UNIDAD II MTODOS Y TCNICAS MICROBIOLGICAS BSICAS

RESERVORIOS DE MICROORGANISMOS

Los reservorios son sitios en los que los agentes infecciosos viables permanecen vivos a partir de los cuales puede surgir la infeccin de los individuos. Los reservorios pueden ser tanto animados como inanimados.

RESERVORIOS DE MICROORGANISMOS

RESERVORIOS DE MICROORGANISMOS Algunos patgenos son primordialmente saprofitos (viven a partir de materia muerta) y slo incidentalmente infectan y causan enfermedad. Por ejemplo, Clostridium tetani habita normalmente en el suelo y para el no es esencial infectar un hospedador para continuar su existencia. Sin embargo, muchos patgenos tienen otros organismos vivos como nicos reservorios.

RESERVORIOS DE MICROORGANISMOS En estos casos, el reservorio es un componente esencial del ciclo de vida natural del agente infeccioso. Algunas infecciones slo tienen lugar en seres humanos, y el mantenimiento del ciclo exige una transmisin de persona a persona y es comn en las enfermedades respiratorias vricas y bacterianas, de transmisin sexual, la difteria, tifoidea y paperas.

RESERVORIOS DE MICROORGANISMOS Un portador es un individuo infectado sin sntomas claros de la enfermedad clnica.

Portadores agudos. No estn conscientes de su infeccin y son fuentes primarias de agentes infecciosos.
Los portadores crnicos: Pueden permanecer infectados durante largos periodos de tiempo. Aparentan estar sanos

RESERVORIOS DE MICROORGANISMOS

ANLISIS DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS BASADOS EN CULTIVOS DE ENRIQUECIMIENTO

Este proceso consiste en separar los organismos de inters de una comunidad microbiana, un procedimiento que se conoce como enriquecimiento, y que permite aislarlos despus en un cultivo axnico. Esto es importante porque se obtienen cultivos para estudios detallados y controlados.

ANLISIS DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS BASADOS EN CULTIVOS DE ENRIQUECIMIENTO En un ambiente natural no es frecuente encontrar un solo tipo de microorganismo, por lo que se ha desarrollado mtodos que permiten obtenerlo. Este mtodo requiere que el medio de cultivo y las condiciones de incubacin sean selectivos para el organismo que se desea aislar y contraselectivos para los organismos no deseados.

ANLISIS DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS BASADOS EN CULTIVOS DE ENRIQUECIMIENTO

ANLISIS DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS BASADOS EN CULTIVOS DE ENRIQUECIMIENTO

CULTIVOS PUROS Y CARCTERSTICAS DEL CULTIVO Las bacterias u otros microorganismos que se desarrollan en medios de laboratorio, se llaman cultivos. Las diferentes especies de bacterias que se desarrollan en la misma clase de medios de cultivo pueden tener aspectos muy diferentes, y por tanto, el conocimiento de la apariencia o de las caractersticas del cultivo es til para reconocer ciertos tipos de bacterias

Para efectuar el estudio de los m.o., se han diseado diversos mtodos que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales en donde es posible experimentar y manejar un solo tipo de m.o. Una de las tcnicas usadas consiste en transferir una muestra microbiolgica de un ambiente determinado a un medio de cultivo. Al efectuar este procedimiento, es necesario considerar que en el rea de trabajo, existen muchos m.o. por lo que hay que tomar precauciones para impedir que contaminen los cultivos en estudio.

POBLACIONES MICROBIANAS NATURALES (CULTIVOS MIXTOS)

La poblacin microbiana de nuestro ambiente es grande y compleja. Muchas especies de microbios habitan normalmente las diferentes partes de nuestro cuerpo, como son la cavidad bucal, conducto intestinal y la piel. De igual manera nuestro ambienteaire, suelo y tierra-, se compone de toda una diversidad de bacterias y otros microbios. El estudio de estos m.o. en estos hbitats exige que se conozcan los microbios especficos presentes.

CULTIVOS PUROS

El cultivo puro representa las condiciones artificiales para el desarrollo de las bacterias y otros microorganismos y las condiciones impuestas a los m.o. mediante el manejo del laboratorio. Existe una gran variedad de tcnicas por medio de las cuales las diferentes especies en una muestra natural pueden ser aisladas y desarrollarse como cultivo puro.

