Locais Sntese e Acumulao de Compostos Secundrios

No sc. 20 os produtos naturais tornam-se de grande interesse Bioqumico -modo como so produzidos cada um deles No inicio de sculo 20 surgem departamentos de Bioqumica clnica, farmacologia, toxicologia, microbiologia e biologia celular com alguns cientistas interessados departamentos de qumica A meio do sculo 20 alguns bilogos celulares e fisiologistas comearam a usar produtos naturais como ferramentas em ensaios em que influenciam ou quebram funes celulares de um modo especifico Exemplo: colchicina, atropina, nicotina, etc.

A descoberta dos antibiticos Ultima metade do sculo 20

departamentos de microbiologia companhias farmacuticas. ecologistas (interaco entre espcies)

Evoluo Face a Novos Mtodos Fsico-qumicos

Caracterizao das espcies vegetais com actividade farmacolgica e o estudo da sua composio qumica com isolamento, identificao e dosagem dos seus constituintes

Botnica

Qumica e Fisiologia

Brasil so 10% de toda a flora mundial e s 1% da flora brasileira conhecida!!

Qumica Analtica, com mtodos cromatogrficos, espectromtricos e Radiolgicos cada vez mais sofisticados > conhecimento da Composio qumica e da estrutura dos seus componentes activos
-cromatografia em papel -cromatografia de camada fina -cromatografia em coluna - lquida : HPLC e MPLC Novas tcnicas de determinao, identificao e caracterizao de compostos: - Ressonncia magntica nuclear 1H e 13C(NMR) - espectrometria de massa (MS) - espectrometria de Ultra-violeta (UV) - espectrometria de infravermelhos - cristalografia de raios-X Conjugao com tcnicas informticas (aquisio de espectros de padres, criao de bibliotecas de espectros)

Separao isolamento e purificao na ordem dos nanogramas a partir de misturas complexas Isolamento: - A totalidade da planta - S um rgo - Tecidos especficos

Mtodos imunolgicos de deteco e tcnicas de sondas radioactivas : - deteco de compostos ao nvel celular -ELISA localiza locais de acumulao dos compostos naturais (metabolitos secundrios)

Tcnicas complementares
Tcnicas de cultura in vitro - Permitem o conhecimento dos processos de biossntese dos compostos qumicos naturais Limitaes estruturais das clulas

Tcnicas de transformao gentica - Manipulao gentica de estruturas vegetais mais complexas para produo dos compostos ( hairy roots)

A quantidade de compostos secundrios na planta depende do equilbrio entre: - Sntese - Armazenamento - Degradao

regulao complexa

Origem das vias metablicas dos compostos secundrios: -Em todos os organismos acumulao de alteraes (mutaes nos genes associados aos metabolismos primrios) -Processo +/- aleatrio e acidental -Mutaes em produtos primrios => eliminao, reduo na produo -Mutaes nos compostos secundrios => mais toleradas

Metabolitos secundrios
Encontram-se em organismos especficos ou grupos de organismos so expresso de individualidade das espcies.
No so produzidos em todas as condies e em muitos casos os seus efeitos benficos para a planta so desconhecidos. Alguns so produzidos como material txico contra predadores, como volteis atractivos ou agentes colorantes. As suas vias biossintticas derivam das do metabolismo primrio

Metabolitos primrios Metabolitos secundrios

Outros compostos origem de Metabolismo Secundrio

Aminocidos no-protecos: Ornitina e lisina precursores de alcalides

Aminocidos Aromticos: fenilalanina, tirosina, triptofano precursores de alcalides

Os metabolitos secundrios podem formar-se por condensao de produtos de diferentes vias biossintticas, ou ligaes a acares simples ou muito complexos

I. suifruticosa

Indigofera tinctoria

Construo das unidades de origem dos metabolitos secundrios

 Informao gentica igual em todas as clulas Dentro das clulas a produo e acumulao pode ser compartimentada Acumulao longe da produo
Transporte clula a clula Transporte de longa distncia

Clulas epidrmicas

Floema Lacticiferos

 Alcalides de Lupinus polyphyllus

Tremoceiro ornamental

tecidos verde

cadaverina + esqueleto de lupanina

Enzimas no estroma

Razes e razes transgnicas No produzem alcalides de lupanina

Alcalides de Conium maculatum

Mitocondria

Clulas da epiderme

Plastos

Outros Alcalides de Lupinus

 Alcalides de Peganum harmala produzidos nas razes Arruda sria

Inibio pela luz

Alcalides de tabaco ou papoila do pio so produzidos nas razes por toda a planta, excepto sementes Acumulao de Alcalides de Lupinus nas clulas da epiderme (Sem cloroplastos) via floema Acumulao dos compostos: - poca do Ano - Estado de desenvolvimento da planta

Alcalides
Etimologicamente, alcalide um composto que tem algo de alcalino ou que se parece s bases (neutros ou sais).
So substncias que se comportam como bases na presena de cidos, contm azoto e que actuam sobre o organismo humano com grande intensidade. Podem ser substncias venenosas que quando empregues em doses muito pequenas, actuam como frmacos curativos. Nas plantas com alcalides, o azoto disponvel no se transforma totalmente em pptidos vegetais, contnua em circulao na seiva ou fixa-se em algumas partes da planta, pode combinar-se com o enxofre e dar hetersidos sulfurados, ou com o cianeto e dar hetersidos cianogenticos. Alguns so lquidos ou amorfos, mas a maioria so cristalizveis.

ALCALIDES TROPANO
Os alcalides derivados do tropano so metabolitos secundrios que tm na estrutura das suas molculas tomos de azoto secundrio, tercirio e quaternrio. Alguns destes alcalides funcionam como fitoalexinas ou na interaco plantainsecto, e tambm foram utilizados como estimulantes, drogas, narcticos e venenos Existem em vrias espcies da famlia das Solanaceas, esta famlia, conta com cerca de 90 gneros e mais de 2.000 espcies distribudas em zonas temperadas e tropicais da terra. Muitas so originrias da Amrica e do Mxico Nas Solanaceas h varias espcies que so ao mesmo tempo txicas e medicinais, como a belladona (Atropa belladona), figueira do diabo (Datura stramonium), a mandrgora (Mandragora officinarum) e o meimendro negro (Hyoscyamus niger), espcies que se utilizam desde a antiguidade como medicinais, mas que tm alcalides do grupo tropano o que as torna altamente txicas quando mal utilizadas

