LAS ENZIMAS

CINTICA ENZIMTICA

MODELOS

ENCAJE INDUCIDO LLAVE CERRADURA

MODELO CINTICO DE MICHAELIS-MENTEN

Los estudios sistematicos del efecto de la concentracion inical del sustrato sobre la actividad enzimatica comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo enzima-sustrato como intermediario del proceso de catalisis enzimatica. En 1913, Leonor Michaelis (foto de la izquierda) y Maud Menten (foto de la derecha) desarrollaron esta teoria y propusieron una ecuacion de velocidad que explica el comportamiento cinetico de los enzimas.

Diagrama de velocidad de reaccin y constante de Michaelis-Menten.

Para determinar la velocidad mxima de una reaccin enzimtica, la concentracin de sustrato ([S]) se aumenta hasta alcanzar una velocidad constante de formacin de producto. Esa es la velocidad mxima (Vmax) de la enzima. En ese caso, los sitios activos de la enzima estn saturados con sustrato.

Velocidad de reaccin/velocidad 'V'

La velocidad V indica el nmero de reacciones por segundo que son catalizadas por una enzima. Con concentraciones crecientes de sustrato[S], la enzima va acercndose asintticamente su velocidad mxima Vmax, pero nunca la alcanza. Por esta razn, no hay un [S] determinado para la Vmax. De todas formas, el parmetro caracterstico de la enzima est definido por la concentracin de sustrato a la cual se alcanza la mitad de la velocidad mxima (Vmax/2).

Constante de Michaelis KM
Entonces, aunque la concentracin de sustrato a Vmax no puede ser medida exactamente, las enzimas pueden ser caracterizadas por la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad mxima. Esta concentracin de sustrato se conoce como constante de Michaelis-Menten (KM). Esta constante representa (para enzimas que exhiben una cintica de Michaelis-Menten simple), la constante de disociacin (la afinidad del complejo enzima-sustrato (ES) por el sustrato). Valores bajos indican que el complejo ES est unido muy fuertemente y raramente se disocia sin que el sustrato reaccione para dar producto. As para estos casos, se obtendr una diferente KM, segn el sustrato especfico, en que acte cada enzima (como sucede en el caso de enzimas que actan en sustratos anlogos); y las condiciones de reaccin en que se realice las mediciones.

'

v = v3 = k3 [ES] =

Si introducimos el parametro Vmax en la ecuacion general de la velocidad, (la formula recuadrada anteriormente), obtenemos la expresion mas conocida de la ecuacion de Michaelis-Menten:

MODELO CINTICO DE MICHAELIS-MENTEN

Ecuacin
Para explicar la relacion oservada entre la velocidad inicial (v0) y la concentracion inicial de sustrato ([S]0) Michaelis y Menten propusieron que las reacciones catalizadas enzimaticamente ocurren en dos etapas: En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la segunda, el complejo enzima-sustrato da lugar a la formacion del producto, liberando el enzima libre:

Ejemplo la cuantificacin de la actividad creatina cinasa en suero

Acompaantes no proteicos de las enzimas

Mg

FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

pH del medio

Temperatura

Tiempo
Concentracin de Sustrato Concentracin de enzima

MODELO CINTICO DE MICHAELIS-MENTEN

ACTIVIDAD ENZIMTICA

ACTIVIDAD ENZIMTICA
Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1 mol de sustrato en un minuto. La actividad especfica es el nmero de unidades de enzima por miligramo de protena (U/mg prot) o por mililitro de disolucin (U/ml).

ACTIVIDAD ENZIMTICA Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad enzimtica como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 106 moles y 1 minuto son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106 U. Esta unidad es muy grande, de forma que se utilizan frecuentemente los submltiplos como el microkatal (kat, 10-6 kat) o el nanokatal (nkat, 10-9 kat).

MEDICIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

MEDICIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

MEDICIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

MEDICIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

METODO DE PUNTO FINAL

la concentracin de glucosa en suero, se mide por mtodo enzimtico el cual consiste que la glucosa por accin de la glucosa oxidasa produce cido glucnico y peroxido de hidrgeno; este ltimo por accin de la peroxidasa oxida a la 4-aminofenazona generando la oxazona de color rosado, color que es proporcional a cantidad de glucosa y medible a 505 nm.
DO

Se lee una sola vez, la lectura es estable por un tiempo determinado.

