ENGENHARIA BIOQUMICA

Prof(a) Bernadete de Souza Santos bernadete.santos@prof.una.br

ESTERILIZAO DOS EQUIPAMENTOS NUM PROCESSO FERMENTATIVO

Referncias Bibliogrficas URENHA L. C; PRADELLA J.G.C. & RODRIGUES M.F. A.

Introduo
Esterilizar um equipamento = eliminar todas as formas de vida em seu interior ou superfcie. Alguns Bioprocessos industriais a eliminao parcial da populao microbiana dos equipamentos suficiente para garantir a qualidade do produto. Ex: processos onde inibidores de crescimento so produzidos (fermentao alcolica,ltica,actica, antibiticos).

Pasteurizao
Processo de desinfeco que no destri todas as formas de vida e garantem assepsia. Ex: indstria de alimentos onde os microorganismos patognicos so tratados pela imposio de condies que impedem o seu desenvolvimento.Refrigerao, inibidores de crescimento(sais, aucares, preservantes qumicos, biocidas ou biostticos)

Terminologia e modo de ao
Termo
Esterilizao Desinfeco Desinfetante ou germicida Antissptico Assepsia Pasteurizao

Significado
Remoo de todas as formas de vida Remoo ou destruio dos organismos vivos capazes de causar danos ou infeces Agente qumico capaz de promover desinfeco Agente qumico aplicvel em pessoas ou animais, com capacidade de eliminar micro-organismos patognicos Remoo de micro-organismos patognico ou indesejados Tratamento trmico(geralmente 62C por 30min, seguido de resfriamento brusco)reduo drstica de micro-organismos do leite, bebidas alcolicas enlatadas ou engarrafadas.

Tindalizao

Processo capaz de eliminar esporos altamente resistentes ao calor. Manter o material a 100C por vrios minutos e resfriar a temperatura ambiente, depois incubar por 24horas.O processo repetido vrias vezes at os esporos virarem formas vegetativas. Agentes capazes de causar a morte de micro-organismos
Agentes capazes de impedir a reproduo sem matar os microorganismos.

Biocidas
Biostticos

Modo de ao dos agentes esterilizantes

Induo por diferentes mecanismos a formao de substncias qumicas letais no interior das clulas. Alterao em molculas essenciais para o funcionamento das clulas tais com as enzimas. Dano irreversvel a um gene

Principais agentes esterilizantes

1. Calor mido temperatura elevada associada ao auto grau de umidade desnaturao de protenas de clulas vivas, alteraes no carboidratos, que geram produtos txicos 2. Calor e presso autoclaves; transferncia de calor e aumento no nvel de hidratao no interior das clulas, levando a coagulao das protenas.

Principais agentes esterilizantes

3. Calor seco - oxidao dos constituintes qumicos dos micro-organismos; porm lenta e menos eficaz. 4. Irradiao por luz ultra-violeta (UV). Extremamente txica para os acidos nuclicos das clulas DNA e RNA. Regio de espectro co ao esterilizante de 220 a 300 nm (regio abitica). Um nanometro vale 1,0109 metros ou um milionsimo de milmetro.

Principais agentes esterilizantes

5. Radiaes ionizantes eletromagnticas so (alfa), - beta raios X, raios catdicos, alm de prtons, nutrons e eltrons de alta energia. Levam a perda da viabilidade da molcula de DNA. 6. xido de etileno ter ciclico (EtO), mata as clulas agindo com um alquilante. Substitui o H de uma protena ou de um DNA. Em medicina a alquilao de DNA utilizada em quimioterapia, para danificar o DNA das clulas cancerosas. A alquilao realizada com a classe de medicamentos chamados alquilantes antineoplsicos.

Principais agentes esterilizantes

7. Glutaraldeido age na superfcie das clulas onde ocorre interaes glutaraldedoprotenas, gerando produtos txicos a clula. O glutaraldeido reagem com as acamadas de peptdeoglicano das bactrias, ricas em protenas.

Esterilizao por agentes fsicos

Esterilizao por calor mido. O agente de uso mais frequente fornecido por vapor de gua. A facilidade de obteno de manuseio, sua eficcia e custo baixo, explicam o uso frequente. O vapor obtido em caldeira e distribudo por dutos de ao galvanizado ou ao inox, isolados termicamente.

Autoclaves gigantes so usadas para curar os componentes de fibra de carbono em indstrias automobilisticas Lamborghini

Esterilizao de Reatores vazios (fermentadores)

Reatores vazios consiste em injetar vapor diretamente em seu interior e promover inicialmente a expulso de todo o ar presente. Aps expulso do ar o reator fechado e injeta-se vapor at que a temperatura e presso internas sejam adequadas a 121C a 1 atm. A partir da, e por todo o tempo de esterilizao novas injees s so necessrias para manter constantes a presso e temperatura. Terminada e esterilizao a entrada de vapor fechada e ar esterilizado deve ser injetado para evitar que o resfriado e a consequente condensao do vapor presente no interior do fermentador gere vcuo que poderia provocar danos ao equipamento ou promover a entrada de ar externo contaminado por fissuras em soldas,vazamentos em vlvulas, etc. Aps o resfriamento e a estabilizao da presso interna o meio de cultura esterilizado externamente por esterilizao contnua ou no pode ser carregado e a utilizao do tanque iniciada.

Esterilizao de reatores ou fermentadores vazios

AR

VAPOR

VAPOR

Ar esterilizado

121C 1 atm

Estabilizao da presso e da temperatura

Esterilizao de reatores com meio de cultivo

1 etapa: circula-se vapor pela serpentina ou camisa at que a temp. do meio de cultura seja maior que 96 a 97C. 2 etapa: injeta-se vapor diretamente no meio de cultura at atingir 100C, fecha-se o reator, a injeo continua at que a temperatura atinja 121C e 1atm de presso (mantidas atravs da serpentina ou camisa) 3 etapa: resfriamento feito pela circulao de gua fria na serpentina ou camisa.

Esterilizao de reatores com meio de cultivo

AR

gua fria na serpentina ou camisa vapor na serpentina

vapor no meio

96 a 97C

100C at 121C

Resfriamento

Esterilizao em autoclaves
Para reatores de pequeno porte (at 30L) Gerao de vapor: eltrica, a gs ou externa(caldeira)

Autoclaves

Consideraes finais.
Todos os processos fermentativos devem e precisam ser conduzidos em condies totalmente estreis para evitar contaminao do produto final, bem como a formao de produtos indesejveis.