Tropano
C8H15N

Composto bicclico

Razes de herbano produtoras de Alcalides Tropano - escopolamina

Escopolamina

Locais de acumulao
Em toda a planta mas predominantemente nos rgos externos: - tecidos em crescimento activo (pices vegetativos) - nos caules sempre no parnquima nunca no sber - clulas epidrmicas e hipodrmicas - bainhas vasculares - Vasos lacticferos

Locais de sntese
Em geral Sintetizados no retculo endoplasmtico Transporte por vesculas at ao vacuolo Armazenamento no vacuolo sob a forma de sais

Durante o transporte podem ocorrer Alteraes na estrutura do alcalide

Compartimentao da Biossntese
1 alcalide enzima de biossntese a partir do metabolismo Primrio, identificada, isolada e caracterizada tetrahidrobenzil-isoquinolino isolado de Berberis sp. antimicrobiana

- Planta venenosa/medicinal - Na Europa as bagas so usadas para fazer doce. - No sudoeste Asiatico (Iro) as bagas so usadas para cozinhar (condimento para arroz). - Com excepo dos frutos e sementes a planta causa ligeiro envenenamento no fatal, o agente a berberina

 Inicio da biossntese Citosol Enzimas chave: enzima berberina ponte carbono, Canarina sintetase ltimos passos catalisados por enzimas dependentes do citocromo P450 Berberina ponte carbono e a (S)-tetrahidroprotoberberina oxidase esto compartimentadas em conjunto em vesculas derivadas do RE liso Produto final acumula-se no vacolo central das clulas 2 mol de L-tirosina (percursor) 1 mol de berberina
Consumo

4 mol S-adenosilmetionina

2 mol NADPH

Adio de algumas auxinas e poliaminas promovem a produo de Berberina induzem produo de etileno

Biossntese da Berberina

 Tcnicas de produo de protoplastos e isolamento de vacolos permitem o estudo da tomada de compostos secundrios. [compostos secundrios] > 500 mmol/L Transporte contra o gradiente de concentrao H+ antiporte ATPases e pirofosfatases mecanismo especfico tonoplasto

Ex: Fumaria capreolata Erva-das-candeias Transporte activo

vacolos

(S)-escoularina e reticulina (R) no transportadas

ATP, [H+], sensvel a inibidores de metabolismo

 O vacuolo toma determinados alcalides em detrimento de outros num sistema que depende de: - pH - Temperatura - ATP - KCl

EX: alcalides, coumarinas, glicsidos, flavonides

Caractersticas gerais
MM de 100 a 900 Carcter lipoflo acentuado solveis em solventes orgnicos e lcool de elevada graduao Reagem com cidos sais solveis em gua ou sol. Hidroalcolicas Oxisgenados cristalizam facilmente, inodoros e no volteis poucos corados (ex: berberina e sanguinarina) Sem oxignio lquidos, odorferos e volteis (conocina, nicotina, espartena) MM pequena e % de O2 lquidos ou cristalizam dificilmente (ex: higrinas) Reveladores: reagente de Dragendorff (sol. Iodeto de bismuto e potssio) ou reagentes com policidos minerais complexos (ex: c. Fosfomolbdico)

Alcalides Indlicos terpnicos (iridoides)

Alcalides derivados do triptofano com cadeia monoterpnica Este tipo de alcalides encontram-se em vrias famlias vegetais, mas principalmente nas Apocinacea, Loganiaceae, Nissaceae e Rubiaceae, todas da ordem Gentianales. ex:Catharanthus roseus,Tabernaemontana divaricata e Rauvolfia serpentina

Vinblastina e vincristina Ajmalicina e serpentina

anticancerigenos antihipertensivos

Alcalides bisindlicos

ajmalicina (A), catarantina (B), vindolina (C) alcaloides monoterpnicos-indlicos e de alcaloides bisindlicos vincristina (D, VCR) e vinblastina (D, VLB).

Em C. roseus as partes areas da planta contm entre 0,2 a 1% de uma mistura de mais de cem alcalides indlicos monoterpenides, sendo os mais abundantes a catarantina e a vindolina

ajmalicina um alcalide extrado da raiz de C. roseus

AMIs Alcalides monoterpnicos Indlicos

Problemas: (2004)
Produo reduzida Custo elevado 0.0005% peso seco 1 milho de dlares por Kg (vinblastina) 12Kg/ano 3,5 milhes de dolres por Kg (vincristina) 1Kg/ano

Precursores e via biossinttica

Os alcalides deste grupo tm 2 elementos estruturais: ncleo indlico derivado do triptofano unidade C9 ou C10 derivada da secologanina (glicosdeo iridoide)
alcalides indlicos monoterpenides possuem uma metade indlica fornecida pela triptamina e uma poro terpenide fornecida pela secologanina triptofano, derivado da via do xiquimato, convertido em triptamina pela enzima triptofano descarboxilase (TDC), secologanina deriva do IPP (isopentenil pirofosfato -isopreno) numa via no cloroplasto, IPP cloroplastideal via de Rohmer (gliceraldedo/piruvato) no pela via do mevalonato, como no citoplasma

inicio
geranil difosfato (condensao IPP) geraniol geraniol hidroxilase (cloroplasto)
desenvolve-se pelo menos em quatro compartimentos subcelulares diferentes e que so utilizados repetidas vezes ao longo da via: cloroplastos: A converso do triptofano em triptamina, pela TDC (triptofano descarboxilase) Vacolo: biossntese STR (estrictosidina sintase) para formar estrictosidina no vacolo (AVLB sintase-peroxidase bsica) RE: (vesculas do reticulo) biossntese da secologanina (enzima SGD e T16H-hidroxilao da tabersonina) Citoplasma (enzimas D4H e DAT- ltimos passos da sntese de vindolina

estrictosidina deglucosilada pela estrictosidina P - D - glucosidase (SGD). A estrictosidina deglucosilada convertida em 4,21 - dehydrogeissoschizina. A partir deste alcalide so sintetizados por diferentes vias os alcalides ajmalicina, catarantina e vindolina

Reagentes de deteco de alcalides

Reagentes gerais em meio cido precipitados corados que podem ser solveis no reagente: - Dragendorff - Bouchardat (sol. Aquosa de iodo em iodeto de potssio) -Mayer - Valser (sol. Aquosa de tetra-iodo mercurato de potssio) Reagentes com policidos minerais complexos (em meio c. ou neutro) compostos cristalinos ou amorfos: - c. Silicotngstico - c. Fosfotngstico - c. fosfomolbdico - c. cloroplatnico

 Reagentes que originam cor especfica de grupos de alcalides: - c. Minerais concentrados, (sulfrico) com molibdato de amnio, de vanadato de amnio ou selenito de amnio (sem especificao) - p- dimetilaminabenzaldedo (reagente de Wasicky) alcalides da clavagem do centeio

- ninhidrina

arilalquilaminas
estres do tropanol (Solanceas)

- reagente de Vitali-Morin

Outros organismos com alcalides

Existem vrias espcies diferentes de cogumelos psilocibinos, contm Psilocibina e Psilocina (alcalides activos). A psilocibina quimicamente semelhante ao LSD (orthophosphoryl-4hydroxy-n-dimethyltryptamine).

cogumelos psilocibinos

Psilocybe mexicana Psilocybe caerulescens Psilocybe (Stropharia) cubensis, Pscilocybe wassoni Stroparia cubensis.

