ESPECTROFOTOMETRIA UV-VISVEL

Marli de Ftima Corra Emiliano ETEC DE SUZANO

O que um espectro?

Fototransduo e Processamento de Informao na Retina 1) Estgios da percepo visual: Luz que entra na crnea projetada contra o fundo do olho onde convertida em sinal eltrico por um rgo sensor especial - a retina Os sinais so ento mandados atravs do nervo tico para centros mais altos no crebro

Localizao da Retina dentro do olho

Estruturas dos dois fotoreceptores

Diferenas entre Bastes e Cones e entre seus sistemas neurais

Diferenas entre os sistemas

Fototransduo no Segmento Externo do Basto

Localizao e Estrutura da Rodopsina

Estrutura da Rodopsina

Resposta dos Sistemas de Cones ao Espectro Visvel

Discriminao de Objetos

Viso Geral Final

Cones individuais no transmitem informaes acerca de comprimentos de onda de luz - o comprimento de onda s afeta a probabilidade que o fton pode ser absorvido ;ele no afeta a resposta eltrica do cone. Para detectar cor o crebro compara as respostas de trs tipos de cones ,cada qual mais sensvel a uma parte do espectro visvel.Esta trivariana da viso de cor explica porque cada cor pode ser produzida por combinaes apropriadas de Vermelho,Azul e Verde. A informao de cor processada num caminho especializado do crebro.A segregao de informao de cor, da informao sobre forma e movimento comea na retina.

Fundamentos da Espectrofotometria
Uma maneira boa de cutucar molculas, com radiao eletromagntica (luz)
A espectrofotometria faz parte da classe dos mtodos analticos que baseiam-se na interao da matria com a energia radiante
Boa sensibilidade Baixo custo de anlise Fcil operao Equipamentos robustos

Luz incidente

Luz emergente
Perdas: - reflexes - disperso -absoro

Luz absorvida

Luz ?????
um conjunto de partculas se deslocando no espao (ftons) com comprimento de onda e freqncia.

Onda eletromagntica

Introduo aos mtodos pticos

Espectrofotometria qualquer tcnica que utilize luz para medir concentraes de espcies qumicas.

A primeira descoberta importante surgiu ainda na Grcia com Heron, de Alexandria, que, fazendo experincias com espelhos, descobriu que a luz caminha em linha reta, o que levou seguinte lei: o ngulo de incidncia igual ao ngulo de reflexo.

Sir Isaac Newton foi um dos cientistas do sculo XVII que mais contriburam para o desenvolvimento cientfico em torno da luz e da cor, chegando a resultados que apenas no sculo XX foram admitidos verdadeiros. A princpio, fazendo um feixe de luz passar por um prisma, percebeu que a luz se decompunha num espectro de cores, passando do alaranjado, amarelo, azul, at o violeta, e que podia recompor em luz branca este espectro vontade. Assim, descobriu que a luz branca era formada por todas as cores do espectro, e que portanto cada cor correspondia a uma frequncia. Isso o levou a estudar a cor como uma onda, mas, isolando as cores, nada podia fazer para alterar sua natureza.

Assim, experimentou cruzar feixes de luz com cores diferentes e, apesar de feixes de luz apresentarem uma resultante, o feixe aps o cruzamento mantinha-se como o raio original. Esse fenmeno no poderia ser explicado se a luz fosse uma onda. Assim, Newton foi o primeiro a postular que a luz poderia ser de uma natureza dupla, partculas e ondas. Mas, para a poca, era uma idia to avanada que Newton preferiu apenas especular sobre o tema em seu Principia ptica. Einstein, muito tempo depois, ao ler tais reflexes, percebeu que Newton quase havia chegado verdade sobre a luz, e escreveu num prefcio sobre isso: Sir Isaac Newton, para quem a natureza no tinha segredos.

E, embora as evidncias sobre a teoria ondulatria reinassem soberanas, ainda persistiam dvidas insolveis que eram deixadas muitas vezes de lado como argumento. Somente no final do sc. XIX que os cientistas voltaram a perguntar afinal, o que a luz.

Radiao Eletromagntica

Fundamentos da Espectrofotometria
Propriedades da luz

As formas das ondas ilustram-se bem com a das ondas na gua. O comprimento de onda de um a onda a distncia entre duas cristas, ou mximos sucessivos (ou entre dois cavados sucessivos, ou mnimos, sucessivos). A distncia pode se dada em metros, em nanmetros ou em qualquer comprimento que seja equivalente. O smbolo para o comprimento de onda a letra (lmbda).

As ondas tambm se caracterizam pela freqncia, simbolizada pela grega (ni). Dada uma onda que passa por um ponto no espao, a freqncia igual ao nmero de ondas completas que passam pelo ponto na unidade de tempo. A freqncia, por isso, em geral definida pelo nmero de ciclos que passa pelo ponto em cada segundo. A unidade de freqncia escreve-se s-1 (isto , por segundo ou 1/s), e denominada hertz.

