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LES MYCOPLASMES

Dr H. GONSU KAMGA
Mdecin biologiste FMSB / CHU Yaound

OBJECTIFS
OBJECTIF GENERAL

Etablir le diagnostic biologique des mycoplasmes


OBJECTIFS SPECIFIQUES

Identifier les mycoplasmes les plus rencontrs en pathologie humaine Apprcier la pathognicit des mycoplasmes Matriser lidentification morphologique et biochimique des mycoplasmes

PLAN
INTRODUCTION I. PROPRIETES GENERALES II. HABITAT POUVOIR PATHOGENE III. CIRCONSTANCES DIAGNOSTQUES IV. DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE V. SENSIBILITE AUX ATB CONCLUSION

INTRODUCTION

Plus petites bactries capables de rplication autonome Dveloppement intra et extra-cellulaire

Structure unique : absence de paroi


Nombreux gnomes squencs Ubiquitaires : homme,animal,insectes,plantes

INTRODUCTION
16 espces chez lhomme : colonisation des muqueuses
respiratoires et gnitales - Prsence ltat commensal - Infections aiges ,maladies chroniques - Immunodprims:bactries opportunistes

Contaminants de cultures cellulaires

I. PROPPRIETES GENERALES
A. QUELQUES DATES

1898 Nocard et Roux:agent de la pleuropneumonie bovine(M.mycoides) 1937 Dienes et Edsall: pleuropneumoniae like organisms PPLO chez lhomme(M.hominis) 1954 Shepard : souche T(U.urealyticum)

I. PROPRIETES GENERALES
B. TAXONOMIE

- Ordre des Procaryotes - Classe des Mollicutes - Mollicutes pathognes pour lhomme - Ordre des Mycoplasmatales - Famille des Mycoplasmataceae - 2 genres: Mycoplasma et Ureaplasma

I. PROPRIETES GENERALES
C. MORPHOLOGIE - Pas de formes dfinies - Visible en fond noir ou contraste de phase: non colorable au Gram - Parfois mobiles(spiroplasme ou par glissement sur
support solide)

I. PROPRIETES GENERALES
D. STRUCTURE Absence de paroi (ni peptidoglycane,ni PLP)
uniquement une membrane plasmique - caractre flexible et petite taille(passage travers les filtres antibactriens de 0,45m)
-

rsistances aux antibiotiques agissant ce niveau (btalactamines)

Membrane

cytoplasmique

Riche en protines 50 60% et en lipides 30 40%

I. PROPRIETES
E. CULTURE ET METABOLISME 1. Caractres culturaux Mycoplasmes cultivables en milieu acellulaire ; mais exigences nutritionnelles complexes en facteurs de croissance, en cholestrol: srum,extrait de levure, tween 80 Aro-anarobies (certains anarobies strictes) Croissance lente 18h - 2 3 mois Colonies en uf sur le plat ou en tte dpingle Inhibition de croissance et du mtabolisme par Ac spcifiques

I. PROPRIETES
2. Proprits mtaboliques
Espces fermentantes par fermentation du glucose: M.pneunoniae,M.genitalium Espces non fermentantes par hydrolyse de Larginine : M.hominis Lure : Ureaplasma sp. Proprits dhmadsorption et dhmolyse: M.pneumoniae

II. HABITAT-POUVOIR PATHOGENE


A. 16 ESPECES RETROUVEES CHEZ LHOMME Le plus souvent extracellulaires Certaines commensales de loropharynx : PP certain de M.pneumoniae Certaines commensales des voies gnitales

PP certain mais occasionel de MH et de UU


PP certain de M.genitalium

HABITAT-PP
B. MECANISMES DU PP

2 types: action directe action indirecte : mec.immunopathogne


Adhrence Production de mtabolites toxiques Pntration intracellulaire Interaction avec le systme immunitaire

III. CIRCONSTANCES DE DIAGNOSTIC


A. Infections du tractus respiratoire M.pneumoniae+++

Trachobronchites Pneumonies atypiques Infections ORL(rares) Formes asymptomatiques 20,formes graves

III. CIRCONSTANCES DE DIAGNOSTIC


B. INFECTIONS URO-GENITALES 1. Espces rencontres 3 espces pathognes : Ureaplasma spp.,M.hominis,M.genitalium
M.hominis et Ureaplasma spp.prsents ltat commensal
- Colonisation variale avec: lge, ltat hormonal,la race, le niveau socio-conomique, le nombre de partenaires - Plus frquente chez lhomme que chez la femme Chez femme Mh < 10% , Uu >ou= 50%

