1 e p D2 e p D3 e p D4 e pD5 e p D6 e p D7 e pD8 e p D9 II + + + + + + + III a + + + + + + + + + III c + + + + + + + + + IV a ( G oa ) + + + + + IV b V a ( Dw ) + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

VI V II ( T a r ) + DFR -

ANTIGENO D DEPRIMIDO POR EFECTO DE POSICION TRANS CON RESPECTO AL ANTIGENO C

ANTICUERPOS DEL SISTEMA RH

SIGNIFICATIVO CLNICAMENTE RANGO TRMICO

S
37C 4C

CLASE DE ANTICUERPO

Y I
EHRN

REACCIONES TRANSFUSIONALES H. EXTRAVASCULAR H. INTRAVASCULAR

RARA