Instituto Politcnico Nacional Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas Ingeniera en Sistemas Ambientales Bioqumica Fundamental

Aspectos bioqumicos y genticos de la tolerancia y acumulacin de metales pesados en plantas

Aim Leyva Trujillo - Gabriela Romero Arenas Anah Nez Trasobares - Marco Castellanos Franco Aislinn Frias Pineda

Aspectos bioqumicos y genticos de la tolerancia y acumulacin de metales pesados en plantas

J.P. Navarro-Avi I. Aguilar Alonso J.R. Lpez-Moya Departamento de Biologa Vegetal Escuela Superior de Ing. Agrnomos Universidad Politcnica de Valencia Camino de Vera. 46022, Valencia

Durante los ltimos aos se ha producido un considerable avance en la Biotecnologa del campo y la ciencia que se dedica a remediar lugares o medios contaminados mediante el uso de plantas y organismos relacionados, denominada Fitorremediacin. Es especialmente significativo el desarrollo que se ha conseguido en la descontaminacin de metales pesados.
Si se comprende dicho funcionamiento es slo una cuestin temporal disear y obtener soluciones adecuadas a todos los problemas derivados de la contaminacin por metales pesados.

INTRODUCCIN
Elementos qumicos que presentan una densidad igual o superior a 5 g cm-3 cuando estn en forma elemental, o cuyo nmero atmico es superior a 20 (excluyendo a los metales alcalinos y alcalinotrreos). Su presencia en la corteza terrestre es inferior al 0,1% y casi siempre menor del 0,01%.

Metales pesados son aquellos metales que, siendo elementos pesados, son txicos para la clula.

Cualquier elemento que a priori es beneficioso para la clula, en concentraciones excesivas puede llegar a ser txico.
Otros elementos que, aunque son metales ligeros o no metales, se suelen englobar con ellos por orgenes y comportamientos asociados; como As, B, Ba y Se.

Los metales pesados se clasifican en dos grupos:

Oligoelementos o micronutrientes

Necesarios en pequeas cantidades para los organismos, pero txicos una vez pasado cierto umbral. Incluyen As, B, Co, Cr, Cu, Mo, Mn, Ni, Se y Zn.

Sin funcin biolgica conocida

Son altamente txicos. Incluyen Ba, Cd, Hg, Pb, Sb, Bi.

El problema de la entrada de metales pesados en la planta

Contaminacin del suelo Dinmica de los metales pesados en el suelo Transporte Toxicidad de los metales pesados

Enfermedades y sntomas que generan

Contaminacin del suelo

La introduccin directa o indirecta como consecuencia de la actividad humana de sustancias, vibraciones, calor o ruido en el aire, el agua o el suelo que pueden ser nocivos para la salud humana o la calidad del medio ambiente, causar daos a la propiedad material o perjudicar o entorpecer las actividades recreativas y otros usos legtimos de medio ambiente. Las concentraciones anmalas de metales pesados en los suelos pueden deberse bsicamente a dos tipos de factores: causas naturales y causas antropognicas.

Dinmica de los metales pesados en el suelo

Retencin de metales pesados en el suelo de distintas maneras: disueltos o fijados, retenidos por adsorcin, complejacin y precipitacin

Movilizacin a las aguas superficiales o subterrneas.

Transferencia a la atmsfera por volatilizacin.

Absorcin por las plantas e incorporacin a las cadenas trficas.

Transporte
Los iones inorgnicos y el agua (sabia bruta) se transportan desde la raz hasta las hojas mediante una serie clulas tubulares que pertenecen a un tejido leoso denominado xilema a travs del proceso de smosis y otra fuerza conocida como fuerza de succin. La smosis se produce porque existe una gran diferencia de concentracin entre la parte superior de la planta (hojas, inflorescencias) donde es mayor y la parte inferior, es decir existe un potencial hdrico favorable al impulso ascendente. La fuerza de succin se produce cuando en las hojas se pierde agua por transpiracin, pues las molculas perdidas producen una succin de nuevas molculas cercanas para reemplazar a las anteriores, de tal manera que se produce una fuerza que atrae agua desde las races hacia las hojas.

Toxicidad de los metales pesados

La toxicidad de los metales pesados depende de la concentracin, la forma qumica y la persistencia.

Un elemento indispensable para un ser vivo en concentraciones traza puede llegar a ser txico en concentraciones elevadas.

