Tcnicas de Esterilizacin

Microbiologa
Q.B.P Aura Flores Prez

Conceptos:
Asepsia: procedimientos encaminados a prevenir o reducir la transmisin de microorganismos. Esterilizacin: procedimientos que conducen a la destruccin de todos los microorganismos presentes en un lugar o material (incluye esporas). Desinfeccin: procedimientos que consiguen una reduccin del nmero microorganismos presentes, pero no necesariamente la destruccin total.

Desinfeccin
Es la eliminacin selectiva de ciertos microorganismos indeseables a fin de impedir su transmisin por interferencia en su estructura o metabolismo Es selectiva y se aplica a objetos inanimados o superficies. En general se usan agentes qumicos

(desinfectantes o germicidas)

ESTERILIZACION
Esterilizacin significa la eliminacin de toda forma de vida de un medio o material, lo que se lleva a cabo generalmente por medios fsicos, por ejemplo, filtracin, o por muerte de los organismos por calor, productos qumicos u otra va. Esta definicin excluye por lo tanto cualquier tcnica que resulte solamente en un dao a los microorganismos o atenuacin de la actividad de cualquier tipo La razn fundamental para efectuar la esterilizacin es para evitar la competicin por los nutrientes en medios de cultivo Evitar que en un proceso se contamine un alimento

PROCEDIMIENTOS DE

ESTERILIZACION/DESINFECCION
Procesos fsicos:
Calor: Seco Hmedo Radiaciones: Ionizantes No ionizantes Ultrasonidos Microondas Filtracin

Procesos qumicos
Fenoles y compuestos afines

Detergentes
Compuestos cuaternarios de amonio

Alcoholes Halgenos

cidos y lcalis

Metales pesados y sus componentes.

Colorantes.
Perxido de Hidrogeno

Glutaraldheido

Qumioestabilizadores gaseosos.

Factores a considerar en la seleccin del mtodo

Microorganismos:
- Grado de muerte microbiana requerido

- Naturaleza microbiana (virus, bacterias...)

Instrumental
- Uso al que se destine - Naturaleza del objeto a tratar

Costo del procedimiento Facilidad/accesibilidad de la tcnica

Relacin decreciente de resistencia

PRIONES (EJC) ESPORAS BACTERIANAS (Bacillus spp., Clostridium spp.) MICOBACTERIAS (Mycobacterium tuberculosis) VIRUS PEQUEOS SIN ENVOLTURA (Poliovirus) BACTERIAS GRAMNEGATIVAS (Pseudomonas spp.) HONGOS (Aspergillus spp., Candida spp.) VIRUS MEDIANOS SIN ENVOLTURA (Adenovirus) BACTERIAS GRAMPOSITIVAS (Staphylococcus spp.) VIRUS CON ENVOLTURA (HIV, VHB)

LA ACCIN LETAL DEL CALOR ES UNA RELACIN DE TIEMPO Y TEMPERATURA

La mayora de bacterias, levaduras y hongos Mycobacterium tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium tuberculosis Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis La mayora de esporas patgenas

80oC , 5-10 min

58oC , 30 min 59oC , 20 min 65oC , 2 min 60oC , 60 min

100oC , pocos min

RADIACIONES

Radiaciones ionizantes: Son los rayos X y Gamma, y los radiostopos Co60 y Cs137 Efectos son letales y mutagnicos. Muy penetrantes

Radiaciones no ionizantes. Son los rayos UV Cambios en el ADN o en protenas Poco penetrantes

ESTERILIZACION POR CALOR HUMEDO

Las molculas de agua desplazan fcilmente los enlaces de hidrgeno, por lo cual este procedimiento es
Ms rpido y efectivo que el calor seco. Requiere menos temperatura. AUTOCLAVE EBULLICION TINDALIZACION UPERIZACION PASTEURIZACION

ESTERILIZACION POR CALOR HUMEDO A PRESIN SUPERIOR A LA ATMOSFRICA: AUTOCLAVE

Vlvula de drenaje VAPOR DE AGUA

PUERTA

Medio de cultivo

Fuente de calor

121C: 30 min 132-134C: 3 min

NO GARANTIZAN ESTERILIDAD

EBULLICION: Presin atmosfrica, 100C TINDALIZACION

- PRIMERA FASE: Calentamiento 50-100C

- SEGUNDA FASE: Incubacin 24 h, 37C Repeticin de varios ciclos de dos fases.

UPERIZACION
135-150C; 2 segundos

PASTEURIZACION/P. RPIDA 628C; 30 minutos/717C; 15 segundos

MTODOS MECNICOS
FILTRACION - Para materiales termolbiles y sensibles a radiaciones. - Tamao del poro: 0.005-1 . - Los virus no son retenidos Filtros de membrana Filtros HEPA

CUIDADOS PARA QUE PROCESO DE

ESTERILIZACION SEA EFICIENTE

Radiaciones: Lmparas de luz ultravioleta, verificar la fecha de
caducidad Filtracin: cambio peridico de filtros Calor 1. Indicadores fsicos: termmetro y manmetro 2. Indicadores qumicos: tiras colorimtricas (T, P, T) 3. Indicadores biolgicos: (esporas de Bacillus)

Como actua la esterilizacion con u.v.

