Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Cromatografia Gasosa
- Importante mtodo analtico de separao; - Anlises qualitativas e quantitativas; - Separao rpida e de alta resoluo; - Pode ser acoplado a um MS: importantes aplicaes forenses; - Apresenta limitaes: Quais compostos podem ser separados por GC?
Cromatografia Gasosa
- Fase mvel: uma corrente (fluxo) de gs;
- Fase estacionria: a)Lquida (cromatografia gs-lquido); b)Slida (cromatografia gs-slido).
FM (gs)
FE (slida ou lquida)
Cromatografia Gasosa
Quais compostos podem ser separados por GC? Os compostos devem: - Ser solveis (pelo menos parcialmente) no gs de arraste;
CG - Instrumentao
1 2 6
5 3
CG - Instrumentao
CG - Instrumentao
GC Gs de arraste
Caractersticas:
- Inerte: NO reage com os componentes da amostra - apenas os carrega pela coluna;
isento
de
impurezas
Hidrocarbonetos
GC Gs de arraste
Caractersticas: - Custo: gases de altssima pureza podem custar muito caro; Maior grau de pureza = Maior custo! - Compatvel com detector: cada detector demanda de um gs especfico para melhor funcionamento;
DCT DIC DCE
He , H2 N2 , H2 N2 (SS), Ar + 5% CH4
GC Gs de arraste
Alimentao de gs:
3 4 2 1 6
1 - Cilindro de Gs 2 - Regulador de Presso Primrio 3 - Traps para eliminar impurezas do gs 4 - Regulador de Presso Secundrio 5 - Regulador de Vazo (Controlador Diferencial de Fluxo) 6 - Medidor de Vazo (Rotmetro)
Microseringa de 10 L:
mbolo agulha (inox 316)
corpo (pirex)
GC Injeo da amostra
Parmetros de injeo:
- Temperatura: Suficientemente elevada para vaporizar a amostra imediatamente, sem degradao;
Regra Geral: 50C acima da TE do composto menos voltil.
- Volume injetado:
COLUNA
empacotada = 3,2 mm (1/4) capilar = 0,25 mm
Amostras Lquidas
0,2 L ... 20 L 0,01 L ... 3 L
Amostras Gasosas
0,1 ml ... 50 mL
GC Coluna
Recheada com slido pulverizado (FE slida ou FE lquida depositada sobre as partculas do recheio)
GC Coluna
Caractersticas de uma FE ideal: - Seletiva: Interagir diferencialmente com os componentes da amostra; = Maior custo! - Estabilidade qumica durabilidade da coluna; e trmica: Maior
GC Coluna
FE lquida SUPORTE Slido inerte poroso Tubo capilar de material inerte
GC Temperatura da coluna
- Alm da interao com a FE, o tempo que um analito demora para percorrer a coluna depende de sua PRESSO DE VAPOR (p0);
- p0
Temperatura da coluna
Presso de vapor
Velocidade de migrao
GC Temperatura da coluna
TEMPERATURA DA COLUNA
GC Forno da coluna
Caractersticas desejveis de um forno:
- Ampla faixa de temperatura de uso: Pelo menos Tambiente at 400C; = Maior custo!
- Temperatura independente dos demais mdulos: No deve ser afetada pela T do injetor e do detector; - Temperatura uniforme em seu interior: Sistemas de ventilao eficientes para manter a T homognea em todo o forno;
GC Forno da coluna
Caractersticas desejveis de um forno:
- Fcil acesso coluna: A coluna pode ser frequentemente trocada; = Maior custo!
GC Forno da coluna
Misturas complexas (constituintes com volatilidades muito diferentes) separadas ISOTERMICAMENTE: TCOL ALTA:
- Componentes mais volteis no so separados - Componentes menos volteis eluem mais rapidamente
TCOL BAIXA:
- Componentes mais volteis so separados - Componentes menos volteis demoram a eluir, saindo como picos mal definidos
GC Forno da coluna
Programao linear de temperatura:
- A T do forno pode ser variada linearmente durante a separao; = Maior custo!
TEMPERATURA
TFIM
R TINI
tINI TEMPO
tFIM
GC Forno da coluna
Programao linear de temperatura:
Consegue-se boa separao dos componentes da amostra em menor tempo
Desvantagens:
- VARIAES DE VAZO DO GS DE ARRASTE A viscosidade de um gs aumenta com a temperatura.
