TERAPIA GNICA

MARIBEB CASTRO GONZLEZ

Terapia gnica. 1989

Insertar una copia sana del gen en una localizacin no especfica. Cambiar un gen anormal por uno normal a travs de recombinacin homloga. Reparar el gen anormal a travs de mutacin inversa selectiva Insertar un gen que aade nuevas funciones Insertar un gen que regula el funcionamiento de otros genes. Alterar la regulacin de un gene en particular

Terapia Gnica

La terapia gnica puede emplearse para curar aquellas enfermedades que tienen: Origen gentico: aquellas causadas por la mutacin de uno o varios genes Monofactorial, multifactorial, cromosomal o mitocondrial. Adquiridas

Tipo heredado, como las enfermedades mono gnicas con patrn de herencia mendeliano

Deficiencia en adenosn deaminasa [ADA], hipercolesterolemia familiar, fibrosis qustica, hemofilia A, sndrome de Martan, Hungtinton,hemocromatosis.

Las enfermedades con herencia multifactorial (en las que hay una influencia de los genes y el ambiente,

Hipertensin, diabetes, cancer de seno (crom 6, 11, 13,14,15,17 y 22) y enfermedad coronaria, Alzheimer, artritis,

Tipo adquirido

cncer, SIDA, artritis

Consideraciones:

La enfermedad tiene que tener una base gentica Conocer qu gen o genes estn implicados Conocer la biologa de la enfermedad Accesibilidad al tejido afectado.

Pasos para una terapia gnica

Identificacin, aislamiento y amplificacin del gen que codifica el producto teraputico. Extraccin y cultivo in vitro de clulas del paciente Seleccin del vector adecuado Unin gen-vector Transferencia del vector-ADN a clulas in vitro. Integracin del gen teraputico al ncleo celular Expresin del gen con el efecto deseado en las clulas blanco. Transplante al paciente.

Introduccin del transgn

Mtodos qumicos Transferencia con fosfato de calcio por endocitosis. 10% eficiencia. Mtodos fsicos: - Microinyeccin: alta eficiencia - Electroporacin: dao celular, alto # clulas - ADN desnudo en solucin salina. Msculo, piel, Terapia in-vivo, poca eficiencia, no integracin, inestable, quiz bueno como vacunas: herpes, malaria, VIH.

Vectores virales (1968)

Retrovirus

Adenovirus

Virus adeno asociados

VHerpes

Lentivirus-VIH Ventajas - Eficientes para introducirse en clulas. - Alta eficiencia de transduccin y expresin - Se pueden modificar en el laboratorio para que infecten clulas que en principio no son su objetivo - Inocuos?

Desventajas -Transportan informacin limitada. - Causan respuesta inmune -Reversin de enfermedad o efectos secundarios

Vectores virales

Retrovirus: Integracin al azar en los cromosomas husped, poca eficiencia, >estabilidad, solo para clulas en divisin Herpesvirus: ADN 2S, infectan slo neuronas, poco estudiados, permiten insertos grandes. Lentivirus: derivados del VIH-1 que codifican para factores neurotrficos como neuroblastina, artemina y el factor neutrfico derivado de la gla (GDNF)2328. Se han documentado altos niveles de expresin durante perodos de tiempos prolongados.

Adenovirus: ADN 2S, alta eficiencia de transfeccin, no insertan el ADN en los cromosomas, transitorios, pero!! generan gran respuesta inmune, efermedades intestinales, respiratorias e infecciones de ojos, gripe.

Vectores adeno-asociados (AAV)

Derivan de pequeos virus ADN 1S, familia Parvoviridae. No envueltos Requieren la colaboracin de otros virus del tipo de adenovirus y herpesvirus para replicarse eficientemente. Su integracin es de alta eficiencia y estabilidad en un sitio especfico del cromosoma 19 Se usan en clulas en divisin o no No producen enfermedades humanas Pero!!! poco estudiados y poca capacidad para los insertos

Vectores de alta capacidad gutless

Estn desprovistos de todas las secuencias virales codificantes, conteniendo slo las secuencias de repeticiones terminales invertidas y la seal de empaquetamiento nuclear. Tienen una mayor capacidad para transportar transgenes (de hasta 30 kb) y alcanzan en el sistema nervioso unos niveles altos y estables de expresin con una mnima toxicidad y respuesta inmunitaria.

