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CONTRLE DE LA QUALIT DES MILIEUX ET DES RACTIFS

F. OHMANI INSTITUT NATIONAL D HYGIENE

I - PRINCIPE :
Le contrle des milieux de culture et ractifs reus ou prpars au laboratoire

Travailler dans des rgles de conformit strictes

Des rsultats meilleurs, Plus fiables Reproductibles

II - METERIEL
Pour raliser ce contrle, on aura besoin de matriel suivant :

Un rfrigrateur Un autoclave Une tuve Un conglateur - 20C ou - 80C Des boites de ptri striles Des tubes essai vis striles Un pH mtre Un bain marie de 45C 100C Milieux dshydrats tester Ractifs prts lemploi tester Souches de rfrence.

III - CONTRLE DE LA QUALIT DU MATRIEL

On ne peut effectuer des tests de bonne qualit si le matriel utilis est de mauvaise qualit ou mal entretenu

contrler et entretenir le matriel du laboratoire

IV- CONTROLE DE LA QUALIT DES MILIEUX DE CULTURE ET DES RACTIFS


1- A la rception : Livraison de nouveaux lots Le fournisseur est tenu de remettre Responsable de gestion,

Une attestation de CQ du produit livr par le fabriquant


Cette attestation tiendra lieu de contrle initial.

V- CONTROLE DE LA QUALIT DES MILIEUX DE CULTURE ET DES RACTIFS :


2- Au moment de lemploi : Ouverture dun nouveau lot de ractifs ou de produits

Raliser un ensemble de tests de contrle Noter les rsultats sur la fiche dvaluation

Classer la fiche

1- Milieux dshydrats :
Deux types de caractres doivent tre contrls
1. Caractristiques physico-chimiques 2. Caractres bactriologiques ou preuves

defficacit

a. Caractristiques physico-chimiques
Laspect de la poudre : lisse ou granule La dissolution de la poudre dans leau au bain-marie : rapide ou lente Le pH pH indique par le fabriquant Aspect du milieu prpar : solide, liquide semi-liquide Couleur du milieu prpar.

b. Caractres bactriologiques ou preuves defficacit:


Juger la fiabilit Tester avec des souches de rfrence dfaut avec des souches de laboratoire de ractivit connue Tableau N1

Noter les rsultats sur la fiche dvaluation des milieux

Tableau N1:lefficacit des milieux couramment employs

Milieux

Dure dincubation

Micro-organismes de contrle S.pyogenes ATCC 19615 S.pneumoniae ATCC 6035 Staphylocoque aureus ATCC 25923 E.coli ATCC 25922

Rsultats attendus Croissance + hmolyse Croissance + hmolyse Croissance

Glose au 24h avec ou sang sans CO2

Croissance

Milieux

Dure Micro-organismes Rsultats attendus dincubation de contrle


Croissance

GC+ isovitalex 24h, CO2 (jarre Haemophilus.influenz bougie) ae ATCC 10211

Muller Hinton

24h

E.coli ATCC 25922 S.aureus ATCC 25923 P.aeruginosa ATCC 27853

Dimensions et zones acceptables selon le C.Q de lantibiogramme.

Bouillon Trypticasesoja

24h

S.pyogenes ATCC 19615 E.coli ATCC 25922 E. coli P. mirabilis

Croissance

Croissance
Ngatif Positif (rose)

Milieu lure 24h

Milieux
Glose CLED ou PBC

Dure Micro-organismes dincubation de contrle


24h E.coli

Rsultats attendus
Colonies de 1 2 mm de lactose (+) Colonies de 2 3 mm de lactose (-) Colonies < 1 mm de Colonies rouges Colonies incolores centre noir Colonies incolores Colonies incolores Colonies jaunes Colonies jaunes Colonies roses Pas de croissance Croissance et noircissement Pas de croissance

P.mirabilis
E.faecalis Glose SS 24h E.coli S.typhimurium Y.enterolitica S.flexneri Milieu TCBS Milieu Chapman Bile-Esculine azide 24h 24h Vibrio spp S.aureus S.epidermidis E.coli E.faecalis S.pyogenes

24h

Milieux Milieu simmonscitrate Recherche de phnylalanine dsaminase Milieu MRVP Milieu Malonate Recherche des dcarboxylases : - lysine :

Dure dincubation 24h

Micro-organismes de contrle E.coli K.pneumoniae E.coli P.mirabilis E.coli K.pneumoniae E.coli K.pneumoniae S.typhimurium S.flexneri

