MICROSCOPIO PTICO

ANDRS CHRREZ DAVID DVILA GABRIELA ECHEVERRA

CONCEPTO
Es un microscopio basado en lentes pticas. Tambin

se le conoce como microscopio de luz, microscopio fotnico (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek, sus microscopios constaban de una nica lente pequea y convexa, montada sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar (la muestra o espcimen).

PARTES DEL MICROSCOPIO Y SUS FUNCIONES

OCULAR
Es la lente situada cerca del ojo del observador.

Capta y ampla la imagen formada en los objetivos.

OBJETIVO
Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la

imagen de sta, lo que significa que es muy importante este elemento del microscopio, es un elemento vital que permite ver a travs de los oculares.

CONDENSADOR

Lente que concentra los rayos luminosos sobre la

preparacin.

DIAFRAGMA

Regula

la cantidad de luz que entra en el condensador.

FOCO

Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

TUBO
Es una cmara oscura unida al brazo mediante una

cremallera.

REVLVER
Es un sistema que coge los objetivos, y que rota para

utilizar un objetivo u otro.

TORNILLOS MACRO Y MICROMTRICOS

Son tornillos de enfoque, mueven la platina hacia

arriba y hacia abajo. El macromtrico lo hace de forma rpida y el micromtrico de forma lenta.

PLATINA
Es una plataforma horizontal con un orificio

central, sobre el que se coloca la preparacin, permite el paso de los rayos. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos y un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento permite mover la preparacin.

SISTEMA DE ILUMINACIN
Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la preparacin u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada. Comprende los siguientes elementos:

FUENTE DE ILUMINACIN

Se trata clsicamente de una lmpara incandescente

de tungsteno sobrevoltada; en versiones ms modernas con leds. Por delante de ella se sita un condensador (una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite controlar el dimetro de la parte de la preparacin que queda iluminada, para evitar que exceda el campo de observacin produciendo luces parsitas.

ESPEJO
Necesario si la fuente de iluminacin no est

construida dentro del microscopio y ya alineada con el sistema ptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele tener dos caras: una cncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara cncava se emplea de preferencia con iluminacin artificial, y la plana, para iluminacin natural (luz solar). Los modelos ms modernos no poseen espejos sino una lmpara que cumple la misma funcin que el espejo.

SISTEMA PTICO
El sistema ptico es el encargado de reproducir y

aumentar las imgenes mediante el conjunto de lentes que lo componen. Est formado por el ocular y los objetivos. El objetivo proyecta una imagen de la muestra que el ocular luego ampla.

PIEZAS PTICAS DE LOS MICROSCOPIOS

CONSTAN DE LOS SIGUIENTES:
O B J E T I V O S O C U L A R E S C O N D E N S A D O R E S Y C O L E C T O R E S .

EL OBJETIVO Y EL OCULAR CREAN EL AUMENTO TIL DEL OBJETO, ES DECIR, FORMAN EL SISTEMA DE OBSERVACIN: EL CONDENSADOR Y EL COLECTOR CONSTITUYEN EL SISTEMA DE ILUMINACIN DEL MICROSCOPIO.

OCULAR

Se encuentra situado en la parte superior del tubo.

Su nombre se debe a la cercana de la pieza con el ojo del observador. Tiene como funcin aumentar la imagen formada por el objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes de aumento van desde 5X hasta 20X. Existen oculares especiales de potencias mayores a 20X y otros que poseen una escala micromtrica; estos ltimos tienen la finalidad de medir el tamao del objeto observado.

OBJETIVOS

Se disponen en una pieza giratoria denominada

revlver y producen el aumento de las imgenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan cerca de la preparacin que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersin.

OBJETIVOS SECOS

Se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices que indican el aumento que producen, la abertura numrica y otros datos. As, por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el objetivo es planacromtico, su aumento 40 y su apertura numrica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El nmero de objetivos vara con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos ms frecuentemente utilizados son: 4X, 10X, 20X, 40X y 60X.

OBJETIVO DE INMERSIN

Est compuesto por un complicado sistema de

lentes. Para observar a travs de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparacin, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos crculos o anillos de color negro que rodea su extremo inferior.

OBJETIVO DE INMERSION

El medio ptico lquido que rellena el espacio entre

el objeto y el objetivo se le denomina lquido de inmersin. El ndice de refraccin de este es prximo al del vidrio (se utiliza agua, glicerina, aceites de cedro y de enebro, monobromonaftalina, entre otros).

CONDENSADOR
Est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar

los rayos luminosos sobre el plano de la preparacin, formando un cono de luz con el mismo ngulo que el del campo del objetivo. El condensador se sita debajo de la platina y su lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto con la preparacin cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliacin); existen condensadores de inmersin, que piden que se llene con aceite el espacio entre esa lente superior y la preparacin. La abertura numrica mxima del condensador debe ser al menos igual que la del objetivo empleado, o no se lograr aprovechar todo su poder separador. El condensador puede deslizarse verticalmente sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo, bajndose para su uso con objetivos de poca potencia.