MTODOS PARA AISLAR CULTIVOS PUROS

Tcnica de siembra por estras en placa y tcnica de siembra por difusin en placa. Asa de siembra y varilla de vidrio

MTODOS PARA AISLAR CULTIVOS PUROS

Tcnica de la placa vertida. Se necesitan realizar diluciones en ms de un tubo para obtener colonias bien aisladas. El medio se mantiene en estado lquido a 45C para permitir que el inoculo se distribuya uniformemente en el medio.

MTODOS PARA AISLAR CULTIVOS PUROS

Tcnicas de enriquecimiento del cultivo

Es para por mejorar las posibilidades de aislamiento de los m.o., esta fue introducida por Beijerinck y Winogradsky. El principio, es procurar un ambiente de cultivo diseado que pueda favorecer el desarrollo de ciertas bacterias.

MTODOS PARA AISLAR CULTIVOS PUROS Tcnica de las diluciones en serie. Se utiliza cuando el microorganismo que se busca en un cultivo mixto se encuentra en mayor cantidad y es posible obtenerlo mediante una serie de diluciones.

MTODOS PARA AISLAR CULTIVOS PUROS Tcnica de aislamiento de una sola clula Se utiliza para obtener un solo microorganismo de una preparacin en gota suspendida. Se necesita de un equipo especial (micromanipulador), adaptado a un microscopio, permitiendo al operador controlar los movimientos de una micropipeta dentro de una gota pendiente permitiendo tomar una sola clula.

NUTRICIN DE M.O. Una caracterstica importante de las clulas es su capacidad para llevar a cabo reacciones qumicas. La nutricin microbiana consiste en suministrar a las clulas los ingredientes qumicos que necesitan para hacer monmeros. Diferentes organismos necesitan diferentes tipos de nutrientes y a menudo los requerimientos son especficos. Adems, no todos los nutrientes se requieren en las mismas cantidades.

NUTRICIN DE M.O.

NUTRICIN DE M.O. (MACRONUTRIENTES)

Los ms importantes el carbono y el nitrgeno.

Los estudios nutricionales han demostrado que las bacterias pueden asimilar varios compuestos orgnicos carbonados y usarlos para hacer nuevo material celular. Algunos m.o. son auttrofos, capaces de construir todas sus estructuras orgnicas a partir del CO2 con la energa obtenida de la luz o de compuestos inorgnicos.

NUTRICIN DE M.O. (MACRONUTRIENTES)

El nitrgeno es importante en las protenas en los cidos nucleicos y en otros constituyentes celulares. En la naturaleza, la mayor parte del nitrgeno est en forma inorgnica como amonaco, nitratos o nitrgeno. La mayora de las bacterias son capaces de usar amonaco como nica fuente de nitrgeno, y otras pueden usar nitratos. El nitrgeno atmosfrico puede ser usado por bacterias fijadoras de nitrgeno

NUTRICIN DE M.O. (MACRONUTRIENTES) El potasio es necesario ya que una gran cantidad de enzimas lo requieren, por ejemplo las implicadas en la sntesis de protenas. El magnesio funciona como estabilizador de los ribosomas, las membranas celulares y los cidos nucleicos. El calcio ayuda a estabilizar la pared celular bacteriana y tiene una funcin importante en la termorresistencia de las endosporas

NUTRICIN DE M.O. (MACRONUTRIENTES) El sodio es requerido por algunos m.o. y su necesidad suele ser un reflejo del hbitat. El hierro es fundamental en la respiracin celular y es un elemento clave para los citocromos y las protenas que contienen hierro y azufre implicadas en el transporte de electrones.

NUTRICIN DE M.O. (MICRONUTRIENTES)

NUTRICIN DE M.O. (FACTORES DE CRECIMIENTO)

MEDIOS DE CULTIVO Y CONDICIONES DE CRECIMIENTO Muchos m.o. necesitan adems uno u otro de los oligoelementos, vitaminas o suplementos antes indicados. Si el medio esta compuesto por sustancias qumicas definidas, se habla de un medio de cultivo sinttico o definido.

