Enzimologa : Generalidades Cintica enzimtica Papel Clnico

Qu es una enzima?
Es un tipo de protena que acta como catalizador de reacciones qumicas. Incrementa la velocidad de reaccin sin cambiar el punto de equilibrio. Como catalizador:
Es especfico para cada reaccin. No necesariamente para un solo sustrato, aunque muchas enzimas lo son. Tiene gran poder cataltico, transformando hasta 103 a 104 molculas por segundo. Est sujeto a diversos mecanismos de regulacin de modo tal que no genere ms producto que el necesario.

Actividad enzimtica
Es la forma de medida de una enzima. La ecuacin general de las reacciones enzimticas es:

E S Cof1 ES E P Cof 2
Donde la enzima se une al sustrato para generar un producto. Algunas veces con el auxilio de un cofactor que se modifica durante la reaccin. La actividad enzimtica se mide por la reaccin cataltica bajo la forma de desaparicin del sustrato por unidad de tiempo. Tambin por formacin de producto o modificacin del cofactor. Unidades: katal = moles de sustrato/segundo. Unid. Internacionales: umol/minuto. 1 U= 16,7 nkat.

Clasificacin de enzimas
Clase de enzima Tipo de reaccin catalizada
Oxidoreductasas Transferasas Hidrolasas Liasas Isomerasas Ligasas Reacciones que transfieren electrones de un sustrato a otro.xido reduccin Transfieren un grupo funcional de una molcula a otra. Grupos como metilos, acilos, fosfatos etc Rompen enlaces entre carbonos u otras molculas con la adicin de una molcula de agua. Rompen enlaces C-C, C-S, C-N sin el ingreso de una molcula de agua. Transforman un ismero en otro transfiriendo un grupo funcional de una posicin a otra. Forman enlaces C-C, C-N, C-O y C-S uniendo dos molculas con gasto de energa.

Especificidad y sitio activo

Las reacciones se inician cuando el sustrato se une al sitio activo de la enzima. El sitio activo es una porcin espacial de la enzima creada por la coincidencia de varias cadenas laterales de aminocidos especficos. Estos pueden no estar en secuencia, pero los dobleces de la protena enzimtica los aproximan. Existen: residuos de captura y residuos de catlisis.

enzima

sustrato

enzima

productos

Tipos de especificidad enzimtica

Modelo de molde rgido En este modelo el sitio activo tiene una estructura rgida, se le llama de llave y cerradura. Es complementaria del sustrato. Explica la especificidad de sustrato an a nivel de ismeros (estructuras casi idnticas). Modelo de molde inducido Aqu el sitio activo es ms flexible, se le llama de mano y guante. Cuando el sustrato se acerca a la enzima se producen cambios conformacionales que llevan a una exacta unin entre ambos. Modelo que explica mejor la especificidad de sustrato.

Enzimas y energa de activacin

Las enzimas no afectan el punto de equilibrio de una reaccin qumica. Slo aceleran la velocidad para alcanzar este punto. La energa de activacin es la necesaria para que el sustrato se eleve al estado transitorio. La velocidad de reaccin es inversamente proporcional a la magnitud de la energa de activacin.
Estado de transicin
Energa de activacin

sustrato

producto

Actividad cataltica
Las enzimas aceleran la velocidad de reaccin por las siguientes razones: La unin de sustrato y enzima incrementa la concentracin efectiva de sustrato en las inmediaciones del sitio activo. Hay tambin un cambio conformacional que orienta al sustrato. La unin enzima sustrato tiene un nivel ms alto de energa y las modificaciones de longitud y ngulo del sustrato asemejan a la forma del estado transitorio. Algunos de los residuos del sitio activo, participan de la reaccin donando y aceptando protones. Algunos residuos catalticos tienen grupos que ayudan a romper enlaces covalentes.

Localizacin enzimtica
Na/K ATPasa Retculo endoplasma Glucosa 6 fosfatasa

membrana

Las enzimas ejercen su funcin predominantemente en el interior celular. Mas an lo hacen en determinado organelo de la clula. Las enzimas que se encuentran en el plasma o lquidos diversos corresponden a aquellas que se estn eliminando y muy pocas como la LCAT (Lecitina colesterol acil transferasa), LLP (Lipasa lipoproteica), ejercen su funcin a nivel plasmtico.

