Dr.

Antonio Barbadilla

Estructura y replicación del material genético
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Tema 6: Estructura y replicación del material genético

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Estructura y replicación del material genético
Deberán quedar bien claros los siguientes puntos:
•Cómo se descubrió la naturaleza química del material hereditario •La composición química de los ácidos nucleicos •La estructura 3D del DNA: naturaleza complementaria y antiparalela de la doble cadena del ácido desoxirribonucleico (DNA) •La extraordinaria capacidad explicativa del modelo del DNA de la función biológica fundamental de esta molécula •La replicación semiconservativa •Enzimología de la replicación
Dr. Antonio Barbadilla

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Tema 6: Estructura y replicación del material genético

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La transformación bacteriana en Streptococcus pneumoniae (Griffith 1928)
Rugosa

Muerte por neumonía

Cepa resistente

Lisa

Dr. Antonio Barbadilla

No muere 3

Tema 6: Estructura Muere y replicación del material genético

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¿Cuál es el Principio transformante?

Principio Rugosa Lisa

Dr. Antonio Barbadilla

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Tema 6: Estructura y replicación del material genético

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Colin MacLeod

El elemento transformante es el DNA (1944)

Maclyn McCarty Oswald Avery

Ver animación experimento tranformación bacteriana
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicación del Sólo DNA produce transformación material genético

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Antonio Barbadilla 6 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 6 .Experimento de Alfred Hershey y Martha Chase con fagos (1952) Bacteriófago T4 El DNA es el material infeccioso Dr.

Antonio Barbadilla 7 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 7 .Componentes de los ácidos nucleicos adenina timina guanina citosina Dr.

Dr. Proporción de purinas = Proporción de pirimidinas A+G=C+T 2.Reglas de Chargaff 1. Antonio Barbadilla A=T G=C Tema 6: Estructura y replicación del material genético 8 3. 8 .

1953. Watson y F. Crick resuelven la estructura tridimensional del DNA (Nature 171: 737-738) Watson y yo hemos encontrado el secreto de la vida Dr. Antonio Barbadilla 9 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 9 . Año culminante: J.

Año culminante: Dos líneas de evidencia: •Reglas de Chargaff •Fotografías de difracción de rayos X Dr.1953. Antonio Barbadilla 10 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 10 .

Significado reglas de Chargaff Dr. Antonio Barbadilla Complementariedad de las bases Tema 6: Estructura y replicación del material genético 11 11 .

Antonio Barbadilla 12 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 12 .Difracción de rayos X Hemoglobina Linus Pauling Dr.

Antonio Barbadilla 13 Crick del Tema 6: Estructura y replicación material genético 13 . Franklin Dr.Interpretación del patrón difracción de rayos X del DNA Rosalind E.

Antonio Barbadilla doble hélice. Watson y F. La estructura se mantiene gracias a enlaces de hidrógeno entre las bases nitrogenadas que se encuentran orientadas hacia el interior de las Tema 6: Estructura y replicación del 14 material genético 14 cadenas J.Modelo en metal del DNA Dr. Crick Concluyen: La estructura del DNA es una . formada por cadenas orientadas en direcciones opuestas (antiparalelas).

Antonio Barbadilla Doble hélice.Dr. La estructura se mantiene gracias a enlaces de hidrógeno entre las bases nitrogenadas que se encuentran orientadas hacia el interior de las cadenas Tema 6: Estructura y replicación del 15 material genético 15 . formada por cadenas orientadas en direcciones opuestas (antiparalelas).

Desnaturalización del DNA •Separación de las dos hebras por calor •Una mayor proporción G-C tiene una mayor temperatura de desnaturalización (‘fusión’) 100 Porcentaje G + C 80 60 40 20 70 80 90 100 110 material genético 16 Dr. Antonio Barbadilla Temperatura de fusión (desnaturalización) Tema 6: Estructura y replicación del 16 .

Dr. Antonio Barbadilla Hélices levógiras y dextrógiras Tema 6: Estructura y replicación del material genético 17 17 .

Dr. Antonio Barbadilla DNA-B dextrógira Tema 6: Estructura y replicación del material genético 18 18 .

Antonio Barbadilla 19 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 19 .Ver artículo Nature 1953 Dr.

Antonio Barbadilla 20 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 20 .Dr.