MEDIOS DE CULTIVO Y CONDICIONES DE CRECIMIENTO

Medios de cultivo complejos o no definidos, estos se utilizan cuando no se conocen an suficientemente bien los requerimientos nutritivos. Se cultivan generalmente en lactosueros, melazas, agua de maz o de extractos de soja los cuales son productos de desecho baratos

MEDIOS DE CULTIVO Y CONDICIONES DE CRECIMIENTO

MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS Para obtener este tipo de medios se aade a los caldos de cultivo unas sustancias solidificantes (agar), que dan a las disoluciones una consistencia gelatinosa, se aade en concentraciones de 15-20 g/L

TIPOS DE MEDIOS Hay muchos m.o. exigentes que necesitan medios de cultivo elaborados, los cuales facilitan la identificacin, aislamiento y cuantificacin de ciertos tipos de bacterias. Para estas necesidades se cuenta con numerosos medios de cultivo a los cuales, de acuerdo con su funcin o aplicacin se les puede clasificar de la siguiente manera:

TIPOS DE MEDIOS Medios enriquecidos. La adicin de componentes como sangre, suero o extractos de tejidos de animales y plantas al caldo nutritivo o agar, les proporciona sustancias nutritivas complementarias para que el medio soporte el crecimiento de m.o. exigentes. Medios selectivos. Al agar se le adiciona ciertas sustancias qumicas especficas, que no permiten el desarrollo de ciertos grupos de bacterias, sin inhibir al mismo tiempo el crecimiento de otros m.o. Ejem: Cristal violeta previene el crecimiento de gram (+) sin afectar el desarrollo de gram (-)

TIPOS DE MEDIOS Medios diferenciales. Se le aaden ciertos reactivos o sustancias dando como resultado un determinado crecimiento de m.o. o cambios, despus de la siembra e incubacin del medio, permitiendo diferenciar ciertos tipos de bacterias. Ejemplo: agar sangre Medios de prueba. Para el ensayo de vitaminas, aminocidos y antibiticos, se utilizan medios de cultivo de composicin conocida.

TIPOS DE MEDIOS Medios para cuenta de bacterias. Se utilizan para determinar el crecimiento bacteriano de sustancias como la leche y el agua. Se debe sealar su formula, as como las especificaciones prescritas.

Medios de mantenimiento. Para preservar las caractersticas fisiolgicas y la viabilidad de un cultivo. El crecimiento rpido puede ocasionar la muerte rpida de las clulas.

CONDICIONES FSICAS NECESARIAS PARA EL DESARROLLO Adems de conocer los nutrientes apropiados necesarios para el cultivo de bacterias, tambin conviene conocer las condiciones fsicas del medio en donde el m.o. Puede desarrollarse mejor. Para un buen cultivo de bacterias se necesita combinar apropiadamente los nutrientes necesarios y las condiciones fsicas adecuadas.

CONDICIONES FSICAS NECESARIAS PARA EL DESARROLLO Temperatura. El patrn de desarrollo bacteriano puede ser influido profundamente por esta condicin. La temperatura puede, en parte determinar la velocidad de crecimiento y el grado total de desarrollo de los microorganismos. Tambin puede influir en los procesos metablicos y en la morfologa celular.

CONDICIONES FSICAS NECESARIAS PARA EL DESARROLLO Psicrfilas. Capaces de desarrollarse a 0C o menos, aunque crecen mejor a temperaturas superiores, cercanas a 15 o 20C. Mesfilas. Crecen mejor en lmites de temperatura que estn entre 25 y 40C Termfilas. Crecen mejor entre 45 y 60C. Cuando crecen en temperaturas cercanas a las mesfilas se les llama termfilas facultativas y cuando crecen a temperaturas superiores a 60C se les llama termfilas obligatorias.

CONDICIONES FSICAS NECESARIAS PARA EL DESARROLLO Necesidades de gases. Los gases principales que afectan el desarrollo bacteriano son el oxgeno y el dixido de carbono, en base a ello se dividen en cuatro grupos. Aerobias. Bacterias que se desarrollan en presencia de oxgeno libre. Anaerobias. Bacterias que se desarrollan en ausencia de oxgeno libre Anaerobias facultativas. Bacterias que se desarrollan tanto en presencia como en ausencia de oxgeno. Microaerfilas. Bacterias que crecen en presencia de pequeas cantidades de oxgeno.