GC Detectores
- Dispositivos que examinam continuamente o material eluido, gerando sinal para as substncias que no o gs de arraste.
Grfico Sinal x Tempo = CROMATOGRAMA Idealmente: cada substncia separada aparece como um PICO no cromatograma.
GC Detectores
UNIVERSAIS:
Geram sinal para qualquer substncia eluida.
SELETIVOS:
Detectam apenas substncias com determinada propriedade fsico-qumica.
ESPECFICOS:
Detectam substncias que possuam determinado elemento ou grupo funcional em suas estruturas.
GC Detectores
Detector por condutividade trmica (DCT ou TCD):
PRINCPIO Variao na condutividade trmica do gs quando da
eluio de um analito.
A taxa de transferncia de calor entre um corpo quente e um corpo frio depende da condutividade trmica do gs no espao que separa os corpos
Se a condutividade trmica do gs diminui, a quantidade de calor transferido tambm diminui - o corpo quente se aquece.
GC Detectores
Detector por condutividade trmica (DCT ou TCD):
SELETIVIDADE Observa-se sinal para qualquer substncia eluida diferente do gs de arraste = UNIVERSAL. Com DCT, a rea dos picos cromatogrficos MUITO dependente da vazo do gs de arraste. Gs de arraste com DCT: He ou H2 He ou H2 outro gs
um detector NO-destrutivo!
GC Detectores
Detector por captura de eltrons (DCE ou ECD):
PRINCPIO Supresso de um fluxo de eltrons lentos (termais) causada
pela sua absoro por espcies eletroflicas.
Um fluxo contnuo de eltrons lentos estabelecido entre um nodo (fonte radioativa b -emissora) e um ctodo.
Na passagem de uma substncia eletroflica alguns eltrons so absorvidos, resultando uma supresso de corrente eltrica.
AB + e - AB - + energia
GC Detectores
Detector por captura de eltrons (DCE ou ECD):
GS DE ARRASTE Funcionamento do DCE muito dependente da natureza do gs de arraste MAIS USADOS:
N2 Ar + 5% CH4
O gs deve ser o mais puro possvel !!! (traos de H2O e O2 comprometem o sinal do DCE)
GC Detectores
Detector por ionizao em chama (DIC ou FID):
PRINCPIO: Formao de ons quando um composto queimado em uma chama de hidrognio e oxignio.
O efluente da coluna misturado com H2 e O2 e queimado. Como numa chama de H2 + O2 no existem ons, ela no conduz corrente eltrica.
GC Detectores
Detector por ionizao em chama (DIC ou FID):
Quando um composto orgnico elui, ele tambm queimado. Como na sua queima so formados ons, a chama passa a conduzir corrente eltrica
GC Detectores
Detector por ionizao em chama (DIC ou FID):
SELETIVIDADE Seletivo para substncias que contm ligaes C-H em sua estrutura qumica.
GC Detectores
Detector de nitrognio-fsforo (NPD):
Modificao do DIC altamente seletiva para compostos orgnicos nitrogenados e fosforados
GC Detectores
Detectores Qualitativos
Cromatografia Gasosa com Deteco Espectromtrica de Massas (CG-EM / GC-MS);
ABUNDNCIA
O grfico do nmero de ons formados em funo da razo Massa / Carga dos ons o ESPECTRO DE MASSAS do analito.
MASSA / CARGA
GC Detectores
Espectrmetro de massa (MS):
- Interface cromatgrafo - espectrmetro:
Separador Molecular O gs de arraste leve (He) difunde mais rapidamente que o analito e tende a ser drenado para o vcuo.
CG
EM
Coluna Capilar
Interface Capilar Direta Com colunas capilares a vazo baixa de gs de arraste pode ser drenada pelo sistema de vcuo.
