Bacillus spp

Siever Morales Cauti Mdico Veterinario UNMSM Laboratorio de Microbiologa

Gnero Bacillus
Caractersticas generales

Bacilos grampositivos esporulados Aerobios o anaerobios facultativos Ubicuos en la naturaleza Especies ms importantes:
B. anthracis: Carbunco B. cereus: Intoxicaciones alimentarias

Bacillus anthracis

Grampositivo bacilo

Anaerobio Facultativo
1 - 1.2m ancho x 3 - 5m largo

Pertenece a la familia B. cereus Requiere para su crecimiento Thiamin capsula de Glutamylpolypeptido No movil
Endosporas de forma oval y central

http://www.bact.wisc.edu/Bact330/lectureanthrax

Caractersticas

No mvil Aerobio Encapsulado Forma esporas que no produce ensanchamiento de la bacteria, mide aprox. 1 u Colonias grandes, blancas grisceas, de bordes ondulados cabeza de medusa Existen colonias lisas, rugosas y mucoides; la rugosa es la ms virulenta.

Bacillus anthracis

Bacillus cereus

Bacillus subtillis

Motilidad
Hemlisis TSA TSB Cpsula Hidrlisis dela gelatina Penicilina Patogenicidad

Cabeza de medusa Copos de algodn + LENTA SENSIBLE +++

+
+ Rugosas irregulares TUR. SED RAPIDA NO SENSIBLE -/+

+
+ Grisceas dentadas PEL. TRU SED -

Endospora

Oxigeno necesario para la esporulacin

Celulas deshidratadas Altamente resistente al calor, frio, desinfectantes quimicos, periodos secos El protoplasto contiene la informacin para la siguiente clula vegetativa
La corteza proporciona resistencia a la radiacion La pared porporciona resistencia quimica y desinfectantes

http://www.gsbs.utmb.edu/microbook/ch015.htm

Gentica

1 cromosoma
5.2 million bp Ames strain sequenced

2 plasmidos
px01 184 kbp Isla de patogenicidad pX02 95.3 kbp Cpsula
gib.genes.nig.ac.jp/single/ main.php?spid=Bant_AME

Where is Anthrax?

http://www.vetmed.lsu.edu/whocc/mp_world.htm

Anthrax

De la palabra griega anthrakos para carbn Causado por esporas Primariamente una enfermedad de: Herbivoros como ovinos, bovinos, equinos, cabras.

Reservorio natural el suelo: No depende de un reservorio No puede ser cultivado de suelo, cuando no es endmico Ocurre esporadicamente en diversas zonas. Zonas de Anthrax Suelo rico en materia organica (pH < 6.0) Cambios dramticos de clima

Anthrax Infeccin - Diseminacin

Puede ser difundido por corrientes, insectos, animales silvestres, aves, desechos, etc. Animales infectados por agua, alimento, o mordedura de algun insecto. El riesgo de una infeccin natural es de 1/100,000 Ocurre en areas endmicas, despues de un brote en ganaderia

Muerte sbita

Tres formas de Anthrax

Cutaneoanthrax Piel Mas comun Las esporas entran a traves de pequeas lesiones Inhalacion anthrax Las esporas son inhaladas Gastrointestinal (GI) anthrax Esporas por ingestion Oral, faringeal, y abdominal

Bacillus cereus

Desarrollo en agar sangre a las 24 horas

Bacillus subtillis

B. anthracis/B. subtillis

Bacillus anthracis
-

1769: Se describe por primera vez, la enfermedad en animales y en el hombre 1847: Se describe el Carbunclo humano en Argentina (Dr. Francisco Muiz) 1850: Daver y Davaine observan al microscopio formas bacilares en sangre. 1865: Davaine demuestra que como agentes causales de la enfermedad. 1876: Koch efecta el primer cultivo puro. 1878: Koch demuestra la presencia de esporos. 1880-81: Pasteur prepara la vacuna. 1910: Ascoli y Valente efectan la prueba de termoprecipitacin.

Bacillus anthracis
El ntrax o carbunco es una enfermedad infecciosa aguda que normalmente afecta a animales como bovinos, ovinos, caprinos, camellos, y otros herbvoros, pero tambin puede afectar a humanos cuando se exponen a animales infectados o tejidos de animales infectados, mientras que las aves y los reptiles por su temperatura corporal son resistentes.

Bacillus anthracis: Factores de Virulencia

Factores de Virulencia
Los bacilos de ntrax expresan dos factores de virulencia:

Capsula. Toxina

Todas las cepas de B. anthracis reportadas como virulentas son portadoras de los plsmidos PXO1 y PXO2.
La falta de uno de los dos da lugar a cepas atenuadas que son las que se utilizan para la produccin de vacuna.

Genes estructurales

PXO2 96 kb
Gen regulador dep Sntesis

capB capC capA

cido poli D-glutmico

Cpsula

Cpsula

Acido D-glutmico, es un polipptido de alto peso molecular

Forma una cpsula, que envuelve la pared celular y contribuye con la patogenicidad permitiendo:
La evasin de los mecanismos de inmunidad y defensa como la fagocitosis. Convierte en incoagulable la sangre Responsable de las reacciones inflamatorias y necrticas.

PXO1 - 181 kb Factor de Edema Antgeno Protector Factor Letal

Toxina edematizante
Edema en piel.

Toxina letal
Muerte

Individualmente cada uno de los factores no exhiben una actividad biolgica significativa, necesita la combinacin de 2 o 3 para producir su efecto.