CONDICIONES FSICAS NECESARIAS PARA EL DESARROLLO Acidez o alcalinidad (pH). En la mayora de las bacterias el pH ptimo de crecimiento est entre 6.5 y 7.5, aunque algunas bacterias pueden desarrollarse a pH extremos; en la mayor parte de las especias los limites mnimos y mximos corresponden a cualquier punto entre pH 4 y pH 9. El pH es muy probable que cambie en el medio debido a las sustancias producidas por los microorganismos logrando que el crecimiento se inhiba. Estos cambios pueden prevenirse mediante la incorporacin de un elemento paliativo (buffer)

FUNDAMENTOS DE CONTROL Importancia del control microbiano. Prevenir la transmisin de la infeccin y la enfermedad. Prevenir la contaminacin o la proliferacin de m.o. perjudiciales prevenir el deterioro o destruccin de materiales por los m.o. Los m.o. se eliminan o inhiben, por medio de agentes fsicos o qumicos, los cuales actan de diferentes maneras teniendo sus propias limitaciones.

DEFINICIONES DE TRMINOS

Los procedimientos fsicos y agentes qumicos reciben los siguientes nombres. 1. Esterilizacin. Es el proceso de destruir todas las formas de vida microbiana. 2. Desinfectante. Es un agente qumico, capaz de matar las formas en desarrollo, pero no necesariamente las esporas resistentes de m.o. patgenos. 3. Antisptico. Toda sustancia que impide el desarrollo o accin de los m.o., ya sea por destruir o inhibir su crecimiento y actividad.

DEFINICIONES Y TRMINOS

4. Saneamiento. Consiste en reducir la poblacin microbiana a niveles no peligrosos por medio de un agente qumico. 5. Germicida (microbicida). Agente que mata las formas en desarrollo. 6. Bactericida. Agente que mata bacterias. 7. Bacteriostasis. Es la supresin del desarrollo de bacterias. 8. Agentes antimicrobianos. Son los que interfieren en el crecimiento y actividad de los m.o.

TCNICAS DE ASEPSIA En general, el control puede efectuarse limitando el crecimiento de los m.o., proceso llamado inhibicin; o destruyendo los organismos por esterilizacin, muerte o eliminacin de todos los organismos viables de un medio de cultivo. Los agentes que destruyen o matan las bacterias son bactericidas, medidas antimicrobianas ms directas son la desinfeccin con agentes qumicos o fsicos especiales (Ejem: Alcohol, limpieza de una mesa).

MODO DE ACCIN DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS Dao a la pared celular. Las paredes de algunas bacterias gram (+) son atacadas por la enzima lisozima que se encuentra en las lagrimas, leucocitos y secreciones mucosas, las cuales desintegran la pared y viene la lisis. Algunos agentes inhiben el desarrollo de la pared dando lugar a la formacin de protoplastos el cual es susceptible a lisis.

MODO DE ACCIN DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS. Alteracin de la permeabilidad celular. La membrana citoplasmtica preserva la integridad de los constituyentes celulares y tiene a su cargo el transporte selectivo de nutrientes al interior de la clula. La actividad antimicrobiana de compuestos fenlicos, jabones, detergentes y compuestos cuaternarios de amonio, anula la permeabilidad selectiva de la membrana permitiendo la salida de los constituyentes celulares.

MODO DE ACCIN DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS.

Alteracin de las protenas y de cidos nucleicos. Toda situacin o sustancia que altere el estado natural, es decir, que lo desnaturalice, daa irreparablemente a la clula. Las altas temperaturas o fuertes concentraciones de agentes qumicos causan este tipo de daos.

MODO DE ACCIN DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS.

Inhibicin de la accin enzimtica. Esta se refiere a la accin de un inhibidor sobre las enzimas, siendo particularmente de gran importancia la disminucin de las reacciones que suministran energa. Los halgenos y el perxido de hidrgeno llegan a daar tanto a los constituyentes celulares que stos ya no pueden efectuar sus funciones metablicas normales

MODO DE ACCIN DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS.

Inhibicin de la sntesis de c. Nucleicos. Existen sustancias qumicas sintticas y otras naturales que son inhibidores poderosos de la sntesis de RNA Y DNA. Hay dos categoras. a) Compuestos que interfieren con la formacin de los bloques estructurales de los c. Nucleicos, los nucleotidos de purina y pirimidina. b) Compuestos que interfieren con la polimerizacin de los nucletidos en c. Nucleico.

