Trabajo diagnstico 2

Secrecin de odo
Caso clnico: Paciente de 5 aos de edad, quien presenta secrecin tica, de aspecto mucopurolento y de color amarillo, desde hace un mes. Al examen fsico se observa secrecin abundante, que escurre por el pabelln de la oreja derecha. La madre refiere que el nio presenta dolor, fiebre, y llanto nocturno y que le ha aplicado gotas que compr en la farmacia cercana a su vivienda, de las cuales no recuerda el nombre. Se solicita Gram, cultivo y antibiograma de secrecin tica . Integrantes: Juan Sebastin Angarita Ivn Leonardo Guevara Ellen Sofa Manrique Albert Emilio Rodrguez

Docentes: Martha Jcome Martha Luca Hincapi

Recibimiento de la muestra y solicitud de medios de cultivo

Fig1. Muestra en medio de transporte Stuart

Da 1

Muestra: En el laboratorio se recibe un hisopo con la secrecin tica del paciente, almacenado en medio de transporte Stuart (mantener viabilidad de los microorganismos). La muestra presentaba un color amarillo intenso y caractersticas mucopurulentas. Pedido: - Medio slido: agar sangre - Medio lquido: caldo de tioglicolato - 2 lminas para realizar tincin de Gram

Fig 2. Examen directo de secrecin tica coloreado con Gram

Da 1

Cantidad abundante de cocos Gram positivos agrupados en racimo Cantidad escasa de bacilos Gram positivos Abundante reaccin leucocitaria/CM (100x)

Fig 3. Aislamiento primario As

Fig 4. Aislamiento primario caldo tioglicolato

Siembra por agotamiento en agar. Incubacin con 5-10% CO2, 35 2C por 18 a 24 horas

Incubacin a 35 2C por 18 a 24 horas en condiciones de aerobiosis.

Da 2
Resultados y evidencias
Tabla 1: Resultados crecimiento en agar sangre Fig 5. Descripcin de las colonias Fig 6. Tincin de Gram Fig 7. Prueba con H2O2 al 3%

Cocos Gram positivos

La bacteria posee la enzima catalasa

Da 2
Resultados y evidencias
Tabla 2 : Resultados caldo de cultivo tioglicolato
Fig 8. Caldo tioglicolato

Crecimiento

En la tincin de Gram se observ:

Crecimiento en Cocos Gram positivos agrupados en fondo y en la racimo parte superior Bacilos Gram variables del tubo (fig 8) Cocos Gram positivos agrupados en cadenas/CM (100x)

Crecimiento en fondo y superficie.

Se procede a realizar la prueba de coagulasa, ya que la morfologa macroscpica, microscpica y la prueba catalasa positiva apuntan a que el microrganismo perteneca al gnero Staphylococcus. Procedimiento: Se tomaron 3 tubos de ensayo, a los cuales se les haba adicionado previamente 0.5mL de plasma, cada uno se rotul y se inocul de la siguiente manera: Tubo #1. Control positivo Cepa de S. aureus ATCC coagulasa positivo Tubo #2. Control negativo. Plasma sin inocular Tubo #3. Colonia de estudio inoculada Los tubos se llevaron a incubadora a 352 C y se revisaron a los 30 min, 2 h, 4 h y 24 h. Resultados:
Prueba coagulasa 30 minutos
2 horas 4 horas 24 horas
Fig9. Plasma + colonia

Control Positivo Negativo

Negativo Positivo Positivo

Control negativo Negativo

Negativo Negativo Negativo

Colonia de estudio Negativo

Negativo Positivo Positivo
Presenta la enzima coagulasa

Da 3
Repique del caldo de cultivo tioglicolato en AS:
Colonias #1 Descripcin Tincin de Gram Cocos Gram positivos agrupados en racimo/CM (100x) -hemolticas, blancas pequeas, Bacilos Gram positivos en empalizadas y letras chinas/CM (100x) Bacilos Gram positivos en empalizadas y letras chinas/CM (100x) Prueba de catalasa Positiva. La bacteria posee la enzima catalasa Positiva. La bacteria posee la enzima catalasa Positivo. La bacteria no posee la enzima catalasa