Toxina

La toxina edematosa es una adenilciclasa dependiente de calmodulina que aumenta el nivel del AMP cclico, perturbando la homeostasis del agua.
Se piensa que es la responsable del edema masivo por alteracin del metabolismo del agua que se observa en las formas cutneas.

La toxina letal es una zinc metaloproteasa que inactiva MAPKK. (la protena kinasa-kinasa mitgeno activada)
La toxina letal estimula en el macrfago la liberacin de TNF alfa y de lL-1beta que son en parte responsables de la muerte sbita en los enfermos de ntrax.

Cpsula

Glicocalix Adhesivo, Polimero externo de la pared celular pX02 plasmido De acido D-glutamico Rol importante durante el establecimiento de la enfermedad Proteje contra la fagocitosis & Lisis en estado vegetativo

http://textbookofbacteriology.net/BSRP.html

Toxinas

pX01 plsmido AB model Binding Activating Protective antigen (PA), edema factor (EF) & lethal factor (LF)

http://www.rcsb.org/pdb/molecules/pdb28_1.html Individually non-toxic PA+LF letal actividad EF+PA edema EF+LF inactive

PA+LF+EF edema & necrosis letal.

Mechanism of Infection

http://kugi.kribb.re.kr/KUGI/Pathways/BioCarta/anthraxPathway/

Reguladores

Bicarbonato o CO2 estimula capsula y formacion de PA LF requiere iones zinc EF requiere calmodulina, a major intracellular calcium receptor Regulador transcripcional AcpA en pX02, controla expresin de la cpsula atxA en pX01 es un regulador necesario para la transcripcin de los genes de todas las toxinas.

Mecanismos de Esporulacin

Tres formas clinicas de Anthrax

3 types of anthrax infection occur in humans: 1) Cutaneous 2) Inhalation 3) GI

Anthrax cutaneo

The most common naturally occurring form of anthrax.

Ulcers are usually 1-3 cm in diameter.

Incubation period: Usually an immediate response up to 1 day

Case fatality after 2 days of infection: Untreated (20%) With antimicrobial therapy (1%)

Inhalation Anthrax

The infection begins with the inhalation of the anthrax spore. Spores need to be less than 5 microns (millionths of a meter) to reach the alveolus. Macrophages lyse and destroy some of the spores. Survived spores are transported to lymph nodes.

At least 2,500 spores have to be inhaled to cause an infection. Inhalation Anthrax, Introduction, DRP, Armed Forces Institute of Pathology

Inhalation Anthrax (2)

Disease immediately follows germination. Spores replicate in the lymph nodes. The two lungs are separated by a structure called the mediastinum, which contains the heart, trachea, esophagus, and blood vessels. Bacterial toxins released during replication result in mediastinal widening and pleural effusions (accumulation of fluid in the pleural space).

Inhalation Anthrax, Introduction, DRP, Armed Forces Institute of Pathology

Inhalation Anthrax (3)

Death usually results 2-3 days after the onset of symptoms. Natural infection is extremely rare (in the US, 20 cases were reported in last century). Inhalation Anthrax is the most lethal type of Anthrax. Incubation period: 17 days Possibly ranging up to 42 days (depending on how many spores were inhaled). Case fatality after 2 days of infection: Untreated (97%) With antimicrobial therapy (75%)

Gastrointestinal Anthrax

GI anthrax may follow after the consumption of contaminated, poorly cooked meat. There are 2 different forms of GI anthrax: 1) Oral-pharyngeal 2) Abdominal

Abdominal anthrax is more common than the oral-pharyngeal form.

http://science.howstuffworks.com/anthrax1.htm

Ocasiona el Antrax llamado tambin carbunco bacteridiano, fiebre carbonosa, pstula maligna
es primariamente una enfermedad de los herbvoros, en particular del ganado vacuno y ovino, y en menor extensin en caballos, cerdos y cabras. Los perros y otros carnvoros son relativamente inmunes a la infeccin espontnea.

Cultivo

Aerobio y anaerobio facultativo 24 horas. pH 7 a 7,4 y 37C. Colonias grandes, blancas, opacas de bordes irregulares cabeza de medusa Cultivos con Temp mayor de 43 produce cepas inactivas

Crece facilmente en agar simple No presenta hemolisis*

Transmisin

Se propaga por suelos, alimento, agua contaminada Los suelos arenosos absorben y filtran el agua, mientras que los arcillosos, permiten que el agua refluya a la superficie, llevando consigo esporas que pueden estar en capas ms profundas.

Micrografa electrnica que muestra las partes principales de una endospora

Continuacin.....

Se multiplican activamente en bazo, alterando el parnquima esplnico. Luego se produce una septicemia tarda y muerte del animal. Una vez muerto el animal la temperatura en el cadver sigue subiendo hasta 44 0 45 C, durante unos 30 minutos por la fermentacin del glucgeno.

Diagnostico del laboratorio

Examen microscopico directo de la sangre mediante coloracin GRAM, azul de metileno, Wright o Giemsa Hemocultivo en agar simple o TSA, agar sangre Inoculacin en ratones ELISA Western Blot ensayo cromatogrfico Pruebas de cido fluorescentes. PCR

http://www.sumanasinc.com/webcon tent/anisamples/ani_anthrax.html http://www.bt.cdc.gov/training/histo ryofbt/index.asp