Se voc j praticou esportes aquticos, tem familiaridade com a altura das ondas. Em termos cientficos, a altura mxima de uma onda, medida a partir do eixo de propagao da onda, a amplitude. Na fig. 1, observe que a onda tem amplitude nula em pontos intervalados ao longo do eixo. Os pontos de amplitude nula so os nodos, que ocorrem sempre em intervalos de comprimento /2 nas ondas estacionrias.

Finalmente, a velocidade da onda que se propaga um importante fator. Como analogia, imaginemos os carros num engarrafamento, parachoque contra para-choques. Se cada carro tiver 4 m de comprimento e se a em cada 4 segundos um carro passar por um observador (isto , se a frequncia for 1 por 4 segundos ou 0,25 s-1), ento a corrente de trfego se move com velocidade de (4 m) (0,25 s-1) ou 1 m/s. Esta multiplicao do comprimento pela frequncia para a velocidade vlida para qualquer movimento peridico, inclusive para as ondas.

Comprimento de onda (m) x freqncia (s-1) = velocidade (m/s)

Esta mesma equao se aplica radiao eletromagntica, para a qual o produto do comprimento de onda pela freqncia igual velocidade da luz, c. A velocidade da luz visvel e de todas as outras formas de radiao eletromagntica, no vcuo, constante (simbolizada por c) e igual a 2,99792458 x 108 m/s ou 299.792,458 Km/s. Isto quer dizer que, se o comprimento de uma onda de luz for conhecido, pode se calcular com facilidade a freqncia, e vice-versa.

Exemplo 1: Sabendo que a luz de cor laranja tem comprimento de onda de 625 nm (nanmetros), pede-se calcular o comprimento de onda (em metros) e a freqncia. Como a velocidade da luz est em metros por segundos, e o comprimento de onda est em nanmetros, preciso passar desta unidade para aquela antes de usar a equao

1 nm 625 nm -

10-9 m x

x = 625 x 10-9 m ou 6,25 x 10-7 m

Comprimento de onda (m) x freqncia (s-1) = velocidade (m/s) x = c

= c = 2,99 x 108 m/s 6,25 x 10-7 m = 4,80 x 1014 s-1

Estamos imersos, constantemente, em radiao eletromagntica, inclusive na radiao que podemos ver, a luz visvel. Como se sabe, a luz visvel composta por um espectro de cores .

Visvel Raios x
Microondas Ultra-Violeta Infra-vermelho

Raios gama

Rdio

a
10-11 10-9 10-7 10-5 10-3 10-1 10 103

Comprimento de onda (cm)

400

450

500

550

600

650

700

750

Comprimento de onda (nm)

c
Visvel Raios x Raios gama
UltraVioleta Infravermelho Microondas

Rdio

10-11

10-9

10-7

10-5

10-3

10-1

10

103

Comprimento de onda (cm)

b
400 450 500 550 600 650 700 750

Comprimento de onda (nm)

Espectro eletromagntico que compreende as radiaes de raios gama, raios x, ultra violeta, visvel, infravermelho, a microondas e ondas de rdio (a), espectro eletromagntico destacando apenas a regio do visvel, a qual perceptvel pelo olho humano (b), ilustrao do tamanho do comprimento de onda de diferentes radiaes do espectro eletromagntico, no se encontra em escala (c).

Espectro Eletromagntico

Fundamentos da Espectrofotometria
Absoro de radiao eletromagntica

Fundamentos da Espectrofotometria
Porque ocorre o fenmeno da absoro?
Molculas que apresentam eltrons que podem ser promovidos a nveis de energia mais elevados mediante a absoro de energia
TRANSIES ELETRNICAS

Nveis discretos de energia so absorvidos devido vibraes e rotaes das molculas

ROTACIONAL E VIBRACIONAL

Por este motivo no se observa uma linha de absoro ntida, mas sim uma banda de absoro
ESPECTRO UV-VISVEL

Planck, Einstein, Energia e Ftons Equao de Planck

To grande foi a perplexidade que o caso ficou conhecido como a catstrofe do ultravioleta.

E = h . radiao Energia de um quantum de radiao = (constante de Planck) . freqncia da radiao)

A constante de proporcionalidade h hoje denominada constante de Planck, numa homenagem ao cientista. Tem o valor de 6,6260755 x 10-34 J.s.

Exemplo 2: No exemplo anterior, calculamos que a luz alaranjada, com comprimento de onda de 625 nm, tinha a freqncia de 4,80 x 1014 s-1. Agora podemos calcular a energia de um quantum de energia da luz alaranjada. E=h. E = (6,626 x 10-34 J.s) . (4,80 x 1014 s-1) E = 3,18 x 10-19 J A teoria baseada no trabalho de Planck a teoria quntica. Com ela, Planck pde calcular o nmero de quanta (plural de quantum) de cada freqncia emitida por um corpo aquecido.