GC Detectores
Espectrmetro de massa (MS):
- Sistema de Controle e Aquisio de Dados :
GC Detectores
Espectrmetro de massa (MS):
- Espectros de massas completos
TIC
SIM
SIM
Seletivo Maior Sensibilidade
GC Detectores
Espectrmetro de massa (MS):
Busca automtica em bibliotecas de espectros: comparao estatstica ( Probability Based Matching )
ESPECTRO DESCONHECIDO
PBM
BIBLIOTECA DE ESPECTROS
GC Detectores
Espectrmetro de massa (MS):
# 1 NOME 1-dodeceno 1-dodecanol ciclododecano 2-dodeceno 1-undeceno FRM. % C12H24 99 C12H26O 91 C12H24 91 C12H24 66
2 3 4 5 6
LIMITAES:
Referncia
7,8
9,10 11,12 13,14 15,16 17,18 19,20 21,22 23,24
Estudo de Caso
(Case Report)
Health, Provincial Laboratory, 3211 Albert Street, Regina, Saskatchewan, Canada S4S5W6 bDepartment of Pathology, College of Medicine, University of Saskatchewan, B419 Health Sciences Building, 107 Wiggins Road, Saskatoon, Saskatchewan, Canada S7N 5E5
GC Estudo de caso
Introduo:
- Malation: inseticida sinttico organofosforado; - Utilizado no controle de pragas em frutas e vegetais;
GC Estudo de caso
O caso:
- Uma mulher de 40 anos foi encontrada morta pelo marido s 20h; - Ela estava de bruos no cho do seleiro; - No local havia: Canivete Exxacto, mao de cigarros e cigarros j utilizados; No balco, uma garrafa de 500 mL de malation, com 50-100 mL de lquido. Estava tampada.
GC Estudo de caso
O caso:
- Feridas mltiplas no pulso esquerdo, manchas de sangue no cho e na mo; - No se observou sinais de luta corporal ou trauma;
GC Estudo de caso
O caso:
- Houve incontinncia de fezes e urina ; - Forte odor qumico que exalava do corpo, caracterstico de malation; - Amostras foram retiradas para exames toxicolgicos: Sangue, fgado e contedo gstricos;
GC Estudo de caso
O caso:
- Vivia com o marido e dois filhos (14 e 16 anos) no stio; - Outubro de 1994 desenvolveu um grave distrbio afetivo com caractersticas paranicas; - Foi tratada com antidepressivos e antipsicticos; - Dezembro de 1994 tentou suicdio por overdose de remdios;
GC Estudo de caso
A anlise:
- Foram feitas as extraes das amostras;
- Posterior anlise utilizando GC-MS:
GC-MS Fisons 8000 cromatgrafo a gs acoplado a um espectrmetro de massa quadrupolo Fisons MD800, EI. Injetado 1 mcL de amostra, temperatura inicial de 120C com rampa de 15C/min at a temperatura final de 300C.
Malation puro
GC Estudo de caso
Discusso:
-A alta concentrao de malation intacto nos contedos gstricos consistente com outros casos reportados de indivduos que cometeram suicdio por ingesto de grande quantidade de malation; -A falecida tambm cortou os pulsos, alm de ingerir malation.
Estudo de Caso
(Case Report)
Concentrao 2ug/g
Concentrao 0,002ug/g
Estudo de Caso II
(Case Report)
Case report
GC Estudo de caso
Introduo:
- Consumo de cocana vem aumentando cada vez mais na Espanha e na Europa; - Espanha: Lugar estratgico de entrada do trfico de drogas na Europa; - Usurios: inalao ou injeo intravenosa; - No consumida oralmente (exceo dos Body packers); - Caso curioso de intoxicao de cocana erroneamente consumida.
GC Estudo de caso
O caso:
- Um homem de 40 anos; - Tomou conhecimento, por amigos, de uma fruta tropical chamada noni, que aumenta a energia e o bem-estar;
- Morinda citrifolia, presente em vrios pases, inclusive no Brasil; - Propriedades medicinais: atividades antibitica, antiinflamatria, analgsica, e, at mesmo, inibidora do cncer (mecanismo de ao desconhecido); - Geralmente em forma de suco, permitida pela Unio Europia.
GC Estudo de caso
O caso:
- Encomendou pela internet o suco de noni, atravs de uma distribuidora do Mxico foram trs garrafas; - Quando chegou, ele e sua parceira abriram uma das garrafas e ele bebeu o tal suco;
GC Estudo de caso
O caso:
- Logo depois de beber, de repente ele sentiu-se mal caindo no cho; - A parceira disse que ela quebrou a garrafa; ela ainda tinha em suas mos quando o perito chegou;
GC Estudo de caso
O caso:
E o que aconteceu?????