CONTROL POR AGENTES FSICOS. Temperatura, agua y vida. Las actividades metablicas de un organismo son el resultado de la suma de todas las reacciones qumicas, y como estas reacciones son influenciadas por la temperatura, en consecuencia el proceso vital tambin lo est. Todos los organismos dependen del agua para realizar sus actividades. Por lo tanto todos estos factores estn intimamente relacionados. Los m.o. son capaces de desarrollarse en una amplia gama de temperaturas, desde las muy bajas (psicrfilos) hasta las altas (termfilos)

SUSCEPTIBILIDAD DE LOS M.O. A ALTAS TEMPERATURAS. La alta temperatura combinada con un alto grado de humedad es uno de los mtodos ms efectivos para destruir microorganismos. El calor hmedo mata los m.o. porque coagula sus protenas y es ms rpido y efectivo que el calor seco. El calor seco destruye los m.o. al oxidar sus constituyentes.

TIEMPO DE REDUCCIN DECIMAL o D Es el tiempo que se requiere para reducir 10 veces la densidad de poblacin a una determinada temperatura. Es el parmetro ms til que caracteriza la esterilizacin por calor. Esporas y esterilizacin por calor. La resistencia al calor de las clulas vegetativas y las endosporas bacterianas del mismo organismo vara considerablemente. En autoclave se alcanzan los 121C. En estas condiciones, las endosporas pueden necesitar de unos 4 a 5 minutos para una reduccin decimal, mientas que las clulas vegetativas slo requieren de 0.1 a 0.5 minutos a 65C.

APLICACIN DE ALTAS TEMPERATURAS

La accin letal del calor es una relacin de temperatura y tiempo afectada por muchas condiciones que se deben recordar al seleccionar estos dos factores y poder reducir la poblacin microbiana. Los procedimientos prcticos en los que se emplea el calor se dividen convenientemente en dos categoras:

Calor hmedo y calor seco

MTODOS DE ESTERILIZACIN VAPOR A PRESIN El autoclave es un dispositivo sellado que permite la entrada de vapor de agua bajo presin.

MTODOS DE ESTERILIZACIN Si se esterilizan objetos voluminosos, la transferencia de calor al interior ser lento y el tiempo de calentamiento debe ser suficientemente largo para que todo el objeto este a 121C durante 10 a 15 minutos. Tambin se requieren mayores tiempos cuando se trata de grandes cantidades de lquidos.

MTODOS DE ESTERILIZACIN Esterilizacin fraccionada (tindalizacin). Es para algunos medios que no pueden ser calentados a ms de 100C sin que resulten daados. Este mtodo implica el calentamiento del material a 100C durante tres das con sucesivos periodos de incubacin. Las esporas resistentes germinarn y en la siguiente exposicin al calor las clulas vegetativas son destruidas.

EQUIPO UTILIZADO: ESTERILIZADOR DE ARNOLD

AGUA HIRVIENTE Materiales contaminados u objetos expuestos al agua hirviente no pueden ser esterilizados eficazmente. Es cierto que todas las clulas vegetativas se destruyen en minutos al ser expuestas al agua hirviente, pero algunas esporas bacterianas resisten la ebullicin durante muchas horas.

Por lo tanto con esta prctica se obtiene ms desinfeccin que esterilizacin.

MTODOS DE ESTERILIZACIN La pasteurizacin es un proceso que reduce la poblacin microbiana en leche y otros alimentos sensibles al calor. Recibe su nombre de Louis Pasteur, quien fue el primero en usar el calor para controlar la contaminacin del vino. Este proceso no es sinnimo de esterilizacin porque en ella no se destruyen todos los m.o. Inicialmente se utiliz la pasteurizacin en la leche para matar los organismos causantes de la tuberculosis, la brucelosis, la fiebre Q y la fiebre tifoidea,

CALOR SECO Esterilizacin con aire caliente. Este se recomienda cuando no se quiere que el vapor a presin tenga contacto completo y directo con el material a esterilizar, como artculos de vidrio, pipetas, aceites y polvos.

Incineracin. Mata m.o. Este mtodo se emplea para destruir materiales de laboratorio infectados, as como residuos biolgico-infecciosos.

BAJAS TEMPERATURAS.

Las temperaturas inferiores a la ptima para el desarrollo, hacen caer el ndice metablico, y si la temperatura es bastante baja, el desarrollo y el metabolismo cesan. Sin embargo, no se pueden usar para desinfectar o esterilizar ya que se considera que mantiene a los microorganismos en latencia.

DESECACIN.

