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Bactriophages

CES Bactriologie-Virologie
Professeur Moussa Fafa Ciss Mdecin Biologiste Facult de Mdecine de Dakar
31/12/2012 1

Introduction

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Dfinition
Virus spcifiques des Bactries Synonyme : phages

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Dcouverte

Auteurs Twort en 1915 DHrelle en 1917 Nombre > 5.000 phages diffrents

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Critres de classification

Nature acide nuclique Morphologie de la particule Enveloppe virale

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Classification des phages

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Phages gnome ADN

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Phages ADN bicatnaire

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Trois groupes

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Phages nus symtrie binaire Siphoviridae Myoviridae Podoviridae Phages nus symtrie cubique Corticoviridae Tectiviridae Phages envelopps Plasmaviridae

Phages nus symtrie binaire

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Phages nus symtrie binaire

Sont les plus nombreux 95% des phages dcrits Sont dits cauds Morphologie Tte cubique (renferme ADN) Queue hlicodale Contractile ou non Taille: 20 190 nm
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Principaux phages cauds

Siphoviridae (60%)

Enterobacteria phage , T1, T5

Mycobactries, Lactococcus Myoviridae (25%)


Enterobacteria phage T4, Enterobacteria P1, P2 EB phage T7 Bacillus phage 29

Podoviridae (15%)
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Deux autres groupes

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Phages nus symtrie cubique

Corticoviridae

Alteromonas phage PM2 Enterobacteria phage PRD1 Bacillus phage

Tectiviridae

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Phages envelopps

Plasmaviridae

Acholeplasma phage L2

Constitution Enveloppe Nucloprotine Absence de capside


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Phages ADN monocatnaire

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Deux groupes

Phages nus symtrie hlicodale Inoviridae Phages nus symtrie cubique Microviridae

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Microviridae

Morphologie Capside cubique ADN simple brin Diffrents phages


Enterobacteria phage x 174 Bdellovibrio phage MACI Chlamydia phage 1


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Inoviridae

Morphologie Long filaments Flexibles

Enterobacteria phage fd

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Phages nus gnomes ARN

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Leviviridae

Morphologie Capside cubique ARN monocatnaire

Enterobacteria phage MS2

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Cystoviridae

Morphologie Capside cubique ARN bicatnaire, segment

Pseudomonas phage 6

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Multiplication des phages

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Cycle lytique des phages

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Phage ADN

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Exemple des Myoviridae T

Adsorption et injection du gnome Rplication et synthse des constituants Assemblage des virus Libration des virus
Dure cycle = 22 minutes

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Adsorption et injection du gnome

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Sites de fixation bactriens


Lipopolysaccharide Protines de paroi Acides teichoques Flagelles Fimbriae

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Sites de fixation phagiques


Plaque terminale de la queue Fibres caudales Capside

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Fixation du phage

Contact alatoire phage-bactrie Par une fibre de la queue Reste des fibres se fixe rapidement Phage bien arrim sur bactrie

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Injection de lADN phagique

Enzymes prsentes au n plaque Perforent paroi bactrienne Contraction de la queue Canal central pntre dans bactrie Gnome phagique est inject

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Aprs injection du gnome

Colmatage brche dinjection Par des composants Synthtiss par enzymes virales Devenir phage dpourvu de son gnome Soit reste fix sur la bactrie Soit est dcroch
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Rplication et synthse constituants

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Phase prcoce

Synthse des enzymes virales prcoces Certains gnes sont transcrits en ARNm ARNm sont traduits en enzymes virales vnement cellulaires ADN bactrien dgrad en nuclotides Inhibition synthse macromolcules Synthse hydroxymthylcytosine qui remplace la cytosine dans le phage
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Phase tardive

Rplication ADN phagique Commence ds phase prcoce Formation copies gnomes du phage Gnes tardifs sont transcrits et traduits Protines virales constitutives Protines virales non structurales Protines de la lyse cellulaire
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Assemblage des virus

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Quatre phases
Construction de la tte Construction de la queue Construction des fibres Assemblage final du phage complet

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Droulement

Encapsidation de lADN dans la tte Tte associe la queue Dj porteuse de la plaque terminale Grce au collier Fibres se fixent enfin la queue Accumulation phages dans cytoplasme
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Libration des phages