GC Estudo de caso
O caso:
- Familiares e a parceira relataram ao perito que foi chamado ao local que o falecido no usava drogas; - Duas garrafas da cena do crime foram enviadas para o laboratrio de anlise dos autores do artigo;
- Foram numeradas:
Garrafa 1: tinha um lquido verde-escuro; Garrafa 2: observou-se a presena de um slido branco suspenso em lquido claro. - Tambm foram retiradas amostras de sangue femoral, urina e humor vtreo do falecido, para o mesmo laboratrio.
GC Estudo de caso
A anlise:
- Amostras de sangue e urina foram devidamente armazenadas e utilizou-se padres analticos;
- Anlise de etanol no sangue foi feita por GC FID, procedimento realizados segundo normas espanholas; - Preparo das amostras de sangue e urina imunoenzimticos e desproteinizao com acetona;
GC Estudo de caso
A anlise:
- Confirmao e quantificao da cocana e dos seus metablitos (etilbenzoilecgonina, benzoilecgonina e metilecgonina) por GC MS;
Resduos secos foram aquecidos20 min a 70C com 50 mL de eagente de derivao BSTFA (N, O-bis (trimetilsilil) trifluoroacetamida). Modelo cromatgrafo gasoso 5890 II acoplado com um detector HP 5973 MS com impacto de eltrons (EI), sob monitoramento SIM. A coluna utilizada era uma slica fundida coluna capilar de Ultra-1-revestidas com metil-siloxano. Portador de gs era de hlio a uma taxa de 1,7 mL / min. Temperatura do injetor foi 280C. A fonte do MS e as temperaturas do MS foram 230C e 250C, respectivamente. Temperatura do forno inicial foi de 60 C, sustentado por 3 min, aumentando em 12C / min a 290C, permanecendo nesta temperatura durante 10 min. Volume de injeo foi de 1 mL.
GC Estudo de caso
A anlise:
Cocana
Cocaetileno
Metilecgonina
GC Estudo de caso
Resultados toxicolgicos:
It is the rst time, to our knowledge, that cocaethylene formation in vitro by a non-enzymatic pathway is reported.
GC Estudo de caso
Resultados toxicolgicos:
No ethanol was detected in blood. Cocaine, methylecgonine and benzoylecgonine were detected in blood, urine and vitreous humour, as it is shown in Table 2. No other toxic compounds were detected.
GC Estudo de caso
Resultados:
- Realizada autpsia e exames histolgicos corao, coronrias, fgado, pulmo, crebro, bao e rim; - Os achados histolgicos no fgado e corao foram de necrose aguda de etiologia txica.
GC Estudo de caso
Discusso:
- Caso fatal de overdose acidental de cocana; - A concentrao de cocana no sangue encontrada foi de 2,27 mg/L; - A ingesto de cocana no pode ser realmente confirmada, pois a garrafa foi quebrada e amostras do contedo gstrico no foram enviadas para o laboratrio;
- A relevncia dos resultados foi obtida atravs da comparao com trabalhos na literatura.
GC Estudo de caso
Discusso:
- Portanto, neste caso a morte foi atribuda a uma intoxicao aguda de cocana devido sua elevada concentrao no sangue e levando em conta os fatos de que o falecido no era um consumidor regular de cocana, e que outras substncias toxicologicamente relevantes no foram detectados nos biofludos analisados. A morte ocorreu de repente, logo aps beber suco noni e os achados histolgicos de focos necrticos no fgado e corao so concordantes de uma leso aguda txica.
GC Estudo de caso
Concluso:
- Importncia dos exames toxicolgicos em mortes sbitas; - O perigo da compra de remdios e alimentos pela internet oportunidade para organizaes do trfico de drogas; A concluso de que a cocana foi mesmo a causa da morte pode ser considerada apenas porque havia uma compreenso razovel das circunstncias e dos fatos relacionados morte;
- Finalmente, pode-se afirmar que um desvio na rede de distribuio de traficantes conduziram a consequncias fatais a uma pessoa inocente.
Dvidas