La desecacin de las clulas microbianas y su medio produce la detencin de la actividad metablica, seguida de una declinacin de la poblacin viable total. La sobrevivencia de los m.o. vara dependiendo de los siguientes factores: La clase de m.o El material en el que desecan los m.o. la terminacin del proceso de desecacin las condiciones fsicas a las cuales los m.o. son expuestos (luz, temperatura, humedad)

MTODOS DE ESTERILIZACIN Esterilizacin por radiacin. Se utiliza radiacin electromagntica como los microondas, radiacin u.v., rayos X, radiaciones gamma y los electrones. Cada tipo de radiacin acta con un mecanismo especfico.

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O. Se entiende por identificacin microbiana al conjunto de tcnicas y procedimientos que se aplican para establecer la identidad de un m.o. Estas tcnicas se utilizan en deferentes reas, por ejemplo: En el rea clnica donde es importante conocer el agente causal de la infeccin. En la industria farmacutica, cosmtica y de alimentos donde las normas de control de calidad exigen la ausencia de ciertos m.o. En la investigacin bsica donde se asla un determinado m.o. que debe identificarse

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O. No todos los m.o. se identifican por las mismas tcnicas. La mayor parte de los mtodos se realizan en un laboratorio y se busca utilizar el menor nmero de procedimientos y ensayos posibles. Los mtodos ms utilizados para la identificacin microbiana se pueden clasificar en: Mtodos basados en criterios morfolgicos
Mtodos Mtodos Mtodos Mtodos Mtodos basados en caractersticas de cultivo basados en pruebas bioqumicas basados en tipificacin con fagos basados en pruebas serolgicas basados en deteccin molecular

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O. Mtodos basados en criterios morfolgicos. Los rasgos morfolgicos (estructurales) han ayudado a los taxonomistas a clasificar los m.o. Los organismos superiores tienen rasgos anatmicos tan diferentes que pueden ser fcilmente utilizados en su clasificacin. Bsicamente se determina el tamao de las clulas, su forma de agrupacin, diferenciacin en tintura e identificacin de estructuras.

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O. Mtodos basados en caractersticas de cultivo. Se refiere a las sustancias nutritivas necesarias para el desarrollo y las condiciones fsicas de un medio que lo favorezcan. Una de las caractersticas principales de las bacterias es su apariencia (caractersticas de desarrollo) seguida del crecimiento en diferentes medios de cultivo.

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O. Para determinar las caractersticas de desarrollo de un cultivo puro es costumbre observar los siguientes aspectos del cultivo: 1. Tipo de colonia en agar. 2. Desarrollo en agar inclinado. 3. Desarrollo en caldo. 4. Desarrollo en gelatina por picadura.

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O. Colonias en placas de agar. 1. Tamao. Los lmites de tamao de las colonias varan desde muy pequeas (punta de alfiler), que miden solamente unas fracciones de mm de dimetro, hasta muy grandes que miden 5 o 10 mm de dimetro. 2. Margen o borde. Los bordes de las colonias bacterianas son de diferentes tipos, segn la especie de que se trate. Pueden formar un circulo perfecto o irregularidades, hendiduras irregulares, proyecciones filiformes o proyecciones en forma de raz.

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O. Colonias en placas de agar. 3. Elevacin. Las colonias pueden ser muy finas (aplanadas) o gruesas (elevadas). Las colonias elevadas muestran diferentes grados de convexidad. 4. Cromognesis o pigmentacin. Las colonias pueden estar coloreadas (pigmentadas) o sin color. 5. Caractersticas pticas. Las hay opacas, transparentes u opalescentes.

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O. Desarrollo en agar (inclinado) por estras. 1. Cantidad. Escaso, moderado o abundante. 2. Margen o borde del desarrollo. Uniforme o incluso presentando varias irregularidades 3. Consistencia de la masa desarrollada. Consistencia de mantequilla, fcilmente removibles con una aguja de siembra, viscosas o filamentosas, secas y brillantes. 4. Cromognesis o pigmentacin. Similar a la descrita para las colonias.

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O. Desarrollo en caldo nutritivo. 1. Cantidad de desarrollo. Escaso, moderado o abundante 2. Distribucin del desarrollo en el caldo. Uniformemente distribuido, desarrollo confinado a la superficie del caldo como nata o pelusa, o desarrollo que se acumula como sedimento, que es granular o viscoso. 3. olor. Ptrido, a frutas o aromtico, o imperceptible.

