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Integrantes Maricela Villanueva Diana Sols Laura Esteban Velasquez Cinthia Alans Lopez Cristian Paola Gonzales Luis Miguel RUIZ Namoyure Managua 5 de Julio del 2013
Objetivos 1 Abordar generalidades del Aislamiento viral y tipos de clulas. 2 - Mencionar generalidades del virus del Dengue e Influenza. 3 Mencionar los mtodos diagnsticos del aislamiento viral. 4 Describir Procedimiento de Aislamiento y identificacin del virus del Dengue e Influenza
Introduccin Un aislamiento Viral es una tcnica de alta Sensibilidad y Especificidad que utiliza cultivos celulares como bisustratos. Los sistemas celulares para aislar los virus en el laboratorio son :
Animales de experimentacin Embriones Animales Cultivos Artificiales
Aislamiento viral
Para el aislamiento de un virus se requiere la recoleccin adecuada de la muestra todas las muestras deben de ser contenidas en un recipiente de
laboratorio de seguridad para trasporte.
El Aislamiento viral es obtenido cuando - Se produce el efecto citopatico. - Aparece una protena codificada por el virus. - Hemodorcion. - Alteracin especifica o muerte del Animal - Aparicin de placa en el huevo Embrionario.
Inoculacin
La inoculacin es usualmente intracerebral con inculos de 0.03 ml tambin pueden ser subcutneo, intramuscular y de dosis mayores del inoculo.
- Pueden ser portador de virus que producen infeccion latente. - Costo de mantener colonias sanas. - Los virus pueden crecer en huspedes diferentes.
Huevos henbrionados Pueden ser utilizados para aislamiento y cultivo de virus. Los huevos henbrionados pueden inocularse diferentes vas dependiendo del de agente que se pretende estudiar. la inoculacin en membrana cariolantoide que es muy til para diferenciar herpes simple la cavidad alantoidea.
Cultivos celulares
El aislamiento en cultivos celulares es la tcnica de oro para la deteccin de un virus . Se derivan del crecimiento de clulas que migran de un tejido o por dispersin enzimtica.
Cultivos Primarios: Obtenidos mediante la dispersin de tejidos tomados directamente del organismo y soportan hasta tres pases Ej. (Rin Embrionario). Lneas celulares diploides : clulas que toleran un numero mayor de pases hasta 50 pases pero presentan un crecimiento normal ya que conservan hasta 75% de su cariotipo original Ej.(Fibroblasto de pulmn). Lneas Celulares continuas son capaces de crecer indefinidamente presentan un numero alterado de cromosoma ya que son de origen maligno o canceroso.
Inhibicin de la hemoaglutinacin
Heemadsorcion Neutralizacin por reduccin de placas Radioinmunoensayos Las que evidencia o descubren material gentico especfico viral conservadas y replicables ya sea en un fluido, clula o tejido entre estos estn(Biologa Molecular): Reaccin en cadena del polimerasa ( PCR) Hibridacin
Influenza
Es una enfermedad infecciosa causada por aerosoles y que infecta las vias respiratorias es de la famila orthomyxoviridae de tipo ARN su tiempo de incubacion va de 1 a 4 dias tipos de Influenza Influenza A con 10serotipos(HINI.H2N2,H3N2,H5N5,H7N7,H1N2 ,H9N2,H7N2,H10N1O) Influenza B Influenza c
Diagnostico de Influenza
Los procedimientos de diagnostico del virus influenza se pueden clasificar en: 1. Diagnostico virolgico basados en deteccin del agente viral por: aislamiento en cultivos celulares o huevos embrionados (Posterior se realiza extraccin del liquido amnitico y alantoideo a prueba de hemaglutinina), deteccin de antgeno y amplificacin parcial del genoma viral por RT-PCR. 2. Diagnostico serolgico basados en la deteccin y medida de niveles de anticuerpos en sueros pareados utilizando las tcnicas de inmunodifusin en agar (IDA), ensayo inmunoenzimtico (ELISA) o inhibicin de la hemaglutinacin (IHA). Cultivo celular en MDCK
Agregar 200 ul de cada espcimen en un frasco de clulas dejando adsorber por 30 minutos a 37c y luego incubar a 33c en incubadora de CO2 Cosechar si ECP 3+ 4+ o si no hay ECP en 6-7 y someter a HA e identificar subtipo por IHA o RT-PCR