FEAD-MG

FACULDADE DE ESTUDOS ADMINISTRATIVOS DE MINAS GERAIS

Trabalho apresentado a disciplina de Imunologia do curso de graduao de Medicina Veterinria.

CITOMETRIA DE FLUXO
COMPONENTES

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CITO Clula METRIA Medida FLUXO Movimento

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uma tcnica de medio das propriedades de clulas em suspenso, orientadas em um fluxo laminar e interceptadas uma a uma por um feixe de luz (LASER).

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Um citmetro de fluxo similar a um microscpio.

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Um citmetro de fluxo tem 5 principais componentes: um fluxo de clulas uma fonte de luz - normalmente so usadas lmpadas; lasers de alto poder; lasers de poder baixo e lasers de diodo. um detector e conversor de sistema analgico para digital (ADC) um sistema de amplificao um computador para anlise de sinais.

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As clulas que sero analisadas se acoplam a um fluorocromo, diretamente ou atravs de uma protena.

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Um ncleo de um linfcito marcados com fluorforos (fluorocromos) diferentes: DAIP (azul, manchando o DNA, e as seqncias especficas de dois pares de cromossomos, verde e vermelho (FISH).

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Posteriormente, as clulas suspendidas em uma soluo fisiolgica so injetadas em um sistema de fludos para serem expostas individualmente a um jato de luz focalizada. um mtodo de leitura rpido, que permite analisar um elevado nmero de clulas A citometria de fluxo permite, alm de caracterizar os antgenos expressos pelas clulas, analisar o tamanho e a granulosidade celular.

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Sistema fluido Sistema ptico Sistema eletrnico

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Fluorescncia Comprimento de onda gerado pela excitao dos fluorocromos, aps atingir absoro mxima da luz do laser. O detector de FL1 (fluorescncia 1) O detector de FL2 (fluorescncia 2) O detector de FL3 (fluorescncia 3)

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As informaes provenientes dos diferentes sensores, so agrupadas, formando as caractersticas de cada clula que so expressas em um histograma

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Marcadores "cluster of differentiation" (CD) e um nmero especfico para identificar estes marcadores celulares. Cada CD refere-se a uma determinada molcula de superfcie celular (antgenos especficos) caracterizada por um conjunto de anticorpos monoclonais.

CD3 citoplasma e membrana de timcitos CD4 clulas T perifricas maduras, moncitos e macrfagos CD8 clulas T citotxicas CD20 e CD 19 clulas B maduras CD45 clulas hematopoiticas CD56 clulas NK

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Aplicaes Hematologia veterinria Para a hematologia veterinria o grande potencial de aplicao clnica desta tcnica inclui a quantificao das clulas CD34+ como indicao da capacidade de reconstituio hematopoitica aps transplante de clulas-tronco avaliando-se resposta imunolgica e subpopulaes linfocitrias. Esta tcnica tem uma ampla aplicao nesta rea cientfica, incluindo a avaliao de clulas-tronco hematopoiticas, contagem diferencial de clulas da medula ssea, eritrcitos, leuccitos e plaquetas.

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Aplicaes Avaliao de clulas-tronco hematopoiticas Avaliao da medula ssea Avaliao de eritrcitos Avaliao dos leuccitos Avaliao de plaquetas

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Vantagens Medio em partculas individuais, em um nmero levado, com rapidez e preciso e com a possibilidade de medir mltiplos parmetros em todas as clulas. Deteco de partculas raras. Velocidade, preciso e convenincia (dezenas de amostras por dia). Procedimento muito pouco destrutivo (necessita de muito pouca quantidade de material). Anlise de grandes populaes de clulas.

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Desvantagens Necessidade de clulas em suspenso. Alto custo diagnstico e do aparelho Mo-de-obra especializada.

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Bibliografia Metodologia e aplicao da citometria de fluxo na hematologia veterinria Disponvel em: http://www.scielo.br/pdf/cr/v35n4/a40v35n4.pdf Consultado em : 10/04/2012 Aplicaes da citometria de fluxo no diagnstico oncohematolgico Disponvel em: http://www.sbpc.org.br/upload/congressos/2_Aplicacoes_da_citometria_de_flu xo_no_diagnostico_onco-hematologico.pdf Consultado em: 11/03/2012 Citometria de fluxo Disponvel em: http://www.biomedicinapadrao.com/2010/06/citometria-defluxo.html Consultado em: 11/03/2012