#2

#3

-hemolticas, puntiformes

Fig10. Gram colonia 1. AS

Fig11. Gram colonia 2. AS

Fig12. Gram colonia 2 . AS

Cocos Gram positivos agrupados en racimo

Bacilo Gram positivos en empalizada

Bacilo Gram positivos en empalizada

Antibiograma para S. aureus

Usando la tcnica de Kirby-Bauer (metodo de dificion en agar), a partir un caldo de cultivo (CASO) con Staphylococcus aureus y ajustado al estndar O,5 de la escala de McFarland (equivalente a 1,5x10 UFC/ml), se inocul la superficie del agar Meller-Hinton, empezando en la parte superior de la placa. 8 Cubriendo toda la placa sembrando de ida y vuelta de un borde al otro. Rote la placa aproximadamente 60 tres veces y por el borde de la caja. Posteriormente se incubo a 352C por 16 a 18 horas.

Resultado (Fig 13):

Sensidisco Eritromicina 15 g Clindamicina 2g Susceptible 23mm 21mm Intermedio 14-22mm 15-20mm Resistente 13mm 14mm Lectura 25 mm susceptible Satelitismo Fig13. Antibiograma para Staphylococcus aureus

Penicilina 10 g
Oxacilina 1 g Cefazolin 30 g Vancomicina 30 g

29 mm
13 mm 18 mm 15 mm

-11-12mm 15-17mm --

28mm
10mm 14mm --

6 mm Resistente
6 mm Resistente 18 mm Susceptible 17 mm Susceptible Agar Mueller Hinton, 18 a 24 horas a 35 2C

Discusin
- Al recibir el caso clnico, en un primer momento el grupo pens que el posible agente etiolgico era Moraxella catarrhalis. - Como el primer da no se hizo la tincin de Gram se opt por documentarse con la literatura, as se encontraron artculos y documentos donde este tipo de casos estaba relacionado con los gneros: Streptococcus pneumonie (30%), Haemophilus influenzae (2025%), Moraxella catharrhalis (10-15%), Streptococcus pyogenes (3-5%) y Staphylococcus aureus (1%). Dada esta consulta se empez a creer que se poda tratar de S. pneumoniae pero cada vez que se avanzaba en el diagnstico todo apuntaba y confirmaba que el verdadero agente infeccioso era S. aureus. - Basados en la observacin tambin de diferentes morfologas en el caldo de cultivo tioglicolato, se logro realizar un excelente repique de ste en agar sangre y as identificar una morfologa adicional como lo fue Corynebacterium spp - Adicionalmente , no se selecciono un cultivo axnico para la solicitud de antibiograma , por lo cual se debi haber repetido ste. Se decide no reportarlo.

Informe al mdico
Fecha: Enero 4 de 2013 Nombre: Camilo Garca M. Edad: 5 aos Identificacin: 1.098.320.487 Tipo de muestra: Secrecin de odo Mdico tratante: Juan Fernando Rodrguez A. Solicitud: 1. Coloracin de Gram Al examen directo coloreado con Gram se observa: Cantidad abundante de cocos Gram positivos agrupados en racimo Cantidad escasa de bacilos Gram positivos Abundante reaccin leucocitaria/CM(100x) 2. Cultivo Se aisl e identific a. Corynebacterium spp b. Staphylococcus aureus
Microbilogo responsable: Sebastin Angarita, Ivn Guevara, TP: 961067 TP: 645321

Sofa Manrique, TP: 131320

Albert Rodrguez TP: 744986

Conclusiones
Cuando se realizan este tipo de trabajos en equipo es de vital importancia conocer los puntos de vista de cada uno de los integrantes (conceptos claros) para poder tomar las mejores decisiones y as llegar a un diagnstico acertado. Es muy importante la observacin de las morfologas microscpicas de las colonias bacterianas, pues nos ofrece informacin que podemos utilizar para acertar en el diagnostico de una patologa. Para la validacin de una prueba es vital tener un control positivo y negativo, lo que nos permite confirmar la veracidad de los resultados.
Se debe saber administrar el tiempo empleado en el diagnstico. Adems conocer la destreza de cada uno de los integrantes al realizar un trabajo encaminado al diagnstico.