La luz ultravioleta (UV-C, en el rango de longitud de onda de 200280 nm) es una forma de radiacin no ionizada que no penetra ms all de las superficies y es generalmente conocida como germicida (particularmente a longitudes de onda cercanas a 250 nm). El mecanismo de desinfeccin se basa en un fenmeno fsico por el cual las ondas cortas de la radiacin ultravioleta inciden sobre el material gentico (ADN) de los microorganismos y los virus, y forman dimeros de timina .

AGENTES QUMICOS:DESINFECTANTES MECANISMO DE ACCIN

Desnaturalizacin y coagulacin de protenas

(Ej. Alcoholes)

Oxidacin de distintos componentes (Ej. Cl, xido

de etileno)

Alteracin de permeabilidad de la membrana

(Ej. Agentes surfactantes, alcoholes)

Combinacin radicales de protenas y cidos nucleicos, dando reacciones de sustitucin (Ej.

aldehidos, xido de etileno)

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA EFICACIA DE LOS DESINFECTANTES

Naturaleza de los microorganismos presentes

Condiciones fsico-qumicas Presencia de materia orgnica

1.- Potencia de los desinfectantes:

1. Alto nivel: Inactivan todas las bacterias vegetativas,
incluyendo a micobacterias, hongos, virus, pero no necesariamente esporas bacterianas (Ej. Aldehdos, derivados del Cl)

2. Nivel intermedio: No eliminan esporas bacterianas,

s bacterias vegetativas, hongos y virus, pero con dificultad virus desnudos de pequeo tamao ( Ej. Alcoholes, fenoles)

3. Bajo nivel: no destruyen a todos los hongos, ni a los

virus desnudos de pequeo tamao (Ej. Derivados del amonio cuaternario)

2. Condiciones fsico-qumicas: escriba 4 factores , explique como afectan?

1. Tiempo de exposicin
2. Temperatura 3. Concentracin

4. pH

3. Presencia de materia orgnica:

Puede captar e inactivar al desinfectante (Ej.
Derivados del Cl)

Puede dificultar el contacto del desinfectante con los microorganismos

DESINFECTANTES MS USADOS:

Alcoholes
Agentes oxidantes (Cloro, Yodo, Ac. Paractico,
H 2 O2 )

Agentes surfactantes Derivados fenlicos

Aldehdos
Oxido de etileno

Alcoholes: Etanol e isopropanol

Mecanismo de accin: desnaturalizacin de
protenas y alteraciones en la membrana

Nivel intermedio

Escasa toxicidad
Usos:
antispticos cutneos en forma de sol. acuosa al 70-90 % Desinfectantes de objetos semicrticos y no crticos

Inactivacin por la materia orgnica

Derivados del Cloro: Hipoclorito sdico en sol. acuosa

Mecanismo de accin: Oxidacin

Alto o bajo nivel (en funcin de la concentracin)

Muy txico y corrosivo Usos:
Tratamiento de aguas Desinfeccin de superficies ambientales en general

Inactivacin por la materia orgnica e inestabilidad

Yodo y Yodforos (Povidona yodada)

Mecanismo de accin: Oxidacin (< Cl) y
halogenacin

Nivel intermedio Poco txicos Usos: Antispticos de mayor uso (piel intacta, heridas,
colutorios, lavado quirrgico de manos,...)
Inactivacin por la materia orgnica. Proteger de la luz

Acido paractico
Mecanismo de accin: Oxidacin y alteracin de la
permeabilidad de la membrana

Alto nivel y esterilizante

Txico y corrosivo de metales

Usos:
Esterilizacin de endoscopios Desinfeccin de instrumental

Se mantiene activo en presencia de materia orgnica

Perxido de hidrgeno
Mecanismo de accin: Oxidacin
Potencia variable (en funcin de la concentracin y
T)

Soluciones concentradas son txicas y

corrosivas Usos:

Desinfeccin de lentes de contacto (3%)

Desinfeccin de equipos mdicos limpios (6%) Esterilizacin con PLASMAGAS

Agentes surfactantes
Mecanismo de accin: Alteracin de la membrana Bajo nivel
Poco txicos

Uso: Antispticos

Cloruro de benzalconio (Dvdo. Amonio cuaternario)

Paraclorometaxilenol Triclosan

Derivados fenlicos
Mecanismo de accin: Alteracin de la membrana y
coagulacin de protenas

Nivel intermedio Usos:

Descontaminacin ambiental Antispticos:

Hexaclorofeno
Clorhexidina

Aldehdos (Glutaraldehdo y formaldehdo)

Mecanismo de accin: Agentes alquilantes
Alto nivel Muy txicos y potencialmente carcinognicos Usos:
Esterilizacin de materiales no resistentes al calor (glutaraldehdo)

Desinfeccin de cabinas de seguridad biolgica

(formaldehdo)

Oxido de etileno
Mecanismo de accin: Oxidacin y alquilacin
Alto nivel y rapidez de efecto Muy txico (cmara hermtica y posterior aireacin) Usos: Esterilizacin de materiales no resistentes al calor
ni a la humedad