Rsultats attendus Pas de croissance Croissance, virage au bleu Ngatif Positif Positif / ngatif Ngatif / positif ngatif positif Positif Ngatif

24h

24h 24h

24 48h

- Ornithine :
- Arginine :

24 48h
24 48h

S.typhimurium K.pneumoniae
S.typhimurium P.mirabilis

Positif Ngatif
Positif Ngatif

2 - Ractifs prts lemploi


Conditionnement

Les ractifs sont prsents sous forme : Disques (tuits) Bandelettes Lyophilis Poudre Liquide Lefficacit des ractifs couramment employs

Tableau N 2:

Tableau N 2: Lefficacit des ractifs couramment employs


Ractifs Espces pouvant tre testes Raction positive ONPG Disques dOptochine E.coli ATCC 25922 S.pneumoniae ATCC6305 Raction ngative S.typhi murium S.mitis Milieux utiliss TSA GS

Oxydase
Facteur V

P.aeruginosa ATCC27853
H.parainfluenzae

E.coli ATCC 25922


H.influenzae ATCC 10211

TSA
TSA

Facteur V + X
Kit Gram Galerie Neisseria NH

H.influenzae ATCC10211
Staphylocoque [Gram(+)] Neisseria Gonnorhae

H.parainfluenzae
E.coli [Gram(-)] S.aureus ATCC 25923

TSA
PBC GC + polyvitex

Espces pouvant tre testes

Ractifs

Raction positive

Raction ngative

Milieux utiliss

Pastorex mningitidis

N.meningitidis B Pas dagglutination ATCC 13090 avec tous les autres H.influenzae b ATCC groupes. 10211 S.pneumoniae ATCC 6306 Strepto B ATCC 12386

GC + polyvitex

Disque de lactamase

H.influenzae lactamase (+)

H.influenzae ATCC 10211

GC + polyvitex

Espces pouvant tre testes

Ractifs

Raction positive

Raction ngative

Milieux utiliss

Glucose

N.gonnorhae ATCC 430069

Branamella cataralis ATCC 25240

Lactose

N.lactamica ATCC 23971

N.gonnorhae ATCC 430069


N.gonnorhae ATCC 430069 N.gonnorhae ATCC 430069 S.pyogenes

GC + polyvitex

Maltose

N.meningitidis ATCC 13090 N.sicca ATCC 9913 S.pneumoniae ATCC 49619

Saccharose

GS

Test de lyse par les sels biliaires

FICHE DEVALUATION DE MILIEU DESHYDRATE Milieu : Marque: Date dexpiration : Lot : Conditionnement :

Analyses
- Caractres physico-chimiques

Rsultats obtenus

Rsultats Thoriques

Aspect de la poudre Dissolution Aspect du milieu prt pH Conditionnement - Activit bactriologique Souches utilises
*

Rsultat Final : Conforme Contrle effectu par :

Non Conforme Le :

FICHE DEVALUATION DE GALERIE API

Identification de la galerie API : Lot N : Date dexpiration : Analyses Aspect des substrats : Tests bactriologiques: Souches utilises * *
Rsultat final : Conforme Contrle effectu par : Le : Non Conforme

Rsultats obtenus

Rsultats Thoriques

RESULTAT DU CONTRLE
La personne responsable de lvaluation doit poser une tiquette pour chaque milieu et ractif contenant : la date douverture la date du test dvaluation La date limite de validit (DLV) La date limite dutilisation (DLU) la lettre C pour les milieux conformes. Les lettres NC pour les milieux non conformes.

V ARCHIVAGE
Rsultats

Fiches dvaluation

Classeur appropri

VI CONSERVATION:

1- Des milieux dshydrats et des colorants


A la temprature ambiante Bien fermer les couvercles Eviter lhumidit atmosphrique Mettre dans un endroit sombre, frais et bien ar.

VI CONSERVATION:
2- Des ractifs
la temprature recommande par le fabriquant : + 4C ou - 20C
Eviter les conglations et dconglations successives.

Aliquoter le ractif ou le srum en portions suffisantes pour chaque test

VII - ELIMINATION

Les milieux, ractifs ou colorants doivent tre jets lorsque :


DLU dpasse

DLV dpasse
Apparition des signes de dtrioration

(trouble, prcipit, changement de couleur ou daspect).