Os cogumelos psicoactivos so todos aqueles que contm estes ou outro tipo de alcalides capazes que afectar o Sistema Nervoso Central. Amanita muscaria e Amanita pantherina psicoactivos mas no psilocibinos.

 O qumico suio Albert Hofmann que descobriu o LSD, foi tambm o primeiro a extrair psilocibina e psilocina dos cogumelos mgicos. A psilocibina, que convertida em psilocina pelo organismo humano, a responsvel pelos efeitos alucingenos

A psilocibina um composto indlico derivado da triptamina, e tem a nomenclatura qumica de ster fosfato 3-[2(Dimetilamino)etil]indol4-ol di-hidrognio, sendo ainda encontrada com a nomenclatura de O-fosforil-4-hidroxi-N,N-dimetiltriptamina. Tem a frmula C12H17N2O4P; com peso molecular de 284,27g.
LSD actua sobre vrios receptores da serotonina (5-HT) assim como o ecstasy, enquanto que a psilocibina mais selectiva (especificamente em relao ao 5-HT2).

psilocibina

 Chegou-se a resultados experimentais que sugerem a seguinte sequncia: triptofano ->triptamina -> N-metiltriptamina -> N,Ndimetiltriptamina -> psilocina -> psilocibina.

biossintese

O fungo tambm pode converter em psilocibina a 4-hidoroxitriptamina por uma via alternativa. A triptamina origina vrias outras substncias, todas dotadas de actividade alucinognica. Todas as substncias da famlia da psilocibina tm estas propriedades. Tm a estrutura indlica bsica caracterstica da maioria dos alucinognicos encontrados na natureza.

Lpidos
Substncias do metabolismo primrio com algumas estruturas que os integram derivadas do complexo AGS (c. Gordo sintetase). Nos organismos vivos tm funes de: lcoois de ac. Gordos e resinas -reserva energtica -plstica -proteco -revestimento Genericamente:

- no volteis - hidrfobas - solveis em solventes orgnicos polares ou pouco apolares - steres de carboxilicos com 4 ou + C (c. Gordos) e de 1 lcool ou poliol

Os lipdos podem ser separados ou isolados com solventes de baixa polaridade como:
Clorofrmio tetracloreto de carbono, ter de petrleo, ter etlico, benzina, benzeno, tolueno, misturas de benzeno tolueno e etanol (2:1).

canola

 Classificao dos lipdos: - segundo a estrutura qumica - reaces qumicas que tm - funes que desempenham

lipidos simples (gliceridos) lipidos conjugados (fosfolipido) lipidos derivados (isoprenicos: colesterol)

Lipdos simples (funo ster): vrios grupos funcionais, abundantes em plantas e animais. nas plantas superiores lenhificadas folhagem cortia, ramos, sementes, flores, Frutos, Madeira (baixos contedos de ceras e glicridos) lpidos simples como as ceras tm grande importncia nas plantas: funes de recobrir as folhas para evitar a transpirao, evitam ataques de pragas e doenas quando se encontram na cortia das diferentes espcies florestais

 Lipdos isoprenides lipdos isoprenides classificam-se em: terpenos e terpenides abundantes em plantas, na actualidade conhecem-se cerca de 22 000 compostos diferentes, mas existem muitas estruturas desconhecidas.

 A maior parte dos Lpidos de membrana so anfipticos extremidade no-polar extremidade polar

cidos gordos

Lpidos simples

cadeia de hidrocarbonetos com um cido carboxlico numa extremidade CH3(CH2)n-COONo-polar polar

c. Gordos
A neutralizao do grupo carboxilo por solues de hidrxilos alcalinos (hidroxilo de potssio ou sdio) origina sais solveis em gua com propriedades tensioactivas sabes

Lipdos simples: Glicridos (acilgriceris) reserva energtica (esteres de c. Gordos e glicerol) cridos (lcoois gordos) estridos Acumulam-se em clulas, tecidos ou rgos de reserva como predominantes nas ceras corpsculos oleosos proteco interna (animais marinhos) proteco externa (caules, sementes, folhas) triglicridos Ex: lcool estearlico, mirstlico ou olelico esterificao por c. Gordos de esteris Ex: colesterol (animal), abundante em substncias lipdicas animais (lanolina, leo fgado bacalhau) forma livre ou estridos Fitoesteris menos abundantes, forma livre ou ligados a heterosdos Fitoesterolinas. Ex: ergosterol, sitosterol,estigmasterol

Cera de abelha

crido

Gordura de animais marinhos trigliceridos

Azeite tem fitoesteris que tem actividade pr-vitamina D

 c. Gordos poli-insaturados com 20 C

eicosanides

mediao de processos fisiolgicos ex: prostaglandinas, tromboxanos, leucotrienos (inflamao, frio, manifestao alrgicas)

Biossntese percursor directo c. eicosapentenico (sntese qumica, produo de percursores em corais e plantas) ex: dinoprostona induz trabalho de parto ex: alprostadil tratamento da disfuno erctil Corpos gordos: leos, gorduras (predominantemente glicridos) ceras (cridos) Reaco de acrolena Teor de insaponificao <1 Reaco negativa de acrolena Teor de insaponificao >1

Lpidos complexos
Lpidos com elementos como azoto, fsforo, alm dos elementares hidrognio, carbono e oxignio

c. glicerofosfrico

EX: lecitinas

membranas celulares

fosfoaminolpidos muito reactivos grupo cido e um azoto

Fosfolipdos (lipdos polares)

lecitina

lecitina

lecitina

glicolipdos

Papel dos lipdos polares

esterol

Bicamada lipdica

A natureza anfiptica dos glicerolipdos essencial para a formao da bicamada; Os triacilgliceris no existem nas membranas Plantas podem regular a sua prpria temperatura e viver sob condies ambientais extremas

Fluidez das membranas afectada pelo grau de cidos gordos insaturados e contedos em esterol

c. Gordos nos diferentes tecidos vegetais

Planta
folhas
ervilha cevada trigo espinafre soja

composio cidos gordos (% mol)

