UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE QUIMICA, ING QUIMICA E INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

ASIGNATURA BIOQUIMICA
SEMANA 4 SEMESTRE 2013-I
Magister ROSARIO CALIXTO COTOS

LUNES 15 ABRIL DE 2013

SEMANA 4 : CONTENIDO
ENZIMAS II 1. Mecanismo de accin enzimtica. 2. Actividad enzimatica. 3. Cintica enzimatica 4. Modelo de Michaelis Menten. 5. Parmetros cinticos, 6. Inhibicin enzimatica. Tipos. Clases Inhibidores enzimticos usados en la industria de alimentos

CLASIFICACION DE COENZIMAS

Coenzimas Vitaminicos
Transferencia de Grupos Coenzima A- Acilo Biocitina - Carboxilo

Coenzimas No Vitaminicos
Transferencia de Grupos Derivados de Nucletidos

Tiamina Pirofosfato - Aldehdo activo

Cobalamina - Alquilo Tetrahidrofolato - Monocarbonados Transferencia de electrones Nucletidos de piridina: NAD+/NADH; NADP+/NADPH Nucletidos de flavina: FMN/FMNH2; FAD+/FADH2

ATP - Adenilato
UTP - Uridilato

UNIDADES DE MEDIDA DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

.La velocidad de una reaccin se puede expresar
1. Moles de S consumidos 2. Moles de producto formado
v= [S]/ T = [P]/ T Por unidad de tiempo

Tambin puede ser: 1. Desaparicin de Sustrato

2. Aparicin de productos

Qu es actividad enzimtica?. Moles transfor S x tiempo Se expresa en micromles (moles) de S convertidos en P por minuto, Rosario Calixto Cotos Mg. Bioqumica tambien es U/min

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Cintica Enzimtica
La cintica enzimtica es el anlisis cuantitativo del efecto de cada uno de los factores que intervienen en la actividad enzimtica, que se evala a travs de la velocidad de la reaccin catalizada. Las variables ms importantes son: Concentracin de enzima, sustratos y productos (incluyendo inhibidores y/o activadores) pH Temperatura

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4.Mecanismo de Michaelis-Menten
El mecanismo de la catlisis enzimtica propuesto por Michaelis y Menten se basa en considerar la formacin del complejo enzima-sustrato (ES)

E + S

k1 k-1

k2

ES

P+E

Una cintica hiperblica implica un proceso saturante:

Hay un nmero limitado de sitios en la enzima para fijar sustrato; una vez que estn ocupados todos, por mucho que aumente la concentracin de sustrato, la velocidad permanecer constante tendiendo a un valor asinttico
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Hiptesis de Michaelis - Menten

E+S

k+1 k-1

ES

k+2

E+P

- La primera parte del mecanismo,

E+S
k+2

k+1

ES

k-1
Tiene lugar mucho ms rpidamente que la segunda:

ES

E+P
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Velocidad Mxima
La Vmax es la velocidad obtenida en condiciones de saturacin del E por S en condiciones de pH, T y fza ionica. Es una const par una [ ] determinada de E. La V. inicial depende de la [S] a medida que aumenta la concentracin de S la V. inicial aumenta hasta que el E este saturad por el S. Se representa la Vo obtenidas a varias [S] se obtiene una curva (ver), La V. de la R. alcanza un maximo en los que los C.A estan saturados

Dra Maria R Calixto Cotos MSC

Mecanismo de Michaelis-Menten

Ecuacin de Michaelis-Menten

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5. PARAMETROS CINTICOS
Vo= Vmax todos los sitios activos estn ocupados y no hay molculas de E libre.
Km= [S] cuando V = Vmax

Km representa la cantidad de sustrato necesaria para fijarse a la mitad de la E disponible y producir la mitad de la Vmax

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5. La determinacin de los parametros

cinticos
Km y Vmax se realiza a partir de los valores de las v.iniciales a diferentes [S], esta determina mediante una representacin lineal del modelo de Michaelis Determine la [S] en M, si Vmax = es 1.5 M/min Vo = 400 M/min Km = 800 M

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6. INHIBICIN ENZIMTICA
Inhibicin Inhibidores(Inh) Def. Impiden actividad de Enzima Enzimtica

la la
REVERSIBLE

IRREVERSIBLE

COMPETITIVA

NO COMPETITIVA

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LOS INHIBIDORES ENZIMATICOS

1. Reversible: establece un equilibrio con la enzima libre, con el complejo enzima-substrato o con ambos:
E+I ES + I EI ESI

2. Irreversible: modifica qumicamente a la enzima: E+I E

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INHIBICION COMPETITIVA
Posee una estructura parecida al S

EL INHIBIDOR

Competitivo es un anlogo qumico del S Compite con el S por la unin con la E La E tiene ocupado el C. activo por el Inh A muy altas [ S] desaparece la inhibicin
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Ejemplo Inhibidor Competitivo

cido succnico + FAD == Acido fumrico + FADH2
Sustrato cofactor oxidado Ptos: principal C.reducido

El inhibidor competitivo es el cido malnico, es un anlogo estructuralmente. parecido al cido succnico

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Inhibidor competitivo su estructura es similar a la del sustrato

No se forma producto
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INHIBICIN NO COMPETITIVA
Altera la forma del sitio activo pegndose a la enzima en otro lugar y cambia la forma de la enzima. El Inh se fija a la E independientemente de que lo haga o no el S. No impide la fijacin del S a la E, pero s impide la accin cataltica
SA

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INHIBICIN NO COMPETITIVA:
Actan en un lugar del enzima distinto al centro activo. Causa una modificacin estructural que impide que el sustrato se pueda unir al centro activo.
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INHIBICION IRREVERSIBLE
Reaccionan con un grupo qumico de la enzima, modifica covalentemente Se unen mediante E covalente con las E cerca del centro activo. Son, por lo general, altamente txicos. * Organofosforados
Actan sobre enzimas sernicas

- Insecticidas: Parathion, Malathion -Inhibidores de laAcetilcolinesterasa

-Arsnico -Piruvato deshidrogenasa, -Altera el Catabolismo oxidativo

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Inhibidores enzimticos usados en la industria de alimentos

Pardeamiento COMP. REDUCTORES enzimtico Acido ascrbico, se utiliza La adicin de para el jugo de frutos y compuestos reductores: frutas cortadas Transfieren las Se usa 0.5 a 1 % del peso quinonas en fenoles del producto que evita retarda el pardeamiento totalmente P. enzimatico. enzimtico.

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Inhibidores enzimticos usados en la industria de alimentos

Los tioles, como la Cys, tambin son agentes reductores que inhiben pardeam. enzimtico. Pero, la cantidad usada de Cys es incompatible con el sabor del pdto. El EDTA pueden inhibir el PPO, que es una metaloenzima que contiene Cu en su sitio activo. Forma un complejo quelante

http/arandoe.com/min/index2

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INHIBICIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Respecto a los enzimas que requieren iones metlicos para su actividad: El Cianuro es un potente inhibidor de enzimas que contienen Fe (Fe(CN)3) El Fluoruro es un inhibidor de enzimas que requieren Ca o Mg.

EVALUACION DE LA SESION 4:

1. Cules son las formas de expresar la actividad enzimatica ? 2. Como determina el Km y V max 3. Cul es la diferencia entre inhibidor competitivo y no competitivo? 4. Cules son los factores de afectan la actividad enzimtica? 5. Mencione 5 enzimas con sus respectivos sustratos 6. Mencione 3 coenzimas con sus respetivas coenzimas?

Elaborado. Dra Maria R Calixto Cotos MSC