III. CIRC.DE DIAGNOSTIC


B. INFECTIONS UROGENITALES (2) 1. Espces rencontres(2)

Pb dinterprtation du pouvoir pathogne:


seuil de pathognicit(apprciation quantitative) M.genitalium non document chez le sujet sain (pousse trs mal, dg uniquement molculaire) 2. Infections chez lhomme Mg,U

UNG Epidydimites, rares(U) prostatite

III.CIRCONSTANCES DE Dg
B. INFECTIONS UROGENITALES

3. Infections gyncologiques Mh,U,Mg

Cervicite Mg

Bartholinite Mh
Vaginose bactrienne = dsquilibre de la flore

bactrienne(X GV,anarobies , Mh)

Endomtrites( Mh, U, Mg), salpyngite Mh,Mg)

III. CIRCONSTANCES DE Dg
B. INFECTIONS UG

4. Mycoplasmes et strilit U
Retentissement qualitatif sur la mobilit des spermatozodes

5. Infections au cours de la grossesse Mh, U


Chorioamniotites Fivres post-partum, post-abortum

III.CIRCONSTANCES DE Dg
B. INFECTIONS UG 4. Mycoplasmes et strilit U Retentissement qualitatif sur la mobilit des spermatozodes 5. Infections au cours de la grossesse Mh, U. - chorioamniotites - fivres post-partum, post-abortum Mh+++ - avortements rptition? Prmaturit? hypotrophie?

III.CIRCONSTANCES DE Dg
C. INFECTIONS EXTRAGENITALES ET EXTRARESPIRATOIRES Souvent mconnues arthrites
infections invasives chez ID Mp,Mh, U surinfections de plaies sternales Mh

IV. Dg BIOLOGIQUE DES INFECTIONS A MYCOPLASMES


A. INFECTIONS RESPIRATOIRES Mp 1. Dg direct
Prlvements Respiratoires (couvillons gorge,aspiration nasopharynges,LBA) Exta-respiratoires (bulles cutanes) Conditions de prlvement et de transport couvillons: viter couvillons en bois Milieu de transport ncessaire : car bactries fragiles Si temps de stockage long ; congeler -20C

IV. Dg BIOLOGIQUE
A. INFECTIONS RESPIRATOIRES

1. Dg direct(2)
Recherche directe Dtection des antignes: peu sensible ,peu spcfique Recherche par PCR: cible gne de ladhsine P1

IV.Dg BIOLOGIQUE
A. INFECTIONS RESPIRATOIRES Culture (idem MUG) Milieux de culture complexes
- Base de peptone ou tryptone (protine, aa) - Extrait de levure(vitamines et facteurs de croissance) - Substrat mtabolique source dnergie(glucose,arginine,ure) - Srum (strols et cholestrol)

VI. Dg BIOLOGIQUE
A. INFECTIONS RESPIRATOIRES Culture (2) Milieux rendus slectifs par ajout dATB(P,Amp) Aucun milieu ne convient toutes les espces Croissance +ou- lente en 02j +++sem.; T 30c et 37c Atmosphre arobie ou anarobie enrichie en CO2.

VI. Dg BIOLOGIQUE
A. INFECTIONS PULMONAIRES Culture 3 Milieux de culture liquides ou gloss Milieux liquides: avec indicateur color(rouge de phnol) ph adapt 7,4-7,6 Mycoplasmes; 66,5Uraplasmes Milieux solides: sans substrat mtabolique,ni rouge de phnol. Typage PCR-RFLP m.e.e de 2 types :1+2

VI. Dg BIOLOGIQUE
A.INFECTIONS RESPIRATOIRES 2. Diagnostic srologique
Ac non spcifiques: agglutinines froides Ac spcifiques . FC . IFA . Agglutination de particules de latex . ELISA Diagnostic de certitude: PCR + prsence dIgM

VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UROGENITALES
Ureaplasma spp. M.hominis M.Genitalium Uniquement un diagnostic direct

Ureaplasma spp.et M.hominis


-

Culture sur milieux adapts ou kits de Dg Pas de srologie PCR rarement

VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UROGENITALES M.genitalium: Culture trs fastidieuse
Pas de srologie