La mayora de metales pesados se combina con otras formas qumicas, antes de entrar en los organismos o cuando se encuentra en el interior de los mismos, antes de determinar la toxicidad de un elemento es necesario determinar la forma qumica en la que se encuentra. La persistencia se define como el tiempo que tarda un contaminante en transformarse en una forma no txica.

La bioacumulacin es un aumento de la concentracin de un producto qumico en un organismo biolgico en un cierto plazo. La toxicidad est causada por la imposibilidad del organismo afectado para mantener los niveles necesarios de excrecin el proceso, las distintas cadenas trficas sufren un fuerte incremento a lo largo de sus sucesivos eslabones, siendo en los superiores donde se hallan los mayores niveles de contaminante, biomagnificacin.

El nivel de toxicidad a nivel qumico de los metales pesados la capacidad para unirse con molculas orgnicas, dependen de reacciones con ligandos que son esenciales para su asimilacin que estn presentes en gran abundancia en la clula, formando parte de molculas de mayores dimensiones o molculas aisladas. La afinidad de metales pesados, como principales ligandos, por grupos sulfidrilo, radicales amino, fosfato, carboxilo e hidroxilo. El resultado de estas uniones ligando-metal:

La accin genrica sobre protenas por inhibicin de la actividad o por disrupcin en la estructura de las mismas. El desplazamiento de elementos esenciales de su metabolismo estndar, produciendo efectos de deficiencia, y La catlisis de reacciones de generacin de molculas ROS (Reactive Oxigen Species) o radicales libres que provocan fenmenos de estrs oxidativo.

El estrs oxidativo es un fenmeno que provoca dao a distintos niveles :

- Inactivacin de protenas y enzimas, fundamentalmente por la oxidacin de los grupos sulfidrilo, dando lugar a puentes disulfuro que causan la interrupcin del funcionamiento normal de la protena o enzima.

-Peroxidacin lipdica de membranas, causando rupturas y subproductos de las cadenas hidrocarbonadas.

-Efectos de dao sobre el ADN. Estos pueden ser desperfectos genotxicos: mutaciones, aberraciones cromosmicas, alteraciones en la sntesis y reparacin de cidos nucleicos y transformaciones celulares. -El estudio de la toxicidad del comportamiento oxidativo de los metales pesados en el interior de la clula de un organismo viene determinado en gran medida por dos tipos de reacciones qumicas, causantes a su vez de dos elementos ROS clave: H2O2 y O2-

Reaccin Fenton
Descomposicin del Perxido de Hidrgeno mediante la adicin de sales de hierro para formar un radical OH

Reaccin de Haber-Weiss
Ciclo de dos reacciones 1. Se aprovecha el radical OH liberado en la reaccin Fenton para reaccionar con ms perxido originando el radical superxido

2. El radical superxido va a reaccionar con ms perxido de Hidrgeno para volver a dar los productos no metlicos de la reaccin Fenton

Desventajas
Los OH producidos inducen daos al DNA, lo que puede conducir a carcinognesis:
1. Alteraciones producidas por oncogenes y factores de crecimiento 2. Alteraciones en los genes supresores de tumores 3. Alteraciones en los genes reguladores del crecimiento

Enfermedades y sntomas que generan

La toxicidad de los metales pesados es elevada, en todos los seres vivos. Debido a la semejanza de los contaminantes y los elementos traza la clula puede incorporar los elementos txicos a su membrana causando dao letal.

Efectos de los metales pesados

As
Bronquitis, cncer de esfago, laringe, pulmn y vejiga; hepatoxicidad, enfermedades vasculares. Interfector de la ruta de gliclisis.
Ya que el arseniatos es qumicamente similar al fosfato y puede reemplazarse en la mayora de las reacciones de fosforilacin.

Efectos de los metales pesados

Cd
Bronquitis, enfisema, infertilidad, cncer de prstata alteraciones neurolgicas hipertensin y enfermedades vasculares.
Es absorbido por los animales y plantas el cual se acumula en los riones, hgado y rganos reproductores.

Efectos de los metales pesados

Hg
Alteraciones respiratorio. neurolgicas y sistema

El vapor de mercurio es la forma ms peligrosa al entrar por los pulmones y llegar al torrente sanguneo y hasta el cerebro.

Efectos de los metales pesados

Pb
Alteraciones neurolgicas, anemia y cncer de rin. Los animales pueden absorberlo por inhalacin o ingestin. Se produce la degeneracin del tejido en el sistema nervioso central.