Einstein e o Efeito Fotoeltrico

O efeito fotoeltrico ocorre quando a luz atinge a superfcie de um metal e h ejeo de eltrons na superfcie. Os eltrons ejetados pela luz incidente, delocam-se e h passagem de corrente na clula. Como a luz provoca a corrente, uma clula fotoeltrica pode operar como chave sensvel a luz. Muitos dispositivos automticos de abertura de portas de lojas e de elevadores operam com tais clulas.
Eltrons ejetados Frequncia

Einstein mostrou que todas essas observaes podem ser explicadas pela combinao da idia de quanta de energia de Planck com a noo de a luz ter no apenas propriedades ondulatrias mas tambm propriedades corpusculares.

Energia aumenta

quando a freqncia aumenta

Energia = constante de Planck . freqncia

Energia aumenta

Energia = constante de Planck . Velocidade da luz comprimento de onda

quando o comprimento de onda diminui

Transies Eletrnicas

Energia Rotacional e Vibracional

Espectro UV-Visvel

Base Terica da Espectrofotometria e da Colorimetria

As cores sempre exerceram fascnio sobre a humanidade. Foi, talvez, motivado pela cor (da ma) que o homem cometeu o seu primeiro pecado. Por toda a histria, corantes e pigmentos foram objetos de atividades comerciais.

Hoje, so mais de 8 mil compostos diferentes sendo vendidos: substncias que podem ser tanto orgnicas como inorgnicas. So elas que do cor a nossas roupas, papis, casas, carros ou lbios. Atualmente uma das maiores beneficirias da tecnologia das cores a indstria das tintas. Assim vamos conhecer um pouco sobre essa tecnologia.

Para a existncia da cor so necessrias algumas particularidades estruturais da molcula. As cores dos corantes e pigmentos so devidos a absoro de radiao eletromagntica* na faixa da luz visvel pelos compostos.

Ns somos aptos a detectar, com nosso corpo, uma estreita faixa desta radiao:

com nossos olhos, detectamos a faixa de 400 a 700 nanmetros;

com o tato, somos capazes de sentir a radiao na faixa do infravermelho e do micro-ondas, que provocam aquecimento da pele;

nosso organismo utiliza a radiao ultravioleta para promover a formao da vitamina D, a partir de sua pr-vitamina. )

As cores esto relacionadas com comprimentos de onda particulares. O vermelho, por exemplo, corresponde faixa entre 480 a 530 nm, e o azul, de 600-700 nm.

Os compostos orgnicos podem absorver radiao eletromagntica. disso que se valem as tcnicas de anlise de infravermelho ou espectroscopia de ultravioleta.

Fundamentos da Espectrofotometria
Dois requisitos devem ser observados para que uma determinada radiao possa ser absorvida por uma molcula: 1 - A radiao incidente deve ser de freqncia equivalente aquela rotacional ou vibracional, eletrnica ou nuclear da molcula, 2 - A molcula deve ter um dipolo permanente ou um dipolo induzido, ou seja, deve haver algum trabalho que a energia absorvida possa fazer.

Cores de Radiao Regio do Visvel

A espectrometria um conjunto de recursos que nos permite identificar a estrutura das partculas que constituem as substncias.

Esses aparelhos funcionam basicamente a partir de feixes de onda eletromagntica incidentes sobre uma amostra do composto, que ento, absorve energia em determinados comprimentos de onda.

Transmitncia (T) - Razo entre a energia radiante transmitida por uma substncia e a energia radiante incidente nessa substncia: T = Et/Ei
Absorbncia ou Absorvncia (A) = - log (T)

Imagine que voc tenha em uma das extremidades uma fonte de luz (representado na ilustrao abaixo por uma lmpada) que emite uma energia radiante e na outra extremidade um anteparo que coleta essa energia proveniente da fonte de luz (denominemos como detector)

Suponhamos novamente o mesmo experimento, entretanto se ao invs do anteparo semipermevel colocssemos uma amostra contendo espcies qumicas as quais gostaramos de quantific-las.

Nos laboratrios de anlises, os aparelhos que medem a transmitncia so denominados espectrofotmetros. assim denominado devido a interao de uma fonte de luz com a amostra de interesse, permitido assim a quantificao de espcies qumicas presentes em uma determinada soluo.

A amostra composta por soluto (espcies qumicas em menor quantidade a serem quantificadas) e o solvente (geralmente gua).

