Utilização de ferramentas de análise de DNA

Dr. LUCIANO DA SILVA PINTO

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Eletroferograma resultante do sequenciamento
início

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Fim

pontes dissulfeto. •Posições conservadas em seqüências homólogas sugerem sítios importantes (sítios ativos ou catalíticos. etc. .Análise comparativa e alinhamento de seqüências Porquê alinhar seqüências? •Análise inicial das sequência (busca de erros). •Encontrar seqüências similares ajuda a determinar a propriedade e inserir funções da nova seqüência. sítios hidrofóbicos.). domínios de ligação de DNA. •Nucleotídeos conservados podem indicar elementos regulatórios que podem ser pré ou pró transcricionais.

. • A qualidade é determinada pela soma dos pontos obtidos por cada unidade pareada (match) menos as penalidades pela introdução de gaps e posições não pareadas (mismatch).Alinhamento de seqüências • consiste em introduzir espaços (gaps) entre os monômeros de uma ou mais seqüências a fim de obter o melhor alinhamento possível.

Sistema de escore e estatística Bases idênticas : “match” score Bases diferentes : “mismatch” score Gaps : “gap opening” penalidade por início de gap “gap extension” penalidade por extensão do gap Exemplo: Match = +1 Mismatch = -1 Gap opening = -5 Gap extension = -1 .

Sistema de escore e estatística • Qual alinhamento é melhor Match = +1 Mismatch = -1 Gap opening = -5 Gap extension = -1 .

ou ..-ELVIS .) Alinhar E-VISP ELVISP EVISP e ELVISP • Local : Não necessita alinhar todas as bases em todas as seqüências Alinhar DUDESLIKESELVIS e DUDESELVIS DUDES & ELVIS DUDESLIKESELVIS ou D – DES & ELVIS DUDES..Métodos de alinhamento • Grande variedade: parâmetros de comparação algoritmos de comparação Busca de similaridades Entre seqüências Alinhamentos: • Global: todas as bases são alinhadas umas com as outras ou com gaps (simbolizados como ..

Programas de análise e alinhamento de seqüências • • • • • • Contig express (Vector NTI) BioEdit BLAST Clustalw Multialin FASTA .

Contig Express .

BioEdit .

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ncbi.nih.gov/ . numa coleção de seqüências. • Fragmenta sua seqüência e procura homologia no banco de dados.nlm.http://www.O que é o BLAST? • Basic Local Alingment Search Tool • Conjunto de programas utilizados para execução de buscas por similaridades estatisticamente significantes • Identifica. as que apresentam alinhamento com a sua. • Programa disponibilizado no NCBI . • Descarta todas as pesquisas com pontuação pequena (score baixo) e vai alinhando a vizinhança das com pontuação boa. até chegar ao máximo valor.

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nih.ncbi.gov/BLAST/ .Ferramentas BLAST http://www.nlm.

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Human Oryza sativa Gallus gallus Mouse Rat Bos taurus Danio rerio Pan troglodytes Microbes Arabidopsis thaliana Drosophila melanogaster Apis mellifera . or list all genomic BLAST databases.BLAST Assembled Genomes Choose a species genome to search.

Basic BLAST Search a nucleotide database using a nucleotide query Algorithms: blastn. psi-blast. phi-blast Search protein database using a translated nucleotide query Search translated nucleotide database using a protein query Search translated nucleotide database using a translated nucleotide query nucleotide blast protein blast blastx tblastn tblastx . discontiguous megablast Search protein database using a protein query Algorithms: blastp. megablast.

Specialized BLAST Choose a type of specialized search (or database name in parentheses.) Search trace archives Find conserved domains in your sequence (cds) Find sequences with similar conserved domain architecture (cdart) Search sequences that have gene expression profiles (GEO) Search immunoglobulins (IgBLAST) Search for SNPs (snp) Screen sequence for vector contamination (vecscreen) Align two sequences using BLAST (bl2seq .

blastn .

gov/ • SwissProt: Swiss Bioinformatics Resource http://expasy.nrc.nlm.rcsb.ac.org/PDB/ .cbr.gov/ • PubMed: National Library of Medicine http://www.ebi.ca/sprot/ • PDB: The Protein Databank http://www.nih.pubmed.ncbi.uk/ http://www.Sítios obrigatórios para um Bioinformata • NCBI: The National Center for Biotechnology Information • EBI: The European Bioinformatics Institute http://www.

EXERCÍCIOS .

com .ls_pinto@hotmail.