Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
ENDCAPPING
El trmino "endcapping" fue introducido a finales de los
aos 70, cuando se hizo evidente que algunos silanoles son todava accesibles despus de modificacin superficial con ligandos de cadena larga. Trimetilclorosilano es el reactivo ms comn para cubrir accesibles silanoles residuales. Esta molcula es relativamente pequea y puede penetrar a la superficie de la slice y para abarcar "tope" algunas reas irregulares de silanoles sin reaccionar. Por lo general, conduce a la mejora significativa de las propiedades adsorbentes de fase reversa (menos asimetra y retencin ms predecible de compuestos polares).
USO
Uso: Almacenar la columna en un solvente recomendado por el fabricante.
18
PRECAUCIONES
Precauciones: No exceder rango de pH de la columna.
19
MANTENIMIENTO Y REGENERACION
Mantenimiento y Regeneracin:
REGENERACION
Regeneracin de una columna Adsorcin irreversible de las impurezas derivadas de la matriz en la cabeza de la columna puede causar cambios en la selectividad o divisin de picos. A menudo esas "columnas sucias" puede ser regeneradas mediante la aplicacin de los siguientes protocolos.
FASE REVERSA
La regeneracin de empaque RP RP-empaques son fases estacionarias C18, C8, C4, C1, C30, fenilo. Lavar la columna con:
Agua 20 volmenes de columna
Acetonitrilo 20 volmenes de columna Isopropanol 5 volmenes de columna Heptano 20 volmenes de columna Isopropanol 5 volmenes de columna Acetonitrilo 20 volmenes de columna
Volumen de la columna
Para estimar el volumen de
columna se puede utilizar la siguiente ecuacin: V = *r2*L Donde: V : Volumen de columna en mL r : Radio de la columna en cm L : Longitud de la columna en cm
Otro protocolo
FASE NORMAL
La regeneracin de empaque NP (fase normal) NP-empaques son slice, Diol, nitro y amino fases estacionarias. Lavar la columna con: Heptano 20 volmenes de columna Isopropanol 5 volmenes de columna Acetonitrilo 20 volmenes de columna Agua 20 volmenes de columna Acetonitrilo 20 volmenes de columna Isopropanol 5 volmenes de columna Heptano 20 volmenes de columna
Otro protocolo
INTERCAMBIO IONICO
La regeneracin de empaque de intercambio de iones
Los empaque de intercambio inico son de aniones o cationes (WCX, SCX, WAX y SAX). Lavar la columna con :
20 volmenes de columna del mismo eluyente, pero el doble
concentracin de buffer.
Siga el protocolo de regeneracin de empaque RP
Otro protocolo
COLUMNA
LA COLUMNA: Es responsable de la separacin de los componentes. Requerimiento generales para una columna: Funcionamiento reproducible de columna a columna Suficiente numero de platos tericos para el anlisis. Empaque de partcula de tamao uniforme. Fcilmente obtenible. Larga duracin (resistente) Bajo costo.
COLUMNA
Frit
El componente poroso en cualquiera de los extremos de una columna que sirve para contener el empaque de columna. Es colocado a los extremos de los tubos de la columna, o ms comnmente, en el final del fitting. Los Frits son hechos de acero inoxidable u otro metal inerte o plstico, como PTFE poroso o polipropileno. Fittirng final y Frits (aparte del empque de la columna, estas partes de la columna son mas susceptibles de daarse por uso inapropiado). El empaque de la columna se sostiene dentro de la columna por los trits, y los frits se sostienen dentro de la columna por el Fitting final.
COLUMNA
CARACTERISTICAS COLUMNAS
LONGITUD . Las columnas vienen a tamaos diferentes, con el dimetro interno (i.d). de la mayor parte de columnas igualan a 4.6 milmetros (el mm) = 0.46 centmetros La longitud de la columna es por lo general 10 o 15 cm de largo,
RELLENOS DE COLUMNA
Ataque qumico
Las causas mas importantes por las cuales una columna falla son:
Ataque qumico
Ciertas fases mviles pueden quitar la fase enlazada de la superficie de la partcula de silicona, rompiendo el enlace qumico que sostiene esta capa orgnica a la silicona. Adems estas mismas fases mviles a menudo pueden disolver a la misma silicona. Las mas agresivas son las fases mviles que son bsicas (el pH mayores que 7) o fuertemente cidas (el pH menos de 2.5). Entonces la mayor parte de cromatografistas evita estos extremos de pH al desarrollar las condiciones para un procedimiento LC. Si usted realmente trabaja en el pH ms alto, es posible usar los empaques de columna que sobre todo son diseados para soportar pH extremos.
TAPONAMIENTO DE LA COLUMNA
Taponamiento de la columna con partculas La segunda causa de falla de columna es el taponamiento del frit o el empaque de la columna por las pequeas partculas de residuos . Estas partculas a menudo son introducidas con la muestra, lo cual quiere decir que cualquier muestra que contiene partculas debera ser filtrada, usando un filtro de 0.5 micras que esta diseado para muestras de HPLC. Si usted est en la duda sobre la presencia de partculas en la muestra, solamente sostenga la solucin de la muestra (que usted va a inyectar) contra la luz, y agite con cuidado. Usted debera ser capaz de ver partculas flotantes o un aspecto nublado - si hay cualquier problema.
TAPONAMIENTO DE LA COLUMNA
Choques mecnicos
La tercera causa de dao de columna es el choque mecnico. Recuerde que la columna es un artculo caro, varios cientos de dlares, entonces trtelo con el respeto que esto merece. No deje caer la columna, y cuando no es instalado sobre el sistema LC lo ponen con cuidado en su caja original para la proteccin. Hay otros modos de daar una columna, adems de la golpeadura de ella. La fase mvil que se mueve por la columna ejerce una fuerza sobre el empaque de la columna, y si esta fuerza es bastante grande, esto causar que las partculas de columna se compriman juntas ms fuerte - o an romper las partculas .Esto entonces conduce a la formacin de espacios vacos en el empaque a la entrada de la columna. Un vaco va a en casi todos los casos causando una prdida catastrfica en el funcionamiento de columna, y requieren su reemplazo.
Adsorcin de impurezas
Adsorcin de impurezas
La causa final de dao de columna es la adsorcin de impurezas de muestras "sucias". Las muestras que son sacadas de las plantas o especimenes de animales, muestras ambientales, o mezclas de reaccin qumica, a menudo contienen los compuestos que son fuertemente atrados a la fase enlazada. Estos gradualmente se acumulan sobre la columna y bloquean la superficie de la fase enlazada. Los picos de la muestra entonces muestran la disminucin en el tiempo de retencin y el aumento de ancho, y tarde o temprano la columna debe ser desechada. Esta acumulacin " de la basura qumica " sobre la columna puede ser evitada por una limpieza inicial de la muestra antes de la inyeccin. Las columnas que han acumulado estas impurezas, en algunos casos, pueden ser regeneradas, lavando la columna con solventes convenientes
grupo funcional C18, sin embargo, habr espacios restantes que no estn modificados. Aquel parte se denomina "silanol residual" y la presencia de silanoles residuales puede influir en la separacin. A menudo para desactivar el residuo de silanol en los geles se aplica un tapado de extremos (endcapping). Casi todas las columnas de ODS hoy en da son desactivadas <>, sin embargo, dependiendo del tipo de analito, la presencia de silanol pueden obtener mejores resultados de separacin.