DIAFRAGMA

El condensador est provisto de un diafragma-iris,

que regula su abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el contraste, lo que se hace cerrndolo ms de lo que conviene si se quiere aprovechar la resolucin del sistema ptico.

PODER SEPARADOR, OBJETIVOS DE INMERSIN Y AUMENTO TIL

Diagrama simple de la ptica de un microscopio.

PODER SEPARADOR, OBJETIVOS DE INMERSIN Y AUMENTO TIL.

PODER SEPARADOR
DE LA TEORA DE LA DIFRACCIN SOBRE LA FORMACIN DE IMGENES MEDIANTE UN MICROSCOPIO SE TIENE QUE LA DISTANCIA MNIMA ENTRE DOS PUNTOS VISIBLES POR SEPARADO ES:

2A

= LONGITUD DE ONDA DE LA LUZ MONOCROMTICA A= ES LA ABERTURA DEL MICROSCOPIO. POR ESO CUANTO MAYOR SEA LA ABERTURA NUMRICA A Y MENOR LA LONGITUD DE ONDA , MEJOR SER EL PODER SEPARADOR DEL MICROSCOPIO.

PODER SEPARADOR, OBJETIVOS DE INMERSIN Y AUMENTO TIL.

OBJETIVOS DE INMERSIN:
EL MEDIO PTICO LQUIDO QUE RELLENA EL ESPACIO ENTRE EL OBJETO Y EL OBJETIVO SE LE DENOMINA LQUIDO DE INMERSIN. EL NDICE DE REFRACCIN DE ESTE ES PRXIMO AL DEL VIDRIO (SE UTILIZA AGUA, GLICERINA, ACEITES CEDRAL Y DE ENEBRO, MONOBROMONAFTALINA, ETC.) EN LA FIGURA SE MUESTRA EL PAPEL DEL LQUIDO:

PODER SEPARADOR, OBJETIVOS DE INMERSIN Y AUMENTO TIL.

PODER SEPARADOR, OBJETIVOS DE INMERSIN Y AUMENTO TIL.

EN EL SISTEMA "SECO" EL FLUJO LUMINOSO SE LIMITA POR EL NGULO SLIDO U EN EL LADO SUMERGIDO POR EL NGULO UM DONDE

UM >U.

DE ESTA FORMA CON LA MISMA INTENSIDAD DE ILUMINACIN E IGUAL ABERTURA DEL CONDENSADOR, LA IMAGEN SE VERA MUCHO MEJOR CON EL OBJETIVO DE INMERSIN QUE EN "SECO". ADEMS ESTO ASEGURA AL MICROSCOPIO UN MAYOR PODER SEPARADOR.

PODER SEPARADOR, OBJETIVOS DE INMERSIN Y AUMENTO TIL.

AUMENTO TIL DEL MICROSCOPIO:
SE DEFINE COMO EL AUMENTO VISUAL DEL MICROSCOPIO QUE PUEDE SER UTILIZADO TOTALMENTE POR EL OJO DEL OBSERVADOR. POR EJEMPLO, UN OJO CON UN PODER SEPARADOR DE 2-4 IN, DEBE SATISFACER LA DESIGUALDAD:

500 < UT < 100 (19)

DONDE, SI SE SALE DE LOS RANGOS LA VISIN SER FORMADA POR ABERRACIONES.

Sistema de iluminacin
LA FUENTE DE LUZ, CON L AYUDA DE UNA LENTE, LLAMADA COLECTOR, SE REPRESENTA EN EL PLANO DEL DIAFRAGMA IRIS DE ABERTURA DEL CONDENSADOR. ESTE DIAGRAMA SE INSTALA EN EL PLANO FOCAL ANTERIOR DEL CONDENSADOR Y PUEDE VARIAR SU ABERTURA NUMRICA. EL DIAGRAMA IRIS DISPUESTO JUNTO AL COLECTOR ES EL DIAFRAGMA DE CAMPO. EL OBJETO SE PROYECTA POR EL OBJETIVO EN EL PLANO DEL DIAFRAGMA DE CAMPO, QUE COINCIDE CON EL PLANO FOCAL ANTERIOR DEL OCULAR.