Vectores no virales

Liposomas: no producen enfermedades baja eficiencia, toxicidad celular. Usados solo In vitro en cncer, fibrosis qustica, melanoma. Biobalstica. lneas celulares, epidermis, msculo, terapia ex-vivo, alta muerte celular, baja eficiencia de transfeccin Plsmidos.

Vector ideal para transfeccin y terapia gnica

Incorporacin y expresin regulada a largo plazo, de uno o ms genes Ser especfico en su transferencia gnica Ser irreconocible para el sistema inmune No inducir respuesta inflamatoria Ser estable y fcil de obtener. Evitar activacin de genes cancergenos Evitar variabilidad entre pacientes No inducir infecciones virales

Tipos de terapia gnica

Terapia gnica somtica: por transferencia gnica en tejidos somticos Terapia gnica germinal : que afecta no slo al paciente sino, potencialmente, a toda su descendencia ya que el gen se inserta directamente en el interior del embrin. Tiene grandes implicancias ticas y sociales. Terapia gnica ex-vivo e in-vivo.

Terapia gnica ex-vivo basada en clulas

Terapia gnica in-vivo, baja eficacia

Qu tipo de clulas se usan en terapia gnica?

Clulas del propio paciente. Estas clulas se modifican en el laboratorio, antes de reinyectarlas. Esta tcnica se aplica ya en ingeniera de tejidos, para articulaciones daadas. Clulas madre. Estas clulas pueden extraerse del propio paciente (autlogas) o proceder de cultivos mantenidos en el laboratorio. Clulas hematopoyticas, mioblastos, osteoblastos.

Temas a resolver

Corta duracin del efecto de la terapia gnica en las clulas blanco y poca estabilidad. Respuesta inmune. Problemas con vectores virales: toxicidad, inflamacin, reversin de enfermedad, cncer. Desrdenes multigenticos: enfermedades del corazn, Alzheimer, artritis, diabetes, presin alta.

Enfermedades tratadas por terapia gnica

Hereditarias : Fibrosis qustica, hemofilia, anemia de fanconi

Infecciosas SIDA, hepatitis Cncer, determinadas patologas infecciosas

Cardiovasculares (hipercolesterolemia y artereosclerosis), Neurodegenerativas (Parkinson Alzheimer, esclerosis lateral amiotrfica) Enfermedades crnicas (artritis reumatoide). Hipercolesterolemia

Inmunodeficiencia combinada severa Gen adenosin desaminasa-X (2000)

Interleukina-2

Fibrosis qustica

Autosmica recesiva Usa el transgn CFTR, Clulas diana: las clulas del epitelio del tracto respiratorio (nasal y bronquial), Via de administracin: aerosol. La nica diferencia entre unos casos y otros son los vectores utilizados: liposomas de 25 nm, y adenovirus

Hemofilia

Hoy en da existen 6 lneas de investigacin en fase I II, de las cuales 3 estudian la hemofilia A, usando como transgn el factor VIII, y las otras 3 la hemofilia B, usando como transgen el factor IX. Vectores utilizados: in vivo: retrovirus, adenovirus, virus adenoasociados, DNA desnudo. Ex vivo: plsmidos. Va de administracin usadas: subcutnea, intramuscular, intraheptica, intraperitoneal, intravenosa.

Huntington
.

La enfermedad de Huntington corea de Huntington autosmica dominante, que destruye los ganglios basales cerebrales, dada la mutacin en el gen de la huntingtina. Se presenta entre 30 y los 50 aos de edad aunque los sntomas se pueden desarrollar a cualquier edad. Mortal
En el mbito del tratamiento se realiza: Reemplazo de neuronas perdidas Trasplantes de tejido fetal Inyeccin de factores neurotrficos (BDNF). Uso de frmacos para evitar la toxicidad de la huntingtina mutante y que restauran efectos de la huntingtina normal. Generar RNA de interferencia (siRNAs) especficos para silenciar el RNAm producido por la copia del gen anormal y evitar produccin de huntingtina anormal txica (2003).