C) •El mecanismo de replicación exacta de los genes •La naturaleza química de las mutaciones •Por qué la mutación.La estructura del DNA suministra una explicación asombrosamente simple del fenómeno de la herencia La estructura explica: •La naturaleza de la secuencia lineal de los genes (información digital cuaternaria en secuencias unidimensionales de monómeros A.T.G. Antonio Barbadilla . la recombinación y la expresión génica son fenómenos separables a nivel molecular Tema 6: Estructura y replicación del 21 21 material genético Dr.

Esencial a la relación íntima entre estructura molecular y función genética del DNA es el concepto de molde La complementariedad de las bases nitrogenadas permite que la secuencia de una cadena sencilla de DNA actúe como un molde para la formación de una copia complementaria de DNA (replicación) o de mRNA (transcripción) Tema 6: Estructura y replicación del material genético 22 Dr. Antonio Barbadilla 22 .

Esto es para mí la prueba verdadera de la existencia de Dios Salvador Dalí Antes pensábamos que nuestro futuro estaba en las estrellas.Y ahora las declaraciones de Watson y Crick sobre el ADN. James Watson Dr. Antonio Barbadilla 23 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 23 . Ahora sabemos que está en nuestros genes.

Una estructura tan bonita tenía. que existir Dr. por fuerza. Antonio Barbadilla 24 Tema 6: Estructura y replicación del material genético J. Watson 24 .

Una estructura tan bonita tenía. por fuerza. 25 Watson . Antonio Barbadilla 25 Tema 6: Estructura y replicación del material genético J. que existir Dr.

Antonio Barbadilla Tema 6: Estructura y replicación del material genético 26 .C (cristal aperiódico) 26 Dr.El DNA contiene información digital cuaternaria en secuencias unidimensionales de monómeros A.T.G.

. infinidad helicoidal asombrosa. de formas infinidad cada de vez formas más bellas cada vez y maravillosas más bellas y maravillosas Charles Darwin Dr.Hay grandeza en esta concepción de la vida. se han desarrollado y se están desarrollando. a partir de un una comienzo molécula tan sencillo. que mientras este planeta ha ido girando según la constante ley de la gravitación.. Antonio Barbadilla 27 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 27 ..

Antonio Barbadilla 28 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 28 .Replicación del DNA Dr.

Dr. Antonio Barbadilla 29 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 29 .25 de Abril 1953 It has not escaped our notice that the specific pairing we have postulated immediately suggests a possible copying mechanism for the genetic material.

Antonio Barbadilla 30 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 30 .Posibles modelos de replicación Dr.

Replicación del DNA •Semiconservativa: una cadena sirve de molde para una nueva cadena •El experimento de M. Stahl (1958) demuestra que la replicación es semiconservativa Mathew Meselson Dr. Antonio Barbadilla Frank Stahl Tema 6: Estructura y replicación del material genético 31 31 . Meselson y F.

Dr. Antonio Barbadilla 32 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 32 .

coli •DNA polimerasa I (rellena huecos y repara) •DNA polimerasa II y III (función principal en la síntesis) •Añade bases en ambas cadenas en la dirección 5’  3’ •Requiere un 3’ OH final •Eucariotas •5 polimerasas • y  principal en replicación •. mecanismos de reparación adicionales la reducen hasta 10-10 33 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 33 Dr.  y  exonucleasas •Corrección de pruebas: actividad 3’  5’ exonucleotídica.Replicación del DNA •Enzimas que sintetizan (replican) el DNA •E. Antonio Barbadilla . Sustituye bases mal emparejadas (10-5) por correctas (10-7).

Las polimerasas conocidas añaden nucleótidos solamente en la dirección 5’  3’ 3’ 5’ Dr. Antonio Barbadilla 34 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 34 .

Dr. Antonio Barbadilla 35 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 35 .

¿Por qué no hay una enzima que polimerice en la dirección 3´-> 5? No funcionaría la corrección de errores por falta de un trifosfato que suministre la energía de enlace covalente azúcar-fosfato Dr. Antonio Barbadilla 36 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 36 .

Antonio Barbadilla 37 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 37 .Adición 5’3’ Dr.

P P P P P P P P P Dr. Antonio Barbadilla P P 5’ 3’ P PP + H2O P P P OH OH P 38 P P P P OH P OH P P Tema 6: Estructura y replicación del material genético P P P 38 P .