Leer Tiempo

METODO ENZIMATICO CINTICO

Ejemplo la cuantificacin de la actividad creatina cinasa en suero
En infarto cardiaco se eleva su actividad en sangre

METODO ENZIMATICO CINTICO

Es un METODO ENZIMATICO CINTICO, METODO DE PUNTOS MULTIPLES

METODO ENZIMATICO CINTICO DE PUNTOS MULTIPLES

Enzimas en el Diagnstico Clnico

Origen de las enzimas circulantes y su liberacin celular

Origen de las enzimas circulantes y su liberacin celular POR APOPTOSIS: recambio natural. POR ALTERACIN CELULAR

Determinacin de actividades enzimticas para el diagnostico clnico

Requisitos
a) La enzima debe estar presente en fluido biolgico b) La enzima debe ser fcil de ensayar y automatizar la medida c) Los valores de actividad entre individuos sanos y enfermos deben ser significativos y debe haber buena correlacin con los valores patolgicos. d) La enzima debe ser estable

Determinacin de actividades enzimticas para el diagnostico clnico

EN SUERO
1. Enzimas especficas (Coagulacin, complemento) 2. Enzimas sin especificidad 2.a. Enzimas que son secretadas por los tejidos. Ejm. Amilasas, lipasas, fosfatasas, etc. 2.b. Enzimas intracelulares. Dao Tisular Proliferacin Celular (Neoplasia)

ENZIMOLOGIA CLNICA DEL INFARTO DE MIOCARDIO

Pruebas enzimticas : Evidencia de la produccin de un infarto Seguimiento del progreso y la recuperacin tras ciruga

Determinacin de actividades enzimticas para el diagnostico clnico

El Valor (U/L) de las enzimas en plasma depende de: Concentracin en tejido Velocidad del vertido Grado de degradacin

ISOENZIMAS
Las isoenzimas o isozimas son enzimas que difieren en la secuencia de aminocidos, pero que catalizan la misma reaccin qumica. La existencia de las isoenzimas permite el ajuste del metabolismo para satisfacer las necesidades particulares de un determinado tejido o etapa del desarrollo. SON DIFERENTES EN DIFERENTES TEJIDOS

ISOENZIMAS

ACTIVIDAD CK, CPK

ENZIMOLOGIA CLNICA DE ENFERMEDADES HEPTICAS Aspartato aminotransferasa (AST GOT) Alanina aminotransferasa (AST GPT) Fosfatasa alcalina g-Glutamil transferasa Otras: Lactato deshidrogenasa, glutation transferasa, etc

AST o GOT
La aspartato aminotransferasa o ASAT (EC 2.6.1.1), antes conocida como transaminasa glutmicooxalactica (GOT), tambin llamada aspartato transaminasa (AST) es una enzima aminotransferasa que se encuentra en varios tejidos del organismo de los mamferos, especialmente el corazn, el hgado y el tejido muscular. Se encuentran cantidades elevadas de esta enzima en el suero en casos de infarto agudo de miocardio, hepatopata aguda, miopatas, por el empleo de determinados frmacos y en cualquier enfermedad o trastorno en el cual resulten seriamente daadas las clulas.

ALT o GPT
La Alanina aminotransferasa (ALAT) (EC 2.6.1.2), anteriormente conocida como Transaminasa glutmicopirvica (GPT), tambin llamada alanina transaminasa (ALT), es una enzima aminotransferasa con gran concentracin en el hgado y en menor medida en los riones, corazn y msculos. Cuando hay una lesin de estos rganos la ALT es liberada a la sangre y aparece elevada en los anlisis. Como es una aminotransferasa ms especficamente heptica que la Aspartato aminotransferasa (AST), aparece ms elevada en las enfermedades hepticas que en otras, por eso el cociente ALT/AST (o GPT/GOT) ser mayor de 1 en ciertas enfermedades hepticas como la hepatitis vrica. Al contrario aparece menor de 1 en la cirrosis heptica, enfermedad heptica alcohlica, congestin heptica o tumores hepticos.

La fosfatasa alcalina (ALP)

La fosfatasa alcalina (ALP) es una enzima hidrolasa responsable de eliminar grupos de fosfatos de varios tipos de molculas como nucletidos, protenas y alcaloides. El proceso de eliminar el grupo fosftico se denomina desfosforilacin. Como sugiere su nombre, las fosfatasas alcalinas son ms efectivas en un entorno alcalino. La fosfatasa alcalina recibe el nombre de orto-fosfricomonoster hidrolasa. Estas enzimas proceden de la ruptura normal de las clulas sanguneas y de otros tejidos. Las fosfatasas alcalinas son enzimas que se encuentran presentes en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente alta en huesos, hgado, placenta, intestinos y rin. Tanto el aumento, as como su disminucin en plasma tienen significado clnico.