16:0
13 13 18 13 12

18:1
2 6 5 5 7

18:2
25 6 15 14 14

-18:3
53 64 55 54 56

outros
8 11 7 14 11

Sementes
soja feijo coco 11 1 9 22 3 7 53 8 4 vestgios 2 0 2 91 80

c. Gordos de plantas

A composio dos grupos de substituio varia entre os diferentes tecidos

Composio dos lipdos em diferentes organelos

Composio das fraces lpidicas das membranas dos tilacides

A forma dos Lpidos afecta a geometria da membrana

Lpidos podem ser classificados como: - cones - cilindros - cones invertidos Depende: rea de seco de ligao da poro dos hidrocarbonetos versus a rea de superfcie da cabea polar dos Lpidos

glicoglicerolpidos
GLICOGLICEROLIPIDOS NEUTROS: compostos com frequentemente 1 ou 2 aucares ligao glicosdica ao glicerol ou diacilglicerol Importantes em plantas superiores, bactrias e algas < quantidade em animais Todos os organismos aerbios fotossintetizadores 85 % de glicoglicerolpidos neutros (MGDG e DGDG) 3 ou + membranas fotossntese

Assimetrias na distribuio dos Lipdos na membrana do tilacoide

Formas diferentes dependendo da ligao componente glicolitica

 Desde 1960 homlogos superiores de galactolipidos (tri- e tetragalactosil diacilglicerois) foram identificados em todos os tecidos vegetais. galactolipidos tm grandes quantidades de cido linolenico (18:3n-3) e um acido trienoico especifico (16:3 n-3). Nas Plantas superiores acido linolenico quase o nico cido gordo no MGDG plantas "18:3". angiospermicas, acido linolenico est concentrado nas posies sn-1 e -2 no MGDG e no DGDG e est ausente o 16:3 n-3

nas plantas inferiores (algas verdes, musgos, fetos, conferas) e algumas angiospermicas (Solanaceae, Brassicaceae, Chenopodiaceae) tm 16:3 n-3 concentrado na posio sn-2 do galactolipido, enquanto a baixa percentagem de 18:3 n-3 acetilado em ambas as posies.
plantas "16:3" e tm uma estrutura similar "procariotica" da cianobactria. algas vermelhas e diatomaceas fotossintetizadoras caracterizados por uma alta proporo de 20:5 n-3. galactolpidos so

Propriedades
Os monogalactosil diacilglicerois contm 2 grupos acil cidos linolnicos (18:3 n-3) frutos de Rosa canina

agente anti-inflamatrio. razo para a utilizao clnica em aces anti-artrticas Anti-tumor, actividade de controlo da falta de oxignio e neutralizao de vrus. DGDG sintetizado ou isolado de folhas de Clinacanthus (Tailndia) exibe actividade anti-herpes simplex vrus

Sntese de DGDG aumenta durante o desenvolvimento da florao em Petunia hybrida, pistilos > [glicolipidos] que outros rgos florais

Biossntese dos cidos gordos

Principais passos (semelhantes em plantas, leveduras, bactrias e animais): 1- formao do 3-carbono malonil-CoA pela enzima Acetil-CoA Carboxilase (ACCase) Gasto de ATP e NADPH

2- ligao do malonil protena acil transportadora (ACP)

Memb Mitc impermevel a malonil CoA

3- condensao repetida de unidades de 2-carbono ao intermedirio Para formar palmitoil-S-ACP (C16:0) e estearoil-S-ACP (C18:0) 4- desnaturao

 Acetil-CoA carboxilase (ACC) a 1 enzima da Biossntese dos cidos gordos carboxilases com Biotina como cofactor e bicarbonato grupos carboxilo Na forma existente no cloroplasto tem 4 subunidades (plantas) ACC catalisa adio de CO2 acetil-CoA originando malonil-CoA em dois passos:

BCCP + ATP + HCO.3 BCCP-CO2 + ADP + P* BCCP-CO2 + Acetil-CoA BCCP + malonil-CoA

Exportados para as clulas para serem utilizados como fonte de energia no metabolismo

Activao da Acetil CoA Carboxilase

1- biotina carboxilada custa de ATP. 2- O grupo carboxilo transferido para Ac-CoA -reaco irreversvel o ponto de mltiplos mecanismos de regulao
Reaco (1) catalizada pela biotina carboxilase (BC); reaco (2) transcarboxilase (TC); BCCP = protena transportadora biotina carboxilase Transcarboxilao da Biotina

Carboxilao da Biotina

 o grupo prosttico biotina da acetil-CoA carboxilase liga-se grupo amina do sitio activo da lisina de modo similar piruvato carboxilase transferncia do CO2 activado para a acetil-CoA para formar malonil-CoA.

(1) protena transportadora biotina carboxil (dimero de 22.5-kD subunidades) (2) biotina carboxilase (dimero de 51-kD subunidades), + CO2 ao grupo prosttico; (3) transcarboxilase (a2b2 tetramero com subunidades 30-kD e 35-kD), transfere CO2 activado para a acetil-CoA.

Nas plantas ACC est no estroma dos plastos, onde a sntese dos cidos gordos ocorre. bissntese de c. Gordos mesfilo fotossntetico, sementes frutos acumuladores de leos

longa e flexvel cadeia biotina-lisina (biocitina) permite que o grupo carboxil activado seja transportado entre biotina carboxilase e transcarboxilase Regulao: Palmitoil-CoA, o produto final da biossntese dos cidos gordos, inactiva as subunidades Citrato como activator alostrico da enzima, promove a forma polimrica activa da enzima Polipptido da acetil-CoA carboxilase, tem stios de fosforilao, e protenas cinases responsveis.

 fosforilao no Ser1200 responsvel pelo decrscimo da afinidade para o citrato.

actividade da acetil-CoA carboxilase depende de fosforilao e desfosforilao. A forma desfosforilada da enzima activada por: - baixa [citrato] - inibida por altos nveis de c. gordos acil-CoA. A forma fosforilada da enzima activada por: - altos nveis de citrato - muito sensvel inibio por ac gordos acil-CoA.

