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Existen numerosas formulaciones de medios de cultivo que por lo general son muy similares Porqu?
Elementos Concentraciones(% peso seco) 45 44 6 1.6 1.0 0.5 0.2 0.2 0.1 0.015 0.01 0.002 0.004 0.0005 0.00007
Carbn ( C ) Oxigeno (O ) Hidrgeno ( H ) Nitrgeno ( N ) Potasio ( K ) Calcio ( Ca ) M agnesio ( M g) Fsforo ( P ) Azufre ( S ) Cloro ( Cl ) Hierro ( Fe ) Boro ( B ) M anganeso (M n) Zinc ( Zn ) M olibdeno (M o)
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Sales inorgnicas
Macronutrientes
Micronutrientes
N, K, P, Ca , S ,Mg
Concentracin: mayores
(mM o mg)
(M)
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Aminocidos y amidas
Compuestos Orgnicos
Sustancias hormonales
Vitaminas
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Sacarosa
Lactosa
Fuentes de carbono
Glucosa
Fructuosa
Concentraciones: 20 - 80 g/L
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Auxinas: AIA; AIB; ANA; 2,4-D Citoquininas: 6-BAP; Kinetina Sustancias Hormonales Acido giberlico (GA3) Acido abscisico (ABA)
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Acido nicotnico
Acido ascrbico
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Glicina
L-arginina
Aminocidos y amidas
L-tirosina
L-asparagina
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Complejos naturales
Complejo
Concentracin ms utilizada
0-18 % 500 mg/L 30- 3000 mg/L 15-30 % 500-1000mg/L 3-30 % 150g/L
Agua de Coco Extracto de Malta Hidrolizado proteico (casena, pertona y triptona) Jugo de Tomate Extracto de Levadura Jugo de Naranja Pulpa de Pltano o Banano
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Sustancias antioxidantes
Antioxidantes
Concentracin
Cianuro de Potasio 5 mM Acido ascrbico 10 - 50 mg/L L- cistena 25 - 100 mg/L Tiourea 5 - 8 mM Peroxido de Hidrgeno 5% Policlar 0.7 % Polivinilpirrolidone (PVP) 0.001 - 0.7 %
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Material de soporte.
Papel de filtro
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Compuestos orgnicos. Reguladores del crecimiento citoquininas, giberelinas, etileno, otros). (auxinas,
Fuente de carbono (sacarosa, fructuosa, glucosa). Vitaminas (tiamina, biotina, niacina, otras). Aminocidos (glicina, csteina) Otros (inositol, antibiticos)
Medio de cultivo
Compuestos naturales.
Agua de coco, extracto de levadura , extracto de malta.
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Equipos necesarios: Balanzas analticas y de platos. Phmetro. Autoclave. Equipo de flujo laminar en determinados casos. Refrigerador domstico. Destilador de agua. Desionizador de agua. Mechero de gas o agitadormagntico con calentamiento. Pipetas. Probetas. Matraz volmetrico. Vasos de Precipitados (Beaker). Erlenmeyer o frascos de conserva de cristal transparente. Tubos de Ensayos. Frascos para almacenar soluciones. Campana desecadora para guardar materiales hidroscpicos. Dosificador automtico para repartir el medio, aunque en pequea escala se puede hacer de forma manual. Filtro miliporo para la esterilizacin de sustancias termolbiles. Papel de aluminio. Placas de Petri.
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8.- Si el medio es slido, aadir agar, segn la concentracin requerida. En este caso de ser lquido repartir directamente. 9.- Diluir el agar en el medio, calentando con estufa de gas o plancha elctrica hasta ebullicin. 10.- Dejar refrescar alrededor de 10 minutos y aadirle el 2,4-D. Si el medio lo lleva. 11.- A continuacin repartir en los frascos de cultivo, taparlos y esterilizarlos en autoclave. 12.- Colocar los frascos en un lugar limpio, para que se enfren y solidifiquen, si contienen agar. En caso de suplementar los medios de cultivo con sustancias termolbiles, estas despus de filtradas(filtromillipore 0.22), son aadidas al medio esterilizado, pero menos caliente, se tapa y se agita para hacer la mezcla homognea. A continuacin se reparte en los recipientes de cultivo anteriormente esterilizados, con cuidado de no mojar la boca del frasco ya que puede provocar contaminacin. Todo esto se tiene que hacer bajo cmara de flujo laminar.
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15 20 25 30 35 40
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Medios de cultivo
MS (1962)
Utilizacin
cultivo de tejidos en tabaco
(1962)
especies monocotiledneas
Induccin y cultivo de callos de plantas monocotiledoneas y dicotiledneas
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Causas de variabilidad:
Normalmente cuando se emplean pices no se adicionan auxinas al medio aunque estas pueden estimular el crecimiento.