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CLULAS VNC
(Kell et al., 1998)
Estado VNC Estado atenuado Tcnicas de reactivacin Reparacin y Resucitacin a edo sano CLULAS VIABLES
Autlisis celular
Autlisis celular
DIAGRAMA PARA DISCRIMINAR ESTADOS FISIOLGICOS DE LAS CLULAS (Kell et al., 1998)
No cultivable An no cultivadas quietas, miniclulas, de crecimiento lento somniclulas Estrategia para sobrevivir en condiciones hostiles. Se conoce menos del 1% de los microorganismos que existen
Clulas espaguetti
Tincin con acido nalidxico: Clulas vivas alargadas: Crecen pero no se separan
Clulas muertas mismo tamao
Membrana energizada
Rodamina 123 Membrana citoplsmica energizada
Medios slidos con pocos nutrientes Perodos de incubacin largos (>30 das) Proteccin de perxidos exgenos Inclusin de cidos hmicos y de compuestos de quorum sensing Incubar en presencia o ausencia de aire, o en atmsfera de CO2
Resucitacin
Para confirmar hiptesis de VBNC, necesario resucitar Conversin clulas no cultivables en clulas cultivables Sin cambios en nmeros
Adicin de nutrientes: Presencia de una pequea cantidad de clulas viables y stas son las que se desarrollan cuando se aaden nutrientes.
Entonces qu pasa?
Otro modelo: Clulas se convierten en no cultivables por deterioro celular, estas clulas son moribundas Necesario contar con mtodos para estudiar cada clula o subpoblacin de clulas por separado Deteccin in situ de carbonilacin de protenas (ensayo inmunolgico, deteccin a nivel celular) Centrifugacin con gradiente de densidades
Regulones de estrs
Mayores en clulas NC: Sigma S Promotores dependientes de Sigma S: sodCp, katEP, uspBP Promotor soxS Entonces activacin de reguln SoxRS PdnaK, regulado por reguln choque trmico P3rpoH y PcpxP, regulados por sigma E, respuesta a estrs extracitoplsmico Entonces, defectos en el manejo de protenas en compartimientos extracitoplsmicos
Clulas en inanicin pierden la capacidad reproductiva debido a deterioro, ms que a entrada adaptativa y programada a VBNC Esterilidad asociada a dao oxidativo, sta podra ser reversible. Sin O2, clulas en inanicin tardan en empezar a ser no cultivables