Forma fosforilada e no fosforilada da Acetil CoA carboxilase

Existem vrios stios de fosforilao alguns so reguladores, outros so silenciados

fosforilao dos stios reguladores decresce a afinidade da enzima pelo citrato nveis elevados de citrato enzima activada.

baixos nveis de c. gordos acil-CoA inibem a carboxilase fosforilada, mas a enzima desfosforilada inibida por altos nveis de c. gordos acil-CoA.
fosfatases especificas desfosforilam ACC sensibilidade ao citrato

Transporte da malonil- CoA para fora do plasto

protena (em E. coli) de um polipptido de cerca de 80 a 90 aa ao qual est ligado (no resduo de serina) um grupo fosfopanteteino, mesmo grupo da zona de trabalho da coenzima A.
Enzima usada na sntese de c. Gordos assim como reaces de acil-transferases e desaturao

Movimentos na Mitocondria

Todo o metabolismo dos Lpidos

cloroplastos

citoplasma

mitocondria

 No sistema procariota as enzimas esto dissolvidas livremente e separadas no citoplasma. Nos mamferos as enzimas esto no citoplasma como um complexo solvel Ao contrrio dos mamferos as plantas tm enzimas de polipptidos individuais e esto nos plastos (embora envolva mitocondrias e citoplasma) Dihidroxiacetona fosfato (DHAP) move-se do estroma para o citosol triosefosfato DHAP piruvato
Acetil-CoA

Mitocondria
c. gordos Cloroplasto acetato

Organizao das enzimas envolvidas na Biossntese dos c. Gordos

Plantas
Bactrias Mamferos Leveduras

KR- 3 cetoacil-ACP redutase ER- enoil ACP redutase MT- Malonil- CoA ACP DH- 3-Hidroxiacil-ACP desidratase KAS - 3 cetoacil-ACP sintetase

 Plastos de sementes ricas em leos parecem ter uma via glicolitica completa em conjunto com a piruvato desidrogenase o que permitir a converso da glucose em acetil CoA.

Plastos e cloroplastos de sementes ricas em leos podem usar diferentes vias metablicas para fornecer os necessrios substratos e cofactores

Enzimas mais importantes da Biossntese de cidos gordos

ACCase (Acetil CoA carboxilase) Acetil CoA +ATP+CO2 malonil CoA

Malonil- CoA ACP (Acyl carrier protein) transacilase (isolada de vrias plantasMT)

3 cetoacil-ACP sintetase (3 formas em plantas-especificas para substratoKAS)

3 cetoacil-ACP redutase (necessita NADPH e NADH - KR)

3-Hidroxiacil-ACP desidratase (DH)

enoil-ACP redutase (2 isoformas- ER)

Sntese de cidos Gordos

Enzimas KAS 3a, 3b, 3c

Resumo biossntese

Abrev: ACCase( acetyl-CoA carboxylase); ACP(acyl carrier protein); ACS(acetyl-CoA synthase); CoA(coenzyme A); dims(cyclohexanedione inhibitors) FAS(fatty acid synthase); fops(aryloxyphenoxy propionate inhibitors) PDC(pyruvate dehydrogenase complex).

 plantas superiores existem 2 formas de ACCase: eucariotica (citoslica) procariotica (plastidial) enzima plastidial resistente a herbicidas susceptvel a herbicidas

2 isoformas

forma dimerica maioria das monocotiledoneas e todas as dicotiledoneas forma multidominio s em gramneas

Herbicidas actuam no domnio carboxiltransferase

Existem duas formas de ACCase nas plantas

ACCase isoenzimas tm propriedades bioqumicas distintas

Enzima multifuncional (gramneas) vs enzima multisubunidades (dicotiledoneas): - Km mais baixo para a acetil-CoA
- carboxila propionilCoA

- ACCase dos Cloroplastos das gramneas sensvel a vrios herbicidas

Acetil CoA carboxilase

Fornece Malonil CoA para:

- Sntese de cidos Gordos - Ceras da Cutcula - Flavonides e antocianinas - Antroquinonas - Malonil - ACC

Regulao da actividade da ACCase (resumo)

Depende de LUZ/Escuro
A regulao da enzima implica a modulao da sntese de cidos gordos dependente da LUZ/Escuro Actividade da ACCase: - 2 a 4 vezes superior em cloroplastos incubados luz - sujeito a inibio retroactiva em excesso de Lpidos - regulada por fosforilao/ desfosforilao

Estrutura do grupo prstetico da protena acil transportadora (ACP)

ACP permite que os c. Gordos sejam solveis em gua durante a sntese Plantas tm pelo menos 2 formas de ACP: ACP-I e ACP-II so expressas diferencialmente: - em folhas vs sementes - luz vs escuro

Nas Plantas:
- Sntese de c. Gordos ocorre nos plastos Outros eucariotas no citoplasma - Enzimas das plantas e bactrias esto fracamente associadas e podem ser separadas facilmente - Os genes que codificam para as enzimas nas plantas so codificados nuclearmente os polipptidos tm sequencias leader de transporte para os plastos - os plastos tm que exportar os Lpidos

Testes de marcao de Lpidos

Sudo III Tetrxido de smio Sudo negro B

Lpidos Totais

Azul do Nilo

Lpidos no cidos

FOX2 (xilenol laranja dissolvido com sulfato de amnio ferroso em c. Sulfrico) cora azul arroxeado c. Gordos polinsaturados oxigenados

Terpenides
Maior constituinte dos leos essenciais das plantas aromticas e medicinais condensao de unidades de isopreno
Hemiterpenos monoterpenos, diterpenos, sesquiterpenos Biossntese condensao de 2 compostos com C5

Tm funes ecofisiolgicas importantes: - relaes com patognios, benficos para as plantas, controlo aleloptico da germinao e/ou desenvolvimento
- economia hdrica (saturao dos estomas - controlo da evapotranspirao), aumento do brilho folhear (reflexo das radiaes - regulao da temperatura)

 Antibacterianos Antifungicos Antineoplasicos ou citoestticos Percursores de esterol animal e fitoesteroides Percursores da P450 das plantas Ligam-se a protenas da membrana isoprenilao

Caractersticas
Grupo maior e mais diverso dos compostos secundrios: - livres - modificados esteres glicosdos ligados a protenas raros em bactrias

isopentenil pirofosfato IPP

Comuns em plantas e fungos

osmeterium

Nos mamferos os esterides resultam do metabolismo terpenide Tm origem na via do c. Mevalnico e na via 2-C-methyl-D-erythritol 4phosphate/1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate (via MEP/DOXP), via no mevalonica ou via independente do cido mevalnico ocorre nos plastos, nos protozoa, e em bactrias (VIA DO PIRUVATO-GLICERALDEDO-FOSFATO) mesmo produto final IPP e DMAPP (dimetilalilpirofosfato)

1 enzima na formao do c. Mevalnico a acetacetil-CoA tiolase e encontra-se nos plastos.