La fosfatasa alcalina (ALP)

Este examen se hace para diagnosticar enfermedad del hgado y del hueso o para ver si los tratamientos para dichas enfermedades estn funcionando. Puede incluirse como parte de las pruebas de la funcin heptica de rutina.

Los niveles de la fosfatasa alcalina superiores a los normales pueden deberse a: Anemia Obstruccin biliar Enfermedad sea Consolidacin de una fractura Hepatitis Hiperparatiroidismo Leucemia Enfermedad heptica Cnceres seos osteoblsticos Osteomalacia Enfermedad de Paget Raquitismo Los niveles de la fosfatasa alcalina (hipofosfatasemia) inferiores a los normales pueden deberse a: Desnutricin Deficiencia de protena Algunas afecciones adicionales bajo las cuales se puede hacer el examen son: Enfermedad heptica alcohlica (hepatitis/cirrosis) Alcoholismo Estenosis biliar Arteritis de clulas gigantes (temporal, craneal) Neoplasia endocrina mltiple (NEM) II Carcinoma de clulas renales

g-Glutamil transferasa
La gamma glutamil transpeptidasa (-GT / GGT / GGTP) (CE (Nmero de la Comisin de Enzimas) 2.3.2.2) (links en ingls) es una enzima heptica. Su nivel en sangre puede ser medido, y un nivel elevado puede indicar una anormalidad en el hgado, aunque puede ser causado por varias condiciones. Su nivel est incrementado en el abuso crnico y agudo de alcohol.

GGT
La GGT participa en la transferencia de aminocidos a travs de la membrana celular y tambin en el metabolismo del glutatin (un antioxidante). Las concentraciones altas de GGT se encuentran en el hgado, las vas biliares y el rin. La GGT se mide en combinacin con otros exmenes. En particular, la enzima fosfatasa alcalina se incrementa en la enfermedad heptica y de las vas biliares, al igual que en la osteopata; mientras que la GGT se eleva en la enfermedad heptica y de las vas biliares, pero no en la osteopata. De esta manera, un paciente con un nivel de fosfatasa alcalina elevado y un nivel de GGT normal tiene probablemente osteopata, pero no enfermedad heptica o de las vas biliares.

Los niveles de GGT superiores al normal pueden indicar:

Insuficiencia cardaca congestiva Colestasis (congestin de las vas biliares) Cirrosis Hepatitis Isquemia heptica (deficiencia en el flujo de sangre) Necrosis heptica Tumor heptico Uso de drogas hepatotxicas (drogas txicas para el hgado)

Lactato deshidrogenasa
La lactato deshidrogenasa (140 kDa) est formada por 4 subunidades, cada una de unos 35 kDa. Se conocen dos tipos de subunidades: H y M, que presentan pequeas diferencias en su secuencia de aminocidos. Ambas pueden asociarse independientemente para formar tetrmeros, dando lugar a cinco isoenzimas (isoformas de la enzima), correspondientes a las cinco combinaciones posibles, cada una de las cuales se encuentra preferentemente en determinados tejidos y puede identificarse mediante electroforesis.

Lactato deshidrogenasa
LDH-1 (H4): en el corazn, msculos y eritrocitos. LDH-2 (H3M): en el sistema retculoendotelial y leucocitos. LDH-3 (H2M2): en los pulmones. LDH-4 (HM3): en los riones, placenta y pncreas. LDH-5 (M4): en el hgado y msculo esqueltico. La asociacin de las subunidades para formar tetrmeros es aleatoria, por lo que la composicin isoenzimtica de un tejido est determinada principalmente por el nivel de expresin de cada uno de los genes que codifican las subunidades H y M.

FOSFATASA ACIDA
Las fosfatasas cidas se encuentran presentes en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente altas sus cantidades en prstata, estmago, hgado, msculo, bazo, eritrocitos y plaquetas. Se ha visto que en individuos con carcinoma de prstata, se produce una elevacin en los niveles de la enzima en suero, como consecuencia del aumento de isoenzima prosttica. Cuando no se ha producido metstasis y el tumor se encuentra circuns-cripto a la glndula, el incremento ser pequeo o nulo. En cambio, ste ser importante cuando existe compromiso de otros tejidos, especialmente, el seo.

ACTVIDAD AMILASA Este examen se realiza principalmente para diagnosticar o vigilar enfermedades del pncreas. Tambin puede detectar algunos problemas del tubo digestivo. Las afecciones adicionales bajo las cuales se puede llevar a cabo el examen son: - Pancreatitis crnica - Cetoacidosis diabtica - Seudoquiste pancretico.

GRACIAS
LIC. T.M. PERCY URETA SIERRA