Diagnostic par PCR

VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UROGENITALES 1. Prlvements Prlvements urognitaux Chez m: couvillonage urtral, urine 1er jet, sperme, scrtions prostatiques Chez f: PCV,endomtre, trompe,liq.Douglas, liq.amniotique,placenta

VI. Dg BIOLOGIQUE
1. Prlvements(2) Nouveaux-ns Prlvement nasopharyng, gorge, endotrachal
Autres : en fonction du site de linfection Liquide synovial, biopsie articulaire , sang, LCR

VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UG 2. Culture: U.spp et M.h Milieux cf M.p Culture U.spp.
Milieu Ph milieu Temps Substrat Shepard 5,5 6 16 20h ure

M.h
Hayflick 7,0 7,2 24 48h arginine

VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UROGENITALES 2. Culture (2) Identification - Proprits mtaboliques en milieu liquide : Changement de couleur de lindicateur de pH
Ureaplasma spp. M.Hominis Jaune orang orang framboise

VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UROGENITALES 2. Culture(3) Identification - Aspect des colonies sur glose
Ureaplama spp. Petites colonies ponctiformes noires (MnSO4) en 24h M.hominis : aspect en uf sur le plat en 2 4j

VI. Dg BIOLOGIQUE
2. Culture (4)
Interprtation Prlvements
- Pvts normalement striles
- Homme Urtre et sperme Urine 1er jet

seuil
aucun isolement = infection
U > 104 UCC /ml U > 103 UCC /ml

VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS UROGENITALES 2. Culture (5) Interprtation - Femme
Cervico-vaginal U aucun,non significatif Mh >104UCC / ml U > 103UCC / ml

- NN
Endotrachal

VI. Dg BIOLOGIQUE
B. INFECTIONS URO-GENITALES 2. Culture U et Mh Kits commercialiss pour:
- Identification - Numration - Sensibilit aux ATB bioMrieux, International Microbio, Bio-Rad, PBS Orgenics

Typage de Ureaplasma spp.


2 espces ; 2biovars U.parvum plus frq..que U.urealyticum

V. SENSIBILITE AUX ATB


A. METHODES DETUDE Pas de mthode standardise Pas de diffusion en glose 1. Diffusion en milieu liquide CMI Micromthode en plaque+++ Kits commercialiss pour les mycoplasmes gnitaux

V. SENSIBILITE AUX ATB


A. METHODE DETUDE Kits commercialiss
- 2 ranges de puits 2 concentrations dATB lyophiliss - Inoculum standardis - Aprs une culture primaire

2. Dilution en milieu glos


- CMI - Mthode classique sur milieu adapt CMI,CMB - Etest (M.hominis) : diffusion en gelose;pas possible pour U

V. SENSIBILITE AUX ATB


A. RESISTANCE INTRINSEQUE OU NATURELLE

Commune tous Absence de paroi R.aux


lactamines,glycopeptides,fosfomycine

Sous-unit de lARN polymrase R la


rifampicine

R. : polymyxines,acide nalidixique , sulfamides

V. SENSIBILITE AUX ATB


B. RESISTANCE ACQUISE
Pas de plasmide de Rsistance dcrit Mutations chromosomiques ou transposons

Absence de systmes de rparation de lADN: frquence de mutation leve

TRAITEMENT DES INFECTIONS M.

A. Infections respiratoires
- Macrolides et apparents - Ttracyclines - Fluoroquinolones

B. Infections gnitales
- Attention l interprtation pour Mh et Uu - UNG doxycycline - Azythromycine

V. TRAITEMENT
C. Infections nonatales Macrolides D. Infections extragnitales, chez limmunodprim Association de plusieurs ATB : CC +D +FQ Traitement de limmuno suppression

CONCLUSION
Pb de standardisation des mthodes de diagnostic et dtude la sensibilit aux ATB Rsistances acquises peu connues et peu tudies Dure du traitement : fonction de la localisation et de la gravit Pb majeur: traiter ou pas les infections M.gnitaux?
sites striles : ok sites non striles (pcv,pvts respiratoiresNNs ) ???

JE NAI PAS DE PAROI MAIS JE SUIS AUSSI UNE BACTERIE FAITES ATTENTION A MOI!!!