Adición 3’5’ (hipotética) Dr. Antonio Barbadilla 39 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 39 .

Antonio Barbadilla 40 Tema 6: Estructura y replicación del material genético Adición 3’5’ (hipotética) OH OH OH OH P P P P P P P P P .P P P 40 P P P P P P P 3’ 5’ PP P P P + H2O P P P P P Dr.

Antonio Barbadilla 41 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 41 .Corrección de errores Dr.

Antonio Barbadilla P P P P P P P P P 5’ 3’ P PP + H2O P P P OH OH P 42 P P P P OH P OH P P Tema 6: Estructura y replicación del material genético P Adición 5’3’ 42 P P P .P P Dr.

Antonio Barbadilla 43 Adición 3’5’ (hipotètica) Tema 6: Estructura y replicación del material genético OH OH P P P P .P 43 P P P P P P P P 3’ 5’ Dr.

cebador sólo inicio) y discontinua (cadena retrasada) •Discontinua •Cebador (pequeño RNA 2-60 nucleótidos añadido por enzima primasa o RNA pol que provee 3’ OH. enlace fosfodiéster) Dr. •Fragmento de Okazaki por DNA pol III (1500 bp en procariotas y 150 en eucariotas) •Pol I elimina cebador 3’ -> 5’ y llena huecos (gap) •Ligación (DNA ligasa. Antonio Barbadilla 44 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 44 .Replicación del DNA (2) •Replicación: continua (cadena adelantada.

Dr. Antonio Barbadilla 45 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 45 .

Dr. Antonio Barbadilla 46 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 46 .

Polimerasa III Polimerasa I Dr. Antonio Barbadilla 47 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 47 .

Antonio Barbadilla 48 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 48 .¿Por qué el cebador es RNA? El cebador es más proclive al error. por lo que debería eliminarse y el RNA puede detectarse y eliminarse fácilmente por la DNApol I Dr.

maquinaria molecular •Dímero de la DNA pol III (núcleos catalíticos) •Primosoma: formado por dos enzimas •Primasa •Helicasa (desenrolla el DNA) •Proteína de unión a cadena sencilla. ssb (Unión Y.Replicación del DNA (3) El replisoma: complejo enzimático de la replicación que coordina la síntesis de las dos cadenas. Antonio Barbadilla 49 . estabiliza el DNA de cadena sencilla) •Topoisomerasas tipo I (rotura una cadena) y II (rotura de dos cadenas) junto a DNA ligasa -> Relajación del superenrollamiento Tema 6: Estructura y replicación del 49 material genético Dr.

El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria Dr. Antonio Barbadilla 50 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 50 .

El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria Dr. Antonio Barbadilla 51 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 51 .

Antonio Barbadilla 52 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 52 .El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria DNA pol III + abrazadera beta -> Enzima procesiva Dr.

El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria Dr. Antonio Barbadilla 53 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 53 .

Topoisomerasas Dr. Antonio Barbadilla 54 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 54 .

coli) por proteínas iniciadoras. Antonio Barbadilla 55 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 55 .Replicación del DNA (4) •Origen de replicación: •Secuencia reconocida (Ori C en E. Varios orígenes en eucariotas •La replicación es bidireccional Horquilla replicación Dr.

Cada unidad de replicación es un replicón. Antonio Barbadilla 56 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 56 . La replicación es bidireccional Dr.En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orígenes de replicación (~500 en levaduras y 60000 en mamíferos).

La replicación es bidireccional Dr.En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orígenes de replicación (~500 en levaduras y 60000 en mamíferos). Cada unidad de replicación es un replicón. Antonio Barbadilla 57 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 57 .

Links de interés Watson-Crick original paper (1953 Nature) Trabajos estelares del descubrimiento de la doble hélice DNA: el secreto de la vida (Animación) Celebración 50 aniversario descubrimiento de la doble hélice en la UAB DNA Structure The Search for DNA .The Birth of Molecular Biology Image Library of Biological Macromolecules .DNA DNA berkeley DNA Learning Center Beginner's guide to Molecular Biology Glosario de Genética molecular DNA Replication Animación de la replicación Dr. Antonio Barbadilla 58 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 58 .

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