Alfa manosidasa Complejo Golgi Catalasa Peroxisoma Succinato deshidrogenasa.Citocromo oxidasa

Mitocondria

Factores que modifican la reaccin enzimtica

La velocidad de una reaccin mediada por enzimas est influenciada por:
Temperatura del medio El pH del medio Concentracin de la enzima Concentracin del sustrato

Temperatura
No existe actividad enzimtica a -273C o cero absoluto. A partir de esa temperatura los incrementos provocan mayor actividad enzimtica. La que se expresa como coeficiente de temperatura o Q10. Esto es, el incremento de actividad por cada 10C de aumento de temperatura. En trminos generales Q10 = 2, es decir que por cada 10C de temperatura la velocidad se dobla. Existe una temperatura ptima tras la cual los aumentos provocan desnaturalizacin de la protena enzimtica y prdida de la actividad.

actividad
0

temperatura

70

pH
Cada enzima tiene un pH ptimo de trabajo, el cul es variable. Las enzimas intracelulares trabajan entre 5 y 9 , las enzimas digestivas pueden trabajar en pH diferentes. Los extremos de pH afectan la ionizacin de los centros activos (-COO- NH3+ SH).
0 pH
14

X H X X Enzima Y Enzima Enzima H Y H Y

pH cido (inac)

pH ptimo (activo)

pH alcalino (inac)

Concentracin de la enzima y constante de equilibrio

La concentracin de la enzima incrementa la velocidad de la reaccin, pero no modifica la constante de equilibrio. As, si la reaccin se produce en ausencia de la enzima...

SP
K 1

K1

La constante de equilibrio ser:

K1 ( P) Keq K 1 (S )
K1

Y, si la reaccin se produce en presencia de la enzima...

Enz S Enz P
K 1

La constante de equilibrio ser:

Keq

K1 K 1

( Enz )( P ) ( Enz )(S )

( P) (S )

Concentracin del sustrato

Si se aumenta la concentracin del sustrato, manteniendo constante las dems variables, la velocidad inicial de reaccin (Vi) aumenta hasta un valor mximo (Vmax) el que se estabiliza. Se dice bajo estas condiciones que la enzima est saturada con el sustrato. Esto se produce de acuerdo a la afinidad enzima sustrato.

Vmax

Vmax/2

Km.

Ecuacin de Michaelis Menten

La relacin entre velocidad de reaccin y concentracin de sustrato se describe en la frmula:

Vmax[ S ] Km [ S ]

Bajo estas condiciones Vmax se observa cuando todos los sitios activos estn llenos de sustrato. Toda la enzima est bajo la forma de [ES] y la Km se define como concentracin de sustrato a Vmax/2 Vmax: es un ndice de la eficiencia de una enzima. Es la velocidad cuando todos los sitios activos estn saturados, y es proporcional a la concentracin de la enzima. Sus unidades son unidades de velocidad. Km: es una medida inversa de la afinidad de la enzima por el sustrato. Una baja Km indica alta afinidad entre enzima y sustrato. Las unidades de Km son unidades de concentracin.

La aplicacin de la ecuacin de Michaelis Menten se basa en...

E S ES E P
K2 K4 K1 K3

La concentracin de sustrato es tan grande con respecto a la de enzima, que la formacin de ES no altera significativamente la concentracin de sustrato. Al inicio de la reaccin la concentracin del producto es tan insignificante que la velocidad descrita como k4 puede ser ignorada. La velocidad de transformacin de ES en E+P(k3) es el factor limitante de la reaccin. La formacin de ES es rpida y reversible y es igual a la velocidad de desaparicin de ES.

Grfica de Lineweaver Burk

La grfica de Lineweaver Burk es usada para obtener Vmax y Km. Se usa la inversa de la ecuacin de Michaelis Menten.

1/v

1 km 1 1 . v Vmax [ S ] Vmax
Cuando 1/v se grafica frente a 1/s se obtiene una recta, donde la pendiente es Km/Vmax. -1/Km La interseccin en el eje de y es igual a 1/Vmax y la del eje de x es igual a 1/Km.

1/Vmax
1/[S]

Inhibidores competitivos
Estructuras semejantes al sustrato que compiten con l por el mismo centro activo. Sus efectos pueden revertirse si se incrementa la concentracin del sustrato hasta ocupar todos los centros activos. La Vmax no cambia, pero si el Km porque se necesita ms sustrato.
1/V

inhibidor
1/Vmax -1/Km

[S]

1/[S]

Inhibidores no competitivos
Estructuras diferentes al sustrato por lo que se unen a un sitio independiente de la enzima. Ambos, sustrato e inhibidor pueden unirse a la enzima al mismo tiempo. Su efecto no puede revertirse aumentando la concentracin del sustrato. No tiene efecto sobre la Km pero s sobre la Vmax.
1/V V inhibidor
1/Vmax

[S]

-1/Km

1/[S]

Inhibidores irreversibles
Reaccionan covalentemente con la cadena lateral de un aminocido de la enzima, para formar un complejo estable permanentemente inactivado. Se les llama tambin substratos suicidas. Su efecto es igual al de un inhibidor no competitivo.