Aunque las protenas especficas que se ven afectadas por el Hg, Cd, Pb y As pueden diferir de un metal a otro, se produce una interaccin bioqumica similar, responsable de la toxicidad de stos cuatro metales.

Mecanismos celulares para tolerancia y detoxificacin de metales pesados en plantas

Micorrizas Pared celular y exudados de raz

Quelacin
Metalotioneinas (MTs) Fitoquelatinas (PCs) Compartimentalizacin vacuolar Biotransformacin Mecanismo de reparacin celular

Mecanismos celulares para tolerancia y detoxificacin de metales pesados en plantas

Se explicar la interaccin de los metales pesados con el entorno tanto en el interior de la planta como en el exterior de la misma.

De forma sinttica se tratar diferentes aspectos de interaccin plantametal relacionados con tolerancia y detoxificacin.

FITORREMEDIACIN
La fitoestabilizacin utiliza plantas que inmovilizan los metales en el suelo, sin removerlos. Los mecanismos involucrados son la absorcin o adsorcin en las races. De esta forma, los contaminantes permanecen retenidos bajo la superficie del suelo, sin peligro de dispersarse con el viento o pasar a la cadena nutritiva la fitoextraccin utiliza plantas tolerantes que adems son capaces de absorber los metales desde el suelo y acumularlos en su biomasa area. Posteriormente, esta biomasa es cosechada, incinerada y tratada como residuo peligroso.

Fitorremediacin con microorganismos

Los posibles beneficios de los m.o. en la rizosfera:
Estimulacin de crecimiento de la planta La detoxificacin del metal Induccin de la acumulacin del metal en la planta

Micorrizas
ASOCIACIN SIMBITICA Hongo(mycos) y raices (rhizos) de una planta. (unidades Raices plantas se unen con las hifas estructurales de la
mayora de los hongos) Nutrientes minerales y agua

Sustratos energticos y carbohidratos

Se estima que entre el 90 y el 95% de las plantas superiores presentan micorrizas de forma habitual

Las plantas micorrizadas presentan una mayor tolerancia a los metales pesados
Una primera barrera a la entrada de metales pesados la constituira la pared celular del hongo, que tiene una gran capacidad de adsorber cationes sobre su superficie, puesto que est se encuentra cargada negativamente
Impiden la entrada de metales pesados

favoreciendo su acumulacin

Los mecanismos que varan segn la especie de hongo y planta, y del metal.

Procesos en que participan las micorrizas

Absorcin/adsorcin de metales pesados en el hongo En los microorganismos, los iones minerales se acumulan en las clulas, mientras que en los organismos mas complejos son transportados a los diferentes tejidos y rganos (Caneva, Salvadori et al. 2000)

Procesos en que participan las micorrizas

Reduccin del acceso de los metales pesados al apoplasto por hidrofobia.

El apoplasto es un espacio extracelular perifrico de las clulas vegetales por el que fluyen agua, CO2, sales minerales,

Procesos en que participan las micorrizas

Quelacin de los metales pesados con exudados del hongo. Es decir, liberacin de compuestos que formarn una unin con el metal Quelatos

Pared celular y exudados de raz

La raz constituye el tejido de entrada principal de metales pesados en la planta.

Llegan por un proceso de difusin en el medio y por intercambio inico.

Pared celular y exudados de raz

La raz posee cargas negativas en sus clulas (grupos carboxilo), interaccionan con las (+) de los metales equilibrio dinmico
Facilita la entrada el interior de la clula
Algunos MP se quedan retenidos en la pared celular por la estructura de lignina y celulosa
Una vez unidas, los metales pesados se transportan por la va apoplstica y simplstica.

Los cationes entran por la pared celular

Pared celular y exudados de raz

Los exudados: compuestos orgnicos liberados por las races de la planta

BAJO PESO MOLECULAR *cidos orgnicos, *azcares, *fenoles, *aminocidos.
Los exudados facilitan la disponibilidad de los metales. Por ejemplo, se ha observado que los exudados favorecen la absorcin de Fe en suelos deficientes en el mismo.

ALTO PESO MOLECULAR *Secreciones *muclagos (forman una capa externa a la raz) *productos de lisados (autolisis de clulas epidrmicas)

Quelacin
Uno de los aspectos ms importantes de la acumulacin de metales pesados es el que se refiere al proceso de complejacin:
1. El metal se rodea de los ligandos formando un complejo; Los ligandos simples, como el agua, slo forman un enlace con el tomo central (monodentados o monocoordinados), algunos ligandos forman mltiples enlaces de coordinacin, lo cual va incrementando la estabilidad de los complejos.