Parkinson

Con Adenovirus estimulan la produccin del neurotransmisor GABA que falla en las personas con prkinson y genera un exceso de actividad en la zona subtalmica del cerebro alterando la motricidad. Terapia in vivo por inyeccin en el crneo. (2008)

Liposomas-PEG marcados con luciferasa en cerebros de ratones y monos. (2000). No integracin en el genoma, inyecciones semanales

Cncer

conjunto de enfermedades genticas adquiridas donde unos genes que controlan la divisin celular se alteran. De mama, ovario, cabeza y cuello, pulmn, prstata, clulas renales, tumor cerebral, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crnica, linfomas, melanoma, mieloma mltiple y neuroblastoma.

Terapia gnica en cncer de piel, 2006

Terapia gnica en cncer

La destruccin de las clulas tumorales mediante frmacos citotxicos. Introducir un gen suicida o de sensibilidad aumentada a determinados frmacos Introducir genes de resistencia a frmacos para reducir la toxicidad de la quimioterapia en las clulas normales, particularmente sobre la mdula sea. Introducir genes supresores de tumores como el de p53 que usualmente est mutado en clulas cancerosas. Represin de genes que favorecen el crecimiento incontrolado y la diseminacin del cncer

Terapia gnica en cncer

Aumentar la actividad antitumoral de clulas inmunes por medio de citoquinas (interleuquinas, factores de necrosis tumoral, factores estimulantes de colonias o interferones). Melanomas Estimular las defensas inmunitarias contra el cncer con el uso de vacunas tumorales. Bloquear la expresin de oncogenes mediante terapia antisentido. Eliminar las clulas tumorales mediante adenovirus oncolticos. Inhibir la formacin de vasos sanguneos inducidos por el propio tumor por insertar secuencias con efecto antiangiognico.

Uso de anticuerpos contra el cncer

Inyectar anticuerpos en clulas tumorales que se acoplen a antgenos o protenas tumorales

Pueden utilizarse solos, en combinacin con quimioterapia como portadoras de sustancias tales como toxinas radiacin. Despus de unirse a un antgeno, el anticuerpo monoclonal puede destruir las clulas tumorales estimular al sistema inmunolgico a atacar el tumor y puede inclusive sensibilizar una clula oncolgica a la quimioterapia. Esta accin, suele ocurrir tanto s el anticuerpo es humanizado quimrico.

Anticuerpos monoclonales aprobados para uso teraputico Nombre genrico/ nombre comercial Muromomab Orthoclone 0KT3 Abciximab (ReoPro) Edrecolomab (Paronex) Rituximab (Rituxan, Mabthera) Daclizumab (Zenapz) Trastuzumab (Herceptin) Antgeno Mecanismo de accin Indicaciones

CD3

Inmunosupresor; anergia/apoptosis de linfocitos T tras su activacin Inhibe la agregacin plaquetaria ADCC, CDC ADCC, CDC, apoptosis

Rechazo agudo en trasplante (tratamiento)

Gpllb/llla EpCAM CD20

Antitrombtico en intervenciones coronarias y angioplsticas Cncer colorrectal Linfoma no Hodgkin

CD25

Inbibe la activacin de linfocitos T mediada por CD25 Inhibe la proliferacin de clulas tumorales mediada por ErbB2 y ADCC Inmunoterapia pasiva

Rechazo agudo en trasplante de rion (prevencin)

ErbB2/ne u

Cncer de mama metastsico

Palivizumab (Synagis)

VSR protena F

Profilaxis enfermedad virus sinticial respiratorio en nios

Ratones transgnicos y cncer

Modelos de ratn que mimetizan las distintas etapas del desarrollo tumoral Uso de genes reporteros para evaluar el potencial teraputico de un frmaco en un animal sin sacrificarlo Para el estudio de los genes supresores de tumores y los genes de reparacin del ADN. Adems, los modelos KO nos sirven para evaluar posibles dianas teraputicas. Estudiar las clulas madre del Cancer Uso de modelos tumorales con animales KO (eliminar los dos alelos del mismo gen) o Knock-in (KI)=introducir mutaciones activantes dentro de un proto-oncogn y convertirlo en un oncognLac-Z. Peros!!!: tumor ratn no = a tumor humano! (melanoma), en humano el desarrollo del tumor es tardo, respuesta a metabolismo de frmacos es #. Clula de tejido conectivo humano+clula cancerosa injertada en ratn son #.

Regeneracin de rganos

Activacin del gen Wnt para regenerar alas y patas amputados en embriones de pollo.
Centro de medicina regenerativa, Barcelona e Instituto Salk de California.

Gracias