Enzima chave na regulao -hidroxil--metilglutaril coenzima A redutase (HMGCoA) encontra-se bactrias, leveduras (matriz mitocondrial), plantas superiores (cloroplastos e citoplasma), insectos e mamferos (retculo endoplasmtico) em todos os tecidos que sintetizam terpenides

 HMG- CoA

membrana

molcula de largo peso molecular subunidades polipeptidicas

A compartimentao sub-celular do metabolismo dos terpenoides controversa Cloroplastos contm via biossnttica completa (autnomos na produo de terpenos) (carotenos e a cauda da molcula de clorofila produo nos cloroplastos Fitoesteris so sintetizados no citoplasma

 Sntese abreviada dos esteris intermedirios terpenoides

 Hemiterpenos (DMAPP) dimetilalil pirofosfato isomerizao do isopentenil pirofosfato (c. Mevalnico

resulta da terpenides)

DMAPP um potente electrlito compostos com grupo 3,3 dimetilalil ex: Humulona do H. lupulus Hemiterpenos em: - furocoumarinas - antraquinonas rotenides - derivados de isoflavonides

Metabolizado facilmente Benzofuranos (Asteraceae)

isolamento difcil citotxicos e insecticidas

percursor

dimetilalil pirofosfato

Politerpenos
2000 espcies (+ angiospermicas, mas fungos e fetos tambm) contm polisoprenos em pequenas quantidades Polisoprenos so Z-ismero s alguns so E- ismero Em cada espcie s um produzido Ocorrem na forma de ltex em partculas mnimas que se acumulam em clulas especiais ou no interior de laticferos Biossntese nos laticferos onde esto todas as enzimas Ltex funciona como um citoplasma altamente especializado com ncleos, mitocondrias, RE e ribossomas e polisoprenos, partculas de resina e partculas luteides (vacolos com enzimas hidrolitcas) HMG- CoA redutase o passo limitante na biossntese Os politerpenos so substncias polimricas tais como a borracha. incluem poliprenis (poliis de cadeia longa, da ordem de C55 a C120). Estes ocorrem essencialmente como constituintes de membranas de microorganismos

Percursores:

3-isopentenil pirofosfato, IPP 3,3'-dimetilalil pirofosfato, DMAPP Geranilgeranil difosfato GGPP Farnesil difosfato FPP

Exemplos de terpenos
N Numero de unidades de isopreno 2 Numero de carbonos 10 Nome 0 Geraniol

15

Farnesol

20

Geranilgeraniol

25

Geranilfarnesol

45

Solanesol

8-11

10-13

50-65

CastaprenolFicaprenol

 Biossntese:
3 passos iniciao elongao ( Z- 1,4 prenil transferase) terminao IPP(isopentenil pirofosfato) adicionados cadeia Z 1,4 poliisopreno

Presena de molcula Difosfato alilico

Polimero liberta-se da enzima transferase Plantas: elongao requer um iniciador E- difosfato alilico(C20) Farnesil pirofosfato (FPP) Complexo enzimtico em partculas hidrofbicas, mas FPP hidroflico no citoplasma reaco na superfcie da partcula

 A enzima necessita de Mg2+ e Mn 2+ e de difosfato alilico Em Hevea brasiliensis esta enzima est associada a estas partculas mas ligada membrana Actividade biolgica do ltex: - ajuda a selar feridas - natureza pegajosa ajuda a proteger dos ataques dos insectos O sistema de lacticferos est presente em todas as partes da planta matura: - razes - caules - folhas - em alguns casos frutos

Resumo de biossntese dos terpenides Ex: gossipol e artemisina

biossntese de terpenides tem lugar numa via comum a vrios organismos.

Envolve condensao de blocos de C5 isopentenil difosfato (IPP,13) e dimetilalil difosfato (DMAPP,14), que so condensados pelas preniltransferases formando intermedirios lineares difosfatados de vrios tamanhos, ex: FPP(15) Ciclizao, conjugao, e/ou re-arranjos catalisados por terpeno sintases produzindo os diversos esqueletos carbonados dos produtos terpnicos naturais.

 Estes esqueletos de carbono so alterados por mltiplas transformaes: oxidao, reduo, isomerizao, hidratao, e conjugao formando estruturas complexas e diversas dos produtos naturais como gossipol (1) e artemisinina (2). ENZIMAS AtoB, HMGS tHMGR MK PMK PMD IDI IspA CAS CAH CPR ADS AMO acetil-CoA acetiltransferase hidroximetilglutaril-CoA sintase (ERG13) hidroximetilglutaril-CoA redutase (HMG1) mevalonate cinase (ERG12) fosfomevalonato cinase (ERG8) fosfomevalonate descarboxilase (ERG19) isopentenil difosfato-isomerase farnesil diphosphate sintase cadinene sintase cadinene hidroxilase P450 redutase amorfadieno sintase amorfadieno oxidase

Acetileno
Hidrocarboneto dos alcenos. o mais simples composto com 2 hidrognios e 2 carbonos composto orgnico insaturado com a tripla ligao com ligao covalente. Acetileno reage com lcoois, hidrogeno cianeto, c. clordrico, ou cidos carboxlicos originando compostos vinilicos : Reaces com aldedos

Com monxido de carbono dando acrlicos

Ciclizao dando benzeno ou ciclooctataedros

Compostos acetilnicos
Compostos altamente instveis: - luz - oxignio - calor
Acetilenos vegetais Existem em toda a natureza plantas e fungos

misturas complexas concentrado em

1000 acetilenos so j conhecidos 3 tipos em plantas: 1) acetilenos cidos 2) derivados do c. Crepenico 3) derivados dos terpenos tripla ligao

Exemplos de compostos acetilnicos lcoois

 lcoois acetilnicos naturais e os seus derivados foram isolados de uma grande variedade de espcies vegetais, fungos e invertebrados. Estudos farmacolgicos revelaram que muitos deles tm propriedades qumicas e medicinais.
lcoois Monoacetilnicos foram isolados de culturas de Clitocybe candicans (Basidiomicetes) e os estudos da estrutura mostram 2 ou 3 grupos hidroxil

 Acetilenos c. derivam do c. oleico trigliceridos leo das sementes de algumas plantas

Acetilenos derivados c. Crepenico derivados metablicos acumulam-se nas razes ex: Apiaceae, Araliaceae, Asteraceae derivados de diferentes vias esporadicamente distribudos em diferentes grupos de plantas

Acetilenos com tripla ligao

 cido Oleico provavelmente o c. Gordo mais comum (Azeite rico neste composto: cerca de 6070%, mas tambm se encontra em nozes). As maiores fontes para o Homem so palma, soja e manteiga

cido Oleico

vrios ismeros do c. Oleico com uma dupla ligao trans. compostos naturais ismeros trans posio(n-13), (n-12), (n-9) ou (n-7) Os leos e gorduras vegetais praticamente livres de ligaes trans