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Lyse brutale de la bactrie

Intervention de 2 gnes phagiques Lun code le lysozyme Lautre code une protine entranant le lysozyme vers la paroi Libration de 300 phages environ

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Phage ARN

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Exemple des Leviviridae

Petits phages ARN (+), monocatnaire Sans queue Capside cubique Site fixation = pilus F et fimbriae Similitudes avec Enterovirus, HAV
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tapes

Fixation-pntration Reconnaissance/fixation sur pilus F Pntration : modalit mal dfinie ARN phagique est directement traduit Protine A fixation Protine de capside Rplicase Protine de lyse bactrienne
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Rplication

Formation intermdiaire de rplication Brin (-) sert de matrice ARNm protines virales ARNv (+) gnomes phages fils Dure du cycle 20 30 minutes

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Cycle lysognique des phages

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Phages temprs

Phages Phage Phages P2 P22 Phage Mu-1 ADNv intgr dans gnome bactrie Directement de faon covalente Ou comme plasmide On obtient un prophage
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tapes

Fixation-pntration Injection ADN phagique Circularisation de lADN phagique Transcription des ARNm 2 voies selon expression du rpresseur CI Cycle lytique Cycle lysognique
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Modalits de la lysognie

Synthse de protines prcoces CII et CIII CII se fixe sur promoteur PRE Activation synthse du rpresseur CI Rpresseur CI : est auto-activable Inhibe transcription des ARNm Stimule un autre promoteur qui augmente la synthse de CI
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Intgration du gnome phage

Mcanisme CII active expression dun intgrase int CI rprime transcription Enzyme int Intgre gnome du phage Dans un site prcis du gnome bactrie Grce au site att du gnome du phage
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Induction du cycle lytique

Agents inducteurs Ultras violets Agents chimiques mutagnes Mcanisme de linduction Diminution quantit rpresseur CI CI dgrad par enzymes bactriennes Gne xis excisionase qui sassocie int dont elle inverse le processus
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Rle et utilisation des phages

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Outils gntique molculaire

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Phages usuels

Phages filamenteux (Inoviridae) Phage M13 Phage fl Phage fd Phage

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Utilisation des phages

Modalits dutilisation Vecteurs de gnes Amplificateurs de gnes Buts Thrapie gnique Vaccination Production de protines
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Prparation des phages


Insertion simple de lADN tranger Dltion-remplacement Il faut conserver Squences cos Gnes de structure du phage

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Autres vecteurs drivs

Vecteurs drivs Cosmide: plasmide + squences cos Phagemide: plasmide + phage filamenteux Intrt Encapsids in vitro Capacit dinsertion gnomique +++

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Rle dans lenvironnement

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Rles bnfiques

Contrle densit bactries et biomasse 1010 UFP litre deau propre 108 UFP litre deau use Tmoins de contamination fcale

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Problmes pour industrie

Phages dtruisent bactries fermentaires Utilises pour production lait, protines

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Utilisation en bactriologie

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Facteurs de virulence

Production de toxines bactriennes Corynebacterium diphtheriae Streptococcus pyogenes Acquisition rsistance aux antibiotiques Staphylococcus aureus Streptococcus spp.
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Lysotypie bactrienne

Bactries souvent types Listeria monocytogenes Salmonella Staphylococcus aureus Indications de la lysotypie tudes pidmiologiques (pidmies) Dtection de Listeria dans aliments
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Autres organismes virus like

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Virodes

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Classification

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Critres de classification Homologie de squences Rgion centrale conserve ou non Deux familles Avsunviridae Virode brlure de lavocatier Rgion centrale non conserve Pospiviridae Rgion centrale conserve

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Structure des virodes

ARN (+) Monocatnaire Circulaire Sans rgion codant pour des protines 240 400 nuclotides Absence de capside

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Infectent les plantes

Agents pathognes parasites des plantes Tubercules Pomme de terre Mcanisme daction Parasitent appareil transcription hte Utilisent ARN pol II nuclaire de lhte
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Virusodes ou ARN satellites

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Composition
ARN satellites Encapsids avec des virus des plantes Ont besoin de virus auxiliaire Car ne peuvent pas se rpliquer seuls

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Merci
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