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BIOQUIMICAS
Los bacilos del gnero clostridium, pueden identificarse por una serie de pruebas bioqumicas en las que se pueden considerar la: Fermentacin de azucares como la glucosa, maltosa, sacarosa, lactosa, salicina; produccin de cido sulfihidrico, licuefaccin de gelatina y fermentacin de la leche. La identificacin final se puede hacer con pruebas serolgicas , cuando se desee saber el tipo de clostridium que se trato.
MEDIO SIM
Lucero
Triptena
Peptona
Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Agar
Fundamento
Indol: El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. El indol producido se combina con el aldehdo del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo.
Tomar una asada de los medios de cultivo de la clase pasada. Sembrar por picadura.
Especie C. difficile C. tetani C. perfringens C. septicum H2S Variable + Indol + Movilidad + + + +
Fundamento
Determinar la capacidad de un microorganismo de reducir los nitratos a nitritos. La reduccin de nitrato a nitrito y a nitrgenos gaseoso por lo comn se produce en condiciones de anaerobiosis. La respiracin anaerobia es un proceso de oxidacin en el que las sustancias inorgnicas producen oxgeno a fin de proporcionar energa.
Producto final puede ser: nitrito, amonaco, nitrgeno molecular, xido ntrico, xido nitroso o hidroxilamina. El producto depende de la especie bacteriana. Positivo: Coloracin roja al agregar cido sulfanlico y a-naftilamina durante toda la noche en un cultivo que contiene nitrato.
Con polvo de zinc, es positivo en ausencia de color y negativo cuando aparece el color rojo.
Gerardo
FUNDAMENTO
ESTA PRUEBA SE BASA EN LA HIDRLISIS DE
LA LECITINA DE LA YEMA DE HUEVO A CAUSA DE LA PRODUCCIN DE LECITINASA POR PARTE DEL MICROORGANISMO.
LA HIDRLISIS DE LA LECITINA LIBERA
PROCEDIMIENTO
Realice un aislamiento o una estra en una placa de agar yema de huevo con el microorganismo a identificar. Incube durante 1 a 4 das a la temperatura ptima de crecimiento del microorganismo.
RESULTADOS
Una prueba de lecitinasa positiva,
consiste en la aparicin de una zona opaca alrededor del crecimiento microbiano, como resultado de la hidrlisis de la lecitina de la yema de huevo.
La prueba dar positivo en las cepas
de Clostridium perfringens En las dems cepas de Clostridium, el resultado suele ser variables, con una tendencia mayor a la positividad.
PRUEBA DNASA
Alexis
Prueba de la DNAsa
Se basa en la capacidad que poseen ciertas bacterias para hidrolizar enzimticamente el cido desoxirribonucleico, produciendo una mezcla de mono y polinucletidos.
DNAsa Agar.
Agar para prueba D-Nasa est
recomendado, para diferenciar los microorganismos basados en la actividad de desoxirribonucleica (DNASA) Medio de cultivo utilizado para la deteccin de enzimas desoxirribonucleasas. Es especialmente til para la diferenciacin entre especies de estafilococos, as como para la diferenciacin de Serratia spp. de especies de Klebsiella y Enterobacter.
En el medio de cultivo, la triptena es la fuente de nitrgeno, aminocidos, y aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. El cido desoxirribonucleico (ADN), se encuentra en grado altamente polimerizado, y es el sustrato de la enzima desoxirribonucleasa (DNAsa), la cual lo hidroliza. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el agar es el agente solidificante. Este medio de cultivo, permite diferenciar bacterias que poseen la enzima desoxirribonucleasa de aquellas que no la poseen. La presencia de la enzima, se puede detectar mediante el agregado de cido clorhdrico 1N. El cido desoxirribonucleico hidrolizado presenta transparencia, mientras que el cido desoxirribonucleico polimerizado, precipita y torna opacidad al medio de cultivo.
Fundamento
Enzima DNAsa + +
+ -
Siembra A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, sembrar un inculo denso, ya sea en estra o por la tcnica de spot. Incubacin En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 C. Cubrir la placa con cido clorhdrico 1N, y observar dentro de los primeros 5 minutos. Resultados Positivo: halo claro, transparente alrededor del crecimiento bacteriano. Negativo: el medio se observa opaco. Limitaciones: Las placas no pueden ser reutilizadas luego del agregado del cido clorhdrico. Caractersticas del medio: Medio preparado: mbar.
TIPO DE MUESTRAS
Como este medio est diseado para la diferenciacin de microorganismos, la siembra debe hacerse de colonias aisladas a partir de cualquier muestra clnica.
MATERIAL
Lupe
Asa bacteriolgica
Mechero
Tubos con caldo glucosado con
sello Tubos con caldo lactosado con sello Tubos con gelatina bacteriolgica con sello Tubos con leche con sello Tubos con medio Sim con sello Cultivo de Clostridium con sello
PROCEDIMIENTO
lactosado y leche en agua hirviendo. (para extraer el aire previamente al desarrollo de la practica) Se debe enfriar sin mover para evitar el aire Sembrar con el cultivo obtenido en la sesin anterior El tubo de gelatina se siembra por PICADURA e incubar a temperatura ambiente Se incuban los tubos de caldo glucosado, lactosado, y leche as como el medio SIM a 37 C durante 48 horas y comparar las tablas de bioqumicas.
Especie C.difficile
C. perfringens
Leche
Muy fermentada Acidificada Sin cambio Acidificada Digerida Acidificada Digerida
Ricardo
BIBLIOGRAFA Murray, Patrick. 1997. Microbiologa mdica. 2da Edicin. Editorial Harcourt Brace. Barcelona. Pginas consultadas: 166-174 Davis, Bernard, Dulbecco Renato, Eisen Herman y Ginsberg Harold. 1990. Tratado de microbiologa. Editorial. Salvat. Barcelona. Pginas consultadas: 514-519. Jawetz Ernest. 1990. Microbiologa mdica. 13a edicin. Editorial El manual moderno. Mxico. Pginas consultadas: 188-193
http://www.monografias.com/trabajos65/identificacion-clostridium/identificacionclostridium2.shtml#ixzz2fmlhSpW0