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O. Desarrollo en gelatina por picadura. 1. Desarrollo (sin licuefaccin) a lo largo de la lnea de inoculacin. El desarrollo puede estar limitado a la zona de la picadura o puede haberse expandido ms all de la picadura. 2. Licuefaccin de la gelatina. Se puede presentar desde arriba suavemente o adquirir aspectos variados de embudos al licuar la gelatina.

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O.

Mtodos basados en pruebas bioqumicas. Estas son ampliamente utilizadas para diferenciar bacterias. Se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar azucares, la presencia de enzimas, la degradacin de compuestos, la produccin de compuestos coloreados, etc. Aun bacterias fuertemente relacionadas pueden separarse en dos especies diferentes con base a pruebas bioqumicas.

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O.

Mtodos basados en tipificacin con fagos. La interaccin entre un virus bacteriano (fago) y su clula bacteriana sensible es sumamente especfica, ya que el proceso de adsorcin se encuentra mediado por receptores especficos tanto en el virus como en la clula bacteriana.

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O.

Mtodos basados en ensayos serolgicos. Estos mtodos implican la utilizacin de preparaciones de inmunoglobulinas especficas provenientes del suero o de un reactivo, y que pueden ser de gran utilidad. Bsicamente se basa en la reaccin de antgeno presente en el agente microbiano con su anticuerpo correspondiente.

CRITERIOS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACIN DE M.O.

Mtodos basados en biologa molecular. Es uno de los mtodos ms avanzados, en donde, a travs de procedimientos y reactivos se pueden detectar determinadas secuencias de ADN que son propias de un determinado agente microbiano. El mtodo que se est utilizando ampliamente en los laboratorios de diagnstico es el PCR (reaccin en cadena de la polimerasa)

MANTENIMIENTO Y PRESERVACIN DE CULTIVOS PUROS. Directamente relacionado al estudio de cultivos puros est el problema de su mantenimiento en condiciones viables por varios periodos. Estos cultivos tipos son importantes para trabajos de investigacin, prcticas de laboratorio o como testigos para procedimientos especficos. Para estos propsitos, es muy importante tener perfectamente identificadas las bacterias de los cultivos puros listos para usarse.

MANTENIMIENTO Y PRESERVACIN DE CULTIVOS PUROS. Mtodos de preservacin. A fin de desarrollar condiciones propias para la preservacin de bacterias se han realizado diversas investigaciones. No todas las especies responden de manera similar a los procesos y condiciones especficas, lo que significa que lo que se ha aprendido para un cultivo no es aplicable para otro. Es esencial que el mtodo de preservacin y mantenimiento conserve todas las caractersticas de las especies. Algunas de las tcnicas en uso son las siguientes:

MANTENIMIENTO Y PRESERVACIN DE CULTIVOS PUROS. Resiembras peridicas a medios frescos. Los cultivos de bacterias se pueden mantener en tubos de medio en los que han sido cultivados mediante pasos peridicos a medios frescos. Los intervalos en los que se hacen varan con el tipo de m.o. Antes de utilizarlo se deben considerar tres aspectos. a) Un medio de cultivo apropiado. b) Temperatura propia. c) Tiempo que se necesita para hacer las resiembras.

MANTENIMIENTO Y PRESERVACIN DE CULTIVOS PUROS. Preservacin de cultivos con una capa de aceite mineral. Se utiliza en cultivos de agar inclinado y el aceite debe cubrir aprox. 1.5 cm del pico del agar inclinado. El tratamiento de la viabilidad varia segn la especie. Este mtodo tiene la ventaja particular de que se puede tomar algo del desarrollo, inocular medios frescos y preservar el cultivo inicial.

MANTENIMIENTO Y PRESERVACIN DE CULTIVOS PUROS. Preservacin de cultivos por secado rpido en congelacin (liofilizacin) Este es el mtodo ms eficaz para la preservacin de cultivos, se pueden mantener por ms de 20 aos. En este mtodo, las clulas se secan rpidamente, mientras son congeladas, mediante las siguientes etapas: la suspensin de clulas se pone en pequeos frascos, que se sumergen en una mezcla de hielo seco (-78C), los cuales se conectan a una lnea de alto vaco que lo seca.

MANTENIMIENTO Y PRESERVACIN DE CULTIVOS PUROS. Almacenamiento a temperaturas muy bajas. En este procedimiento las clulas se congelan con un agente protector (glicerol). Los especmenes se guardan en refrigeradores con nitrgeno lquido. De igual manera se conservan perfectamente que con la liofilizacin.