S aquecidos a altas temperaturas na presena de componentes activos

ligaes trans so comuns nas gorduras animais especialmente manteiga e gorduras de ruminantes

cidos acetilenicos (acidos 6-octadecinoico e 6nonadecinoico) descritos em razes de Pentagonia gigantifolia, Rubiaceae, inibiam o crescimento de estirpes Candida albicans. O potencial antifngico comparvel com o da anfotericina B e fluconazole mas com pouca toxicidade.

cido Crepeninico (acido 9-octadecenio-12-inoico) encontra-se em 60% no leo extrado de sementes de Crepis foetida (Compositae) efeitos txicos das plantas com este c. Gordo em ovelhas Australianas

 Ismero trans:

cidos gordos saturados

Ismero cis:

Biossntese
cido oleico e linolico so os precursores dos acetilenos nos microrganismos e nas plantas
cidos Crepeninico e dihidrocrepeninico so incorporados em quase todos os acetilenos por oxidaes e re-arranjos

Componentes derivados de modificaes do c. Gordo acetilnico em C18 pores vegetativas da planta Forma triacilgricridos leo das sementes

BIOSSNTESE

Distribuio nas plantas

Limitados a alguns taxa comparativamente com os c. Gordos Comuns inseridos nos triacilgliceridos em leos de sementes de Asteraceae mas mais em Loranthaceae, Olacaceae, Opiliaceae e Santalaceae Acetilenos metabolicamente alterados Araliaceae, Asteraceae, Campanulaceae e Pittosporaceae. Apiaceae,

Fungos Basidiomicetes, livres em diferentes partes do organismo, mas tambm como componentes de leos essenciais

Propriedades Fisiolgicas e Farmacolgicas

O tipo e quantidade de acetilenos presentes na maioria das plantas varia com o estgio de desenvolvimento e com a zona da planta Ex. razes de Helianthus pentainene frutos

O tempo de vida de um acetileno nas plantas de 6 a 48h

Poliacetilenos nas plantas podem ir de vestgios a 1% Plantas que no produzem acetilenos podem ser induzidas a produzi-los na presena de fungos

Plantas transformadas com Agrobaterium podem comear a produzir tal como hairy roots de plantas no produtoras

 Actividade biolgica: os que ocorrem em leos essenciais contribuem para o sabor e cheiro em vrias especiarias originrias em ervas da famlia das Apiaceae
alguns acetilenos so altamente txicos para humanos e animais (ex: cicuta, Oenanth crocata) falcarinol menos txico para as pessoas mas potente antifngico membranas de cenouras ou ginseng, salsa

antibiticos (bactericidas) micomicina tiarubrina A antiviral condriol (algas marinhas)

instvel

 Fitoalexinas: aumentam a produo em resposta a infeces fngicas ex: em Carthamus tinctorius o safinol aumenta 20x quando a planta atacada por Phytophthora drechsleri

Planta-insecto e planta-nematodo
Estes compostos podem ter efeito anti-alimentao dos insectos Ex: cido 8-Z-Dihidromatricarida em carochas, aranhas, vermes Em Asteraceae compostos acetilenos com estruturas tiofeno tem actividade anti-nematodos 4 dos compostos acetilnicos mais comuns nas Asteraceae so insecticidas para as Oncopeltus fasciatus anti-hormonas juvenis

 Efeitos fototxicos dos compostos acetilnicos

Quando excitados estes compostos medeiam vrios efeitos fototxicos atravs de 2 tipos de aco: Acetilenos de cadeia linear interagem com molculas alvo na clula

Tiofenos medeiam a oxidao de vrias biomolculas (Lpidos de membrana e protenas) S em Asteraceae existem compostos acetilnicos com fototxicidade Alteraes no comportamento aps ingesto: fotofobia, Ruptura do tegumento

Fototoxicidade em plantas
Fototoxicidade em plantas mediada pela formao de singletos de oxignio (tiofenos, polienos e perileno quinonas) ou atravs de ligaes covalentes com o DNA no caso das fotogenotpicas furanocoumarinas

ditionas Formao de tiofenos As tiarubrinas possuem um mecanismo nico de fototoxicidade envolvendo formao induzida pela luz de intermedirios reactivos como os fotosulfidos e ditionas de cadeia aberta e activao do enxofre que parte da via do tiarubrina-tiofeno.

A toxicidade da tiarubrina resultado de pelo menos 3 mecanismos distintos.

(1) toxicidade das tiarubrinas na ausncia de luz resultante da reaco do anel alvo (uma nica enzima) (2) fototoxicidade da luz visvel causada por intermedirios (3) danos foto-oxidativos causados por formao de singletos de oxignio induzidos por UV e pelos fotoprodutos finais os tiofenos.

A utilidade destes 3 mtodos de estratgia defensiva relevante pelos danos que estes compostos podem causar nos patognios ou herbvoros

Ceras
Misturas complexas: hidrocarbonetos, aldedos, cetonas Compostas predominantemente por cridos Reaco negativa da acrolena Percentagem elevada de insaponificao Lquidas e slidas steres de lcoois e c. saturados steres de lcoois cidos insaturados

Biossntese
Derivam de c. Gordos de cadeia longa (C28-C30). Formados pela extenso de cadeias curtas de c. Gordos Elongamento das cadeias necessita de malonil CoA e a reduo de NADPH

Ceras na superfcie das folhas Folhas limpasde ceras Reposio das ceras

Maiores constituintes das ceras das plantas

O tamanho dos cidos produzidos depende das espcies mas os mais comuns so: C28, C30 e C32

n-Alkanes Alkyl esters Fatty acids Fatty alcohols (primary)

CH3(CH2)xCH3 CH3(CH2)xCOO(CH2)yCH
3

21 to 35C - odd numbered 34 to 62C - even numbered 16 to 32C - even numbered 22 to 32C - even numbered 22 to 32C - even numbered 23 to 33C - odd numbered 23 to 33C - odd numbered 27 to 33C - odd numbered

CH3(CH2)xCOOH CH3(CH2)yCH2OH CH3(CH2)yCHO CH3(CH2)xCO(CH2)yCH3 CH3(CH2)xCHOH (CH2)yCH3 CH3(CH2)xCOCH2CO(CH 2)yCH3

As cadeias longas de lcoois so formadas por reduo das cadeias longas de c, gordos (Acil Co A redutase)

Fatty aldehydes Ketones Fatty alcohols (secondary) -Diketones Triterpenols Triterpenoid acids