2. Las plantas utilizan este mecanismo en el interior de la clula para detoxificar los metales pesados, uniendo a ellos ligandos para formar complejos.

3. Los metales pesados muestran gran afinidad por determinados grupos funcionales como principales ligandos, como grupos sulfidrilo, radicales amino, fosfato, carboxilo e hidroxilo.

4. Entre los quelantes producidos por las plantas se encuentran los cidos orgnicos (citrato, oxalato y malato); algunos aminocidos (histidina y cistena), y metalotionenas y fitoquelatinas. Los dos ltimos son los ms importantes.

Metalotionenas (MTs)
Fueron las primeras protenas identificadas(mamferos) como transportadoras de Cd.

Son polipptidos de unos 70-75 aminocidos con un alto contenido en cistena.

Se cree que son responsables de la quelacin de metales pesados en el citoplasma de las clulas de mamferos y bacterias, pero se piensa tambin que no son protenas tan decisivas en el proceso de quelacin de metales pesados en plantas

Fitoquelatinas (PCs)
Son pptidos ricos en cistena sintetizados enzimticamente
Se piensa que las fitoquelatinas pueden desempear en plantas el papel equivalente al que las metalotionenas desempean en mamferos y bacterias Su principal funcin tiene que ver con la destoxificacin de metales no esenciales (Cd,Ni,Al, entre otros) y metaloides con marcada afinidad por el azufre. Las fitoquelatinas tambin estn involucradas en la homeostasis de los metales esenciales (micronutrientes), particularmente de Fe,Cu,Zn.

Las fitoquelatinas tienen como sustrato glutatin.

Glutatin (GHS)
El glutatin est considerado el pptido ms abundante de la Tierra. Participa en procesos de detoxificacin de diversas sustancias nocivas , y es capaz de quelar metales pesados por s misma. Est constituida por 3 aminocidos: cido Glutmico (Glu), Cistena (Cys) y Glicina (Gly), unidos por enlaces peptdicos cuya estructura primaria es: -GluCysGly. El GSH es el sustrato para la biosntesis de las fitoquelatinas.

Sntesis de Fitoquelatinas

Compartimentalizacin vacuolar

En consecuencia, parece ser que el paso final en el proceso de detoxificacin, esto es, desde la movilizacin del metal del suelo a las races hasta llegar al interior de las clulas tanto de la raz tanto de las hojas, es la compartimentalizacin vacuolar.

Compartimentalizacin vacuolar

Para reducir la concentracin de metales txicos en el citoplasma

Eflujo de iones

Transporte al interior de la vacuola

Biotransformacin
Al conjunto de caminos metablicos por medio de los cuales los tejidos incrementan la polaridad de un txico, o a la transformacin qumica de un compuesto en el organismo, se le denomina biotransformacin.
Fase I Fase II

Fase I Fase II

Mecanismos de reparacin celular

Es el conjunto de procesos que se activan como respuesta a los fenmenos de deterioro celular. Estos mecanismos se activan para restablecer las caractersticas iniciales de la clula.

Mecanismos de reparacin celular

Participan en la sntesis de componentes de pared

Participan en la activacin de procesos de reparacin de errores rutinarios en la copia de ADN

Mecanismos de reparacin celular

Metalotioneinas

Protenas de choque trmico.

Estas ltimas incrementan su expresin en gran variedad de organismos en respuesta a la subida de temperaturas por encima de la optima. Tambin se expresan en respuesta a otros estreses como metales pesados, de forma que actan como proteccin y reparacin de protenas.

Mejora de la entrada y acumulacin de metales pesados en plantas

Cmo se consigue que una planta acumule ms metales?

Transporte

Quelacin

Compartimentalizacin

Mecanismos de reparacin celular

Biotransformacin

Asegurar que el metal no produce un efecto txico importante. Para mejorar la acumulacin se debe evitar que el metal pesado provoque dao en su transporte. El metal no sea lesivo en el citoplasma

Disponer el complejo ligando para que inmediatamente se amortige el efecto txico. Disponer el complejo metal-ligando en vacuola.

Incrementar el transporte.

BIOTRANSFORMACIN Y MECANISMOS DE REPARACIN CELULAR