Efecto clnico de los Inhibidores

Droga Lovastatina 5-fluouracil Metrotexate Alopurinol Cumadin Aspirina Captopril Uso teraputico Hipercolesterolemia Cncer Cncer Gota Anticoagulante Antiinflamatorio Hipertensin art. Enzima afectada HMGCoA reductasa Timidilato sintetasa Dihidrofolato reductasa Xantino oxidasa Glutamil carboxilasa Ciclooxigenasa Enz.convert.angiotensina Tipo de inhibidor Competitiva Irreversible Competitiva Irreversible Competitiva Irreversible Competitiva

Papel Clnico de las Enzimas

Si bien es cierto las enzimas cumplen su actividad en el interior celular, es posible encontrarlas en los lquidos biolgicos con cierta frecuencia. Todas las enzimas plasmticas, las del LCR, del L. Asctico o Pleural se encuentran en bajos niveles de concentracin actividad- provenientes de los tejidos ricos en ellas y generalmente de paso a un proceso de destruccin heptica o eliminacin renal. nicamente algunas enzimas como las del metabolismo de lpidos (LCAT, LLP) o los factores de coagulacin ejercen su actividad en el plasma o suero.

Elevacin enzimtica en el plasma...

La actividad enzimtica en el plasma y otros lquidos biolgicos se produce por: Necrosis: destruccin celular y vaciamiento de las enzimas como en el infarto de miocardio, hepatitis viral. Permeabilidad: aumento de permeabilidad de membrana igual a necrosis. Sobre produccin: mayor metabolismo en un tejido -neoplasia-. Menor eliminacin: no se elimina normalmente -obstruccin biliar-. Incremento de clulas inflamatorias: en lquidos como Pleural y Asctico los exudados se acompaan de aumento de actividad enzimtica.

Origen de las enzimas en el plasma

Enzimas Especficas del plasma Secretadas Del metabolismo celular Ejemplos Protrombina, plasmingeno,ceruloplasmina, Lipasa Lipoproteica,colinoesterasa Amilasas, fosfatasa prosttica, pepsingeno Lctico deshidrogenasa, aldolasa, aspartato y alanina transferasa.

Enzimas de uso diagnstico

Enzima Fosfatasa cida Fosfatasa alcalina Amilasa Aspartato amino transferasa Alanina amino transferasa Creatino fosfo quinasa Dehidrogenasa lctica Uso diagnstico Cancer de prstata Enf. heptica y osea Enf. pancretica Enf. heptica y cardiaca Enf. heptica Enf. muscular y cardiaca Infarto de miocardio

GOT GPT GLDH SDH CPK

LDH

Papel de las enzimas en la medicina

Establecer un diagnstico, como en el caso de las enzimas del infarto de miocardio (CPK y LDH). Valorar la magnitud de la lesin Monitorizar la mejora del paciente. Mostrar la repeticin del fenmeno (reinfarto) CPK TGO

LDH

10

Das despus del infarto de Miocardio.

Isoenzimas
Enzimas que realizan la misma funcin pero difieren en su estructura qumica y propiedades cinticas. Las formas isoenzimticas distintas pueden pertenecer a distintos tejidos revelando sus modificaciones el tejido que le dio origen. Generalmente son estructuras oligomricas con varios tipos de cadenas proteicas -dmeros o tetrmeros- .
100% % 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%

Isoenzimas LDH
LDH1 LDH2 LDH3 LDH4 LDH5

Eritrocitos

Pulmones

Hgado

Rin

Miocardio

Msculo

Bazo

Dehidrogenasa lctica
Existen cinco isoenzimas de la deshidrogenasa lctica (LDH). Cada una es un oligmero con cuatro protmeros de los tipos H y M y tiene un PM de 34 000. Los protmeros se combinan de manera distinta y se originan en distintos tejidos con preferencia. El suero tiene un contenido representativo de todos los tejidos.
Isoenzima SubunidadesTejido predominante LDH1 HHHH corazn LDH2 HHHM corazn LDH3 HHMM rin, pulmn LDH4 HMMM hgado LDH5 MMMM hgado

normal

infarto

Creatino fosfokinasa
Isoenzima CK1 Ck2 CK3 Subunidades BB MB MM Tejido predominante Cerebro Msculo cardiaco Msculo esqueltico
(+)
CK1 CK2 CK3

Existen tres isoenzimas de la creatino fosfokinasa. Cada una es un dmero formado por la combinacin de protmeros M y B. Cada dmero representa a un tejido en particular.

(-)