Sterols, -amyrin, -amyrin, uvaol, lupeol, erythrodiol Ursolic acid, oleanolic acid, etc

Propores relativas (%peso) dos constituintes mais comuns de ceras em algumas espcies de plantas
Grape leaf Rape leaf Apple fruit Rose flower Pea leaf Sugar cane stem

Hydrocarbons Wax esters Aldehydes Ketones Secondary alcohols Primary alcohols Acids

2 6 6 60 8

33 16 3 20 8 12 8

20 18 2 3 20 6 20

58 11 -

40-50 5-10 5 -

2-8 6 50 5-25 3-8

9 4 5

7 20 6

Other components present include various diol types and triterpenoid acids

 Numa planta os aldedos e os lcoois gordos so similares aldedos so intermedirios na sntese dos lcoois steres das ceras resultam da combinao de longas cadeias de lcoois com longas cadeias de cidos (acil CoA lcool transacilase) Hidrocarbonetos das ceras tem origem nas longas cadeias de c. Gordos (C12, C14, C16 e C18). Precursores para as cadeias longas de c. Gordos so tambm precursores dos hidrocarbonetos

Cetonas e lcoois secundrios tambm so sintetizados a partir de c. Gordos de cadeia longa

Resumo da biossntese
Duas vias para a Biossntese de ceras:

via acil reduo (com inicio na formao de lcoois e esteres), via da descarboxilao que resulta na sntese de aldedos, lcoois secundrios, alcanos e cetonas.
Na via redutiva de esteres acil CoA produzidos pelo elongamento da cadeia so reduzidos num processo de dois passos via um intermedirio aldedo transiente e catalizado por uma nica enzima acil-CoA redutase

Acil reduo

Descarboxilao

Locais de produo
As ceras cobrem tanto folhas como caules, flores e frutos

Produo

clulas da epiderme

Actividade biolgica
Em todas as plantas existem ceras com hidrocarbonetos C29, C31 e C33, assim como os esteres das ceras so quase ubquos diferenciao taxonmica

Proteco contra patognicos e desidratao Papel importante em Nepenthes (carnvora)

 Nos processos de atraco de insectos: -cheiro - viso - tacto (a superfcie das ceras fundamental) volteis dissolvidos nas ceras reconhecimento da superfcie Ex: Pseudomyrmex ferrugineus (formiga) e a ( Acacia collinsii) rvore. Os insectos tm razes cuticulares de alcanos e alcenos semelhantes aos hidrocarbonetos cuticulares da rvore

 Anlise de ceras: Hidrocarbonetos removem-se com um solvente no polar hexano purificado

Analise por cromatografia gasosa e espectrometria de massa steres difcil, mistura complexa

Anlise por espectrometria de massa

Estruturas secretoras nas plantas

 Secreo acto de separao de uma substncia do protoplasto (libertao de compostos com actividade fisiolgica) Estruturas secretoras variam em grau de especializao e em localizao na planta - internas - externas - plos glandulares - glndulas vascularizadas - canais intercelulares - cavidades (bolsas) - fuso de clulas (lacticferos)

 Estruturas secretoras externas: - tricomas e glndulas - nectrios - hidtodos Estruturas secretoras internas: - clulas secretoras - espaos secretores (cavidades/canais) - lacticferos

Biotecnologia nos metabolitos secundrios

Mais de dos novos frmacos (30 anos)

molcula de origem vegetal 9 dos 20 mais vendidos frmacos

metabolitos secundrios das plantas Interesse redobrado nos compostos naturais Sucesso limitado na abordagem de sntese qumica para produo de novos frmacos Enorme biodiversidade de compostos activos na bibliotecade molculas dos organismos vivos. plantas + insectos, bactrias, nemtodos e vrus co-evoluo plantas grande variedade de produtos naturais envolvidos na defensa

 Para biologia molecular e aplicaes biotecnolgicas, as plantas medicinais e os seus produtos tm alguns problemas: A produo dos compostos especifica de espcies e do gentipo e a acumulao limitada a certos tecidos ou tipos celulares e regulados por factores ambientais e de desenvolvimento A funo da maioria dos metabolitos no conhecida ou muitas vezes qual dos vrios metabolitos produzidos pela planta responsvel pela actividade medicinal.

O problema

nveis de produo. Existem 3 opes:

Desenvolver a sntese qumica se a estrutura conhecida Extraco a partir da planta (silvestres, cultivadas, cultura de tecidos Produo do metabolito em sistemas heterologos (plantas ou no-vegetais)

problemas

Sntese qumica no possvel ou no rentvel compostos secundrios complexos Por vezes possvel baseado no conhecimento da aco para produzir um substituto sinttico com a mesma aco.

Ex: artemisinina, em que o sitio activo da molcula, uma ligao peroxidica farmacoforica num nico heterociclo 1,2,4- trioxano forma as bases para o desenvolvimento de um frmaco perxido sinttico antimalarico.

 Sistemas de extraco baseados na planta inteira : Baixos nveis de produtos naturais Acumulao em tecidos especficos

Em estgios do crescimento vegetativo especfico

Condies de crescimento ou ambientais especficos

 Cultura de tecidos Problemas:

Em cultura os compostos naturais no se acumulam ou acumulam em pequenas quantidades toxicidade celular Diferentes sistemas foram testados com vrios sucessos.

Esquema geral da Transformao de plantas Com Agrobacterium sp

 A. rhizogenes, causa o sindroma hairy root. uma bactria Gram negativa do solo capaz de entrar na planta por ferida e causar a proliferao de razes secundrias

Efeitos morfognicos nas plantas por transferncia de parte do plasmideo Ri (root inducing)

 Hairy rootstm crescimento rpido, crescem em meio sem hormonas

No susceptveis a gravitropismo Geneticamente estveis com produes elevadas de metabolitos secundrios caractersticos das plantas originais. Produo de metabolitos secundrios estvel comparativamente com outros sistemas de cultura in vitro Produo de alcalides por hairy roots estvel por anos Alguns casos h excreo para o meio dos compostos. A extenso da excreo varia com a espcie em estudo O crescimento varia entre espcies at entre clones diferentes da mesma espcie. Relao crescimento produo tambm varia com a espcie

Factores de produo em hairy roots

Biossntese de metabolitos secundrios em razes transformadas geneticamente controlada factores nutricionais ambientais.
Composio do meio de cultura afecta crescimento e produo

Nvel de sacarose Fitorreguladores exgenos Tipo de fonte de azoto (e quantidade) Luz Temperatura Presena de qumicos

- Crescimento - Aumento Biomassa - Metabolitos secundrios