Introduziremos essa amostra em um recipiente que denominamos de cela ou cubeta, que geralmente mede 1 cm e dizemos ento que essa cubeta possui 1 cm de caminho tico ou seja o comprimento por onde h a interao da luz com as espcies qumicas de 1 cm, como descrito nas figuras acima, As cubetas so produzidas com quartzo, este escolhido por no interagir com a fonte de luz ou interagir o mnimo possvel.

Inicialmente, precisamos de um referencial que geralmente denominamos na espectrofotometria como o branco, ou seja, todas as espcies qumicas da amostra que no queremos quantificar. Por exemplo, sabendo que o aparelho de espectrofotometria emite uma fonte de luz, com determinado comprimento de onda, a qual absorvida por espcies qumicas de ons Cu2+ e temos uma soluo contendo ons Cu2+, os quais queremos quantificar. O branco seria somente a gua. Outro exemplo, se tivssemos uma soluo contendo os ons Cu2+, Fe3+, o branco seria uma soluo (gua + Fe3+).

A lei de Beer-Lambert
A = bc

a absorbitividade molar em unidades de L mol-1 cm-1

b o comprimento do caminho da amostra, isto , o comprimento do caminho que a luz tem que atravessar na cuba ou qualquer recipiente onde esteja a soluo. Esta grandeza tem unidades de comprimento, p. ex. centmetro.

c a concentrao do elemento que absorve, na soluo, expressado em mol L-1

Espectros de absoro de diferentes substncias

Espectros de absoro diferentes substncias (1: bacterioclorofila; 2: clorofila a; 3: clorofila b; 4: ficoeritrobilina; 5: beta-caroteno)

Teoria da Espectrofotometria
Lei de Lambert
Io
1 cm

Lei de Beer
Io
soluo 10 g/l

IT1

IT1

Io
3 cm

IT3

Io
soluo 20 g/l

IT2

It = Io 10-Kl

It = Io 10-Kc

Lei de Beer-Lambert
A espectroscopia de absoro molecular est baseada na medida de absorbncia (A) ou transmitncia (T), que esto relacionadas atravs das equaes:

Lei de Beer-Lambert

A absorbncia muito importante porque ela diretamente proporcional concentrao, c, de espcies absorventes de luz na amostra

Desvios da Lei de Beer-Lambert

LIMITAO REAL
A Lei vlida somente para baixas concentraes Altas concentraes = Interao entre as molculas afeta a distribuio de carga, alterando o coeficiente de absortividade molar

DESVIO QUMICO
Surgem quando um analito se dissocia, se associa ou reage com um solvente para dar um produto que tem um espectro de absoro diferente

Desvios da Lei de Beer

DESVIO INSTRUMENTAL A lei s vlida para radiao monocromtica, ou seja, para um nico comprimento de onda () Como minimizar o desvio? Escolher a regio onde o constante na regio selecionada

Partes Essenciais de um Espectrofotmetro

Fontes de radiao; Monocromador; Compartimento de amostra; Detector.

Espectrofotmetros
Feixe Simples

Feixe Duplo

Espectrofotmetros com duplo feixe

Espectrofotmetros com duplo feixe

Fontes de Radiao

Sistema ptico

Celas de Medida

Detectores

Detectores

Detectores

Espectrofotmetros Portteis

Espectrofotmetro de bancada

Absoro Seletiva de Compostos Orgnicos e Inorgnicos

ABSORO SELETIVA
A. Compostos Inorgnicos

B. Compostos Orgnicos
Cromforos Auxcromos

Cromforos Representativos
Composto Cromforo max (nm) Log

Octeno-3
Acetileno Acetona Acetato de diazoetila Butadieno Crotonaldedo Dimetilglioxina Octatrienol Decatetraenol

C=C
C=C C=O N=N C=C-C=C C=C-C=O N=C-C=N C=C-C=C-C=C [-C=C-]4

185 , 230
173 188 , 279 252 , 371 217 217 , 321 226 265 300

3,9
3,8 2,9 , 1,2 3,9 , 1,1 4,3 4,2 , 1,3 4,2 4,7 4,8

Vitamina A
Benzeno 1,4-Benzoquinona Naftaleno

[-C=C-]5
C C

328
198 , 255 245 , 285 , 435 220 , 275 , 314

3,7
3,9 , 2,4 5,2 , 2,7 , 1,2 5,0 , 3,7 , 2,5

Difenilo

246

4,3

Anlises Quantitativas

Anlises Quantitativas

Anlises Quantitativas

Titulaes Espectrofotomtricas

Anlise Qualitativa
3,2

D
C5H11 C5H11 OH R OH

3,0

Log

2,8

R OH

A ou B

2,6

(A)

(B)

OH C5H11

2,4

C5H11
2,2

OH
2,0 240 250 260 270 280 290 300

Comprimento de onda (nm)

OH (C)

OH

(D)

OH

Espectro de absoro do canabidiol comparado com outros fenis.