Sistema de iluminacin
LA PUPILA DEL OJO DEL OBSERVADOR SE HACE COINCIDIR CON LA PUPILA DE SALIDA DEL MICROSCOPIO. PARA EL OJO NORMAL LOS HACES DE RAYOS DESPUS DEL OCULAR SON PARALELOS. EL HAZ DE RAYOS DE UNA FUENTE DE LUZ CON ILUMINANCIA IRREGULAR ASEGURA CON EL SISTEMA DE ILUMINACIN UNIFORME DEL CAMPO VISUAL. SI POR RAZONES RELACIONADAS CON EL TAMAO Y AL HABER POSIBILIDADES DE DESPRECIAR LA ACCIN TRMICA DE LA LUZ, ES POSIBLE INSTALAR STA EN EL PLANO DEL DIAFRAGMA DE ABERTURA DEL CONDENSADOR, ENTONCES EL SISTEMA DE ILUMINACIN SE SIMPLIFICA.

 La resolucin de los microscopios pticos est restringida

por un fenmeno llamado difraccin que, dependiendo de la apertura numrica (AN o AN) del sistema ptico y la longitud de onda de la luz utilizada (), establece un lmite definido (d) a la resolucin ptica. Suponiendo que las aberraciones pticas fueran despreciables, la resolucin sera:

Normalmente, se supone una de 550 nm, correspondiente

a la luz verde. Si el medio es el aire, la AN prctica mxima es de 0,95, y en el caso de aceite de hasta 1,5. Ello implica que incluso el mejor microscopio ptico est limitado a una resolucin de unos 0,2 micrmetros.

CARACTERSTICAS PTICAS DE LOS MICROSCOPIOS

Aumento

Poder de resolucin
Apertura numrica

Cmo se calculan los aumentos de un microscopio?

El aumento final que se obtiene con un microscopio se calcula, multiplicando el Valor del aumento del objetivo por el valor del aumento del ocular.

Qu es el Poder de Resolucin?

El poder de resolucin es la capacidad de un

instrumento para producir imgenes distintas depuntos situados muy cerca uno deotro en el objeto.
El poder de resolucin (R) se calcula de la siguiente

forma: R = 0,61 x L /AN

Qu es la Apertura Numrica?

Es la capacidad de un lente objetivo de utilizar ms

o menos rayos luminosos para formar la imagen. Este valor se encuentra inscrito enla moldura de los lentes objetivos.

Cmo se calcula la Apertura Numrica?

La apertura numrica de un objetivo se obtiene

multiplicando el ndice de refraccin del medio (n) por el valor del Seno del semingulo (a) del cono de luz incidente en el objetivo. AN = n x Sen a

TIPOS DE OBJETIVOS Y SUS CARACTERSTICAS

Aunque todos los componentes que constituyen Un microscopio son importantes, los objetivos son de suma importancia, puesto que la imagen, en definitiva, depende en gran medida de su calidad. Los mejores objtivos son aquellos que estn corregidos para las aberraciones.

Qu son las aberraciones?

Las aberraciones son alteraciones pticas en la formacin de la Imagen debidas a las propias lentes del objetivo. Pueden distinguirse las aberraciones geomtricas y las aberraciones cromticas.

Existen diferentes tipos de aberraciones geomticas (esfrica, astigmatismo, en coma, curvatura de campo, distorsin en cojn o en barril), y todas ellas se traducen en una alteracin de la forma de la imagen.
Las aberraciones cromticas provocan distorsiones en los colores.

Cmo se corrigen las aberraciones?

Para evitar las aberraciones geomtricas se construyen los llamados objetivos planos, lo cual suele estar indicado en el propio objetivo con La inscripcin PLAN. Los objetivos que estn corregidos para las aberraciones cromticas se denominan: - Acromticos (corregidos para el rojo y el azul), - Semiapocromticos (corregidos para el rojo y el azul y tienen una mayor apertura numrica) - Apocromticos (que son de mayor calidad y estn corregidos para el rojo, el azul y el verde)

Qu indican las diferentes inscripciones que pueden leerse en un objetivo?

En un objetivo deben venir especificadas una serie de datos que hacen r eferencia a sus caracterticas:
Fabricante/Pas. Por ejemplo: Zeiss/West Germany Numero de serie. Tipo y correccin. Si no llevan ninguna especificacin es que se trata de

objtivos acromticos. Denominaciones frecuentes que pueden encontrarse son: PLAN = objetivo planacromtico NEOFLUAR = objetivo con apertura numrica incrementada PLANAPO = objetivo planapocromtico ULTRAFLUAR = objetivo especial para fluorescencia

Qu indican las diferentes inscripciones que pueden leerse en un objetivo?

Aumentos y Apertura Numrica. Por ejemplo: 25/8 Longitud de tubo/cubreobjetos. Por ejemplo: 170/0,17 [cm/mm] Cuando se encuentra la inscripcin Korr se indica que el objetivo

puede regularse para diferentes grosores de cubreobjetos.

Inmersin. Indica el tipo de lquido que se necesita un objetivo.

Oil= Inmersin en aceite W = Inmersin en agua Glyc: Inmersin en glicerina.

GRACIAS